FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLGICAS

Laboratorio de Biologa Celular BIO-131
Componentes qumicos de la clula









- Autores:
Vctor Garca Henott.
Melissa Muoz Peralta.
Mery Romero Yez.
Jorge Sandoval Maldonado.

- Docentes:
Mara Jos Daz.
Miguel Ponce.

- Seccin: 18

20-mayo-2014
Introduccin
La clula es la unidad bsica de la vida, y son sus componente qumicos los que confieren a
sta caractersticas especiales que son esenciales para su supervivencia. En trminos
generales, las clulas se componen de gran cantidad de agua, iones inorgnicos y grandes
macromolculas que contienen carbono. Siendo stas ltimas (los componentes orgnicos)
las que asignaran el mayor grado de particularidades a la clula. Hidratos de carbono,
protenas, lpidos y cidos nucleicos son los cuatro tipos de compuestos principales de
molculas orgnicas que componen las clulas y cumplen tanto roles estructurales como
funcionales. (1)
Los Hidratos de Carbono estn compuestas por C,H,O, son polihidroxi-aldehdos o cetonas
o sustancias que rinden tales productos por hidrlisis. La mayor parte de los hidratos de
carbono poseen formula emprica (CH2H)n. Los hidratos de carbono desempean cuatro
funciones importantes en los organismos vivientes: 1)Fuente de energa, mediante su
combustin, 2)Aportan tomos de carbono a las sntesis de otros componentes celulares,
3)Constituyen la forma principal de almacenamiento de energa qumica y 4)Son elementos
estructurales de las clulas y tejidos. (2). Las protenas estn compuestas por C,H,O,N y
algunas azufre. Son las macromolculas ms abundantes en la mayor parte de las clulas y
costituyes el 50% de su masa. Las protenas son fundamentales en todos los aspectos de la
biologa, son el producto de la expresin de la informacin gentica, algunas son enzimas,
tambin actual como componentes estructurales y tambin funcin hormonal. (3). Los
lpidos son macromolculas orgnicas, insolubles en agua que desempean dos funciones
principales: 1) Como componentes estructurales de membrana, y 2) Como depsito de
combustible de reserva metablico. Tambin pueden encontrarse llevando a cabo funciones
hormonales a travs de esteroides. (4) Los cidos nucleicos poseen dos tipos principales de
macromolculas el DNA (cido desoxirribonucleico) y el RNA (cido ribonucleico) en los
que ambos estn formados por los nucletidos que son las unidades estructurales que
participan en el mecanismo molecular mediante el que se transmite la informacin gentica.
Adems participan en el transporte de energa qumica. Estn formados por una base
nitrogenada, un azcar de cinco carbonos y un grupo fosfato. (5) Las sales minerales son
molculas inorgnicas que se encuentran en pequeas cantidades en la clula, tienen funciones
muy importantes en las reacciones metablicas, o como constituyentes celulares, tambin
forman parte de la estructura de algunos organismos y funcin homeosttica. (6).
En ese prctico analizaremos los mtodos de reconocimiento de los componentes orgnicos
e inorgnicos de la clula como el mtodo de reaccin Fehling, mtodo lugol, reaccin
Biuret, solubilidad en ter, precipitacin de sales y reconocimiento de enzimas.
Preguntndonos cul es el mejor mtodo para el reconocimiento de cada componente
celular.

Objetivos
Generales:
Reconocer y diferenciar molculas orgnicas e inorgnicas, mediante distintos tipos
de reacciones, solubilidad y presencia de enzimas.
Entregar resultados obtenidos en el prctico de laboratorio utilizando distintas
metodologas de reconocimiento de molculas.

Especficos:
Fundamentar el uso de cada metodologa (reactivo de Fehling, reactivo de Lugol,
reactivo de Biuret, Solubilidad y reaccin de la enzima Catalasa).
Discutir el procedimiento.

Materiales y Mtodos
Actividad N1: Reconocimiento de hidratos de carbono
Se prepararon 6 tubos de ensayo para la identificacin de monosacridos, los cuales fueron
rotulados para identificarlos con mayor facilidad, luego se agreg con distintas pipetas 1ml
de cada una de las siguientes muestras correspondiente al tubo rotulado: -Agua destilada, -
Solucin glucosa 1%, -Solucin almidn 1%, -Leche, -Solucin NaCl 1% y Almidn
hidrolizado, despus se les aadi 0,5 ml del reactivo Fehling A y 0,5 ml del reactivo
Fehling B que ya se encontraban preparados. En seguida de agregados los reactivos se
procedieron a agitar y a introducirlos a un bao mara (80 C) durante alrededor de 3
minutos, luego se extraan cada tubo de ensayo para observar los resultados.
Para la identificacin de polisacridos mediante la prueba de Lugol se realiz el mismo
medio anterior, esta vez con el reactivo Lugol, sin la necesidad de introducirlos a bao
mara. Se prepararon nuevamente 6 tubos de ensayo, los cuales se rotularon, y se agreg
1ml de las muestras ya indicadas a cada tubo y adems se aadi 1 ml de reactivo Lugol
anticipadamente preparado, cada sustancia con una pipeta diferente, y de inmediato se
procedi a ver los resultados.
Actividad N2: Reconocimiento de protenas
Para la identificacin de protenas a travs de la reaccin de Biuret, se prepararon 5 tubos
de ensayo, los cuales rotulamos previamente. Se les agreg, con pipetas diferentes para
cada sustancia, 1ml de cada una de las siguientes muestras: -Agua destilada, -Solucin
glicina 1%, -Clara de huevo, -Leche, -Solucin NaCl 1%. A los tubos con estas muestras se
les adiciono 1 ml de reactivo Biuret, para luego agitar dichos tubos y prestar atencin a los
efectos.
Actividad N3: Reconocimiento de Lpidos
Se prepararon 2 tubos de ensayo, los cuales rotulamos previamente, en uno de ellos se
agreg 1 ml de agua y en el otro tubo se agreg 1 ml de ter. Luego se aadi 1ml de aceite
para despus agitar, as mezclar estos elementos y observar las reacciones.
Actividad N4: Reconocimiento de Sales minerales
Se prepararon 2 tubos de ensayo, primeramente rotulados, a los cuales se les agreg 1 ml de
Cloruro de Calcio. Al primer tubo se le adicion 1ml de Nitrato de plata 1%, al segundo
tubo se le adiciono 1ml de oxalato de amonio al 1%,.





Actividad N5: Reconocimiento de Enzimas
Para la determinacin de la presencia de Catalasa se prepararon 2 tubos de ensayo
previamente rotulados, se agreg un trozo de Hgado de rata a cada tubo y un poco de agua
destilada solo a un tubo hasta que esta cubriera la muestra de hgado, se procedi a hervir
este tubo por alrededor de 3 minutos aproximadamente para que la el hgado se cociera y
as desnaturalizar la enzima. Luego se agregaron 5ml de agua oxigenada a cada tubo, el que
contena hgado cocido y el que posea hgado crudo, y se procedi a observar los
resultados.





















Resultados
Actividad N1
A) Identificacin de monosacridos mediante la reaccin de Fehling.
Muestra Reaccin Observacin
Agua destilada
_
Aplicacin calor 80c, no presenta variaciones, muestra neutra.
Solucin de glucosa 1%
+ ++
Aplicacin calor 80c, posee precipitado, se tie por completo
de un color rojizo.
Solucin de almidn 1%
_
Aplicacin calor 80c, no presenta cambios aparentes.
Leche
+
Aplicacin calor 80c, posee precipitado, adquiere color
anaranjado, existe reaccin.
Solucin NaCl 1%
_
Aplicacin calor 80c, no presenta cambios aparentes.
Almidn Hidrolizado
+ +
Aplicacin calor 80c, posee precipitado, se tie de un color
marrn oscuro variando entre azulado.

B) Identificacin de polisacridos mediante la prueba de Lugol.
Muestra Reaccin Observacin
Agua destilada
_
Cambia de color debido al tinte del Lugol, amarillo, sin
embargo no reacciona.
Solucin de glucosa 1%
_
Cambia de color al igual que el agua, pero tampoco reacciona
ni posee precipitado.
Solucin de almidn 1%
+
Posee precipitado, cambia de color tomando un tono violeta
oscuro.
Leche
_
No reacciona, solo toma color amarillo del Lugol.
Solucin NaCl 1%
_
Solo cambia el color a amarillo sin embargo no reacciona.
Almidn Hidrolizado
_
No se registran cambios en su apariencia ms que la tincin del
Lugol.

Actividad N2: Reconocimiento de Protenas, a travs de la reaccin de Biuret.
Muestra Reaccin Observacin
Agua destilada
_
No se registran cambios, muestra neutra.
Solucin de Glicina 1%
+
Aminocido, existen cambios en su coloracin, leves.
Clara de huevo
+ + +
Muestra orgnica, origen proteico, alta actividad, tincin
violeta.
Leche
+ +
Compuesto orgnico, posee protenas, tincin plida
entre azulada.
Solucin NaCl 1%
_
No se registran cambios, muestra inorgnica.

Actividad N2: Reconocimiento de Lpidos, Solubilidad.
Muestra Reaccin Observacin
Agua + Aceite
_
El aceite se observa superior al agua sin mezclarse.
ter + Aceite
+ + +
El aceite se mezcl completamente con el ter,
observndose una solucin homogenizada.

Actividad N2: Reconocimiento de Sales Minerales.
A) Identificacin de Cloruros. B) Identificacin de Calcio.
Muestra Observacin
Nitrato de Plata (A) Posee precipitado de tono blanco lechoso, la solucin se ve con
aspecto espeso.
Oxalato de Amonio (B) Tambin posee precipitado pero de tono ms cristalino que el
anterior y aspecto ms aguado, pareciera estar ms diluido, sin
embargo la cantidad de precipitado es similar.



Imagen 1, experimento con
reaccin de Fehling, se observan los
tubos de ensayo que arrojaron
resultados positivos donde si ocurre
la reaccin.
Actividad N2: Reconocimiento de Enzimas, determinacin de presencia de Catalasa.
Muestra Observacin
Trozos de Hgado + agua. Al aplicar agua oxigenada, se puede observar que se produce
espuma desde la muestra.
Tozos de Hgado +agua +
temperatura de 80 C
Al aplicar agua oxigenada, no existe cambio en la muestra, no se
registra actividad.


Imgenes






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Imagen 2, Experimento con el uso
de Lugol, se puede apreciar la
variacin de la actividad entre las
muestras y su clara actividad en el
cuarto tubo correspondiente al
Almidn.
Imagen 3, Experimento con un
trozo de hgado y agua oxigenada,
la fotografa ilustra el estado del
tubo de ensayo que posea la
muestra cruda con el perxido de
hidrgeno adicionado Se observa
espuma.






Discusin
La diversidad de muestra nos permite identificar la funcin de los reactivos que se les
agrega a una muestra determinada, y nos permite mantener un grupo control para identificar
el rango de normalidad, de expresin y de no expresin.
En el primer experimento, trabajamos con Fehling. Los monosacricos que presentan en
su estructura un grupo aldehdo tienen poder reductor (actan como dadores de electrones).
Se oxidan fcilmente para originar el cido carboxlico correspondiente. Es posible
evidenciar este poder reductor a travs de una reaccin redox entre el reactivo de Fehling y
una azcar. Si la solucin cambia de color, significa que se ha producido la reaccin del
catin Cu2+ y que, por lo tanto, el azcar analizado acta como reductor (7) como es el
caso de la glucosa principalmente que en nuestro experimento arroj un 100% de actividad.
El siguiente consista en el uso de Lugol, el cual, por el contrario, marca los polisacridos.
Cuando se unen ms de diez monosacridos hablamos de polisacridos () En la
naturaleza el almidn y la celulosa son los ms abundantes y comunes. Ambos son
polmeros de glucosa(8), esto explicara porque el Almidn solamente reaccion entre
nuestras muestras ya que es un polmero de glucosa formado por Amilosa y Amilopectina.
Entre nuestras muestras no existan ms polisacridos.
El siguiente experimento consista en la marcacin de protenas a travs de Biuret. El
reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La
reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin
de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos presentando un
mximo de absorcin a 540 nm. (9) En sntesis nos permite marcar el enlace peptdico,
que forma parte de las protenas por tanto nuestras muestras marcadas se mantienen unidas
gracias a el enlace mencionado.
El siguiente experimento es bastante simple, consisti en mezclar aceite con agua y con
ter el agua no logra disolver al aceite y por un cambio de densidad se distinguen
completamente, en cambio con el ter podemos ver que logra disolver completamente al
aceite ya que es un disolvente orgnico, adems porque ambos son compuestos no
polares lo polar se disuelve en lo polar y lo no polar en lo no polar, por afinidad
electrosttica.
En nuestro siguiente procedimiento experimental, observamos que las sales a diferencia de
las molculas orgnicas poseen distintas caractersticas entre ellas por ende observamos el
reconocimiento de calcio y cloruros a travs de distintos compuesto como el oxalato y el
nitrato los cuales si bien actan de forma similar identifican distintos tipos de sales de
manera especfica y nos permiten reconocer si las molculas inorgnicas se encuentran
presentes en procesos biolgicos.
Para finalizar, realizamos el experimento del hgado crudo y cocido, para identificar la
funcin de la Catalasa y en qu circunstancias acta recordando que es una enzima y que
su actividad est regulada por factores como la temperatura, el pH, etc Y como nuestro
experimento nos ayud a observar, la enzima, tras ser expuesta a una temperatura de 80 se
denatura y pierde su funcionalidad que es actuar como catalizador del perxido de
hidrgeno, sustancia que adicionamos y slo mostr efecto en el hgado crudo a
temperatura ambiente.



















Conclusin
Luego de realizar este laboratorio concluimos que es posible identificar los componentes
qumicos en una clula, ahora sabiendo que cada uno de estos requiere procesos distintos,
con materiales distintos y sustancias especficas para la correcta apreciacin del compuesto
ya sea orgnico (hidratos de carbono, lpidos, cidos nucleicos y protenas) o inorgnico
(sales minerales).
Por otro lado conocimos los mtodos de Fehling, Lugol, Biuret y a tratar con ter los
lpidos, el precipitado de las sales y la neutralizacin de las enzimas. Todos estos
participaron en la identificacin de nuestro objetivo, estos resultaron mtodos efectivos y
de interesante utilidad para poder descubrir y distinguir lo que hay en una determinada
solucin o ms especficamente en una clula, viendo que los componentes de la clula
estn distribuidos en distintas cantidades en las diferentes mezclas de los tubos de los
experimentos con un particular componente y tambin resulto que a veces, no contenan el
componente buscado en el experimento.
Lo anterior mencionado nos aport una visin ms cientfica en relacin a las reacciones
que son utilizadas en el mundo de la ciencia para detectar diferentes tipos de molculas, con
distintas tcnicas y procesos.












Bibliografa
(1), (6). Universidad Andres Bello, Gua de trabajo Practico N4 COMPONENTES
QUIMICOS DE LA CELULA, curso BIO131, BIOLOGIA CELULAR, 2014
(2), (3), (4), (5). Lehninger A. (1983), Curso breve de Bioqumica, Ediciones Omega, S.A. ,
Paginas: 51-89-105-119.
(7), (8) Silvina Iriberri de Daz Romina Martnez O. (2012), El texto del Estudiante
Qumica 4, Ediciones Santillana del Pacfico S.A. , Pginas: 58-59
(9) http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf, Universidad Nacional de la
Plata, Argentina. (19-05-2014 , 23:10 hr)