Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
0.64912281 Rf
2
=
0.57894737
BANDA 1 BANDA 2
3.7 cm 3.3 cm
Log (PM) = -0.7956 Rf + 2.4485
R = 0.9916
0
0.5
1
1.5
2
2.5
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
Log(PM)
Log(PM) Linear (Log(PM))
Ya calculado el Rf de cada banda, se pudo obtener el valor del peso molecular
sustituyendo el Rf y despejando el peso molecular de la siguiente ecuacin
proporcionada por la grfica: Log (PM) =-0.7956 Rf +2.4485
BANDAS Log (PM) ANTILOGARITMO
PESO MOLECULAR
1 Log (PM
1
) =(-0.7956 *
0.64912281)+2.4485=1.93205789
10E1.93205789 85.52 kDa
2 Log (PM
2
) =(-0.7956
*0.57894737)+2.4485=1.98788947
10E 1.98788947 97.25 kDa
Se observ que las protenas pequeas recorran una distancia mayor que las
protenas con pesos moleculares grandes. Esto es porque las protenas pequeas
fcilmente pasan a travs de los poros del gel mientras que las protenas ms
grandes son sucesivamente retenidas en la malla de la poliacrilamida.
PARTE V: Cintica enzimtica
Una vez corrido y revelado el gel con el sustrato, se observ la actividad
enzimtica de la protena, ya que en ste se distinguieron diferentes lneas
horizontales, que es donde la proteasa actu, se pueden ver claramente los
degradados del gel en las zonas marcadas con los crculos rojos, e incluso desde
el gel concentrador. Esto nos dice que la proteasa aislada tena mucha actividad
aun despus de desnaturalizarla parcialmente. Tambin es importante mencionar
que el peso molecular de la enzima no se puede determinar de esta manera ya
que slo nos interesa saber si la proteasa tiene efecto sobre algn sustrato
especfico.
DISCUSIN
En este bloque se intent determinar muchas cualidades de las protenas y
adems conocer los mtodos de purificacin que nos permiten conocer adems
de su peso molecular, su punto isoelctrico o su actividad como enzimas. En la
determinacin de protenas se pudo calcular cuntos microgramos haba de
albmina srica de bovino en un microlitro de muestra, comparado con otros
equipos que no tuvieron dificultades al momento de realizar su trabajo, se puede
decir que la tcnica utilizada (microfolin} resulta un poco ms amplia en cuestin
de informacin que se obtiene a comparacin del mtodo Bradford.
En la cromatografa de intercambio inico, se puede decir tambin que dio mejores
resultados que la de exclusin molecular, ya que el equipo que realiz este
mtodo no obtuvo resultados, adems de que les fue ms tardado hacerla.
En la parte de electroforesis para determinacin de peso molecular y actividad
enzimtica, fue una de las tcnicas ms interesantes ya que brinda informacin
crucial y muy especfica de la muestra que se est estudiando, sin embargo
tambin es un mtodo que requiere ms inversin de tiempo, dinero y cuidados.
BIBLIOGRAFA
1. David L. Nelson, Principios de Bioqumica, 5
a
edicin, editorial OMEGA,
Barcelona Espaa 2009, pg. 71-84.
2. Pilar Roca, Bioqumica: Tcnicas y Mtodos, Editorial Hlice, Madrid
Espaa 2009, pg. 135-159.
3. Donald Voet, Bioqumica, 3
a
edicin, Editorial Medica PANAMERICANA,
Buenos Aires Argentina 2006, pg. 135-189.
4. Antonio Pea, Bioqumica, 2
a
edicin, Editorial LIMUSA, Mxico D.F.
2004, pg. 65-73.