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Fundamentos da Espectrofotometria
Parte 2 - Anlise Qumica Instrumental
Aluno: ___________________________________ Turma: ___
Prof: Danielle Gomides Alkmim data: __/__/__
Aproveitamento:


Interao da Radiao com a matria:

O efeito que a radiao eletromagntica pode causar na
matria vai depender da energia dessa radiao. O raio X por
exemplo, uma radiao ionizante que tem a capacidade de
atravessar tecidos de menor densidade e ser absorvido por
partes mais densas como ossos por exemplo. Os raios
infravermelhos no so ionizantes, e so emitidos geralmente por corpos quentes.
Os raios ultravioletas no so visveis para ns, mas so capazes de excitar
eltrons, o que os deixa levemente ionizantes, capazes de causar cncer a
depender da intensidade e energia.

Entendendo bem os diferentes tipos de interao, podemos usar esse conhecimento a
nosso favor para analisar os diferentes comportamentos da matria sob essas ondas. Sendo
assim, h vrios mtodos espectroscpicos que podem ser usados para interpretar
um analito.

A Ressonncia Magntica Nuclear (RMN) por exemplo, trabalha com
ondas de baixa frequncia (rdio) que alteram certos spins nucleares e so
capazes de formar imagens bastante teis para a medicina. A COLORIMETRIA
um outro exemplo que visa a determinao da concentrao de uma substncia
pela medida da absoro relativa da luz UV-Visvel.
Veja a figura abaixo:


A espectrofotometria est relacionada ao efeito da luz sobre a matria, e sobre esse
aspecto que vamos nos focar:


Principais fenmenos pticos necessrios compreenso da espectrofotometria:


Figura 2:
Possveis
fenmenos
causados pela
Interao da Luz
visvel com um
material
qualquer


Fosforescncia
Fig. 1
Fig. 1
2
REFRAO DA LUZ:
Uma onda sofre refrao, isto , muda sua direo de propagao, quando
passa de um meio para outro. Isso s ocorre quando a velocidade de
propagao da luz nos dois meios diferente.
A velocidade da luz varia de acordo com o meio em que ela est.

No vcuo/ar v = 300.000 Km/s
Na gua v = 230.000 km/s
No vidro v = 200.000 km/s

Por isso, em qualquer meio material, a luz se propaga com uma velocidade menor que a sua
velocidade de propagao no vcuo. O ndice de refrao (n) um nmero que expressa
quantitativamente essas alteraes:

Como a velocidade da luz em qualquer meio sempre menor que c n > 1 e seu valor tanto
maior.

DISPERSO DA LUZ:
importante observar que o
ndice de refrao depende no s do
meio material que o constitui, mas
tambm do comprimento de onda da luz
incidente. Quanto menor o comprimento
de onda maior ser o desvio. essa
propriedade que faz com que um prisma
decomponha a luz branca nas cores do arco-ris. A esse fenmeno chamamos disperso da luz.

Um feixe de luz policromtico um feixe constitudo por radiaes de diferentes
comprimentos de onda ou frequncias (cores). Teoricamente, a luz branca possui todas as cores
do espectro visvel. Um prisma feito de um material transparente com ngulos apropriados para
dispersar a luz (visvel e no visvel). Assim, cada freqncia de luz distinta, sofre um desvio
diferente quando atravessa o prisma, e a luz policromtica ento dispersada. Um simples CD
tambm capaz de fazer o mesmo

Vrios aparelhos de espectrofotometria precisam de um dispersor de luz para as anlises. muito
comum para isso usarem uma GRADE DE DIFRAO para dispersar a luz e obter o ESPECTRO
para anlise.

Espectro
J vimos que um prisma capaz de projetar a imagem de um arco-res sobre uma tela
branca ou sobre uma chapa fotogrfica. Essa imagem colorida obtida pela disperso da luz
chamada ESPECTRO VISVEL.
De modo similar, as ondas eletromagnticas que estiverem misturadas em um nico feixe
podem ser dispersas obtendo um ESPECTRO ELETROMAGNTICO, que um arranjo ordenado
das radiaes conforme seus comprimentos de onda. Porm, mais comum registr-lo em forma
de um grfico do que sob uma tela, como
no caso da luz branca.



A figura ao lado mostra o espectro
das radiaes emitidas pelo sol. Veja que o
sol emite no s luz visvel, mas tambm
bastante UV e IV.






Exemplo: n
vidro
= 300.000/200.000 = 1,5
F
i
g
.
4

F
i
g
.
3

Fig.5
3
ABSORO
Quando um feixe de radiao atravessa um
meio material slido, lquido ou gasoso
certas freqncias podem ser seletivamente
absorvidas. A energia dos ftons
absorvida, excitando o material.
Esse estado excitado no estvel,
e logo libera a energia absorvida para
voltar ao seu estado fundamental.
A figura ao lado ilustra o processo
de excitao eletrnica provocada pela
absoro de luz visvel.
Mas lembre-se:
Nem toda excitao eletrnica.

Espectro de absoro:
Um espectro de absoro obtido por um
ESPECTROFOTMETRO, que, dentre os
diversos tipos, pode-se simplificar o seu
funcionamento conforme o esquema ao lado:
A fonte de luz a, emite a radiao
policromtica que passa por um colimador b e
logo em seguida separada por um prisma ou
rede de difrao c. A fenda seletora d
responsvel por limitar a frequncia da radiao
incidente que incidir sobre a amostra. A
radiao incidente selecionada chega at a amostra contida no porta-amostra e com uma
intensidade (I0). Essa radiao pode ser absorvida pela amostra e sair do outro lado com uma
intensidade (I). A radiao transmitida pela amostra chega a um detector f, que amplificada em
g, e s ento a quantidade de radiao absorvida ou transmitida registrada.

A intensidade de absoro depende da frequncia da radiao incidente em cada
amostra. Materiais diferentes, absorvem diferentemente nas regies do espectro eletromagntico,
obtendo espectros de absoro especficos para cada substncia distinta.
Por isso, muito comum fazer uso de um espectro de
absoro de uma amostra como ferramenta no auxlio na sua
identificao.
A figura ao lado mostra um espectro de absoro na
regio do visvel da clorofila, que d a cor verde caracterstica da
maioria dos vegetais. Ela absorve muito bem a luz nas faixas do
vermelho e do violeta, refletindo a luz verde. possvel ainda
diferenciar pelo espectro de absoro a clorofila do tipo a
(presente em clulas fotossintetizantes, exceto bactrias), da
clorofila do tipo b (presente em vegetais superiores).

Para construir um espectro como esse, passa-se pela amostra um comprimento de onda de
cada vez, e a absoro de cada uma dessas radiaes registrada no grfico.
comum registrar grficos tanto em funo da luz absorvida (absorbncia), como na
figura _ acima, quanto da luz transmitida (transmitncia), como da figura _ abaixo.

O grfico ao lado mostra um espectro de
absoro que evidencia as diferenas de absoro
na regio do UV-VIS (ultravioleta e visvel) da
safira e do rubi.
Esses minerais possuem diferentes
centros cromforos que absorvem diferentemente
certas frequncias da luz visvel. Pelo grfico, a
safira em questo praticamente incolor, por
absorver de forma relativamente constante na
regio do visvel E o rubi de um vermelho
caracterstico, pois transmite mais a luz vermelha
(e um pouco de azul-esverdeado) absorvendo
intensamente as outras cores.
Estado Fundamental Estado Excitado
Absoro Emisso
I0
I
Fig.6
Fig.7
F
i
g
.
8

Fig.9
4
Relao entre absorbncia (A) e transmitncia (T)
A relao entre a luz transmitida (It) e a luz incidente (Io) chama-se TRANSMITNCIA e o
valor mximo que pode assumir 100%: [observao (It) tambm representado por (I) nas
equaes]
0
/ I I T
t

Se determinada soluo no absorve energia, ento It e Io tm o mesmo valor (100%) e,
conseqentemente, T = 1. Como se usa a transmitncia percentual para evitar operaes com
nmeros decimais, T fica entre 0 e 100%.
A lei de Beer Lambert estabelece a relao entre Transmitncia (T) e Absorbncia (A):
100 / logT A
Por esta expresso, entende-se que um valor em porcentagem de transmitncia lido na
escala do fotocolormetro pode ser facilmente transformado em absorbncia. Por ex., 20% de
transmitncia correspondem a uma absoro de 0,699

A lei de Lambert-Beer:
Dois cientistas, J. H. Lambert e A. Beer, investigaram o processo de absoro e
concluram que a intensidade da luz absorvida depende:
a) da intensidade da luz incidente (Io )
b) do comprimento percorrido pela luz (espessura do recipiente = b)
c) da concentrao da espcie absorvente ( C )

Todas essas relaes podem ser expressas pelas equaes 3 e 4, que so base para a
espectrofotometria aplicada anlise qumica:



Onde:
I0= intensidade da luz incidente na amostra.
I = intensidade da luz transmitida pela amostra.
A = absorbncia, representa a quantidade de luz absorvida pelo soluto da amostra,
naquele comprimento de onda selecionado. adimensional.
k = absorvitividade (constante caracterstica do soluto). Absortividade molar [ ] dada em
mol/L e a absorvitividade especfica [ a ] dada em grama/L). Essas duas constantes se
relacionam entre si por:
= a x PM , onde PM = peso molecular
b = espessura do recipiente que contm a soluo, e representa o comprimento do caminho
tico atravs da amostra. Expressa em cm geralmente.
C = concentrao do soluto, em gramas/Litro ou em moles/Litro


Figura 10: Representao grfica da absoro da luz durante o seu caminho ptico dentro da amostra de comprimento b.

Assim, como a concentrao do analito absorvente diretamente proporcional radiao
absorvida, possvel determinar a concentrao de qualquer amostra mediante a construo de
uma CURVA DE CALIBRAO, conforme j foi visto anteriormente. Dois exemplos clssicos de
mtodos de anlise que fazem uso desse princpio so a COLORIMETRIA e a
ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORO NA REGIO DO UV-VIS.

Exerccio: Encontre a absorbncia e a transmitncia de uma soluo 0,00240 M de uma
substncia com coeficiente de absortividade molar de 313 M -1 cm -1 numa clula com 2 cm de
caminho ptico.



Quanto maior a espessura,
maior a absoro
Quanto maior a
concentrao, maior a
absoro.
I
I
A
0
log
b
I(b)
(3)
C b k A (4)
(1)
(2)
5
Resumo dos termos e smbolos usados na lei de Lambert-Beer:



Curva de Calibrao:
Uma curva de calibrao mostra a resposta de um mtodo analtico para quantidades
conhecidas de constituinte.
Solues contendo concentraes conhecidas de uma substncia so chamadas solues-
padro.
Solues contendo todos os reagentes e solventes usados na anlise, mas sem a adio da
substncia de interesse, so chamadas solues branco. O branco mede a resposta do
procedimento analtico para impurezas ou espcies interferentes nos reagentes.

Requisitos para determinar a concentrao de um analito a partir da curva de calibrao:
a espcie a ser analisada deve absorver luz em conhecido de absoro deve ser
diferenciado de outras substncias presentes na amostra.

Preparo de um branco: soluo que contm todos os reagentes presentes na soluo da
espcie a ser analisada (amostra), menos a espcie a ser analisada. Subtrai-se Absorbncia
do branco da Absorbncia da amostra antes de realizar os clculos.

EMISSO
Quando o eltron perde a excitao ou a energia absorvida, isto ,
passa de um estado energtico mais elevado para outro menos elevado, ele
emite energia sob a forma de radiao eletromagntica.

Quanto maior o salto energtico realizado durante a perda de energia,
maior a freqncia do fton emitido (e menor seu comprimento de onda) e
maior a energia emitida.

A radiao emitida pelos tomos excitados ao retornarem ao estado fundamental, pode ser
exibida em ESPECTROS DE EMISSO, como se fossem fotografias das transies eletrnicas
dos tomos ou molculas das espcies qumicas.

Temos dois tipos de espectros de emisso:

Espectro Atmico (de linhas):
composto por uma srie de linhas estreitas paralelas correspondentes a cada
comprimento de onda emitido, geradas pela excitao de tomos individuais do elemento qumico,
na fase gasosa. So emisses de radiao eletromagntica, geralmente na regio do Visvel e UV e
tanto mais cheio de linhas quanto maior for o numero de
transies eletrnicas que o tomo pode realizar. Por isso,
caracterstico (especfico) para cada elemento, e serve para
identific-lo.

Espectro Contnuo:
composto por uma faixa de comprimentos de onda
emitidos, formando uma banda sem evidente diferenciao
entre uma faixa e outra. So emisses de Radiao
eletromagntica comumente emitidas por um slido
incandescente (filamento de lmpada por exemplo).
O comportamento de um espectro tpico de emisso de
um corpo quente varia conforme o grfico ao lado.
Termo Smbolo Equao
Absorbncia A
A = - log T
A = k . b . C
Transmitncia T T = (10
-A
) x 100
Comprimento da trajetria
(espessura da cela)
b b = A / k .C
Absortividade molar
(coeficiente de absoro molar)

= a.PM
= A/b. Cmol/L
Absortividade especfica a
a = / PM
a = A / b. Cg/L
I
0

I
Fig.13
Fig.12
Fig.11
6
Exerccio :
1) A figura abaixo, mostra um espectro tpico de absoro, outro de emisso atmico e um
espectro contnuo. Identifique esses imagens.
2) Logo acima do espectro de emisso, faa um esboo de como ficaria o registro desse espectro
em forma de grfico de emisso.


Figura 14

Como complemento, veja o vdeo youtube: http://www.youtube.com/watch?v=OMe_X-oh2mc

FLUORESCNCIA E FOSFORESCNCIA

So importantes processos analticos de emisso, nos
quais os tomos ou molculas so excitados por um feixe de
radiao eletromagntica; e ento, a emisso radiante ocorre
quando as espcies excitadas retornam ao estado fundamental.

Algumas substncias ditas fluorescentes, absorvem a
luz ultraviota ou raios x (que invisvel ao olho humano) e
emitem luz visvel. Ou seja, absorvem radiaes mais
energticas (invisveis) e emitem radiaes menos energticas
(visveis). Assim o material fluoresce, emitindo luz. Esse fenmeno bastante usado para
diferenciar materiais com essas propriedades, e tem ampla aplicao na biologia e mineralogia.


A fluorescncia ocorre mais rapidamente que a fosforescncia, e geralmente se
completa aps 10
-5
segundos a partir do instante da excitao. A emisso fosforescente acontece
em perodos superiores a 10
-5
s, e pode permanecer ativa por minutos e at horas.

Mtodos analticos
Os mtodos espectromtricos abrangem um grupo de mtodos analticos baseados na
espectroscopia atmica e molecular. Espectroscopia um termo geral para a cincia que estuda a
interao de diferentes tipos de radiao com a matria
Os mtodos espectromtricos ou fotomtricos mais amplamente utilizados fazem uso da
radiao eletromagntica, sendo a luz visvel e o calor radiante as mais facilmente reconhecveis.
As interaes mais sofisticadas incluem os raios gama e raios X como a radiao ultravioleta,
microondas e radiofreqncia. A tabela a seguir resume alguns mtodos analticos.
Complete a tabela...
Tipo de espectroscopia de
trabalho
Intervalo de
comprimento de onda
Tipo de transio quntica
Emisso de raios gama 0,005 a 1,4
Absoro, emisso, fluorescncia e
difrao de raios X
0,1 a 100
Absoro, emisso, e fluorescncia
ultravioleta e visvel
180-780 nm
Absoro infravermelha e Raman 0,78 a 300 m
Absoro de microondas 0,75 a 3,75 mm
Ressonncia magntica nuclear 0,6 a 10 m Spin dos ncleos em um campo magntico