SNTESIS DE FLUORESCENA

SYNTHESIS FLUORESCEIN


Universidad del Quindo, Facultad de Ciencias Bsicas y Tecnologas
Programa de Qumica, Laboratorio N 8 de Sntesis Orgnica


JOHN DIDIER CRDENAS NIETO (1098307083)
13/12/2013


RESUMEN


En esta prctica se realiz la sntesis de un pigmento fluorescente, la fluorescena por medio de
una reaccin de sustitucin electrofilica del compuesto anhdrido ftlico con resorcinol en medio
acido.
El producto final se le determino grado de pureza, punto de fusin, adems se obtuvo su
respectivo IR.


PALABRAS CLAVES: anhdrido ftlico, electrofilica, fluorescente, fluorescena, resorcinol

ABSTRACT


In this practice the synthesis of a fluorescent dye was done, fluorescein through an electrophilic
substitution reaction of phthalic anhydride with resorcinol compound in acid medium.
The final product was determined purity, melting point, also obtained their respective IR.


KEYWORDS: phthalic electrophilic fluorescent anhydride, fluorescein, resorcinol






INTRODUCCIN


La fluorescena fue sintetizada por primera vez por Adolf von Baeyer en 1871. Se puede preparar
a partir de anhdrido ftlico y resorcinol en presencia de cloruro de cinc a travs de la reaccin de
Friedel-Crafts.
Un segundo mtodo para preparar fluorescena utiliza el cido metano sulfnico como un
catalizador cido de Brnsted. Esta ruta tiene un alto rendimiento en condiciones ms suaves.
La fluorescena es un compuesto que puede utilizarse como indicador cido-base pues el color de
sus disoluciones depende del pH. Tal diferencia es ms evidente si se analizan los espectros de
absorcin respectivos en la regin del ultravioleta-visible, UV- Vis. Dichos espectros se obtienen
cuando la molcula en cuestin es irradiada con radiacin electromagntica del intervalo que va
de 300 a 800 nanmetros (nm).
La fluorescena es un fluorforo comnmente utilizado en microscopa, en un tipo de lser de
colorante como el medio de ganancia, en el anlisis forense y la serologa para detectar manchas
de sangre latentes, y en el rastreo de tinte. Fluorescena tiene una absorcin mxima a 494 nm y
un mximo de emisin de 521 nm. Los principales derivados estn isotiocianato de fluorescena
y, en la sntesis de oligonucletidos, 6-FAM fosforamidito.





INTRODUCTION


Fluorescein was first synthesized by Adolf von Baeyer in 1871. It can be prepared from
resorcinol and phthalic anhydride in the presence of zinc chloride by Friedel -Crafts.
A second method for preparing fluorescein using methane sulfonic acid as a Brnsted acid
catalyst. This route has a high performance in milder conditions.
Fluorescein is a compound that can be used as acid -base indicator as the color of the solutions is
pH dependent. This difference is more apparent if the respective absorption spectra are analyzed
in the ultraviolet - visible region, UV -Vis. These spectra are obtained when the molecule in
question is irradiated with electromagnetic radiation of the interval from 300 to 800 nanometers
(nm).
O
O
O
+
OH
OH
H
3
O
+
O
O
OH O H O


Fluorescein is a fluorophore commonly used in microscopy, in a type of dye laser as the gain
medium, in forensics and serology to detect latent blood stains, and in dye tracing. Fluorescein
has an absorption maximum at 494 nm and an emission maximum of 521 nm. The main
derivatives are fluorescein isothiocyanate, and in oligonucleotide synthesis, 6 -FAM
phosphoramidite.

OBJETIVOS

Obtener fluorescena a partir de la reaccin de sustitucin electrofilica aromtica del anhdrido
ftlico con resorcinol en medio acido.
Obtener un producto con un grado alto de pureza y un porcentaje de rendimiento ptimo


REACTIVOS

Resorcinol C6H6O2
Anhdrido ftlico, C8H4O3
50 mL [H
2
SO
4
]
10 mL [HCl]
20 mL solucin HCl 1.0 M
100 mL solucin NaOH 1.0 M
2.0 Litros de agua destilada
Frasco de desechos qumicos


MATERIALES

1 tubo de ensayo de 125 x
10 mm.
4 tubos de ensayo
pequeos
3 Beaker de 25 mL
1 Filtro Buchner.
2 Pipetas graduadas de 1.0
mL
1 Pipeta graduada de 10
mL



2 Pipetas Pasteur
1 Agitador de vidrio
2 Beaker 50 mL
1 Mortero con pistilo
1 Estufa elctrica
1 Parrilla de calentamiento
1 Pinza metlica para tubo
de ensayo
1 Termmetro (0-300 C)
1 Balanza de cuatro cifras
decimales
















PROCEDIMIENTO




RESULTADOS


COMPUESTO OBSERVACIN
Anhdrido ftlico



Olor caracterstico
Solido cristalizado color blanco
Densidad :
P/p :




0.15 g anhidrido ftalico
1 gota H
2
SO
4
Calentar
2 ml H
2
O
Enfriar
Filtrar
Residuo Precipitado
Lavar
Secar
Pesar
I.R
Punto de Fusin
0.22 g Resorcinol
20-40 minutos
0.1 ml HCl
H
2
O fria
O
O
O



Resorcinol




[H
2
SO
4
]








HCl




Olor caracterstico
Solido cristalizado color rosa
Densidad :
P/p :
Al adicionar no se evidencia cambio alguno en
temperatura, estado fsico ni color.



Olor caracterstico acido
Liquido traslucido oleoso
Densidad : 1.18 g/ml
P/p : 96%
Al adicionar el cido sulfrico se presenta
disolucin cambiando su coloracin a rojo
oscuro.


Olor caracterstico acido
Liquido traslucido oleoso
Densidad : 1.18 g/ml
P/p : 37%
Al adicionar el cido clorhdrico se presenta
disolucin y cambio de color a amarillo
verdoso.

Peso del producto

Peso papel filtro vaco: 0.36 g
Peso papel filtro + producto: 0.995 g
Peso del producto: PPP-PPV: 0.635 g Peso producto: 0.995 g- 0.36 g = 0.635 g
Peso del producto: 0.635 g

Clculos:

# Moles Anhdrido ftlico: densidad: P/p: PM: 148.1155 g/mol





OH
OH




# Moles Resorcinol: densidad: P/p: PM: 110.1106 g/mol
















Relacin molar 1:2
Reactivo lmite: anhdrido ftlico
Reactivo exceso: resorcinol

Peso terico:












ANALISIS DE RESULTADOS

Despus de llevar a cabo el proceso experimental de la sntesis de la fluorescena se observ que
el medio acido aportado por el cido sulfrico es primordial para que se lleve la reaccin de
sustitucin electrofilica generando un slido caf rojizo, el agua de lavado de este precipitado fue
expuesto a luz UV observando que el compuesto presentaba la propiedad de fluorescencia.
Al diluir el producto y ponerlo en medio cido con HCl, cambio a color verde fluorescente esta
coloracin se debe a la forma cida de la fluorescena. Al ponerla frente a una fuente de rayos
UV aumentaba la intensidad del color. La fluorescena al ser diluida en medio bsico NaOH
adquiere coloracin amarilla ya que est en su forma de anin, al ponerla tambin frente a
una fuente de rayos UV se tornaba de un color verde fluorescente ms fuerte que los anterior,
debido a que esta forma de la molcula necesita ms energa para excitar sus electrones y
promoverlos a otro nivel de energa.






CONCLUSIONES

Con esta prctica pudimos observar la eficacia de la reaccin de sustitucin nucleoflica
aromtica en la sntesis de fluorescena.
Tambin se pudo evidenciar el comportamiento de la fluorescena en medio cido y
bsico y su importancia como compuesto tipo ftalina, lo que lo hace un buen indicador
acido-base.
Los compuestos fluorescentes tiene la capacidad de emitir fotones a longitudes de ondas
mayores que la irradiacin utilizada para la excitacin.
La fluorescena tiene una mayor absorbancia y emisin de luz, cuando se encuentra en un
pH alcalino, debido a que en este medio se favorece la forma quimoidea que posee un
cromforo.
Se puede concluir de igual manera que debido a que el cambio de coloracin en medio
bsico y acido ocurre de manera rpida y drstica, la fluorescena es una buena opcin
para ser utilizada como indicador de punto final.
Del mismo modo se concluye que el compuesto tiene la propiedad de realizar
transiciones a estados de energa mayores con la presencia de la luz UV- vis y al regresar
O
O
O
H
+
O
O
O
+
H
OH
OH O
O
OH
O H
O H
H
+
O
O
OH
OH
O
+
H
H
-H
2
O
O
C
+
O
OH
O H
OH
OH
O
O
OH
O H OH O H
-H
2
O
O
O
O
O H OH


al estado basal lo hace con desprendimiento de luz, por lo que su longitud de onda es
mayor y adquiere una coloracin amarilla verdosa.


BIBLIOGRAFIA

Francis A. Carey. Advance Organic Chemistry. Mc Graw Hill, 2006. 6 Ed.
Rubinson, K. A. y J. R, Rubinson. Anlisis Instrumental. Madrid, Prentice Hall.2001.
Morrison, Boyd. Organic Chemistry. Prentice-Hall, 2002. 6 Ed
Silverstein, Webster. Spectrometric Identification of Organic Compounds. John Wiley. 6 Ed.


ANEXOS

Espectro IR de la molcula obtenida.





ANALISIS ESPECTRO



En el espectro de absorcin infrarroja para la fluorescena se observ aproximadamente en
3300cm-1, una banda ancha pero de mediana intensidad, caracterstica de los grupos hidroxilo
tanto del fenilo como del cido carboxilo que forman parte de la estructura del compuesto.
Generalmente se esperara que dicha banda apareciera por encima de los 3500cm-1 y con una
intensidad mayor de la observada. La disminucin de la intensidad de la banda, es ocasionada
por el uso de un solvente lquido para realizar la lectura en el IR, el cual hace que las molculas
del compuesto interaccionen entre ellas mediante enlaces de hidrogeno. Adems, la presencia de
los dobles enlaces en la molcula, permiten que haya resonancia especialmente los de los anillos
aromticos, haciendo que la seal se desplace hacia menores frecuencias.
Entre 3000 y 2800cm-1 hay una banda intensa caracterstica de la vibracin de tensin de los
enlaces C-H de hibridacin sp2, tambin se encuentra desplazada hacia la derecha por el efecto
de resonancia producida por mltiples enlaces dobles de la molcula, ya que, generalmente en un
hidrocarburo aromtico la banda se observa entre los 3100-3000cm-1.
Teniendo en cuenta la estructura del compuesto, se esperara encontrar una banda intensa en
1720cm-1 debido a la presencia de un grupo carboxilo en la fluorescena, pero en el espectro de
referencia, la banda no aparece y la ms cercana a ese valor se encuentra en 1600cm-1 banda
caracterstica de la vibracin de tensin del doble enlace carbono-carbono de los anillos
aromticos. Pero para este caso, normalmente se esperara ver 4 bandas de intensidad variable
unas cerca de los 1600cm-1 y las otras cerca de los 1500 cm-1, realmente en el espectro no se ve
tal comportamiento solo se observan dos bandas un poco intensas cercanas a las regiones ya
mencionadas, lo que sugiere un solapamiento de las seales de los enlaces C=C y C=O, adems
siendo la fluorescena una sal, su grupo carboxilo estara en su forma anicnica como anin
carboxilato, donde los dos enlaces carbono-oxigeno estn fuertemente acoplados con fuerza de
enlace intermedia entre el C=O y C-O.3

CUESTIONARIO

1. Consulte la estructura de al menos otros dos pigmentos fluorescentes.
2. Por qu es diferente el color de la disolucin de fluorescena en medio cido, bsico y
neutro? Qu cambios estructurales se producen en la molcula a consecuencia del medio cido
o bsico?
3. Investigue qu es un espectro de absorcin y uno de emisin.
4. En qu difiere el color de las disoluciones observadas a simple vista de aquellas observadas
bajo luz ultravioleta? Cmo se nombra tal propiedad de las sustancias?
5. Observando los espectros UV-Vis obtenidos, en qu difieren? Tal diferencia es observable a
simple vista?

SOLUCION

1. Consulte la estructura de al menos otros dos pigmentos fluorescentes.









2. La fluorescena es un colorante indicador ftlico por lo que al estar en medio bsico u acido
cambia de color debido a un cambio estructural inducido por la induccin de un protn (H
+
).
Cuando se encuentra en soluciones de pH mayor a cinco, su color se torna verde y altamente
fluorescente. La razn por la cual la fluorescena emite fotones en el UV-vis, se debe a grupos
funcionales con enlaces responsables de este tipo de transiciones, conocidos como cromforos.
Entre mayor cantidad de grupos funcionales que permitan realizar transiciones * (baja
energa), se van a presentar transiciones en el UV-vis a mayor de 250nm. Las longitudes de onda
de mayor energa afectan los enlaces * (mayor energa), produciendo la desactivacin de los
estados excitados y el rompimiento los enlaces.
Al poseer 3 grupos ionizables, en medio cido, estos grupos se van a protonar y en medio bsico
se van a desprotonar. Al generar cambios en la forma y el tamao de la nube electrnica
dependiendo del pH del medio, se van a presentar diferencias en el color del UV y el UV-vis
adems en la absorbancia.

O N
+
N
+
O
CH
3
CH
3
Fe O
C H
3
C H
3
Fe O
Pulquerrimina
N
N
+
CH
3
OH
Piocianina
N
H
N
H
O
CH
3
N
CH
3
CH
3
Prodigiosina
N
N
O
O
S
O
O
O
-
S
O
O
O H
H
H
Na
+
Na
+
Indigoina




3. Investigue qu es un espectro de absorcin y uno de emisin.

La radiacin electromagntica es un espectro de emisin, ocurre cuando hay una relajacin de las
partculas excitadas a niveles de menor energa. Las formas ms comunes para la excitacin de
partculas son: bombardeo de electrones, exposicin a chispas de corriente, calor de una llama,
horno, radiacin ultravioleta, visible o infrarroja, radiacin electromagntica.
Un espectro de emisin en la representacin grfica de la potencia de la radiacin emitida de una
sustancia vs la longitud de onda o frecuencia. Hay varios tipos de espectros de emisin, siendo el
espectro de lneas la representacin de la excitacin de tomos individuales, las lneas ms
intensas en este tipo de espectros se conocen como lneas de resonancia y son caractersticas
nicas para cada metal. El espectro de bandas consiste en varias longitudes de ondas definidas y
muy cercanas, provenientes de todos las posibles transiciones de los niveles vibracionales que
tiene las molculas o radicales

El estudio de las diferentes frecuencias de radiacin permite caracterizar los componentes de una
muestra, para esto se realiza un espectro de absorcin que representa la absorbancia en funcin
de la longitud de onda o frecuencia.
La radiacin ultravioleta y visible tiene la energa suficiente para producir transiciones
nicamente de los electrones ms externos o electrones enlazantes. Las frecuencias de rayos X al
ser mucho ms energticas interaccionan con los electrones ms prximos al ncleo.
Los espectros de absorcin molecular son ms complejos que los espectros atmicos, debido a la
gran cantidad de estados de energa que tienen las molculas en comparacin a los tomos
aislados. Esto se debe a que las molculas estn constituidas por energa electrnicas, energa
vibracionales y energa rotacionales, las cuales al absorber energa.
O
O
O H OH
O
NaOH
(ac)
O O O
Na
Na
O
OH
O
Na
NaOH
(ac)
O O O
Na
O
O
Na
Fluoresceina forma acida
Fluoresceina forma basica


Una de las diferencias que presentan los espectros de absorcin y emisin, radica en que un
compuesto absorbe a longitudes de ondas especficas para pasar de un estado basal a uno
excitado, pero en un espectro de emisin no siempre se emite a la misma longitud de onda de
absorcin, un gran ejemplo de estos es la fluorescena que emite a longitudes de onda mayores,
es decir, a menor energa.

4. En qu difiere el color de las disoluciones observadas a simple vista de aquellas observadas
bajo luz ultravioleta? Cmo se nombra tal propiedad de las sustancias?

Ciertos materiales son capaces de transformar la luz UV (10 nm -400 nm) en una radiacin
visible de onda ms larga, produciendo con esto una fluorescencia visible inducida por efecto de
la radiacin UV. Cuando la radiacin es absorbida por el material, los electrones son puestos de
forma temporal en un mayor estado de energa, luego esa energa es liberada volviendo los
electrones a su estado normal. Es esta energa radiante liberada, o fluorescencia, la que se logra
apreciar en el espectro visible dependiendo del material irradiado.
.

5. Observando los espectros UV-Vis obtenidos, en qu difieren? Tal diferencia es observable a
simple vista?

En la disolucin bsica se tiene un max de 490 nm, en la disolucin neutra 450nm y en la
disolucin cida a 437nm.
La diferencia no es visible a simple vista, esta es observable cuando se expone a radiacin UV-
vis denotada por la mayor intensidad en la fluorescencia que se presenta en la solucin bsica, y
el cambio casi imperceptible en la fluorescencia de la disolucin normal y la acida ya que la
forma lactona es menos luminiscente que la forma quinoidea.