INFORMES DE PRCTICA

MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS I

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2014



UNIVERSIDAD NACIONAL
PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS
DOCENTE: Graciela Olga Albino Cornejo
INTEGRANTES:
Burgos Tuoque Esthefany
Diez Vsquez Sindy
Gutirrez Armijos Leydi
Lpez Ramrez Kelly
Farro Barbarn Roco

Lambayeque, 2014

PRCTICA N 10
NUMERACIN E IDENTIFICACIN DE BACILLUS CEREUS

I. INTRODUCCIN

Bacillus cereus es un bacilo Gram positivo, aerobio-anaerobio facultativo. Es
formador de esporas, las que se encuentran en la tierra, polvo y por esta razn es un
frecuente contaminante de alimentos, con frecuencia cereales, leche, budines,
cremas pasteurizadas y especias, entre otros alimentos.
La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) estima que las enfermedades causadas
por alimentos contaminados constituyen uno de los problemas sanitarios ms
difundidos en la actualidad. Los casos de intoxicaciones o enfermedades por
alimentos mal preparados o contaminados por este microorganismo suelen ser
frecuentes a pesar de que son perfectamente evitables, la primera descripcin de un
brote de gastroenteritis data de principios de 1900.

Para llevar a cabo la determinacin presuntiva de B. cereus se utilizan medios
que contengan yema de huevo en su composicin, para poner de manifiesto la
lecitinasa, produciendo una zona opaca que rodea la colonia, mientras que otras
bacterias formadoras de esporas como por ejemplo, B. thuringiensis, por lo general
no producen la zona opaca, o si la producen, es muy restringida. En los medios que
contienen manitol y rojo de fenol como indicador, el B. cereus no fermenta el
carbohidrato y por lo tanto las colonias se presentan rodeadas por zonas de color
rojo.

Los medios de cultivo recomendados para su determinacin son, el agar
selectivo para Bacillus cereus segn MOSSEL, agar yema de huevo-polimixina-rojo
de fenol, agar yema de huevo piruvato, agar selectivo REUTER y agar sangre de
caballo en el cual se puede observar la hemlisis provocada por cepas de B. cereus.
Este procedimiento analtico especifca el mtodo de enumeracin en placa de B.
cereus y es aplicable a cualquier alimento en el cual B. cereus est viable y presente.

II. OBJETIVOS

Desarrollar y familiarizarse con la metodologa para la determinacin de
Bacillus cereus.
Aislar e identificar B. cereus a partir de una muestra de alimento (harinas).
III. MATERIALES

Materiales biolgico:
- Muestra: Harina de Chochoca
Medios de Cultivo:
- Agar para Bacillus cereus (MOSSEL, Agar yema de huevo con indicador rojo
fenol)
- Agar almidn
- Agar gelatina
- Caldo de nitratos
- Caldo glucosado
- Diluyente: Agua Peptonada o Agua destilada
Material de laboratorio:
- Placas petri
- Frascos de vidrio
- Tubos de dilucin
- Esptula de drigalsky
- Pipetas de 1 ml y 10 ml.
- Gradillas
- Mechero de alcohol
- Balanza
- Incubadora


IV. PROCEDIMIENTOS

Mtodo de Siembra en Superficie

1. Pesar 3 g de harina de chochoca, aspticamente.








2. Proceder hacer diluciones hasta 10
-3
: La primera con 27 ml de agua destilada,
las dos restantes con 9 ml cada una.










10
-1
10
-2
10
-3


3. De cada dilucin, se siembra por duplicado en placa con el uso de esptula de
drigalsky
4. Incubar a 37 C durante 24 48 horas
5. Para la Lectura: seleccionar colonias grandes con un halo y un precipitado
blanco alrededor (blanquecino por accin de la enzima lecitinasa).
6. De las colonias sospechosas realizar tincin Gram y observar bacilos GRAM
Positivos enmaraados y truncados esporulados.

Para la identificacin:
- Hidrlisis de la gelatina
- Hidrlisis del almidn
- Reduccin de Nitratos
- Fermentacin de carbohidratos




V. RESULTADOS
























No se observaron las colonias tpicas de Bacillus cereus en las placas, ni tampoco fue
posible hacer recuento debido al crecimiento que se observ en las placas lo hace
incontable.




10
-1
10
-2
10
-3
VI. CONCLUSIONES
Se aprendi el mtodo de investigacin para determinar la presencia de
Bacillus cereus en harinas.
No se lleg a realizar numeracin, aislamiento ni a identificar colonias
caractersticas de Bacillus cereus a partir de la muestra de harina de
chochoca.

VII. CUESTIONARIO

Fundamento del uso de Agar para Bacillus cereus, segn Mossel
B. cereus ha sido implicado en toxoinfecciones alimentarias, particularmente
asociado al consumo de arroz contaminado, y tambin en algunos procesos
infecciosos en seres humanos y animales.
El medio de cultivo, contiene los nutrientes necesarios para el apropiado
desarrollo bacteriano. Es diferencial debido a la presencia de manitol.
Bacterias fermentadoras de manitol, acidifican el medio produciendo el
viraje del indicador de pH rojo de fenol del rojo al amarillo, mientras las
bacterias que no lo fermentan, producen colonias del medio.
La adicin de emulsin de yema de huevo, mejora el aislamiento y la
esporulacin de esta bacteria, adems favorece y facilita la visualizacin de
las colonias de B. cereus ya que se produce un halo de precipitacin de la
lecitina hidrolizada alrededor de las mismas.
Puede lograrse el aislamiento selectivo de B. cereus, inhibiendo el desarrollo
de la flora acompaante presente en la muestra, por el agregado del
suplemento para B. cereus con el que se obtiene una concentracin final de
100 U de Polimixina B por ml de medio.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

James M. Jay. 2002. Microbiologa moderna de los alimentos. Editorial Acribia
S.A. Cuarta edicin. Zaragoza-Espaa.
Frazier W.; 1999; Microbiologa de los Alimentos; 4ta edic.; Edit. Acribia;
Zaragoza; Espaa.
Adams M. R. y M. O. Moss; 1995; Microbiologa de los Alimentos; Editorial
Acribia; Zaragoza; Espaa; Pg. 388 391.