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1.

Extraccin de tetraciclina del caldo de fermentacin mediante dos acuosa-phasesystems


compuesto de polietilenglicol y sales basado en cholinium
b s t r a c tAiming al desarrollo de la extraccin no slo ms barata, pero tambin biocompatible y
sostenible y purificationprocesses para los antibiticos, en este trabajo fue evaluar la capacidad de
systems(ATPS) dos fases acuosa compuesto de polietilenglicol (PEG) y sales cholinium-base de
tetraciclina, extraen el caldo de fermentacin de Streptomyces aureofaciens. Polmero
convencional/sal y sal sal ATPS erantambin estudiaron para propsitos de comparacin. Los
novedosos sistemas aqu propuestos son capaces de extraer tetracyclinedirectly del caldo de
fermentacin con eficiencias de extraccin superiores al 80%. Un extractionability a la medida de
estos sistemas puede lograrse tambin, con extracciones preferenciales o para las fases de
polmero-orsalt-rico, y que ms dependen de la sal cholinium base empleada. El resultssupport se
reunieron la aplicabilidad de los ATPS biocompatible en la extraccin de los antibiticos del
complejo matricesand puede contemplarse como plataformas valiosas para ser aplicado a nivel
industrial por pharmaceuticalcompanies.
Los antibiticos son compuestos qumicos que pueden ser totalmente o partlysynthesized por
viven microorganismos que tampoco inhiben la piensas incluso matar a otros microorganismos.
Por lo tanto, son currentlyused en todo el mundo para un control eficaz de los niveles de
pathogenicbacteria en humanos y animales. A nivel global, el antibioticmarket lleg a US$ 42
billones (34 billionD) en 2009 *1+. Sin embargo, en los ltimos aos, un nmero de patentes
sobrela sntesis y aplicaciones de antibiticos y otro medicamentos haveexpired y se caen en el
dominio pblico [2]. El pharmaceuticalindustry se enfrenta al crecimiento de los medicamentos
genricos y hay necesidad de acrucial reducir al mnimo los costos operativos mediante la
optimizacin de la antibiotics'production y sus pasos de purificacin. Los antibiticos de costo de
produccin se deriva, en gran medida, de los procesos de purificacin de extraccin
andassociated. En este contexto, es imperativeto encontrar y evaluar nuevo
extractivo/purificacin tcnicas conduzca ser escalado-para arriba por las empresas
biofarmacuticas.Hay varias clases de antibiticos como - lactmicos, aminoglucsidos, macrlidos
y tetraciclinas (TCs). Tetracyclinesare los antimicrobianos bacteriostticos producidos por
Streptomyces
aureofaciens o Streptomyces rimosus. Son un amplio-spectrumantibiotic puesto que pueden ser
utilizados contra Gram positivos y negativebacteria, coccidios, Trichomonas, micoplasma,
Chlamydia andRickettsia. Las tetraciclinas inhiben la sntesis de proteinsby bacteriana que ataba a
la pequea unidad (30 S) del ribosoma bacteriano mientras preventingthe acceso del aminoacil
ARNt al sitio aceptor en el complejo themRNA-ribosoma [3-6]. Adems de sus propiedades
antibiticas, las tetraciclinas tambin poseen anti-inflamatorio, anti-apoptoticand anti-
neurodegenerativas propiedades [6]. Debido a que todos sus benefitstetracyclines actualmente se
aaden al animal feed en orden a preventdiseases, as como un aditivo para alimentacin para
acelerar el crecimiento [7].Tcnicas cromatogrficas (particularmente cromatografa de
intercambio inico), extraccin lquido lquido o slido lquido es generallyused para la
extraccin y purificacin de antibioticsfrom comn del caldo de fermentacin [8-10]. Entre estas
tcnicas, la ms usada es la extraccin lquido lquido que tiene beencarried utilizando solventes
orgnicos, es decir el acetato de etilo, acetonitrileand metanlico cido tricloroactico (TCA) [11].
La extraccin lquido lquido de este tipo es una tcnica til que implica lowcosts y conduce a un
nivel de alta pureza. Sin embargo, estos organicscompounds presenta algunos inconvenientes, ya
que son peligrosos para la salud humana [8] volatileand. Teniendo en cuenta la biocompatibilidad
de sustainabilityand de los procesos de extraccin, los useof sistemas bifsicos acuosos (ATPS)
pueden representar un viableoption.
ATPS son considerados un bajo costo, ms apacible y biocompatiblealternative a otras tcnicas de
extraccin ya que son mainlycomposed de agua [12-14]. En la ltima dcada, novela ATPS
composedof lquidos inicos (ILs) agua orgnico/inorgnico Sales, aminocidos, polmeros o
hidratos de carbono tambin han sido propuestos en la literatura [15]. Las principales ventajas del
polmero sal o polmero ILATPS, en comparacin con sistemas de polmero, polmero, rel de
theirlower viscosidades y posibilidad de cambiar la polaridad de las fases thecoexisting. Por otra
parte, generalmente exhiben un phaseseparation rpido y eficiencias de alta extraccin, que
pueden ser easilymanipulated por una adecuada seleccin de los iones que componen una
determinada sal ILor [15]. De hecho, basado en IL ATPS han utilizado con xito en la separacin,
concentracin y purificacin de protenas, antioxidantes, los iones del metales, alcaloides y
antibiticos [15].La mayora ILs hidroflico exhiben propiedades nicas que cumples solventes
respetuosos como insignificante vaporpressures, no-inflamabilidad y altas trmicas y qumicas
estabilidades [16]. Sus ofertas de diversidad qumica nica considerables desarrollar solventes
para fines especficos con medida characteristicsby la combinacin de iones apropiados. Debido a
sus propiedades attractivephysicochemical, ILs adems han sido aplicada forbio-purificacin y
procesos de bio-extraccin [15,17], enzymaticcatalysis [18], bioprocesos y operaciones [19] y el
[20] la produccin de biocombustibles. Sin embargo, la mayora ILs son pobremente
biodegradables y de biocompatibilidad baja.En este contexto, lquidos inicos y sales basadas en
thecholinium ion puede ser una alternativa valiosa; Sin embargo, poco estudiada.Cloruro de
Cholinium es un nutriente esencial, como considerada por theInstitute de medicina en 1998,
debido a su papel en el cuerpo humano (utilizado para la sntesis del neurotransmisor, sealizacin
de membrana celular, etc.). [21]. es de fcil preparacin, relativamente barata, estable en agua y
aire, biocompatible y biodegradable. El cholinium-basedsalts, o lquidos inicos (ILs) cuando su
punto de fusin es inferior a 100 C, estn constituidos por el 2-hidroxietil-N, N, N-
trimethylammoniumcation combinado con los aniones tan diversos como cloruro, bicarbonato,
acetato, levulinato, malato, glicolato, entre otros. Por lo tanto, basado en thecholinium sales/ILs
son una opcin factible para ser utilizado en theformation de ATPS. Hemos demostrado
recientemente los sistemas de dos fases acuosa y de crear posibilidad de tipo polmero sal orsalt
sal por la combinacin de PEG y cholinium-basedsalts o por la adicin de una sal inorgnica a ILs
ligeramente basada en hydrophobiccholinium [22,23]. Con el objetivo de explorar la applicabilityof
esas novela ATPS, este trabajo se centra en el oftetracycline de extraccin directamente en el
caldo de fermentacin de S. aureofaciens.Sistemas compuestos de polietilenglicol 600 y
choliniumbasedsalts fueron investigados por medio de las eficiencias de extraccin coefficientsand
particin obtenidas de tetraciclina. A furtherascertain en la capacidad mejorada de estos
novedosos sistemas de extracttetracycline, adems se realizaron experimentos con
conventionalpolymer/sal y sal sal ATPS para propsitos de comparacin.
Polietilenglicol (PEG) con un peso molecular promedio de 600 g mol1 (abreviado como PEG 600)
y tetraciclina (TC), el 98 wt % puro, fueron suppliedby Fluka. Las sales cholinium base fueron
adquiridas en Sigma-Aldrich: choliniumchloride, [Ch] Cl, bicarbonato cholinium, Bic [Ch] y
cholinium dihydrogencitrate, DHcit *Ch+, con purezas of98 wt %, 80% en peso (en solucin
acuosa) y 99% en peso, respectivamente. El acetato de cholinium, CA [Ch] y cholinium
dihydrogenphosphate, DHph [Ch], se adquirieron en Iolitec con los niveles de pureza del 98% wt
and98 wt %, respectivamente. Estas dos ltimas basadas en cholinium sales caen dentro de la
categora de ILssince presentan temperaturas de fusin por debajo de 100 C. Sin embargo, para
evitar anyambiguity, todos estos materiales sern thereinafter referidos como sales basado en
cholinium.Las estructuras qumicas de las sales de cholinium base investigadas presentan inTable
1. Espectros de RMN de 1H y 13C fueron realizados para evaluar la pureza de eachsample. Todas
las muestras son de alta pureza y los proveedores de acuerdo con la indicatedby de los niveles de
pureza. Las sales inorgnicas K3PO4 (98 wt %) y Na2SO4 (> 99,0% de peso) eran