TECNICAS DE SIEMBRA

UNIVERSIDAD DE NARIO
FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
LAB MICROBIOLOGIA


JUSTIFICACION: La importancia de esta prctica es aprender a manipular adecuadamente los
cultivos puros y aplicar las tcnicas de siembra, tales como Siembra en medio lquidas, medio
semislido, en agar inclinado, masiva (antibiograma).
El tipo de microorganismo que ser utilizado en este laboratorio sern bacterias aureus. Las
bacterias se cultivan sobre materiales conocidos como medios de cultivo. La composicin
qumica o nutricional de los medios es extremadamente variada (Prctica Medios de Cultivo).
Los medios ms comunes son los caldos (medios lquidos), tubos con agar inclinado, tubos con
agar y cajas de Petri con agar o placas de agar. El agar es una sustancia derivada de un alga
marina que se solidifica como un semislido tipo gelatina. Cuando se aaden nutrientes y otros
factores de crecimiento, muchos tipos de bacterias pueden cultivarse en l. Para Sembrar es
necesario colocar una muestra de inculo, en un medio de cultivo para obtener el crecimiento
de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de Petri, que contiene un
gel (Agar) al que se han aadido las substancias que necesitan los microorganismos para crecer.
La siembra se puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos de vidrio con gel,
frascos con lquidos nutritivos para los microorganismos y posterior a ello se procede a la
"incubacin" del medio ya sembrado. En cada caso se hace en condiciones particulares de
presin de oxgeno, temperatura, agitacin, duracin, etc. Muchas de las bacterias patgenas
crecen bien a temperaturas cercanas a los 37C habituales de nuestro organismo. Si el cultivo
bacteriano tiene xito, crecern "colonias" de bacterias en el medio de cultivo. Estas colonias
tienen caractersticas de color, forma, tamao etc. propias de cada bacteria y esto nos ayuda a
identificarlas. Dependiendo del carcter del material para la siembra de los fines de
investigacin del medio de cultivo utilizado existen varios mtodos de siembra. Todos ellos
cumplen con un fin; instalar microorganismos. Por eso se requiere trabajar rpido, pero sin
movimiento brusco y durante el proceso de siembra.
PROCEDIMIENTOS
Primero se Limpiar y esterilizar el rea de
trabajo, se Prende los mecheros, ajustar la
flama hasta que sta presente un cono azul
bien marcado en lo cual se Identifica y
organiza el material dentro del rea de
trabajo. Luego se Marca el material con
iniciales de la cepa a sembrar, fecha y grupo.
1. Siembra en medio liquido: caldo
tioglicolato.
Se toma una muestra de los microorganismos
del tubo con el material problema y se
translada al tubo con medio de cultivo estril.
Enseguida incubar el tubo recin sembrado
durante 10 a 20 minutos a 37 grados
centgrados.


2. Siembra en medio semislido: SIM (medio
de movilidad.)
Esta siembra se lleva a cabo con un hilo de
siembra (asa recta) con el que se toma la
muestra. El medio queda inoculado al
introducir el hilo hasta el fondo del tubo.

.
3. Tcnicas de estriado:
Estriado simple: EMB o McConkey (medio
selectivo).Se realiza la siembra en una placa
con agar esteril y con cuidado de no daarlo
se inucula la muestra en un extremo de la
placa y con el asa realiza las estrias.
Siembra para aislamiento por estrias:
(cuadrante) agar sangre.
Al realizar esta tcnica de siembra
extendemos lo ms posible en inoculo para
obtener colonias aisladas .Primer paso: estriar
un borde de la caja. Segundo paso: estriar el
segundo plano perpendicular y repetir el
ejercicio hasta ocupar toda la caja.





4. Siembra en agar inclinado: TSI
Se toma una colonia del cultivo puro con el
asa recta y se introduce en el tubo con agar
inclinado,picando el fondo y al retirar el asa se
desliza por la superficie haciendo un zig-zag.
Esto ayuda a identificar bacterias
-En superficie: aerobias
-En la profundidad: anaerobias



5. Siembra masiva: antibiograma (mueller
hinton) MH.
Disco de plata: con un inoculo normalizado
sobre la superficie de un medio slido,
colocando en ella discos de papel de un
determinado antibitico. Marcar la caja e
incubar.



VERIFICAR QUE TODAS LAS CAJAS ESTEN
MARCADAS E INCUBAR A 37 GRADOS
CENTIGRADOS DURANTE 24 HORAS
RESULTADOS
Bacteria sembrada:
Staphylococcus aureus (pronunciacin:
/stafilokokus awrews/), conocido como
estafilococo ureo, o comnmente
estafilococo dorado, es una bacteria
anaerobia facultativa, gram positiva,
productora de coagulasa, catalasa, inmvil y
no esporulada que se encuentra ampliamente
distribuida por todo el mundo, estimndose
que una de cada tres personas se hallan
colonizadas, aunque no infectadas, por ella.1
Puede producir una amplia gama de
enfermedades, que van desde infecciones
cutneas y de las mucosas relativamente
benignas, tales como foliculitis, forunculosis o
conjuntivitis, hasta enfermedades de riesgo
vital, como celulitis, abscesos profundos,
osteomielitis, meningitis, sepsis, endocarditis
o neumona. Adems, tambin puede afectar
al aparato gastrointestinal, ya sea por
presencia fsica de Staphylococcus aureus o
por la ingesta de la enterotoxina estafiloccica
secretada por la bacteria.
1. Resultado Siembra en medio liquido:
Caldo tioglicolato


Como el Medio liquido es el caldo de
enriquecimiento ms utilizado en
Microbiologa pues contiene 0,075 % de Agar
para evitar que las corrientes de conveccin
transporten el oxgeno de la superficie a toda
la masa del caldo. El cido tiogliclico acta
como agente reductor, disminuyendo an
ms el potencial de xido-reduccin del
medio.
Con el agregado de muchos factores
nutrientes (Casena, extractos de Levadura y
Carne, Vitaminas, etc.), el medio permite el
desarrollo de la mayor parte de las bacterias
patgenas.
En nuestro caso el cambio de color fucsia a
transparente turbio como se muestra en la
figura nos indica la probabilidad de que el
microorganismo que se sembr en este medio
es patgeno y que es anaerobio.
2. RESULTADO DE Siembra en medio
semislido: (SIM o MIO cualquier medio de
movilidad).

Como l (SIO o MIO) Es un medio semislido
destinado a verificar la movilidad, produccin
de indol y de sulfuro de hidrgeno en un
mismo tubo. Con base a si toma o no alguno
de los siguientes resultados:
-Cepas mviles: producen turbidez del medio,
que se extiende ms all de la lnea de
siembra.
-Cepas inmviles: el crecimiento se observa
solamente en la lnea de siembra.
-Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo
largo de la lnea de siembra o en todo el
medio.
-Cepas SH2 negativas: el medio -permanece
sin cambio de color.
-Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo
luego de agregar el reactivo de Kovacs o de
Erlich.
-Cepas indol negativas: sin cambio de color.
-En nuestro caso las cepas son mviles pues
pueden apreciarse en este medio, por la
turbidez que producen alrededor de la
puncin de siembra, y no son productoras de
sulfhdrico por que no hubo formacin de un
precipitado negro de sulfuro de hierro a partir
del tiosulfato.
3. Resultado Tcnica de estriado.

Con el fin de obtener colonias aisladas y as
poder realizar un anlisis determinado de
estas, se emplea esta tcnica de siembra;
obtuvimos algunas colias aisladas y se pudo
realizar la siguiente descripcin de la (S.
Aureus)
Elevacin =planas
Forma =regular redondeada
Aspecto= spera con pequeas
irregularidades
Color= beige
Consistencia=mantecosa
Borde=entero
4. resultado Siembra en agar inclinado TSI.

Como el TSI es un medio universalmente
empleado para la diferenciacin de entero
bacterias, en base a la fermentacin de
glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de
cido sulfhdrico. se emple este medio e
identificando que si:
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo
amarillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo
amarillo): el microorganismo fermenta
glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico
rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del
medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el
microorganismo produce cido sulfhdrico.
Y obteniendo los siguientes resultados:
Pico acido/ fondo acido: nuestro
microorganismo fermenta los tres azucares.
Por fermentacin de azcares, se producen
cidos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol, el cual vira al color
amarillo como se muestra en la figura
anexada y nos muestra que se est en
presencia de un medio cido.
El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de
hidrgeno el que reacciona luego con una sal
de hierro proporcionando el tpico sulfuro de
hierro de color negro en el fondo del tubo.
No hubo presencia de burbujas lo que nos
indica que no se produjo gas.
5. resultado Siembra masiva (antibiograma):
Mueller Hinton (MH).



Como el Agar Mueller-Hinton es especfico
para la realizacin de antibiogramas ms el
sistema disco-placa se puede medir la eficacia
de los antimicrobianos en nuestro caso 3 tipos
de antibiticos; de los cuales al disco 3 el s.
aureus presento sensibilidad con un radio de
sensibilidad superior a los 10 ml y mostrando
resistencia a los discos 1 y 2.
Radio de sensibilidad al disco 3= 20 ml.
CUESTIONARIO:
1. Cundo tomas un inoculo de un
cultivo bacteriano. Por qu es
necesario tocar una parte estril con
el asa antes de tocar el crecimiento
bacteriano?
Para que no se infecte el inoculo y para
obtener los resultados esperados.
La esterilizacin con calor seco y
hmedo son los procedimientos de
mayor utilizacin en microbiologa. El
calor seco desnaturaliza las enzimas y
destruye a los microorganismos por
oxidacin, por ejemplo al ponerlos
directamente a la flama de un
mechero. Estos mtodos aplican
principalmente en la esterilizacin de
asas de inoculacin y todo tipo de
material de vidrio y quirrgico.
2. Por qu el asa debe ser flameada
antes y despus de todos los
procedimientos de siembra?
La llama de un mechero tambin se
utiliza para esterilizar. Cada vez que un
matraz o un tubo de ensayo se abre
para aadir o sacar material, se pasa la
boca del mismo a travs de la llama de
un mechero, a fin de destruir cualquier
microorganismo que pueda haberse
depositado all. Este procedimiento
disminuye la probabilidad de que las
clulas microbianas caigan en el
recipiente y contaminen su contenido.
Las asas e hilos de siembra, que los
microbilogos utilizan para tomar
microorganismos de un medio y
llevarlos a otro, tambin se esterilizan
flamendolos en la llama de un
mechero Bunsen hasta la
incandescencia. Este mtodo de
esterilizacin es rpido y cmodo,
pero peligroso cuando se trabaja con
microorganismos causantes de
enfermedad. El calentamiento
repentino en una llama puede formar
un aerosol (suspensin de pequeas
gotas de lquido) que contenga clulas
microbianas y que puede ser inhalado
por la persona que est trabajando en
el laboratorio. La utilizacin de un
pequeo horno para esterilizar las asas
evita este riesgo.
3. Por qu las placas de agar deben
mantenerse invertidas durante la
incubacin?
Una vez que se ha colocado la
suspensin de bacterias en la placa, se
debe dejar que se evapore una parte
antes de comenzar la incubacin
durante toda la noche. Sin embargo,
quedar una cantidad moderada de
humedad. Si la placa no es invertida
durante la incubacin, la bacteria no
podr colonizar el agar
apropiadamente, lo que evitar que
crezca y forme colonias
adecuadamente, o estimular el
crecimiento de otros
microorganismos. Cualquiera de estas
dos consecuencias invalidarn el
experimento. Adems, la
condensacin o humedad puede
causar vetas, lo que har que elegir y
analizar colonias separadas sea mucho
ms difcil. Una vez que la bacteria ha
formado colonias, la placa tambin
debe ser almacenada hacia abajo para
mantener los niveles de humedad.


OBSERVACIONES
Para que exista una siembra adecuada
de microorganismos debe existir una
buena esterilizacin de los materiales
y manejo de ello juega un papel
importante de la cual depende el buen
desarrollo de los microorganismos.
Mantener un medio de trabajo donde
se realiza la tcnica de siembra y
tambin de nuestras manos para
reducir la probabilidad de esparcir
microorganismos al ambiente.

CONCLUSINES
Se estudia o analiza y diferencia a
todos los tipos de siembra que puedan
realizarse explicados en teora.
Se realiza experimentalmente el
ensayo de siembra de cultivos que se
pueden realizar en el laboratorio
dependiendo del tipo de medio de
cultivo y del tipo de microorganismo a
sembrar.
El aislamiento de cultivos microbianos
puede realizarse por mtodos de
dilucin, en medios slidos a travs de
estra en placa o en medios lquidos.
Esto nos permite apreciar que cada
clula bacteriana que se separe dar
origen a una poblacin que formara
una colonia.


BIBLIOGRAFIA:
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dados por el laboratorio. John Bernard
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https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/pr
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