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La Famine Amliore la Survie de

Bactries Introduites dans des


Boues Actives
Starvation Improves Survival of Bacteria
Introduced into Activated Sludge
KAZUYA WATANABE, MARIKO MIYASHITA, AND
SHIGEAKI HARAYAMA
Applied and Environmental Microbiology,
Sept. 2000
Benoit DRIENCOURT 19/11/2012
M2 Microbiologie MES 2012/2013
Universit de Lorraine Nancy
Bactries + boue active = ! densit bactries
" Lessivage
" Prdation (protozoaires)
Bactries phnol-dgradantes # dbarrasser les eaux
uses de cette molcule corrosive pour le vivant
Famine de 2 jours amliore survie de R. eutropha E2
dans la boue active
" Changement hydrophobicit surface
" Changements physiologiques
Introduction
Matriel
" Bactrie
" Boue
Expriences
" Survie
" Phnol-oxydase
" Changements morphologiques et physiologiques
Conclusion
Plan
Isole depuis boues actives dune raffinerie dhuile
Bactrie btonnet Gram-ngative du sol et de leau
Classe des -protobacteries
Respiration arobie et anarobie (dnitrification)

Fonction phnol hydroxylase grce aux gnes
poxABCDEF permettant de crotre avec du phnol
comme seule source de carbone
Cultive sur milieu MP200 (200 mg phnol/L) et sur
milieu LB
Ralstonia eutropha E2
Matriel
Isole dune station dpuration municipale au Japon
Acclimate au phnol par un apport continu en
MP200
Principe : bioaugmentation
! carbone organique de leau dans une station
dpuration
$ floculation pour sparer les particules de leffluent
La Boue Active
Matriel
Survie des cellules E2 dans la boue active
Expriences
Table 1. Inocula utiliss dans cette tude
Inoculum Milieu de culture Priode de famine (jours) Forme des cellules (dimensions [m]) Motilit
L-0 LB Pas de famine Cylindrique (1 sur 35) Vigoureuse
L-2 LB 2 Ovale (1 sur 2) Quelques cellules motiles
L-7 LB 7 Ronde (1) Non
P-0 MP200 Pas de famine Cylindrique (1 sur 35) Vigoureuse
P-2 MP200 2 Ronde (1) Non
P-7 MP200 7 Ronde (1) Non
Boue active aclimate au phnol 20 jours avant
dtre inocule avec ces inocula au jour 0

Nombre total de cellules dans le rservoir daration
durant ltude : 3.10
9
6.10
9
cellules/ml

Les dynamiques de la population de cellules E2 furent
analyses par qPCR
Croissance de E2 sur milieu (a) LB ou (b) MP200.
% Non affames. & Affames pendant 2 jours. Affames pendant 7 jours
Parmi les inocula, seules les cellules P-2 ne montrent
pas une rapide diminution en nombre durant les
premiers jours
Survie des cellules E2 dans la boue active
Expriences
RT-PCR montrant lexpression de lARN
m
pox dans
la boue active inocule avec des cellules P-0 (a)
et P-2 (b).

P-0 : dtection aux jours 0 et 1
P-2 : dtection partir du jour 1 et
jusquau jour 7
Labsence de dtection ensuite
serait due la baisse du nombre
de cellules
LARN
m
pox na pas t dtect
dans les autres inocula
Expression de Pox dans la boue active
Expriences
Au microscope :
Rduction de la taille des cellules, changement de la forme des cellules
et perte de motilit durant la famine
Croissance sur MP200 # adhsion aux rsines hydrophobes
(=hydrophicit) et aux flocs de boue (=capacit dadhsion aux flocs)
aprs 2 7 jours de famine
Laugmentation de ces caractristiques est moins apparente
pour les cellules sur LB



Figure : Pourcentages de cellules adhrant aux rsines (pois) et aux flocs de boue (hachures)
Changements physiologiques durant la famine
Expriences
Mesure des activits mtaboliques
durant la famine :
(a) Taux de respiration
(b) Activit dshydrognase
(c) Activit phnol-oxydase (non
dtecte pour le LB)
% Cellules cultives sur LB
& Cellules cultives sur MP200
Influence de la quantit de rserves
cellulaires ?
Changements physiologiques durant la famine
Expriences
Dure de la famine # taux de survie en boue active
Hydrophobicit # agrgation aux flocs protecteurs
" Optimum ?
Lexpression de phnol-oxydase semble importante pour la
survie des bactries en boue active
" Indispensable ?
Expression de pox indtectable durant le 1
er
jour des P-2
dans la boue mais rapide renversement les jours suivants
! tudes approfondies sur la physiologie de la survie attendre
Conclusion
Merci de votre attention