Vernica Gonzlez Nez

Universidad de Salamanca
3. BIOSINTESIS DE NUCLEOTIDOS PURICOS
1. Va de novo de la biosntesis de nucletidos pricos
- Precursores
- Caractersticas de la va
- Reacciones de la va hasta la sntesis del IMP
- Balance
- Sntesis de ATP y GTP
- Sntesis de nucletidos trifosfato
- Sntesis de purinas vs. pirimidinas
- Agentes bloqueantes de la va de novo
2. Regulacin de la biosntesis de nucletidos pricos
- Regulacin de la va de novo de biosntesis de nucletidos pricos
- Regulacin coordinada de las sntesis de purinas y pirimidinas
3. Va de recaptacin de nucletidos pricos
4. Catabolismo de los nucletidos pricos
5. Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos
- Sndrome de Lesch-Nyhan: deficiencia en HGPRT
- Hiperuricemias y gota
ESQUEMA. Biosntesis de nucletidos pricos
SINTESIS DE NOVO DE NUCLEOTIDOS PURICOS
PRECURSORES
Estudios con marcaje radiactivo
Formato
Formato
Gly
Gln
CO
2
Asp
- 2 procesos: Sntesis del IMP 11 pasos
Sntesis de AMP & GMP
- Los tomos del anillo prico se incorporan 1 a 1, excepto la Gly
- El anillo prico se sintetiza unido a la ribosa-5P
- Elevado gasto : 7 ATP / IMP
- Localizacin: en el hgado
Channeling en animales en la sntesis del IMP
3 polipptidos multifuncionales
- Fosforribosil aminoimidazol sintasa: reacciones 3, 4, 6
- Fosforribosil aminoimidazol succinil carboxamida sintasa: reacciones 7 & 8
- IMP sintasa: reacciones 10 & 11
Caractersticas de la va
SINTESIS DEL IMP
Fuente de la imagen
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1. Sntesis de la PRPP (I)
Enzima: Ribosa-5P pirofosfokinasa
Ciclo de las pentosas-P
Precursor de:
- nucletidos pirimidnicos
- His & Trp
Ribosa5P Fosforribosilpirofosfato (PRPP)
-D-ribosa-5P + ATP PRPP + AMP
1. Sntesis de la PRPP (II)
Enzima: Ribosa-5P pirofosfokinasa
Mecanismo: ataque nucleoflico del C
1
-OH de la ribosa al enlace fosfato- del
ATP y transferencia del grupo pirofosfato
Formacin de un enlace en configuracin entre el fosfato y el C
1
de la ribosa
PRPP: reactivo limitante en la sntesis de nucletidos pricos
Regulacin: + PPi, 2,3BPG
- ADP & GDP
2. Adquisicin del N
9
de la Gln (I)
PRPP
Fosforribosilamina
Enzima: Amido-fosforribosil-transferasa
(PPi 2Pi Enzima: pirofosfohidrolasa)
PRPP + Gln + H
2
O P-ribosil--amina + Glu + PPi
2. Adquisicin del N
9
de la Gln (II)
Enzima: Amido-fosforribosil-transferasa
(PPi 2Pi Enzima: pirofosfohidrolasa)
- Primera reaccin especfica de la va
- Punto clave en la regulacin
- Inversin de la configuracin
- Inhibicin por retroalimentacin negativa
PRPP + Gln + H
2
O P-ribosil--amina + Glu + PPi
Enzima: GAR Sintetasa
GAR: Glicinamida ribtido
- Formacin de un enlace amida con el grupo COOH de la Gly
- Formacin de un intermediario activado (acil-P)
Gly + ATP NH
2
-CH
2
-COO-PO
3
2-
+ADP
3. Adquisicin de los tomos C
4
, C
5
& N
7
de la Gly
Fosforribosilamina GAR
fosforribosil--amina + Gly + ATP GAR + ADP + Pi
GAR FGAR
4. Adquisicin del C
8
(I)
Enzima: GAR Transformilasa
GAR + N
10
-formil-THF FGAR + THF
FGAR: Formilglicinamida ribtido
4. Adquisicin del C
8
(II)
Enzima: GAR Transformilasa
- C cedido por el N
10
-formil-THF procede de Ser / Gly
- Grupo formilo clave en la condensacin del ciclo
Mecanismo
Ataque nucleoflico del grupo NH
2
del GAR al grupo formilo del N
10
-formil-THF
Formacin de un intermediario tetradrico
Transferencia del grupo formilo
GAR + N
10
-formil-THF FGAR + THF
FGAR
FGAM
5. Adquisicin del N
3
(I)
Enzima: FGAM Sintetasa
FGAR + Gln + ATP + H
2
O FGAM + Glu + ADP + Pi
FGAM
Formilglicinamida ribtido
5. Adquisicin del N
3
(II)
1. C=O de FGAR (forma isoamida) + ATP intermediario P-ster
Gln (C amidado) + SH de la enzima formacin de un tioster
2. Hidrlisis del tioster: Glu + NH
3
3. NH
3
+ P-ster formacin de un aducto tetradrico
4. Desfosforilacin y formacin del enlace imino
FGAR + Gln + ATP + H
2
O FGAM + Glu + ADP + Pi
Mecanismo de accin de la FGAM sintetasa
Enzima: AIR Sintetasa
AIR: 5-aminoimidazol ribtido
- Condensacin intramolecular
- Tautomerizacin imino #enamino propiedades aromticas
6. Cierre del anillo imidazol
FGAM AIR
FGAM + ATP AIR + ADP + Pi
Enzima: AIR Carboxilasa
7. Adquisicin del C
6
(I)
AIR
CAIR
AIR + ATP + HCO
3
-
CAIR + ADP + Pi
CAIR: Carboxiaminoimidazol ribotido
Enzima: AIR Carboxilasa
- Carboxilacin directa con aporte de
- Ausencia de biotina
- AIR carboxilasa de E. coli: heterodmero PurE & PurK
(sinergia cataltica)
7. Adquisicin del C
6
(II)
AIR + ATP + HCO
3
-
CAIR + ADP + Pi
CAIR
SAICAR
Enzima: SACAIR Sintetasa
SACAIR: 5-aminoimidazol-4-N-succinil carboxamida ribtido
- Condensacin y formacin de un enlace amida
- Reaccin parecida a la reaccin 3 (GAR sintetasa)
8. Adquisicin del N
1
CAIR + Asp + ATP SACAIR + ADP + Pi
Enzima: Adenilsuccinato liasa
9. Eliminacin del fumarato (I)
SACAIR AICAR + fumarato
AICAR: 5-aminoimidazol-4-carboxamida ribtido
SAICAR
AICAR
Enzima: Adenilsuccinato liasa
- Transformacin de un grupo carboxilo en un grupo amida
- Reaccin anaplertica del ciclo de Krebs
Gran importancia en el metabolismo muscular
- Reacciones 8 + 9 anlogas a la amidacin de la citrulina para formar Arg
(en el ciclo de la urea)
9. Eliminacin del fumarato (II)
SACAIR AICAR + fumarato
10. Adquisicin del C
2
Enzima: AICAR Transformilasa
FAICAR: 5-formaminoimidazol-4-carboxamida ribotido
- Similar a la reaccin 4
- Grupo formilo clave para la condensacin del ciclo
AICAR
FAICAR
AICAR + N
10
-formil-THF FAICAR + THF
Enzima: IMP Ciclohidrolasa
IMP: Inosina monofosfato
Base prica del IMP: hipoxantina
11. Cierre del anillo y formacin del IMP (I)
FAICAR
IMP
FAICAR IMP + H
2
O
Enzima: IMP Ciclohidrolasa
- Condensacin intramolecular en ausencia de hidrlisis de ATP
- El IMP no se acumula en la clula, sino que se transforma rpidamente
en AMP & GMP
Balance de la sntesis de IMP
2 ATP en el paso 1: sntesis de PRPP
1 ATP en el paso 3: GAR sintetasa
1 ATP en el paso 5: FGAM sintetasa
1 ATP en el paso 6: AIR sintetasa
1 ATP en el paso 7: AIR carboxilasa
1 ATP en el paso 8: SACAIR sintetasa
Balance total: 7 ATP
11. Cierre del anillo y formacin del IMP (II)
FAICAR IMP + H
2
O
Enzima: Adenil-succinato sintetasa
SINTESIS DE AMP (I)
IMP Adenilsuccinato
IMP + Asp + GTP adenilsuccinato + GDP + Pi
Adenilsuccinato
AMP
Balance : + 1 ATP
Sntesis de AMP (II)
Enzima: Adenilsuccinato liasa
Reaccin global: sustitucin del grupo ceto en C
6
por un grupo amino
Es la misma enzima que la que cataliza la reaccin 9 de la sntesis del IMP
Adenilsuccinato fumarato + AMP
SINTESIS DE GMP (I)
IMP XMP
IMP + NAD
+
+H
2
O XMP + NADH + H
+
Enzima: IMP DH
Flavoenzima
XMP: Xantosina monofosfato
Sntesis de GMP (II)
Reaccin global: introduccin de un grupo amino en C
2
Balance : + 2 ATP
XMP GMP
Enzima: GMP sintetasa (PPi 2Pi)
XMP + Gln + ATP + H
2
O GMP + Glu + AMP + PPi
Nuclesido monofosfato kinasas
AMP+ATP2ADP Enzima:Adenilato kinasa
GMP+ATPGDP+ADP Enzima:Guanilato kinasa
NodistinguenNMPsdedNMPs
Altaespecificidaddebasenitrogenada
SINTESIS DE NUCLEOTIDOS DI- & TRIFOSFATO
Nuclesido difosfato kinasa
ATP+GDPADP+GTP
Bajaespecificidaddebasenitrogenada
Reaccionescercanasalequilibrio
Mecanismocatalticodepingpong
1.NTPfosforila unresiduodeHis delaenzima
2.Laenzimatransfiereelgrupofosforilo alotroNDPNTP
ImportanciaBiomedica: Activacindenuclesidos antiviralescomolaAZT
SINTESIS DE PURINAS vs. PIRIMIDINAS
RegulacinporUTP
(productofinal)
RegulacinporATP&GTP
(productosfinales)
Balance:4ATP(hastaUMP)
+1ATP(sntesisdeCTP)
Balance:7ATP(hastaIMP)
+12ATP(ATP/GTP)
ObtencindeUMP&CMP ObtencindeIMP
Sntesisdelanillopirimidnico y
posterioruninalaribosa5P
Adicindelostomossobrela
ribosa5P
Sntesisapartirde2precursores
metablicos
Adicindelostomos1a1
(exceptolaGly)
Pirimidinas Purinas
AGENTES BLOQUEANTES DE LA VIA DE NOVO (I)
6-mercaptopurina
Competicin con el IMP en la sntesis del AMP
Droga inmunosupresora
Tratamiento de leucemias
Acido micofenlico
Inhibe la IMP DH
Inhibe la proliferacin
de linfocitos
Anlogos de la Gln
Impiden la donacin de grupos de NH
4
+
Gln Azaserina
Sulfonamidas
Anlogos del cido p-aminobenzoico (PABA)
Inhibidores competitivos de la sntesis del cido flico en bacterias
Inhibicin de la dihidropteroato sintetasa no se genera THF
Inhibicin de la sntesis de timina y de purinas
Inhibicin del crecimiento bacteriano (bacteriosttico)
Animales: las sulfonamidas no tienen efecto
Causa: los animales no pueden sintetizar el cido flico, sino que han
de ingerirlo con la dieta
Nota: Importancia del cido flico como suplemento alimentario durante el
primer trimestre del embarazo
Agentes bloqueantes de la va de novo (II)
Resistencia a las sulfamidas
Mutaciones que producen alteraciones en el centro activo menor afinidad
Aumento de la produccin de PABA neutraliza la competicin
Plsmido que codifica para una dihidropteroato sintetasa alterada con menor
afinidad por las sulfamidas que por PABA (1/1000 afinidad)
Trimetoprima
Antibitico bacteriosttico que inhibe la dihidrofolato reductasa
Accin sinrgica junto con las sulfamidas
La combinacin de sulfamidas y trimetoprima es un potente bactericida
Agentes bloqueantes de la va de novo (III)
REGULACIN DE LA BIOSNTESIS DE NUCLETIDOS PRICOS (I)
Importancia
1. Regulacincoordinadadelabiosntesisdelosnucletidospricos
Obtencindecantidadesequimolares denucletidosdeadenina&guanina
2.Regulacindelosniveles intracelulares(nivelesdeATP&GTP)
Importancia:losniveles intracelularesregulanmuchosprocesosmetablicos
2procesosimplicadosenlaregulacin
1.Inhibicincompetitivaporproductofinal
Importancia:evitarlaacumulacindeexcesodeproducto
2.CrossestimulacindelasntesisdeATP&GTP
Importancia:obtencindecantidadesequimolares deambosnucletidos
Punto clave
Regulacin recproca desustratos
ElGTPestaimplicadoenlasntesisdeATPyviceversa
Regulacin de la biosntesis de nucletidos pricos (II)
Puntos de regulacin en la via de novo
Sntesis de IMP
Ribosa-P pirofosfokinasa (R1): - ADP & GDP (negative feedback)
+ PPi & 2,3BPG
Amidofosforribosil-transferasa (R2): - ATP, ADP & AMP (sitio 1)
- GTP, GDP & GMP (sitio 2)
+ PRPP (feedforward activation)
Sntesis IMP AMP - AMP (inhibicin competitiva por producto final)
(adenilsuccinato sintetasa) + GTP (sntesis coordinada de ATP & GTP)
Sntesis IMP GMP - GMP (inhibicin competitiva por producto final)
(IMP DH) + ATP (sntesis coordinada de ATP & GTP)
PurK: represor de purinas en bacterias
sinergia
neg. feedback
PRPP: Activa la biosntesis de IMP (amidofosforribosil-transferasa)
Orotato fosforribosil transferasa depende de la disponibilidad de PRPP
ATP: estimula la sntesis de pirimidinas: ATCasa (bacterias)
carbamil-P sintetasa II (animales)
inhibe la sntesis de PRPP
inhibe la sntesis de IMP
Regulacin coordinada de purinas y pirimidinas (I)
Efector Accin / Va

PRPP Pur / Pir

ATP Pir / GTP
Pur / ATP / PRPP
GTP ATP
Pur / GTP / PRPP
CTP Pir
UTP Pir
dTDP PRPP
Regulacin coordinada de purinas y pirimidinas (II)
VA DE RECAPTACIN DE NUCLETIDOS PRICOS (I)
Salvage pathway
En animales: Necesidad de la recaptacin de bases pricas
- A partir de la degradacin de DNA & RNA se obtienen bases pricas
- La va de novo de biosntesis de purinas es muy cara
- La va de novo no puede satisfacer las necesidades totales de purinas en
determinados tejidos (especialmente en el tejido nervioso)
- El 90% de las bases pricas libres son recuperadas y recicladas
PRPP: metabolito comn a las vas de sntesis de novo y de recaptacin
Va de recaptacin de nucletidos pricos (II)
Enzima: APRT - Adenina fosforribosil-transferasa
adenina + PRPP AMP + PPi
Enzima: HGPRT Hipoxantina - Guanina fosforribosil transferasa
hipoxantina + PRPP IMP + PPi
guanina + PRPP GMP + PPi
Posteriormente: PPi 2Pi Enzima: Pirofosforilasa
Fosforilaciones sucesivas hasta obtener los NDPs & NTPS
AMP + ATP 2 ADP & GMP + ATP GDP + ADP
ATP + GDP ADP + GTP
Balance : 2 ATP
Enanimales,lasbasespricas sondegradadashastaelcidorico
Enzima:5nucleotidasa (hidrlisis)
Nucletidos+H
2
Onuclesidos+Pi
Enzima: PNP Purinanuclesidofosforilasa
Nucleosido+Piribosa1P+purina
Isomerizacindelaribosa:ribosa1Pribosa5P
Enzima:AMPdesaminasa
AMP+H
2
OIMP+NH
4
+
Enzima:Adenosinadesaminasa(ADA)
Adenosina+H
2
OInosina+NH
4
+
Enzima: Guaninadesaminasa
Guanina+H
2
OXantina+NH
4
+
CATABOLISMO DE NUCLEOTIDOS PRICOS (I)
Enzima:PurinaNuclesidofosforilasa(PNP)
InosinaHipoxantina (Hipoxantina=6oxopurina)
XantosinaXantina (Xantina=2,6dioxopurina)
GuanosinaGuanina
Enzima: Xantinaoxidasa
Hipoxantina+O
2
+H
2
OXantina+H
2
O
2
Lahipoxantinapuedeserrecaptada
Enzima: Guaninadesaminasa
Guanina+H
2
OXantina+NH
4
+
Enzima:Xantinaoxidasa
Xantina+O
2
+H
2
Ocidorico+H
2
O
2
Enzima:catalasa:H
2
O
2
H
2
O+ O
2
Catabolismo de nucletidos pricos (II)
Tautomera ceto-enlica (lactama-lactima) del cido rico
hipoxantina acido urico xantina
Reacciones catalizadas por la xantina oxidasa
El cido rico es un cido dbil
Catabolismo de nucletidos pricos (III)
Importanciafisiolgicadelurato
1. Es un potente antioxidante, ya que elimina ROS (Reactive Oxygen Species:
radicaleshidroxilo,anionessuperxido,oxgenoatmicoetc.)
En humanos, la concentracin de urato en sangre est prxima a su lmite de
solubilidad(7mg/dL a37Cdeuratomonosdico)
2.Elcidoricononecesitaagua ensuexcrecin,mientrasqueelNH
4
+
s
Mantenimientode losnivelesdeaguaenespeciesterrestres
Importanciaevolutiva
La evolucin ha favorecido la acumulacin de un metabolito hasta el lmite
desusolubilidadporquedesempea otra importante funcin fisiolgica?
Catabolismo de nucleotidos puricos (IV)
No en genes de la va de novo letales durante el desarrollo
Sndrome de Lesch-Nyhan: Deficiencia en HGPRT
- Enfermedad congnita ligada al sexo (cromosoma X). Carcter recesivo
- Manifestaciones
hiperuricemias y gota
desrdenes neurolgicos: espasticidad, retardo mental y comportamiento
agresivo y destructivo (automutilaciones en labios y dedos)
- La muerte suele estar causada por fallo renal (por depsitos de urato
monosdico)
- Fue la primera enfermedad psiquitrica asociada al defecto en una sola enzima
La aparicin de alteraciones neurolgicas indica que la va de recaptacin de
purinas es clave en el tejido nervioso
ALTERACIONES DEL METABOLISMO DE PURINAS EN HUMANOS (I)
Causa bioqumica del Sndrome de Lesch-Nyhan
Ausencia de actividad HGPRT
Bloqueo de la va de recaptacin de purinas
Consecuencias
Acumulacin de PRPP
Estimulacin de la biosntesis de novo de nucletidos
(x200 biosntesis de purinas)
Aumento de la degradacin de purinas cido rico hiperuricemia y gota
Depsitos de urato
Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (II)
Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (III)
Hiperuricemia
Aumento de los niveles de cido rico en sangre y otros fluidos
Gota
Enfermedad causada por la hiperuricemia
Cursa con
- inflamacin de las articulaciones y dolor articular muy intenso, generalmente
en el dedo pulgar del pie, y en hombres
- depsito de cristales de urato (monosdico) en las articulaciones
- depsito de cristales en el rin y urteres dao renal y obstruccin del
tracto urinario
Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (IV)
Causas de la gota
Fallos en la excrecin de cido rico
Superproduccin de urato
- Deficiencia en HGPRT
- PRPP sintetasa hiperactiva: se salta la retroinhibicin alostrica
- Glucogenosis de von Gierke: la Glc se desva hacia la ruta de las
pentosas-P sntesis de PRPP
- Frmacos que pueden producir hiperuricemia
niacina, diurticos, aspirina, ciclosporina, drogas citotxicas
Tratamiento de la gota (I)
Tratamiento no farmacolgico de la gota
- Prdida de peso
- Evitar comidas ricas en purinas: carne roja y casquera, mariscos,
arenques, anchoas
- Evitar el alcohol
- No utilizar frmacos hiperuricmicos (aspirina)
Tratamiento farmacolgico de la gota (I)
Colchicina
Disminucin de la movilidad de leucocitos, de la fagocitosis y la lactiacidosis
Tratamiento farmacolgico de la gota (III)
Agentes uricosricos probenecid: inhibe la reabsorcin tubular de urato
hipoxantina alopurinol
aloxantina
Tratamiento farmacolgico de la gota (III)
Alopurinol
Anlogo de la hipoxantina
Mecanismo
1. El alopurinol se comporta primero como sustrato de la xantina oxidasa
alopurinol aloxantina
2. La aloxantina permanece fuertemente unida al centro activo
INHIBIDOR SUICIDA
Tratamiento de la gota (II)
Consecuencias
- produccin de cido rico y niveles de hipoxantina y xantina
La hipoxantina y la xantina son ms solubles en agua, por lo que se eliminan
mejor por va renal
- El alopurinol secuestra PRPP
estimulacin de la biosntesis de purinas
cantidad de sustrato (PRPP) disponible para la amido-fosforribosil-transferasa
Disminucin de la produccin de cido rico
Tratamiento de la gota (III)
Deficiencia en AMP desaminasa
No tiene lugar la reaccin: Adenosina + H
2
O Inosina + NH
4
+
Importancia
En la conversin de IMP AMP, se produce fumarato
En el msculo, no se expresan otras enzimas de las reacciones anaplerticas
del ciclo de Krebs (el fumarato es un intermediario del ciclo de Krebs)
La deficiencia gentica en AMP desaminasa produce fatiga muscular y
calambres tras realizar ejercicio fsico
Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (IV)
Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (IV)
Sndrome de inmunodeficiencia causado por deficiencia en PNP
Muerte selectiva de linfocitos T
Causa
El tejido linfoide presenta una elevada actividad del metabolismo de los
nucletidos (alta tasa proliferativa)
La ausencia de alguna de las enzimas implicadas en estas rutas provoca una
manifestacin muy clara en el tejido linfoide
Idea para el tratamiento
La ausencia de respuesta de linfocitos T podra aprovecharse como
tratamiento para enfermedades autoimnunes (artritis reumatoide, psoriasis),
algn tipo de diabetes, as como para frenar el crecimiento de linfomas de
clulas T
Estructura de rayos X de la PNP diseo de inhibidores especficos