Resistencia de Sinapis alba (Mostaza blanca) a inhibidores

de ALS y control herbicida alternativo en Espaa

J. M. ROSARIO, H. CRUZ-HIPOLITO y R. DE PRADO
Boca Chica, Repblica Dominicana
Julio, 2010.
UNIVERSIDAD DE CORDOBA
INSTITUTO DOMINICANO DE INVESTIGACIONES AGROPECUARIAS
Introduccin
La resistencia a herbicida es un carcter inherente a
ciertos individuos en una poblacin de una especie maleza,
que les permite sobrevivir y reproducirse despus de la
aplicacin de la dosis recomendada de un herbicida, que
en condiciones normales debi controlarla eficazmente.
1 2 3 4 5 6 7
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Aplicaciones de herbicidas y
aparicin de la resistencia
Introduction
La acetolactato sintasa (ALS) cataliza la biosintesis de los aminocidos de cadena
ramificada valina, leucina e isoleucina, esenciales en el crecimiento y desarrollo de
las plantas.
Los herbicidas que se unen en algn sitio de la enzima acetolactato sintasa son
conocidos como inhibidores de la ALS, causando deficiencia de estos aminocidos
y la posible muerte en plantas susceptible .
Los inhibidores de ALS es el grupo con mayor tasa anual de resistencia, 181
biotipos en 108 especies, 80 dicots y 28 monocots en 34 pases (Heap, 2010).
Espaa, tiene 32 especies resistentes y de estas 4 son resistentes a inhibidores de
ALS: Alisma plantago-aquatica, Cyperus difformis, Papaver rhoeas y Sinapis alba.
S. alba L (Mostaza blanca):
Origen
Agresividad
Control
Objetivo General :
Examinar la resistencia de S. alba a herbicidas inhibidores
de ALS, elucidar mecanismos de resistencia y evaluar
control herbicida alternativo en campo.
Materiales y mtodos
Material vegetal para ensayos de laboratorio e invernadero
Fueron prospectadas semillas de 15 poblaciones de S. alba en el Suroeste
de Espaa, controladas con tribenuron metil durante la ltima dcada en
cultivo de cereales. Semillas de plantas cosechadas en reas nunca
tratadas fueron consideradas como testigo susceptible.
Las semillas fueron germinadas a 4C en oscuridad/luz.
Las plntulas crecieron en macetas y sustrato 2:1:1 (suelo:turba:vermiculita)
en invernadero a 18/14C da/noche, 65% HR y 10 h luz hasta el estado de
4-5 hojas.
10 plantas/poblacion
Diseo Completamente al azar
Evaluacin del peso fresco: 21 DDT
Doses tribenuron : 20. g a.i. l/ha
aplicacn: cmara de lab
Screening con poblaciones de S. alba
Ensayos Dosis-Respuesta
Biotipos: AR
1
(S) y AR
8
(R)
Arreglo Tratamiento : DCA
Evaluacin peso fresco 21 DDT
Datos ajustados a modelo de regresin no
lineal log-logistic
Se estim la ED
50
y se clculo el F.R.
Plantas AR
1
y AR
8
en estado de 4-5 hojas
Aplicacin de herbicida
12.8
6.4
12.8
6.4
160.0 128.0
80.0
80.0
64.0
64.0
40.0
40.0
32.0
28.0
16.0
16.0
8.0
0.0
0.0
R
S
Mesosulfuron
25.6
12.8
6.4
3.2
4.8
1.6
3.2
0.8
2.4
0.6
1.6
0.4
0.8
0.2
0.4
0.1
0.0
0.0
R
S
Iodosulfuron
20.0
7.5
15.0
5.0
10.0
2.5
5.75
1.25
3.75
0.625
2.5
0.3125
0.0
0.0
R
S
Florasulam
115.2
4.8
57.6
2.4
28.8
1.2
14.4
0.6
7.2
0.3
3.6
0.15
1.8
0.075
0.0
0.0
R
S
Imazamox
25.6
12.8
6.4
3.2
4.8
1.6
3.2
0.8
2.4
0.6
1.6
0.4
0.8
0.2
0.4
0.1
0.0
0.0
R
S
Tribenuron
4.0
4.0
2.0
2.0
1.0
1.0
0.5
0.5
0.25
0.25
0.125
0.125
0.0625
0.0625
0.0
0.0
R
S
Bispiribac sodium
224.0
84.0
168.0
56.0
112.0
42.0
84.0
28.0
56.0
21.0
28.0
14.0
14.0
7.0
0.0
0.0
R
S
Flucarbazone
Dosis (g i. a. ha
-1
) Biotipo Herbicidas
Ensayos Dosis-Respuesta: herbicidas y dosis
Ensayos de inhibicin de la ALS
1.- Extracto Crudo de ALS :
Corte 3 gramos tejido foliar de planta R y S
Congelado y pulverizado tejido foliar en mortero
Adicin de 0.5 g polivinilpirrolidona
Adicin de 4 ml solucin Ext. Buffer/g tissue
Agitado, filtrado y centrifugado del homogenado
Precipitado de la fraccin de protena con (NH4)
2
SO
4
Centrifugado y suspendido del pelet en sol. extraccin buffer (700
L)
Calibrado Col. sefadex con sol. Elucin Buffer.
Agitado del pelet redisuelto a baja temperatura
Paso del pelet redisuelto al traves de la col. Sefadex, adicionando 2
ml, 1 ml y otro ml de elucin buffer a la columna
2.-Medicin de la actividad ALS
Mezcla de 0.05 ml de Extracto de ALS+0.1 ml de la sol. Buffer
de ensayo
Adicin de la concentracin de c/. herbicida en c/. eppendorf
Agregado a cada eppendorf de 0.25 ml with PP
Adicin de 0.05 ml H
2
SO4 3M solo al eppendorf del blanco
para deterner la reaccin
Incubacin a 37C/1h, despus de adicionar H
2
SO4 al resto
Nueva incubacin a 60C/15 min
Adicin de 0.25 ml de las soluciones de creatina y naftol
Agitado y reincubado a 60C/15 min
La acetoina fue detecteda como un complejo coloreadp a 520
nm
La inhibicin de la ALS fue expresada en nmol de acetoina mg
-
1
protein
Concentraciones
Herbicidas
B Herbicida
25000
25000
15000
15000
10000
10000
300.0
50.0
50.0
1000.0
30000
30000
25000
25000
10000
10000
1000
500.0
500.0
250.0
250.0
100.0
50.0
50.0
0.0
0.0
R
S
Mesosulfuron
(nM)
50000 25000
25000
10000
10000
5000
5000
2500
2500
1000
1000
500
500
0.0
0.0
R
S
Iodosulfuron
(nM)
1000
250.0
500.0
200.0
300.0
100.0
200.0
50.0
100.0
25.0
50.0
12.5
25.0
6.25
0.0
0.0
R
S
Florasulam
30.0
30.0
10.0
10.0
5.0
5.0
2.50
2.50
1.0
1.0
0.50
0.50
0.25
0.25
0.0
0.0
R
S
Imazamox
(M)
500.0 250.0
1.0
100.0
0.75
50.0
0.5
25.0
0.25
10.0
0.10
5.0
0.05
0.0
0.0
R
S
Tribenuron
(mM)
40.0
40.0
25.0
25.0
10.0
10.0
5.0
5.0
2.50
2.50
1.25
1.25
0.0
0.0
R
S
Bispiribac
sodium (nM)
30000
30000
5000
5000
2500
2500
1000
1000
500.0
500.0
250.0
250.0
100.0
100.0
50.0
50.0
0.0
0.0
R
S
Flucarbazone
(nM)
Ensayo inhibicin ALS: herbicidas y concentracin
Ensayos de inhibicin de ALS
3 gramos tejido foliar planta R y S
congelado y pulverizado tejido foliar
Adicin de reactivos (E.B. and PVP)
Cocktail: E.C.E (R&S) + A.B.+herbicidas
Medicin de la actividad de ALS
Ext. Buffer (PP+SP+MgCl
2
+TP+FAD+DTT+G
Evaluacin de herbicidas posemergentes para
control de S. alba resistente.
Tratamiento herbicida: 7
Volumen aspersin: 140.25 l/ha
poca aplicacin :112 DDS
Evaluacin control visual (%): 33 DDT (escala 0-100%)
Tratamientos herbicidas postemergentes
56.0 Tribenuron metil 50% (2)
8.4 + 168 Tribenuron metil+bromoxinil
28 + 600 Tribenuron metil+MCPA
14.0 Tribenuron metil 50% SG
800.0+0.1 Mecoprop-P+tribenuron metil
(3+15)+0.5+(112.5+112.5+562.5) (Iodosulfuron+mesosulfuron)+mefenpyr diethyl+(ioxinil+bromoxinil+mecoprop-P)
Control no tratado
Rates (g a.i ha
-1
) Tratamiento herbicida
Evaluacin rendimiento de trigo y
biomasa seca area de S. alba
Resultados y Discusiones
Screening con poblaciones de S. alba
7.72.7fg 0.7 7.9 8.6 AR13
7.92.8fg 1.2 12.9 14.0 AR12
9.02.2ef 1.6 14.8 16.4 AR11
10.21.2de 1.8 14.9 16.7 AR10
10.92.7de 1.9 14.5 16.4 AR8
11.92.2cd 2.4 16.7 19.0 AR7
11.62.1cd 1.0 6.9 7.9 AR6
13.13.1c 2.0 11.9 13.9 AR5
30.02.3b 6.0 13.6 19.6 AR4
1.9675 LSD Fischer: alfa 0,05
5.71.8h 1.1 16.7 17.8 AR16
6.42.2gh 1.1 15.3 16.4 AR15
6.61.8gh 1.4 18.0 19.4 AR14
11.12.2d 2.2 16.8 19.0 AR9
91.31.8a 19.4 1.2 20.7 AR3
90.92.1a 14.1 1.3 15.4 AR2
90.92.3a 11.5 1.1 12.6 AR1
Reduccin peso fresco
( 21 DDT)
Peso fresco
20 g i. a. ha
-1
Peso fresco
testigo
Poblaciones S. alba
Screening poblaciones S. alba
Ensayos Respuesta a Dosis e Inhibition de ALS-
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
Valor-P
Ensayos Inhibicin-ALS (Lab) Ensayos Respuesta-Dosis (invernadero)
<0.0001 0.93 5.73 0.883 0.66 S
<0.0001 0.98 1.6 9.0 0.963 0.16 0.107 R Bispiribac s
<0.0001 0.96 43.87 0.979 23.878 S
<0.0001 0.98 86.0 3780.37 0.998 8.5 203.091 R Flucarbazone
<0.0001 0.98 3.07 0.999 0.042 S
<0.0001 0.97 24.0 72.10 0.989 65.2 2.771 R Florasulam
<0.0001 0.97 4.39 0.987 0.423 S
<0.0001 0.97 1.8 7.80 0.997 4.5 1.905 R Imazamox
<0.0001 0.90 13.39 0.999 1.529 S
<0.0001 0.99 900.0 11833.57 0.997 11.9 18.175 R Mesosulfuron
<0.0001 0.996 0.51 0.997 0.141 S
<0.0001 0.972 835.0 427.96 0.975 17.5 2.462 R Iodosulfuron
<0.0001 0.89 0.22 0.993 0.180 S
<0.0001 0.91 3,969.0 908.25 0.985 9.8 1.760 R Tribenuron
Valor-P Rajust RF ED
50
Rajust RF ED
50
B Herbicida
Ensayos Respuesta-Dosis
Efecto de tribenuron
Efecto de mesosulfuron
Efecto de bispiribac
Efecto de florasulam
Herbicidas Alternativos para control de S. alba
resistante a tribenuron.
157.18 17.818 7.1837 LSD (0.05)
*(Iodosulfuron+mesosulfuron)+mefenpyr diethyl+(ioxinyl+bromoxinyl+mecoprop-P)
; Medias ensayo 2007-2008.
4752.056.0a 89.00.0a 14.01.0e *(I+m)+m-d+ (i+b+mecop-P)
2924.024.0d 28.72.8c 71.02.8b Tribenuron methyl 50%
3842.050.0c 66.0 0.0b 38.51.6d Tribenuron + bromoxinyl
3814.074.0c 70.37.5b 62.03.0c Tribenuron methyl 75%
3958.026.0c 88.719.3a 34.51.4d Mecoprop-P+tribenuron
4186.010.0b 92.312.8a 11.50.4e Tribenuron + MCPA
2856.012.0d 0.00.0d 138.51.4a Testigo no tratado
Rendimiento trigo
(kg ha
-1
)
Eficacia
Herbicida
Peso seco tejidos
areo (Gramos m
-2
)
Herbicida
Conclusiones
Esta investigacin confirm la resistencia de S. alba a tribenuron metil y otros
herbicides inhibidores de ALS
Los ensayos in vitro sugieren que el mecanismo de resistencia es debido a la
falta de afinidad de tribenuron en el sitio de accin (ALS).
La retencin foliar y el ngulo de contact podran contribuir en la evolucin de
resistencia de S. alba al tribenuron y otros herbicidas inhibidores de ALS.
La mezcla de tribenuron con otros herbicidas de diferentes modos de accin
(MCPA or bromoxinyl) puede ser aplicada para el control de mostaza blanca
resistente.
Viewof resistant S. alba. Arriate, Mlaga, Spain. 2009.