Amoníaco

Universidade de
Aveiro
Ano 2010
Departamento de Qumica
Vera Lcia Martins
Antunes

Anlise de Amonaco em guas Utilizando um Sensor
Acstico

Universidade de
Aveiro
Ano 2010
Departamento de Qumica
Vera Lcia Martins
Antunes

Anlise de Amonaco em guas Utilizando um
Sensor Acstico

Dissertao apresentada Universidade de Aveiro para cumprimento dos
requisitos necessrios obteno do grau de Mestre em Qumica Analtica e
Controlo de Qualidade, realizada sob a orientao cientfica da Doutora Maria
Teresa Seabra dos Reis Gomes, Professor Associada do Departamento de
Qumica da Universidade de Aveiro.

Dedico este trabalho aos meus pais e avs maternos

o jri

Presidente Professor Joo Antnio Baptista Pereira Oliveira
Professor associado do Departamento de Qumica da Universidade de
Aveiro

Doutora Maria Teresa Seabra dos Reis Gomes
Professora Associada do Departamento de Qumica da universidade de
Aveiro

Doutora Maria Helena Figueiredo Godinho
Professora Auxiliar com Agregao do Departamento de Cincia dos
Materiais da Universidade Nova de Lisboa

Agradecimentos

Agradeo a todas as pessoas que directa ou indirectamente contriburam para
o desenvolvimento deste trabalho, em especial minha orientadora, Doutora
Maria Teresa Seabra dos Reis Gomes pelo apoio e motivao que me foi
prestando ao longo do trabalho.
Doutora Maria Graa Neves por me ter fornecido a porfirina para o meu
trabalho e pela ajuda que sempre me concedeu ao longo do trabalho.
A nvel pessoal queria agradecer aos meus colegas de Mestrado e em
especial aos meus colegas de laboratrio pela ajuda e pelos bons momentos
que tornaram este percurso bem melhor.
Aos amigos que sempre me apoiaram ao longo de todo este tempo,
principalmente nestes ltimos meses que tiveram muito que aturar, o meu
muito, mas mesmo muito obrigado!
E por ltimo, e mais importante, quero agradecer aos meus pais, aos meus
avs e ao meu irmo pelo apoio e por me terem dado esta oportunidade.

palavras-chave

Amonaco, guas, Azul de Indofenol, Cristais piezoelectricos de quartzo

resumo

O amonaco produzido naturalmente a partir de fontes naturais ou
antropognicas. bastante importante como micronutriente. A
presena do amonaco em excesso pode no entanto constituir um
perigo potencial para os ecossistemas. Dai a necessidade de controlar
as concentraes presentes nas guas. O amonaco pode ainda
acumular-se no corpo humano e outros organismos vivos com graves
prejuzos para os mesmos.
Segundo o Decreto Lei n. 236/98 de 1 de Agosto o mtodo analtico de
referncia usado na determinao do amonaco a espectroscopia de
absoro molecular, sendo o mtodo do azul de indofenol o mais
utilizado. Este oferece uma maior sensibilidade em relao a outras
metodologias UV/Vis, apresentando contudo varias desvantagens, tais
como morosidade e a utilizao de numerosos reagentes, alguns deles
muito txicos.
O objectivo principal deste trabalho foi o desenvolvimento de um novo
mtodo analtico, mais simples e barato, mas fivel, para a
determinao do amonaco em guas destinadas ao consumo humano.
Este novo mtodo consiste num sensor baseado em microbalanas de
cristais piezoelectricos de quartzo, para detectar o amonaco no estado
gasoso. Foi necessrio alcalinizar as amostras de gua e aplicar um
revestimento no cristal para promover a interaco com o amonaco,
tendo-se seleccionado uma metaloporfirina para esse efeito. Verificou-
se que a interaco com o amonaco era rpida e completamente
reversvel, sendo o tempo de anlise para cada amostra
aproximadamente 2 minutos. Verificou-se que o sensor permite detectar
concentraes to baixas de amonaco como 1,83 g L
-1
e quantific-lo
em concentraes desde 4,47 g L
-1

Comparando os resultados obtidos com o novo mtodo do indofenol,
verificou-se que no se detecta a presena de erros sistemticos,
concluindo-se que os resultados obtidos por ambos os mtodos no
so estatisticamente diferentes um do outro.

keywords

Ammonia, waters, blue indophenol, piezoelectric quartz crystal

abstract

Ammonia is produced both from natural and anthropogenic sources. It
is important as a micronutriente, although in excess it is dangerous for
the ecosystems. Therefore it is the needed to control the ammonia
content in the water.
According to the Portuguese legislation the reference analytical method
used to determinate ammonia is the molecular absorption spectroscopy
and the blue indophenol method is the most used methodology. It offers
a higher sensibility compared with other UV/Vis methodologies; however
it suffers from some disadvantages. Its time consuming and uses
numerous reagents, some of them very toxic.
In this work, a new methodology based on a quartz acoustic wave
sensor for the determination of ammonia in freshwaters is reported.
This methodology is based on the use of a sensor to determinate
ammonia in the gaseous phase. It was necessary to increased pH the
samples of water and to apply a sensitive coating to a piezoelectric
quartz crystal. A metalloporphyrin was used to promove the interaction
with the ammonia. This interaction was fast and fully reversible. An
analysis could be performal in 2 minutes. A piezoelectric quartz crystal
coated with an amount of porphyrin that induced a frequency
decreased of 21,4 kHz could detect ammonia in concentrations as low
as 1.83 g L
-1
and to quantify it in concentrations of 4.47 g L
-1
.
Comparing the results obtained with the new methodology with the indofenol
method, no of systematic errors, could be found ( = 0.05).

Anlise de Amonaco em guas Utilizando um Sensor Acstico

Pgina i

ndice

1. Introduo Geral .

1

2. Reviso Bibliogrfica

5
2.1 O Amonaco: a origem e propriedades .....
7
2.2 Mtodos para a anlise do Amonaco
11
2.2.1 Mtodos Espectroscpicos .. 11
2.2.1.1 Mtodo do Azul de Indofenol 11
2.2.1.2 Mtodo de Nessler 13
2.2.1.3 Fluorescncia 13
2.2.2 Sensores qumicos 14
2.2.2.1 Mtodo Potenciomtrico .. 14
2.2.2.2 Sensores pticos . 14
2.2.2.3 Sensores de Condutividade
15
2.3 Microbalanas de Cristais de Quartzo 16
2.3.1 Definio e breve histria da piezoelectricidade . 16
2.3.2 Cristais piezoelectricos de quartzo 16
2.3.3 Sensor baseado em cristais piezoelectricos de quartzo 20
2.3.4 Vantagens e desvantagens das microbalanas . 22
2.3.5 Revestimento Aplicado 23

3. Instrumentao, Arranjo e Procedimento Experimentais ...

27
3.1 Recolha das Amostras e Preservao
29
3.2 Mtodo do Azul de Indofenol 30
3.2.1 Reagentes, Material e Equipamento . 30

Pgina ii

3.2.2 Procedimento
32
3.3 O sensor .. 34
3.3.1 Reagentes, Material e Equipamento . 34
3.3.2 Revestimento do Cristal .. 35
3.3.3 Descrio da aparelhagem e montagem experimental . 36
3.3.4 Procedimento 38

4. Resultados e Discusso ...
39
4.1 Reversibilidade, Sensibilidade e Estabilidade do Sensor 41
4.2 Anlise das Amostras 44
4.3 Anlise dos Interferentes ... 45
4.4 Resultados Obtidos na anlise das Amostras pelos dois
mtodos ..
47
3.5 Vantagens do novo mtodo em relao ao mtodo do Azul de
Indofenol .
50

5. Concluso

51

6. Bibliografia

55
7. Anexo I .. 63


Pgina iii

ndice de Tabelas

Tabela 2.1 Parmetros fsico-qumicos do amonaco . 9
Tabela 3.1 Reagentes utilizados para o mtodo do Indofenol .. 31
Tabela 3.2 Reagentes utilizadas para o mtodo do sensor .. 34
Tabela 4.1 Equaes de calibrao do sensor F (Hz), [NH
3
](g/L) ... 43
Tabela 4.2 Concentrao de amonaco encontrada para cada uma das
amostras
48
Tabela 4.3 Resultados obtidos do teste F, para cada amostra analisada 49


Pgina iv

ndice de Figuras

Figura 2.1 Ciclo do Azoto ... 8
Figura 2.2 Equilbrio entre o NH
3
NH
4
+
. 10
Figura 2.3 Reaces de Berthelot
15
Figura 2.4 Efeito piezoelctrico no quartzo .
17
Figura 2.5 Estrutura cristalina do cristal de quartzo com os respectivos
eixos ..
17
Figura 2.6 Cristais piezoelctricos de quartzo 18
Figura 2.7 Cortes AT e BT da estrutura cristalina de quartzo .. 19
Figura 2.8 Representao da onda que se propaga atravs do material
perpendicularmente s faces do cristal piezoelctrico de quartzo .
19
Figura 2.9 Exemplo de uma resposta obtida a uma determinada massa
injectada
21
Figura 2.10 Representao da estrutura da metaloporfirina, Mn (TPFPP)Cl
23
Figura 2.11 Numerao segundo as recomendaes da IUPAC
24
Figura 2.12 Qumica de coordenao das porfirinas: a metalao de uma
porfirina tambm a coordenao do metal; X e Y so ligandos axiais ...
24
Figura 2.13 Processos comuns da coordenao axial. L = ligando de troca;
X = ligando fixo
25
Figura 3.1 Mapa de Portugal, onde se encontram sinalizados os Distritos
de Aveiro e Viseu, onde foram recolhidas as amostras
29
Figura 3.2 Espectrofotmetro de Ultra Violeta Visvel de feixe duplo
utilizado no Mtodo do Azul de Indofenol ...
31
Figura 3.3 Solues obtidas aps o desenvolvimento da cor no mtodo do
Azul de Indofenol .
33
Figura 3.4 Representao de um spin coater . 35
Figura 3.5 Montagem experimental utilizada para a quantificao do
amonaco em guas destinadas ao consumo humano
37
Figura 4.1 Frequncia de um cristal de quartzo aps a introduo de 10
mL da soluo de NH
3
de concentrao 30 g/L .
41

Pgina v

Figura 4.2 Recta de calibrao obtida pelo Mtodo Baseado em Cristais
Piezoelctricos .
42
Figura 4.3 Grfico da Frequncia de um cristal de quartzo aps introduo
de 10 mL de uma amostra de gua .
44
Figura 4.4 Frequncia do cristal de quartzo revestido aquando da anlise
de uma soluo de amonaco de 1,8 mmol/L (30 mg L
-1
) com 1,8 mmol/L de
glicina
45
Figura 4.5 Frequncia do cristal de quartzo revestido aquando da anlise
de uma soluo de amonaco de 1,8 mmol/L (30 mg L
-1
) com 1,8 mmol/L de
dietilamina
46

Figura I Espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear de
1
H da
estrutura livre da porfirina ..
65
Figura II - Espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear de
19
F da
estrutura livre da porfirina ..
66
Figura III Espectroscopia de Ultra Violeta Visvel do complexo de
mangansio ..
67


Pgina vi

Lista de Smbolos

Smbolo Descrio
NH
x
Equilbrio Qumico entre o amonaco e o io de amnio
NH
3
Amonaco
NH
4
+
N
2
Io de amnio
Azoto
UV-Vs Ultravioleta-Visvel
NaOH Hidrxido de Sdio
Mn(TPFPP)Cl Cloro[5,10,15,10-tetraquis(pentafluorofenil)porfirinato]mangansio(III)
QCM Microbalana de cristais de quartzo
F Variao da frequncia
F
0
2
Frequncia ressonante
M Variao da massa
Constante de sensibilidade de massa
p
Densidade do quartzo
q
Modo de cisalhamento


Pgina 1

1. Introduo Geral


Pgina 2


Pgina 3

O amonaco chega ao meio ambiente atravs de fontes naturais ou
antropognicas. Este imprescindvel para o meio ambiente uma vez que as plantas
assimilam-no para construir os aminocidos celulares e as protenas. Porm, o seu
excesso pode provocar problemas graves nos ecossistemas, como o crescimento
excessivo da biomassa e causa perturbaes na coluna de gua, podendo levar
eutrofizao. Pode-se tambm acumular no ser humano e noutros organismos vivos,
levando a alteraes no seu metabolismo e do pH corporal. Existe por isso a necessidade
de controlar o amonaco presente nas guas.
Na literatura existem vrias tcnicas analticas para a determinao do amonaco
em guas. Contudo, estas tcnicas apresentam diversas desvantagens, existindo assim a
necessidade de procurar mtodos mais eficazes, baratos e simples.
O objectivo principal deste trabalho foi o desenvolvimento de um novo mtodo
analtico para a determinao de amonaco em guas doces destinadas ao consumo
humano. Para tal, desenvolveu-se um sensor qumico baseado em microbalanas de
cristais piezoelectricos de quartzo. O princpio de funcionamento deste sensor baseia-se
no facto de os cristais piezoelectricos oscilarem quando excitados electricamente e da
sua frequncia de oscilao se encontrar directamente relacionada com a massa
depositada sobre o cristal.
Num primeiro passo para o desenvolvimento do sensor procedeu-se aplicao
de um revestimento no cristal piezoelctrico, um complexo metlico de um monociclo
tetrapirrlico que interage com o amonaco. De seguida, procedeu-se criao de uma
montagem experimental de modo a criar as condies necessrias para a realizao das
anlises s guas. A deteco do amonaco feita em fase de vapor, logo todas as
formas de azoto existentes na gua devem ser transformadas em NH
3
, para o que se
torna necessrio ajustar o pH para valores iguais ou superior a 11, atravs da adio de
uma base forte. Depois do sensor montado e das anlises realizadas foi efectuada a
anlise dos resultados obtidos por comparao com os resultados obtidos pelo mtodo
do azul de indofenol de forma a verificar a fiabilidade do novo mtodo e a sua
funcionalidade.
Este trabalho encontra-se dividido em cinco partes. A primeira parte tratada a
introduo geral e a segunda parte do estado de arte. Aqui se fala do amonaco e das
suas propriedades no meio aqutico, dos mtodos analticos utilizados para a sua

Pgina 4

determinao, do princpio de funcionamento dos sensores de massa baseados em
cristais piezoelectricos.
Na terceira parte do trabalho so apresentados os aspectos experimentais.
apresentada a montagem experimental e so detalhadas as metodologias e
procedimentos experimentais de ambos os mtodos testados: o mtodo baseado em
microbalanas de cristais piezoelectricos e o mtodo do azul de indofenol.
Na quarta parte do trabalho faz-se a discusso e a anlise dos resultados obtidos.
Analisam-se os resultados obtidos na determinao do amonaco pelo sensor, os testes
presena ou no de alguns interferentes e comparam-se estatisticamente os resultados
obtidos pelos dois mtodos utilizados, apresentando-se ainda algumas das vantagens e
desvantagens do novo mtodo
Por fim, na ltima parte, expem-se as concluses gerais do trabalho.


Pgina 5

2. Reviso Bibliogrfica


Pgina 6


Pgina 7

2.1 O Amonaco: a origem e propriedades

O amonaco produzido naturalmente a partir de fontes naturais ou
antropognicas. O NH
x
(NH
3
-NH
4
+
) [1] produzido pelas bactrias (fontes naturais),
atravs da decomposio das protenas, aminocidos e outros compostos orgnicos
nitrogenados na coluna de gua [2]. A utilizao de fertilizantes na agricultura tambm
constitui uma fonte de amonaco. Este tambm bastante usado na indstria, como por
exemplo na sntese do cido ntrico, fibras, plsticos e explosivos, na indstria
metalrgica e refinaes, na produo de cermicas, na minerao, no processamento
de alimentos e na produo de equipamentos de refrigerao. introduzido nas guas
residuais devido utilizao dos produtos de limpeza domsticos. Por fim, o amonaco
ainda produzido atravs da decomposio atmosfrica. O NH
x
vai para a atmosfera
atravs de processos de volatilizao e combusto, sendo que a deposio atmosfrica
contribui significativamente para a introduo do amonaco nos sistemas aquticos [3-5].
O amonaco (NH
3
) um dos principais constituintes do ciclo do Azoto. Cerca de
quatro quintos da atmosfera constituda por azoto livre, mas este no pode ser utilizado
directamente pelos seres vivos, o restante azoto encontra-se distribudo pela matria
orgnica nos solos e nos oceanos. O ciclo do azoto um dos ciclos mais importantes dos
ecossistemas terrestres. O azoto utilizado pelos seres vivos para a produo de
molculas complexas necessrias ao seu desenvolvimento, como o caso dos
aminocidos, protenas e cidos nucleicos [2,6].
Apesar do azoto ser bastante abundante na atmosfera, considerado um
elemento limitante ao crescimento das plantas, uma vez que estas apenas o conseguem
obter na forma de io de amnio (NH
4
+
), nitrito (NO
2
-
) e nitrato (NO
3
-
). Estes compostos
so obtidos atravs de diversos processos patentes no ciclo do Azoto [7,8].
O ciclo do azoto (Figura 2.1) encontra-se dividido em etapas. A fixao o
processo atravs do qual o azoto atmosfrico fixado pelas plantas. Algumas bactrias
tm a capacidade de fixar as molculas de azoto gasoso (N
2
) e transforma-lo, atravs de
processos de simbiose, em amonaco, nitratos e nitritos. Na gua doce e nos oceanos,
muitas outras formas de vida, alm das bactrias, produzem amonaco como produto
final do seu metabolismo. A etapa seguinte consiste na decomposio da matria

Pgina 8

orgnica morta. Esta convertida em NH
4
+
pela aco de bactrias aerbias,
anaerbicas e alguns fungos. A terceira etapa a nitrificao (oxidao do amonaco),
que consiste na produo de nitratos a partir do amonaco (NH
3
). Este processo
realizado por bactrias nitrificantes, e pode ser dividido em duas etapas: numa primeira
etapa o amonaco convertido em nitritos (NO
2
-
) e numa segunda fase, os nitritos so
convertidos em nitratos (NO
3
-
), sendo posteriormente so assimilados pelas plantas.
Numa quarta etapa, os nitratos so utilizados pelas bactrias na respirao anaerbica e
libertam azoto no estado gasoso (N
2
). A este processo d-se o nome de desnitrificao,
no qual o azoto volta para atmosfera no estado gasoso, fechando-se assim o ciclo do
Azoto [7,8].

Figura 2.1. - Ciclo do Azoto [9]

temperatura ambiente, o amonaco um gs incolor. A tabela 2.1 apresenta as
principais propriedades fsico-qumicas do amonaco.


Pgina 9

Tabela 2.1. - Parmetros fsico-qumicos do amonaco [1]
Parmetros Valores
Peso Molecular 17,03
Ponto de Ebulio, C -33,4
Ponto de Fuso, C -77,7
Solubilidade (g/L): gua fria 899
gua quente 74
lcool 132
Coeficiente de solubilidade (298 K) 0,0420
Constante de acidez, pKa 9,245

Na gua o amonaco dissolvido existe em equilbrio com o amonaco gasoso e o
catio amnio solvatado (equao 1):

NH
4(s)
+
+ H
2
O NH
3(s)
+ H
3
O
+
Equao 1

O equilbrio entre o NH
3(s)
-NH
4(s)
+
de elevada importncia na qumica da gua e
no ciclo do amonaco. Nas guas naturais, o NH
4
+
a espcie dominante (Figura 2.2),
dado que o equilbrio entre o NH
3
-NH
4
+
depende do pH, da fora inica e da temperatura
[10].


Pgina 10

Figura 2.2 Equilbrio entre o NH
3
NH
4
+
[adaptado da referncia 8].

Como j foi referido, o amonaco bastante importante como micronutriente uma
vez que as plantas assimilam-no para formar os aminocidos celulares e protenas. A
presena do amonaco em excesso pode, no entanto, constituir um perigo potencial para
os ecossistemas. O excesso de amonaco nas guas leva a um crescimento excessivo
da biomassa, perturbao do equilbrio ecolgico da coluna de gua e eutrofizao.
Da a necessidade de controlar as concentraes presentes nas guas, sendo que o
valor mximo recomendado para as guas destinadas ao consumo humano de
0,05mg/L [11]. O amonaco pode ainda acumular-se no corpo humano e noutros
organismos vivos com graves prejuzos para os mesmos. No homem pode alterar o
metabolismo e o pH corporal, irritante para os olhos, nariz, garganta e pulmes [1].
Assim, a determinao do amonaco constitui um parmetro importante para o
controlo de qualidade das guas destinadas ao consumo humano.

Gama de pH das guas
naturais
Gs
Dissolvido
(NH3)
Catio
Solvatado
(NH
4
+
)

Pgina 11

2.2 - Mtodos para a Anlise de Amonaco
Existem diversos mtodos para quantificar o amonaco nas guas. A escolha da
metodologia deve ser feita tendo em conta os limites de deteco da metodologia, a
concentrao de amonaco nas amostras, e a selectividade da metodologia versus
composio da amostra.

2.2.1 Mtodos Espectroscpicos

2.2.1.1. Mtodo do Azul de Indofenol
Em 1859 Berthelot descreveu a determinao do amonaco atravs do mtodo azul
de indofenol. A reaco de Berthelot oferece uma elevada sensibilidade, e o mtodo
mais utilizado para a determinao do amonaco [1], sendo o mtodo aconselhado por
diversos autores na literatura devido sensibilidade que apresenta em relao aos
restantes mtodos utilizados na determinao do amonaco em guas.
O amonaco e o fenol reagem na presena de hipoclorito para formar o azul de
indofenol. O tempo necessrio para que esta reaco atinja a mxima absoro pode ser
mais que uma hora. O aumento da temperatura pode acelerar o desenvolvimento da cor,
embora isto leve a uma rpida perda da cor [12,13].
A complexidade da reaco levou a diversos estudos das condies da reaco,
assim como as concentraes dos reagentes, pH, efeitos da temperatura e a ordem de
adio dos reagentes. Por isso, tal estudo levou a introduo do nitropussianato como
catalisador [14-17].
A Figura 2.3 apresenta as reaces de Berthelot.

Pgina 12

Figura 2.3 Reaces de Berthelot [15].

O amonaco reage com o hipoclorito (OCl
-
) para formar monocloramina (Equao
2), que por sua vez reage com dois fenatos para formar o corante indofenol (Equaes 3
e 4). Estequiomtricamente a reaco geral diz que 1 mol de NH
3
reage com 2 moles de
fenol e 3 moles de OCl
-
para formar 1 mol de indofenol [14,15,17].
Equao 5
Equao 4
Equao 3
Equao 2

Pgina 13

A concentrao de amonaco determinada medindo a absorvncia do indofenol
a 640 nm num espectrofotmetro de ultra violeta visvel. Nestas reaces, a
monocloramina, o hidrxido de sdio e o fenol so reagentes essenciais formao do
indofenol.

2.2.1.2. - Mtodo de Nessler
J. Nessler, em 1856, props pela primeira vez o uso de uma soluo alcalina de
tetraiodomercurato(II) de potssio (reagente de Nessler) como reagente para a
determinao de amonaco em guas. Quando o reagente de Nessler adicionado
amostra, a reaco com o amonaco produz um precipitado amarelo-acastanhado. A
intensidade da cor vai depender da concentrao de amonaco presente. A equao 6
traduz a reaco que ocorre entre o amonaco e o reagente de Nessler:

2 K
2
[HgI
4
] + 2NH
3
NH
2
Hg
2
I
3
+ 4KI + NH
4
I Equao 6

Pode ocorrer a existncia de interferentes, tais como partculas em suspenso,
ento deve-se proceder inicialmente destilao das amostras. Este mtodo por norma
aplicado determinao de amonaco em concentraes muito baixas, 0,1 mg L
-1
[18,19].

2.2.1.3. - Fluorescncia
Esta uma tcnica automatizada de fluorescncia para a determinao de
amonaco em guas naturais. Neste mtodo, o NH
x
presente nas amostras tem que ser
convertido em NH
3
atravs da adio de uma base forte. Assim, o NH
3
entra numa
membrana permevel atravs do fluxo do reagente. O produto da reaco entre o
amonaco e o reagente utilizado determinado fluoretricamente. Este mtodo bastante
usado para determinao de amonaco com baixos limites de deteco [1].

Pgina 14

2.2.2. Sensores qumicos

2.2.2.1. - Mtodo Potenciomtrico
O elctrodo selectivo para a determinao do amonaco constitudo por uma
membrana fina de gs hidrofbico, permevel, que separa o electrlito interno (cloreto de
amnio) da amostra [20]. s amostras so adicionadas uma base forte, de forma a
converter todo o NH
4
+
em soluo em NH
3
, que por sua vez passa por difuso atravs da
membrana para dentro da clula. A variao do pH detectada por um elctrodo, dando
origem a um sinal potenciomtrico [1, 21].
O potencial da clula encontra-se associado concentrao de NH
3
presente nas
amostras. A difuso do NH
3
impulsionada pela diferena de presso na membrana.
Uma vez que a presso parcial do NH
3
da soluo interna encontra-se em equilbrio com
o da amostra, a tenso exercida pelo elctrodo estvel, logo o equilbrio depende da
concentrao do NH
3
da amostra [22].
Este mtodo aplicado para a determinao de concentraes entre 0,03 a 1400
mgL
-1
de NH
3
em guas potveis, superficiais e guas residuais domsticas e industriais.
Concentraes elevadas de ies dissolvidos interferem na determinao do amonaco,
contudo a cor e a turbidez das amostras no interferem. O elctrodo selectivo tambm
responde a concentraes baixas de amonaco, por isso a imerso do elctrodo dever
demorar cerca de 2-3 minutos para a obteno das leituras. As aminas so possveis
interferentes deste mtodo [22].

2.2.2.2. Sensores pticos
Nos ltimos anos tm sido desenvolvidos sensores pticos para a determinao do
amonaco. O mecanismo destes sensores baseado na monitorizao de caractersticas
como a absoro e fluorescncia [23-25].
Estes so constitudos basicamente por um reagente imobilizado na fibra ptica. Ao
interagir com o analito, o reagente modifica as suas propriedades pticas, sendo estas
transmitidas pela fibra ptica. A imobilizao do reagente pode ser feita por mtodos
fsicos ou por meio de uma reaco qumica covalente [24,25].

Pgina 15

Estes sensores apresentam a vantagem de poderem fazer vrias determinaes ao
mesmo tempo, possibilidade medies distncia. Contudo, estes tambm possuem a
desvantagem da luz ambiente causar possveis interferncias, poder ter pouco tempo de
vida, e o tempo de resposta poder ser demorada [24,25].

2.2.2.3. Sensores de Condutividade
Os polmeros condutores, os seus derivados e os xidos metlicos tm sido usados
como camadas activas nos sensores de gs desde 1980. Os polmeros condutores so
facilmente sintetizados atravs de processos qumicos e electroqumicos, sendo a sua
estrutura facilmente modificada atravs de derivaes estruturais. Para alm disso, os
polmeros apresentam boas propriedades mecnicas o que permitem assim uma fcil
obteno dos sensores [26-29]. Comparando-os com a maioria dos sensores, estes so
baseados em xidos metlicos ou polmeros que operam a elevadas temperaturas. Estes
possuem grande sensibilidade e apresentam uma resposta num curto espao de tempo
[26].


Pgina 16

2.3. Microbalana de Cristais de Quartzo

2.3.1. Definio e breve histria da piezoelectricidade
A palavra piezo, deriva da lngua grega e significa pressionar, sendo a
piezoelectricidade definida como a capacidade de um material produzir electricidade
atravs da aplicao externa de uma presso mecnica [30].
A piezoelectricidade uma propriedade apresentada por um grupo de materiais, que
foi descoberta em 1880 por Pierre e Jacques Curie, durante um estudo realizado sobre
os efeitos da presso mecnica no aparecimento de cargas elctricas em cristais, tais
como o quartzo, entre outros [30-32]. O termo piezoelectricidade apareceu um ano mais
tarde, em 1981 sendo sugerida por W. Henkel. Lippmann deduziu matematicamente a
existncia de um efeito inverso ou recproco para a piezoelectricidade baseando-se nos
princpios fundamentais da termodinmica, tendo o trabalho dos irmos Curie
comprovado experimentalmente a sua existncia. Estes comprovaram a reversibilidade
completa das deformaes mecnico-electro-elsticas nos materiais piezoelctricos e
apresentaram algumas aplicaes laboratoriais [31]. O efeito piezoelctrico apenas
encontrado em materiais sem centro de simetria [33].

2.3.2. Cristais piezoelectricos de quartzo
O quartzo constitudo quimicamente por dixido de silcio (SiO
2
). Quando uma
presso mecnica deforma a rede cristalina, o centro das cargas positivas e negativas
desloca-se, dando-se o aparecimento de cargas superfcie, Figura 2.4 [34]. o cristal
piezoelctrico mais usado graas s suas caractersticas, tais como ser inerte, insolvel
em gua e sua resistncia trmica at 579C sem alterao das suas propriedades
piezoelctricas. Para alm disso possui um excelente factor de qualidade (Q), sendo Q a
razo entre a energia armazenada e a energia perdida por ciclo, durante a oscilao, o
que garante a estabilidade da frequncia.


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Figura 2.4 Efeito piezoelctrico no quartzo

O cristal piezoelctrico de quartzo obtido pelo corte num determinado ngulo na
estrutura cristalina (Figura 2.5).

Figura 2.5 Estrutura cristalina do cristal de quartzo com os respectivos eixos [32].


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A esta lmina de quartzo so aplicados dois elctrodos metlicos, um em cada
uma das faces opostas. Na Figura 2.6 encontra-se representado um cristal piezoelctrico
de quartzo com elctrodos metlicos.

Figura 2.6 Cristal piezoelctrico de quartzo [35]

Existem dois tipos de sensores acsticos: os BAW (Bulk Acoustic Wave) e os
SAW (Surface Acoustic Wave). Por norma os sensores BAW, operam no modo de
cisalhamento TSM (Thickness Shear Mode) [36].
A microbalana de cristal piezoelctrico, usualmente designada por QCM (Quartz
Crystal Microbalance) um dispositivo em modo de cisalhamento em que a acstica se
propaga na direco perpendicular superfcie do cristal [37]. Para que isto acontea,
necessrio realizar um corte com uma orientao especfica, com os respectivos eixos do
cristal. A escolha do eixo e do ngulo de corte determina as propriedades fsicas e
elctricas do quartzo como oscilador. Geralmente so utilizados dois ngulos especficos
que apresentam coeficientes de temperatura zero, nomeadamente o corte AT e o corte
BT, como mostra na Figura 2.7. Os cortes AT e BT tem fundamentalmente ngulos de
corte de 35 e 49 em relao ao eixo do cristal primrio. O corte AT a 35 15 o mais
indicado, dado que a frequncia praticamente insensvel variao da temperatura
ambiente e superior ao corte BT na sensibilidade massa [36]. No corte AT o cristal
oscila no modo cisalhamento de espessura, em que as partculas da superfcie do cristal
se deslocam conforme indicado na Figura 2.8. Se todas as variveis que podem
influenciar o cristal poderem ser controladas e se mantiverem constantes, a espessura
directamente proporcional frequncia.

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Figura 2.7 Cortes AT e BT da estrutura cristalina de quartzo [32].

Figura 2.8 Representao da onda que se propaga atravs do material,
perpendicularmente s faces do cristal piezoelctrico de quartzo [38].

A textura do cristal pode ser rugosa ou lisa, sendo os mais comuns os polidos
mecanicamente ou os rugosos, sendo a textura que influncia a aderncia. A frequncia
tpica entre os 5-10 MHz, apresentando espessuras razoveis. Acima dos 537C o
cristal deixa de ser opervel [37]. O dimetro do cristal tambm desempenha um papel

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importante na estabilidade deste, sendo os dimetros mais comuns de 10 e 16 mm [36].
A espessura do cristal determina a sua frequncia, e por sua vez a estabilidade, por isso
quanto mais fino for o cristal, maior a sua frequncia, e maior a sua sensibilidade, tendo
a desvantagem de estes se tornarem muito frgeis e difceis de manusear.

2.3.3. Sensor baseado em cristais piezoelectricos de quartzo
Neste trabalho utilizado o mtodo baseado em microbalanas de cristal de quartzo,
que se baseia no facto da variao de massa superfcie do cristal provocar uma
variao na frequncia de vibrao.
Em 1959, Sourbrey [30,39,40] introduziu um novo mtodo baseado em microbalanas
de cristais de quartzo, atravs do uso de cristais piezoelectricos, que mede a massa de
filme aderente superfcie do cristal de quartzo, por unidade de rea, pela variao da
frequncia no cristal de quartzo.
Como a QCM piezoelctrica, a aplicao de um potencial elctrico externo produz
um mecanismo interno de oscilao do campo elctrico a todo o dispositivo, o que induz
a uma propagao de uma onda acstica atravs do cristal [32]. Para alm da espessura
existem outros factores que afectam a frequncia do cristal, assim como a densidade, o
corte, o dimetro e o mdulo de cisalhamento do quartzo.
A Figura 2.9 demonstra a resposta a uma injeco de uma determinada concentrao
do composto a analisar. A massa depositada na superfcie do cristal provoca um aumento
da espessura e por sua vez a frequncia de oscilao diminui. Esta diminuio
proporcional massa depositada, e voltar posteriormente ao valor inicial graas
reversibilidade do sensor.


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Figura 2.9 Exemplo de uma resposta obtida a uma determinada massa injectada [35].

A variao da frequncia pode ser quantificada a partir da Equao de Sauerbrey
[32].

Equao 7

Onde F a frequncia do cristal de quartzo, f
0
2
a frequncia ressonante
fundamental, m a variao de massa (g), A a rea activa de piezoelctricidade,
q

o modulo de cisalhamento do quartzo = 2,94710
11
g.cm
-2
,
q
a densidade do cristal de
quartzo = 2,648g.cm
-3
, C a constante da sensibilidade da massa (sg)
-1
[36].
Sauerbrey demonstrou que a frequncia de ressonncia diminua medida que se
adicionava a massa superfcie do sensor, porque a distncia percorrida pela onda
acstica, desde uma face do sensor at outra aumentava devido ao aumento da
espessura adicionada. Saurbrey considerou que o filme depositado possua as mesmas
propriedades acsticas que o quartzo e que se tratava de um filme rgido e
uniformemente distribudo [32, 41].
Para a deteco do analito essencial que a espcie a ser detectada interaja com os
elctrodos da superfcie do cristal de forma a fazer variar a massa do cristal [42].

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2.3.4. Vantagens e Desvantagens das microbalanas
A principal vantagem das microbalanas a sua sensibilidade, que pode ser tambm
responsvel pela possvel variabilidade observada nos resultados.
A variabilidade comea pelos cristais. Existem pequenas diferenas resultantes das
variaes de espessura e tamanho, assim como dos elctrodos e das imperfeies da
superfcie, assim como irreprodutibilidade na deposio do revestimento. Quando se
usam cristais em que as ligaes aos elctrodos so constitudas por fios finos, flexveis
e por vezes com diferentes comprimentos, estes podem fazer variar a posio do cristal
relativamente ao caudal de gs, produzindo assim diferenas na sensibilidade destes.
Um dos motivos da variao da frequncia a longo prazo mais conhecido o
envelhecimento do cristal, dado que este nunca volta exactamente ao mesmo estado
cada vez que levado a oscilar. Estes ainda podem conter contaminaes, devidas aos
processos de fabrico, levando assim ao aconselhamento da limpeza destes antes de
serem utilizados pela primeira vez [43].
Um outro factor experimental que se deve ter em ateno a temperatura. Os cristais
AT do algumas garantias quanto sua estabilidade, contudo a dissoluo e adsoro de
gases no revestimento so bastante influenciados pela temperatura, e as temperaturas
elevadas podem levar evaporao do revestimento. A humidade uma varivel que
geralmente afecta a estabilidade do sensor, dado que a baixas temperaturas, a gua
pode at chegar a condensar sobre o cristal e impedir a vibrao deste [43].
Existe ainda a presena de rudo elctrico que frequente e obriga a esperar alguns
minutos at que a frequncia estabilize e se possam retomar os ensaios [43].
As anlises de lquidos so mais complicadas do que as em fase gasosa, uma vez
que os lquidos possuem uma sobrecarga adicional e ocorre dissipao de energia do
mesmo [43].
Contudo, a grande vantagem a simplicidade do equipamento utilizado na maioria
das experincias, bem como o custo reduzido e a facilidade de aquisio dos cristais,
contribuindo assim para tornar o mtodo acessvel [43].


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2.3.5. Revestimento Aplicado
O revestimento aplicado no cristal para promover a interaco com a espcie
(amonaco, neste caso) que se pretende analisar. A procura de uma interface especfica
que demonstre uma interaco selectiva e reversvel de grande importncia, e a sua
eficincia na deteco est dependente de caractersticas como: capacidade de adsoro
do analito, selectividade, rapidez de resposta, reversibilidade e reprodutibilidade ao longo
do tempo.
O revestimento utilizado foi a metaloporfirina

cloro[5,10,15,20-
tetraquis(pentafluorofenil)porfirinato]mangansio(III), Mn(TPFPP)Cl, de origem sinttica
cedida pelo Grupo de qumica Orgnica do Departamento de Qumica da Universidade
de Aveiro. A estrutura da porfirina seleccionada encontra-se representada na Figura 2.10.
bem como a numerao segundo a IUPAC na Figura 2.11.

Figura 2.10 Representao da estrutura da metaloporfirina, Mn(TPFPP)Cl


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Numerao Posio
1,4,6,9,11,14,16 e 19 -pirrlicas
5,10,15 e 20 Meso
2,3,7,8,13,17 e 18 -pirrlicas

Figura 2.11 Numerao segundo as recomendaes da IUPAC

A maioria dos elementos da tabela peridica forma complexos equatoriais com
porfirinas, e muitas dessas metaloporfirinas so ainda capazes de adicionar ligandos
axiais, tal como pode ser observado na Figura 2.12 [44, 45].

Figura 2.12 Qumica de coordenao das porfirinas: a metalao de uma porfirina
tambm a coordenao equatorial do metal; X e Y so ligandos axiais [adaptado da
referncia 44].

Para alguns metais, a troca de ligandos axiais rpida e simples, como se pode
observar nos processos de equilbrio apresentados na Figura 2.13.

Metalao
Desmetalao

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Figura 2.13 Processos comuns da coordenao axial. L = ligando de troca; X = ligando
fixo [44].


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3. Instrumentao, Arranjo e Procedimento
Experimentais


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A componente laboratorial deste estudo encontra-se dividida em duas partes,
sendo a primeira referente descrio experimental do mtodo mais utilizado para a
determinao do amonaco em guas, enquanto que a segunda parte se refere ao
desenvolvimento de um novo mtodo baseado em microbalanas de cristais
piezoelctricos, onde se encontra a descrio da montagem experimental e os
procedimentos usados para a anlise do amonaco.

3.1 Recolha das Amostras e Preservao
As amostras de gua utilizadas foram recolhidas em poos nos Distritos de Viseu
e de Aveiro (Figura 3.1). Em cada Distrito a distncia mnima entre os pontos de recolha
foi de 2 km e a distncia mxima entre eles de 30 km.

Figura 3.1 Mapa de Portugal, onde se encontram sinalizados os Distritos de Aveiro e
Viseu, onde foram recolhidas as amostras [adaptado da referncia 46].
Local V da recolha
das amostras
Local A da recolha
das amostras

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Aps a recolha das amostras estas foram transportadas para o laboratrio em
frascos de polietileno.
No laboratrio procedeu-se sua filtrao por filtros de acetato MSI Acetate
plus, de porosidade 0,45 m e de 47 mm de dimetro. Os filtros de acetato foram
escolhidos, porque os filtros com composies onde se encontra nitrato de celulose
poderiam introduzir interferncias. A filtrao foi realizada manualmente atravs de um
sistema de filtrao de polietileno (Millipore). Esta filtrao teve como objectivo eliminar
as partculas em suspenso de forma a evitar interferncias nas anlises [1].
Como no se procedeu anlise das amostras no prprio dia da recolha, estas
tiveram que ser preservadas.
Assim, aps filtrao, as amostras foram preservadas por acidificao, pela
adio de algumas gotas de H
2
SO
4
at pH = 2 e posterior refrigerao a 4C [1].
Todo o material de vidro usado neste trabalho foi, depois limpo, lavado com cido
ntrico 4M.

3.2 Mtodo do Azul de Indofenol

3.2.1 Reagentes, Material e Equipamento
Os reagentes utilizados para a execuo do trabalho encontram-se descritos na
Tabela 3.1. As solues foram preparadas com gua Milli-Q e os reagentes no sofreram
nenhuma purificao prvia. O cloreto de amnio foi seco numa estufa a 100C.


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Tabela 3.1 Reagentes utilizados para o Mtodo do Indofenol
Reagentes Referncia Qualidade Analtica
cido sulfrico Fluka 84720 p.a
Etanol Merck 100983 p.a
Fenol Panreac 131322 p.a
Nitropussianato de Sdio RPE 481934 p.a
Citrato de sdio Jos M. Vaz Pereira p.a
Hidrxido de Sdio Panreac 131687.1211 p.a
Soluo de Hipoclorito de
Sdio
Panreac 212297 p.a
Cloreto de Amnio Merck 101145 p.a

Foram ainda utilizadas clulas de quartzo de 1 cm, e um Espectrofotmetro de
Ultra Violeta Visvel de feixe duplo (UV-2101PC, SHIMADZU) (Figura 3.2).

Figura 3.2 Espectrofotmetro de Ultra Violeta Visvel de feixe duplo utilizado no
Mtodo do Azul de Indofenol.

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2.2.2 Procedimento
Neste mtodo, o amonaco das amostras e padres reagem com o hipoclorito e o
fenol, sendo a reaco catalisada pelo nitropussianato de sdio, dando origem ao azul de
indofenol [1,20, 47-49].
1. Preparou-se a soluo de Fenol, para a qual foram dissolvidos 10 g de fenol em
etanol 95% (v/v) para um volume final de 100 mL. Esta soluo foi preparada
semanalmente.

2. Preparou-se uma soluo de nitropussianato de sdio 0,5% (w/v) dissolvendo 0,5
g de nitropussianato de sdio em gua Milli-Q para um volume final de 100 mL.
Esta soluo foi preparada mensalmente.

3. Preparou-se uma soluo de citrato alcalino, dissolvendo 100 g de citrato de sdio
e 5 g de hidrxido de sdio em gua Milli-Q para um volume final de 500 mL.
Sendo esta preparada semanalmente.

4. Preparou-se uma soluo oxidante, atravs da mistura de 100 mL de citrato
alcalino e 25 mL de uma soluo comercial de hipoclorito de sdio, 5%. Esta
soluo foi preparada diariamente.

5. Preparou-se uma soluo me de cloreto de amnio, 1000 mg L
-
-1
, dissolvendo-
se 3,1409 g de cloreto de amnio para um volume final de 1000 mL gua Milli-Q.

6. A partir da soluo me de cloreto de amnio, preparam-se diariamente diversas
solues padro com diferentes concentraes: 0,005, 0,01, 0,02, 0,03, 0,04,
0,05, 0,06 mg L
-1
em gua Milli-Q para um volume final de 50 mL.

7. Colocaram-se 25 mL de cada uma das solues padro de cloreto de amnio
num erlenmeyer de 100 mL e adicionou-se com agitao constante, 1 mL de
fenol, 1 mL de soluo de nitropussianato de sdio e 2,5 mL da soluo oxidante.

8. Voltou-se a repetir o procedimento descrito no ponto 7, substituindo a soluo
padro pelas amostras, depois do pH das mesmas ter sido corrigido para os
valores normais (pH 6-8) com NaOH. Para cada amostra, procedeu-se
preparao de 5 rplicas.


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9. Taparam-se os erlenmeyers e deixaram-se as solues em repouso para
desenvolver a cor temperatura ambiente durante 1h. A cor mantive-se estvel
durante 24 horas aps a reaco.

A figura 3.3 mostra a cor obtida com padres de diferentes concentraes.

Figura 3.3 Solues obtidas aps o desenvolvimento da cor no mtodo Azul de
Indofenol

10. Procedeu-se s leituras das absorvncias a 640 nm das solues obtidas com os
padres e as amostras, num espectrofotmetro de ultra violeta visvel de feixe
duplo utilizando clulas de quartzo de 1cm;

11. Com os dados obtidos no ponto 10, foi construda uma recta de calibrao das
absorvncias em funo das concentraes dos padres de cloreto de amnio.
Calculou-se a partir dessa recta e das absorvncias das amostras a quantidade
de NH
3
presente nas guas em g L
-1
.


Pgina 34

3.3 O sensor

3.3.1 Reagentes, Material e Equipamento
Os reagentes utilizados para a execuo desta parte do trabalho encontram-se
descritos na Tabela 3.2. As solues foram preparadas em gua Milli-Q e os reagentes
no sofreram nenhuma purificao prvia para alm da secagem do cloreto de amnio a
100C. Foi utilizado azoto Alphagaz proveniente do Ar Lquido como gs de arraste.

Tabela 3.2 Reagentes utilizados para o mtodo do sensor
Reagentes Referncias Qualidade Analtica
Cloreto de Amnio Merck 101145 p.a
Hidrxido de Sdio Panreac 481934 p.a
cido Sulfrico Fluka 84720 p.a
Clorofrmio LAB-SCAN Analytical
reagent A.R
p.a
Cloro [5,10,15,20 -
tetraquis(pentafluorofenil)porfirinato]
mangansio(III)
Cedido pela Doutora
M.Graa Neves
-

Os cristais utilizados para este trabalho so cristais de quartzo polidos e lisos de 9
MHz de corte AT, possuindo elctrodos de ouro (ICM International Crystal
Manufacturing).
Foi utilizado o spin coater (Figura 3.4) (Delta 10TT) para o revestimento do cristal
de quartzo. E durante a parte experimental utilizou-se um rotmetro (ColeParmer) e um
frequencmetro FLUKE PM6685.


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Figura 3.4 Representao de um spin coater.

3.3.2 Revestimento do Cristal
Os cristais de quartzo foram previamente lavados com clorofrmio puro e
posteriormente deixados a secar dentro de um exsicador. Registou-se a frequncia do
cristal lavado.
A metaloporfirina Mn(TPFPP)Cl, foi utilizada no revestimento do cristal
piezoelctrico de quartzo. Esta de origem sinttica e foi cedida pelo grupo de Qumica
Orgnica do Departamento de Qumica da Universidade de Aveiro.
A estrutura da porfirina livre foi confirmada por Espectroscopia de Ressonncia
Magntica Nuclear de
1
H e
19
F (Anexo 1). A estrutura do complexo de mangansio foi
confirmada por espectroscopia de ultra-violeta visvel (Anexo 1).
A sensibilidade e a reprodutibilidade da deteco so influenciadas pela
disposio do revestimento nos elctrodos do cristal, assumindo assim uma grande
importncia o mtodo utilizado no revestimento.
Preparou-se uma soluo da porfirina, dissolvendo-a em clorofrmio puro (CH
3
Cl),
tendo-se de seguida procedido aos seguintes passos para o revestimento do cristal:
1. Ligou-se o spin coater e programou-se para 950 rpm durante 60 segundos;

2. Colocou-se o cristal na sua caixa de proteco, na qual tinha sido feito um orifcio
central, coincidente com a rea do elctrodo, e faz-se vcuo de modo a ficar bem
preso;


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3. Com o auxlio de uma micropipeta, colocaram-se alguns microlitros de uma
soluo concentrada da metaloporfirina, atravs do orifcio da caixa de proteco;

4. Accionou-se o programa imediatamente, evitando que o composto secasse, para
espalhar uniformemente o revestimento;

5. Repetiram-se os passos 2, 3 e 4 para a outra face do cristal;

6. Deixou-se secar o cristal durante 2 dias, dentro de um exsicador. Ao fim desse
tempo registou-se a frequncia do cristal revestido.

2.3.3 Descrio da aparelhagem e montagem experimental
Na realizao do trabalho experimental com o sensor baseado em microbalana
de cristais piezoelectricos utilizou-se a montagem da Figura 3.5.


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Figura 3.5 Montagem experimental utilizada para a quantificao do amonaco em
guas destinadas ao consumo humano. (A: frequencmetro; B: fonte de alimentao; C:
oscilador; D: clula do cristal; E: computador para a aquisio dos dados; F: tubo de vidro
contendo slica gel; G: clula de gua; H: rotmetro).

O sensor baseado em cristais piezoelectricos de quartzo revestidos com
Mn(TPFPP)Cl. O cristal de quartzo encontrava-se ligado a um oscilador, que por sua vez
se encontrava ligado a uma fonte de alimentao. As frequncias de oscilao do cristal
de quartzo foram monitorizadas atravs de um frequencmetro, FLUKE PM6685, ligado a

A
B

Pgina 38

um computador, o que permitiu fazer a aquisio de dados que eram armazenados no
PC por meio de um programa escrito Lab View.

2.3.4 - Procedimento
O rotmetro assegurou a entrada constante de um caudal de 50 cm
3
min
-1
de
azoto no sistema. Este flui ao longo da montagem experimental at atingir o cristal de
quartzo. A clula destinada introduo da amostra possui na parte inferior uma placa de
vidro sinterizado que permite a entrada de azoto na clula. Foi introduzido um volume de
10 mL, rigorosamente medidos, de uma amostra, ou padro, na parte superior da clula,
atravs da abertura na tampa. Aps a estabilizao da frequncia, foi registado o seu
valor (linha de base). De seguida, atravs do septo da tampa foi injectado 1 mL de uma
soluo de hidrxido de sdio (10 N), utilizado para converter todo o amnio livre
dissolvido na gua (NH
3
e NH
4
+
) apenas numa forma: NH
3
. A quantidade injectada de
NaOH suficiente para aumentar o pH acima dos 11. O amonaco ento arrastado pela
corrente de azoto at ao cristal de quartzo. Antes de atingir o cristal de quartzo o fluxo de
azoto contendo o amonaco atravessa uma coluna contendo slica-gel, que permite seca-
lo.
A fim de aumentar a sensibilidade, o caudal de vapor do azoto contendo o
amonaco da amostra dividido em dois, sendo cada uma destas correntes
encaminhadas para uma das faces do cristal de quartzo. Ao atingir o cristal
piezoelctrico, a interaco do amonaco com o revestimento provocou um abaixamento
da sua frequncia, tendo sido registado o valor mnimo observado. Calculou-se ento a
diferena entre o valor mximo (linha de base) e mnimo da frequncia do cristal,
observado depois da introduo da amostra de gua/padro.
Atravs da recta de calibrao obtida pela anlise dos padres calculou-se a
quantidade de NH
3
presente nas amostras de gua em g L
-1
.


Pgina 39

4. Resultados e Discusso


Pgina 40


Pgina 41

4.2. Reversibilidade, Sensibilidade e Estabilidade do Sensor
Neste trabalho foi testado um sensor com um revestimento constitudo por uma
metaloporfirina, cloro[5,10,15,20-tetraquis(pentafluorofenil)porfirinato]mangansio(III),
Mn(TPFPP)Cl que j tinha sido provado ser capaz de interagir com o amonaco [50]. Para
a deteco do amonaco em guas foi necessrio fazer testes ao sensor para verificar o
seu funcionamento visto no haver na literatura nenhum estudo anterior do uso de
microbalanas de cristais de quartzo para a deteco de amonaco em guas naturais.
Para isso foi utilizada uma montagem como descrita na seco 3.3.3, e injectaram-se
solues padro de cloreto de amnio.
A Figura 4.1 representa a frequncia de um cristal de quartzo aps a introduo
de 10 mL da soluo padro de concentrao NH
3
30 g L
-1
e de uma injeco posterior
de 1 mL de NaOH 10N.

Figura 4.1 Frequncia de um cristal de quartzo aps a introduo de 10 mL da soluo
de NH
3
de concentrao 30 g L
-1.


Pgina 42

A reversibilidade da interaco do amonaco com o revestimento permite que este
seja reutilizvel e vivel. A resposta do sensor obtida aps 80 segundos aps a
injeco do NaOH, demorando a anlise de uma amostra, desde que se injecta o NaOH
at o cristal retornar a frequncia da linha de base cerca de 2 minutos.

A Figura 4.2 representa uma recta de calibrao obtida com um sensor com uma
quantidade de revestimento que produziu em decrscimo da frequncia de 21,4 kHz.

Figura 4.2. Recta de calibrao obtida pelo Mtodo Baseado em Cristais
Piezoelctricos.

A Figura 4.2 mostra a faixa linear, onde a sensibilidade mais elevada. O sensor
permite detectar concentraes de amonaco to baixas como 1,83 g L
-1
e quantific-lo
em concentraes desde 4,47 g L
-1
. Para um revestimento de -F
rev
= 21,4 kHz o sensor
apresenta uma sensibilidade de 612 Hz L/mg na zona de concentrao at 60,0 g L
-1
. O
limite admissvel para o amonaco em guas (50 g L
-1
) [11] est precisamente dentro da
gama de linearidade do sensor.

y = 0,612x + 1,104
R = 0,9985
0
5
10
15
20
25
30
35
40
0,0 10,0 20,0 30,0 40,0 50,0 60,0 70,0
F

(
H
z
)
NH
3
(g L
-1
)

Pgina 43

Com vista a estudar o tempo de vida do sensor comparam-se os declives das
rectas de calibrao obtidas ao longo do tempo. Durante a realizao experimental, o
cristal no foi retirado da clula.
Na Tabela 4.1 mostra-se as equaes de calibrao do sensor, obtidas ao longo
do tempo.

Tabela 4.1 Equaes de calibrao do sensor F(Hz), [NH
3
] (g/L)
Data Equao da Recta
26 de maio de 2009
-F = 0,599 [NH
3
] - 1,455
8 de Dezembro de 2009
-F = 0,608 [NH
3
] - 0,746
6 de Janeiro de 2010
-F = 0,609 [NH
3
] + 0,453
25 de Janeiro de 2010
-F = 0,607 [NH
3
] + 0,364
1 de Fevereiro de 2010
-F = 0,612 [NH
3
] + 1,104

A partir da Tabela 3.1, pela comparao entre as rectas de calibrao obtidas ao
longo do tempo pode se confirmar que o sensor baseado em cristais piezoelectricos
mantm a estabilidade durante 8 meses.
Atravs do teste t-student demonstrou-se que os declives das rectas de calibrao
entre os dias 26 de Maio de 2009 e 1 de Fevereiro de 2010 no so estatisticamente
diferentes a um nvel de confiana de 95% (t
calculado
=0,98 < t
tabelado
= 2.57) [51].


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4.3. Anlise das Amostras
A Figura 4.3 representa a frequncia de um cristal de quartzo aps a introduo
de 10 mL de uma amostra de gua com concentrao aproximada 30,0 g L
-1
.

Figura 4.3 Grfico Frequncia de um cristal de quartzo aps a introduo de 10 mL de
uma amostra de gua.

Como possvel verificar atravs da figura anterior, aps a injeco do NaOH
ocorreu um pequeno pico de presso, tendo-se de seguida verificado que a frequncia
decresce cerca de 23 Hz. Este decrscimo da frequncia deve-se ao facto de a massa
sobre o cristal aumentar com a interaco da metaloporfirina com o amonaco. Com a
passagem do azoto pelo sensor, d-se a dessoro do amonaco, o que provoca uma
subida da frequncia.
Para o caso das solues padro, o decrscimo da frequncia proporcional
concentrao do NH
3
e o grfico da calibrao obtido entre 5 g L
-1
e 60 g L
-1
.

Pgina 45

4.4. Anlise dos Interferentes

O sensor demonstra uma boa sensibilidade em solues aquosas. Contudo, o
trabalho experimental baseou-se na deteco de amonaco gasoso [52]. A deteco em
fase gasosa foi escolhida a fim de reduzir o nmero de compostos capazes de atingir o
sensor e passveis de causar interferncias. Entre os compostos volteis que podero
chegar ao sensor e que so propensos a interferir, contam-se as aminas [53]. A
dietilamina e a glicina so duas das aminas que costumam ser analisadas em guas
doces. Portanto, foram adicionadas s solues de amonaco de concentrao conhecida
a fim de testar possveis interferncias na metodologia proposta.

Figura 4.4 - Frequncia do cristal de quartzo revestido aquando da anlise de uma
soluo de amonaco de 1,8 mmol L
-1
(30 mg L
-1
) com 1,8 mmol L
-1
de glicina.


Pgina 46

A Figura 4.4 mostra a frequncia do cristal de quartzo revestido aquando da
anlise de uma soluo de amonaco de 1,8 mmol L
-1
(30 mg L
-1
) e 1,8 mmol L
-1
de
glicina. Aps a introduo da soluo a frequncia comeou a diminuir, o que indica a
presena da amina no cristal revestido, sendo que aps 80 segundos se regista a
frequncia mnima atingida (pico A). De seguida, a frequncia do cristal comea a
aumentar at ao valor inicial, indicando assim a completa dessoro das aminas da
superfcie do elctrodo do cristal. Aps se obter estabilidade da frequncia foi injectada a
soluo de NaOH, tendo-se de seguida observado um novo decrscimo da frequncia
(23Hz) que corresponde ao NH
3
presente (30 mg L
-1
), sem qualquer interferncia da
amina. Logo o pico B corresponde ao amonaco que se apresenta nitidamente distinto do
sinal da amina.
A Figura 4.5 mostra a frequncia do cristal de quartzo revestido aquando da
anlise de uma soluo de amonaco de 1,8 mmol L
-1
(30 mg L
-1
) e 1,8 mmol L
-1
de
dietilamina. O comportamento muito semelhante ao descrito para a glicina.

Figura 4.5 - Frequncia do cristal de quartzo revestido aquando da anlise de uma
soluo de amonaco de 1,8 mmol L
-1
(30 mg L
-1
) com 1,8 mmol L
-1
de dietilamina.

Pgina 47

Os picos A e B em ambas as figuras 4.4 e 4.5 apresentam igual magnitude, o que
permite concluir que o sensor detecta aminas e amonaco com a mesma sensibilidade
molar.

4.5. Resultados obtidos na anlise das Amostras pelos dois mtodos
O novo sensor foi utilizado para determinar a concentrao de amonaco em
guas doces. As guas doces como j foi referido anteriormente foram recolhidas a partir
de sete poos localizados em duas reas geogrficas localizadas no centro de Portugal,
nomeada no distrito de Aveiro (A) e no distrito de Viseu (V). Cinco rplicas de cada
amostra foram analisadas, tanto pela nova metodologia que utiliza o sensor
piezoelctrico, como atravs do mtodo do Azul de Indofenol. 25,00 mL ou 10,00 mL de
cada uma das amostras foram retirados e utilizados nos mtodos com sensor e do
Indofenol, respectivamente.
De modo a testar e comparar o mtodo do Indofenol e o novo mtodo, baseado em
microbalanas com cristais de quartzo, foram analisadas as respostas obtidas para as
diferentes amostras.
Na Tabela 4.2 mostra-se a mdia dos resultados das anlises acompanhadas do
respectivo intervalo de confiana.


Pgina 48

Tabela 4.2 Concentrao de amonaco encontrada para cada uma das amostras. O
prefixo A e V identificam os distritos de Aveiro e Viseu, respectivamente.
NH
3
(g L
-1
)
Mtodo Azul de Indofenol Sensor
Amostra 1 (A) 42,3 1,3 42,6 1,4
Amostra 2 (A) 20,0 1,7 20,1 1,4
Amostra 3 (V) 20,7 1,5 20,7 1,3
Amostra 4 (V) 20,4 1,6 20,4 1,5
Amostra 5 (V) 25,9 1,6 25,1 1,9
Amostra 6 (V) 21,9 1,7 22,0 1,4
Amostra 7 (V) 29,6 1,5 29,7 1,8

De seguida, procedeu-se comparao estatstica dos resultados obtidos pelos
dois mtodos.
Fez-se a comparao dos resultados atravs do teste t-emparelhado [48], onde o
t calculado foi de 0,527. O valor tabelado de t a 95% de nvel de confiana para 6 graus
de liberdade de 2,45. Portanto, t
cal
< t
tab
, e possvel afirmar que no existe uma
diferena significativa entre os resultados obtidos pelos dois mtodos.
Desejou-se tambm comparar a preciso dos dois mtodos analticos, tendo-se
realizado um teste de comparao dos desvios padro dos resultados obtidos para cada
amostra individualmente pelos dois mtodos. Para tal, fez-se o teste F, de Fisher [48],
que permite realizar a comparao de duas variveis da seguinte forma: calcula-se o
parmetro F em termos de varincias dos dois mtodos, em que a varincia o quadrado
do desvio padro:
F =


Pgina 49

Na Tabela 4.3 encontram-se os resultados obtidos para o F
cal
para cada uma das
amostras.
Tabela 4.3 Resultados obtidos do teste F, para cada amostra analisada.

O valor tabelado de F para seis graus de liberdade, v
1
= 6 e v
2
= 6, 4,28. Uma vez
que o valor calculado para as amostras em todos os casos inferior ao tabelado, pode-se
concluir de uma forma geral que no h diferenas significativas na preciso conseguida
com os dois mtodos.

4.6. Vantagem do novo mtodo em relao ao mtodo de Azul de Indofenol

O mtodo do sensor apenas necessita de um pequeno volume de amostra, 10
mL, enquanto que o mtodo do azul de indofenol necessita de 25 mL para cada anlise.
Para alm disto o mtodo do indofenol necessita a manipulao de vrios reagentes,
como uma soluo de fenol que preparada com etanol a 95%, nitroprussianato de
sdio, uma soluo de citrato alcalino, que consiste na mistura de citrato de sdio e
hidrxido de sdio, uma soluo oxidante feita com citrato alcalino e uma soluo
comercial hipoclorito de sdio a 5% e cloreto de amnio. Alguns destes reagentes
necessitam de ser preparados diariamente e o nitroprussianato de sdio e o fenol so
reagentes txicos, sendo que o fenol possui um odor muito caracterstico. No caso do
F
Calculado
Amostra 1 (A) 1,0079
Amostra 2 (A) 1,0015
Amostra 3 (V) 1,0001

Pgina 50

mtodo do sensor, este apenas necessita da manipulao da soluo de cloreto de
sdio, como soluo padro e uma soluo de hidrxido de sdio.
As anlises realizadas com o mtodo do indofenol so bastante mais demoradas
do que aqueles onde se utiliza o mtodo do sensor, no s porque neste se manipulam
muitos reagentes, tendo muitas solues que so previamente preparadas, mas tambm
porque o desenvolvimento da cor no mtodo do indofenol necessita de um tempo de
espera de cerca de uma hora, aps adio dos reagentes amostra.
Assim, o mtodo do sensor bastante mais barato que do mtodo do azul de
indofenol, no s porque a aparelhagem necessria menos dispendiosa, no laboratrio
so menores os custos em reagentes e em tempo do analista.


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5. Concluso


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Pgina 53

Os sensores baseados na microbalana de cristais piezoelectricos so baratos e
de composio simples. Atravs deste trabalho resultou um sensor para a determinao
do NH
3
em guas com excelentes caractersticas.
O sensor aqui apresentado foi desenvolvido para amostras de guas destinadas
ao consumo humano. O objectivo era substituir os mtodos tradicionais por este novo
mtodo. Assim, para alm da rapidez das anlises com o sensor desenvolvido
suplantarem o mtodo padro, estes trazem outras vantagens para o analista em termos
de operao, como o facto de se utilizar um pequeno volume de amostra, no ser
necessria a manipulao de tantos reagentes, principalmente reagentes txicos como o
fenol que possui um odor muito caracterstico e o nitropussianato de sdio, e no se ter
que preparar solues dirias, como a soluo oxidante utilizada no mtodo Azul de
Indofenol. O mtodo Azul de indofenol possui ainda a desvantagem de se ter que esperar
pelo desenvolvimento da cor (reaco) que ocorre em cada soluo padro e amostra,
tornando assim a anlise tediosa e demorada.
O sensor para a anlise do NH
3
baseado em microbalana de cristais de quartzo
necessita de um passo preliminar de revestimento do cristal. O sensor para alm de ser
completamente reversvel e de permitir obter respostas num curto espao de tempo,
apresenta uma notvel estabilidade, que pode ser traduzida numa longa durabilidade. A
sensibilidade do sensor no demonstrou nenhuma degradao notvel no espao de oito
meses, algo que raramente encontrado nos dispositivos de onda acstica.
Os resultados obtidos, para um conjunto de amostras de guas analisadas por
ambos os mtodos, no evidenciam a presena de erros sistemticos, nem permite dizer
que um dos mtodos conduz a resultados estatisticamente diferentes do outro.


Pgina 54


Pgina 55

6. Bibliografia


Pgina 56


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Pgina 62


Pgina 63

Anexo I


Pgina 64


Pgina 65

Figura I Espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear de
1
H da estrutura livre da
porfirina


Pgina 66

Figura II Espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear de
19
F da estrutura livre
da porfirina


Pgina 67

Figura III Espectroscopia de Ultra Violeta Visvel do complexo de mangansio

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