El medio de cultivo

El cultivo celular se realiza:

en medios artificiales mezcla de -componentes purificados
- soluciones orgnicas complejas
en interior de instrumentos q. mantienen las condiciones fsico-
qumicas adecuadas
sobre soportes o recipientes q. los contienen y aislan del medio
exterior
Medio de cultivo formado:
1. la naturaleza del sustrato o fase donde crecen las clulas
2. las condiciones fsico-qumicas y fisiolgicas del medio
3. la naturaleza y composicin de la fase gaseosa
4. las condiciones de incubacin, s/t humedad y temperatura
1. El sustrato de cultivo
dependiente o independiente de anclaje
1.1. Materiales usados como sustrato
a. Vidrio.
b. Plstico desechable.
c. Microsoportes ("microcarriers") .
d. Otros sustratos artificiales.
f. "Feeder layers".
g. Matrices tridimensionales.
h. Sustratos no adherentes.
i. Interfases lquido-gel o lquido-lquido
j. Haces microcapilares permeables
1.2 Recipientes de cultivo. plstico desechable
* placas de Petri (ventiladas)
* multiplacas.
* frascos de Roux -
* "roller bottles"
2. La fase gaseosa
Oxgeno
Dixido de carbono
3. Propiedades fsicas
Las caractersticas del medio: pH, osmolaridad, T, viscosidad y T superficial
pH y capacidad tamponadora
* pH ptimo 7.4
fibroblastos entre 7.4 y 7.7
clulas transformadas 7.0 a 7.4
clulas epidrmicas 5.5
* indicador de pH el rojo fenol: - color rojo a pH 7.4
- naranja a pH 7.0
- amarillo a pH 6.5
- azul-rojo a pH 7.6
- prpura a pH 7.8
El medio de cultivo debe estar tamponado, evitar cambios bruscos de pH
Osmolaridad Osmolaridad
amplia tolerancia frente a la osmolaridad del medio,
* * Control mediante la determinacin del punto de congelacin de la P de vapor
Temperatura Temperatura
* * tiene gran influencia en la tasa de crecimiento de las clulas
Influye en pH del medio
Viscosidad Viscosidad
* * determinada por el contenido en suero
* * tiene poca influencia sobre el crecimiento
* * importante para evitar el dao celular
Tensi Tensi n superficial n superficial
* * baja
* * alterada por aparicin espumas
* * agente antiespumante
4. Condiciones fisiol 4. Condiciones fisiol gicas gicas
Los principales medios Los principales medios:
1. Medio Basal de Eagle (BME) 1. Medio Basal de Eagle (BME)
2. Medio M 2. Medio M nimo Esencial de Eagle (MEM) nimo Esencial de Eagle (MEM)
3. 3. R.P.M.I R.P.M.I. 1640. . 1640.
4. Medio MEM modificado por 4. Medio MEM modificado por Dulbeco Dulbeco (DMEM). (DMEM).
5. Modificaci 5. Modificaci n de n de Iscove Iscove del medio DMEM (IMDM). del medio DMEM (IMDM).
6. McCoy 5A.
7. Medio L-15 de Leibovitz.
8. Medio F-10 de Ham.
9. Medio F-12 de Ham.
10. Medio 199.
0,4 Riboflavina 4 Tiamina
VITAMINAS 4 Piridoxal
4 Nicotinamida
16 L - Triptfano 4 cido flico
30 L - Metionina 4 Cloruro de
colina
30 Glicina 4 Pantotenato de
calcia
42 L - Serina 7.2 i - Inositol
42 L - Histidina VITAMINAS
62.75 L - Cistena 15 Roig de fenol
66 L - Fenilalanina 4500 D - Glucosa
84 L - Arginina OTROS
94 L - Valina 0.1 Fe(NO
3
)
3
.9H
2
0
95 L - Treonina 97.67 MgSO
4
104.2 L - Tirosina 125 NaH
2
PO
4
.H
2
O
105 L - Leucina 200 CaCl
2
105 L - Isoleucina 400 KCl
146 L - Lisina 3700 NaHCO
3
584 L - Glutamina 6400 NaCl
AMINOCIDOS SALES
INORGNICAS
DMEM
(mg/dl)
DMEM
(mg/dl)
Dulbelcco's Modified Eagle Medium
1. 1. Soluciones salinas equilibradas (BSS)
2. 2. Aminocidos
3. 3. Vitaminas
4. 4. Otros suplementos orgnicos de bajo peso molecular
5. 5. Hormonas y factores de crecimiento (suero)
6. 6. Inhibidores del crecimiento de los contaminantes (antibiticos y antifngicos)
Todo medio de cultivo est formado por:
Todo medio de cultivo est Todo medio de cultivo est formado por: formado por:
Cuidado si se combinan 2 o + antibiticos
Las mezclas de mezclas de uso ms comn son: Penicilina / Estreptomicina
Penicilina / Estreptomicina (/ Fungizona
Gentamicina. Anti-microbiana,
Anfotericina-B Antifngico y antilevaduras
6. 6. Antibioticos Antibioticos y fungicidas y fungicidas
1. Obtener siempre clulas de bancos reputados
2. No mantener abierto frascos de + de 1 lnea a la vez
3. Manipular las lneas de crecimiento rpido las ltimas
4. Nunca usar la misma pipeta para diferentes lneas
5. No usar la = botella de medio, PBS, etcpara diferentes lneas
6. No introducir nunca en una botella de medio, PBS, etcuna pipeta que ha estado en
contacto con clulas
7. Comprobar las caractersticas de la lnea regularmente, s/t se cambios en tasa crecimiento,
morfologa etc.
PRECAUCIONES PARA EVITAR CONTAMINACI PRECAUCIONES PARA EVITAR CONTAMINACI N CRUZADA N CRUZADA