I Conferencia

Nociones Básicas en
Biología Molecular,
Genética y Genómica
A. Brayan Campos S.
6to Año – FFBB
Asistente de Investigación
Clonamiento y expresión de genes por
tecnología del ADN recombinante
CONTENIDO
Técnicas básicas empleadas en Biología
Molecular: PCR - Electroforesis
Knockout de proteínas transportadoras
de membrana del ácido pirazinoico en
M. smegmatis
EXTRACCIÓN
DE ADN
REACCIÓN EN CADENA
DE LA POLIMERASA
ELEMENTOS
Solución tampón o
Buffer de PCR


dNTPs

Cloruro de Magnesio

Cebadores (Primers)

ADN polimerasa

ADN molde
5 - 10 mM Tris (pH 7 - 8).
• La electroforesis es una técnica básica en biología molecular
y biotecnología que consiste en la separación de
macromoléculas bajo un campo eléctrico, de acuerdo a su
tamaño, carga y forma.
• Nos permite la separación de moléculas
cargadas como ADN, ARN y/o proteínas.
• La matriz más empleada es la
Agarosa.
ELECTROFORESIS
¿Y para qué amplificar el
DNA?
Aplicaciones
Biomédicas
Ciencias
Forenses
Investigación
Ciencias de
los Alimentos
Oncogenes

Enfermedades
genéticas

Paternidad

Terapia génica
Genetic
Fingerprinting
Mutagenésis
dirigda
Clonamiento
Filogenia
Expresión génica
Determinación de
especies animales
Dr. Lawrence’s talk was spellbinding, and her idea to silence the third
chromosome 21 of Down syndrome is perhaps the most brilliant idea I’ve
heard in my many years of writing about genetics.
Clonamiento y expresión de genes por
tecnología del ADN recombinante
CONTENIDO
Técnicas básicas empleadas en Biología
Molecular: PCR - Electroforesis
Knockout de proteínas transportadoras
de membrana del ácido pirazinoico en
M. smegmatis
CONOCIMIENTOS EN
BIOINFORMÁTICA
BÚSQUEDA DE
SECUENCIAS Y DISEÑO
DE PRIMERS
gen pncA
Enzima Pirazinamidasa (PZAsa)
Mecanismo de resistencia a
Pirazinamida en Mycobacterium
tuberculosis
¿Qué clonamos?
*PURIFICACIÓN
DEL AMPLICÓN
*PURIFICACIÓN
DEL AMPLICÓN
VECTORIZACIÓN
DIGESTIÓN
ENZIMÁTICA Y
LIGACIÓN
REACCIÓN DE LIGACIÓN
TRANSFORMACIÓN
EN CÉLULAS DE CLONACIÓN
Verificación de presencia de inserto (gen pncA) en el
vector
TRANSFORMACIÓN
EN CÉLULAS DE EXPRESIÓN
INDUCCIÓN Y
EXPRESIÓN
Clonamiento y expresión de genes por
tecnología del ADN recombinante
CONTENIDO
Técnicas básicas empleadas en Biología
Molecular: PCR - Electroforesis
Knockout de proteínas transportadoras
de membrana del ácido pirazinoico en
M. smegmatis
El bloqueo de genes (en inglés, gene knockout) es una técnica
genética que consiste en suprimir la expresión de un gen específico
en un organismo, sustituyendo el gen original en su locus (Posición
en el cromosoma) por una versión modificada del mismo,

Esta versión modificada puede ser el mismo gen pero al cual se le
han extraído exones, secuencias codificantes, etc. Y por ende la
proteína que codificaba originalmente ya no sería funcional.
Knockout de proteínas transportadoras
de membrana del ácido pirazinoico en
M. smegmatis
Vectores de
clonaje
Vectores de
expresión
Vectores
Integrativos
Shuttle
vectors
Vector
Suicida
Vector
Suicida
Cassetes de
Contraselección
GRACIAS POR SU GENTIL
ATENCIÓN!!
Biopharm.grupodeinvestigacion@gmail.com
antonybcampos@gmail.com

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