PRCTICA 2.

OBSERVACIN DE CLULAS FUNGI VEGETALES Y ANIMALES

OBSERVACIN DE CLULAS ANIMALES Y VEGETALES
Para comenzar a utulizar el microscopio, se observarn clulas animales y vegetales,
y se estudiarn sus diferencias. Adems, se observarn orgnulos celulares, en
concreto plastos de clulas de tubrculo de patata.

MATERIAL
Microscopio
Portaobjetos y cubreobjetos
Navaja de un solo filo
Lanceta y aguja enmangada
Abatelenguas
Pinzas
Gotero
Tiras de papel filtro
Azul de metileno
Violeta de genciana
Tintura de Iodo
Pulpa de tomate
Tubrculo de patata
Bulbos de cebolla con rabo
Rebanada de sanda (parte blanca)
Hojas de Elodea
Sangre
Agua dulce estancada

ESTUDIO DE CLULAS EPIDRMICAS DE CEBOLLA
Mtodo
Mediante una cuchilla y unas pinzas, aislar una parte de la epidermis correspondiente
a la zona cncava de la tercera o cuarta escama de la cebolla y colocarla extendida
en un portaobjetos; a continuacin se coloca el cubreobjetos y se observa al
microscopio ptico.
Observacin
Con el objetivo de menor aumento, se examinar la preparacin entera, observando
que est formada por clulas alargadas que encierran el ncleo.
La estructura, aunque no se pueda observar en su totalidad con este mtodo, es la
tpica de una clula vegetal. El lmite ms externo es la pared celular, que rodea el
material vivo de la clula: el protoplasma. La parte que rodea todo el protoplasma y
que est en contacto con la pared celular, es la membrana celular. Dicha membrana
no es visible en estas clulas porque est aprisionada contra la pared celular. Prxima
a esta pared hay una capa irregular, granular, que constituye el citoplasma. El
ncleo aparece homogneo.

ESTUDIO DE CLOROPLASTOS, CROMOPLASTOS Y LEUCOPLASTOS
Los plastos son orgnulos citoplasmticos tpicamente vegetales. Pueden
estar coloreados por pigmentos liposolubles o ser incoloros. En el primer caso se
incluyen cloroplastos y cromoplastos y en el segundo los leucoplastos.
Los cloroplastos son los responsables de la asimilacin fotosinttica del
carbono en las plantas verdes, los cromoplastos lo son del color anaranjado o rojizo
de distintas estructuras vegetales (flores, frutos, etc.). Los leucoplastos pueden
almacenar almidn, y se denominan amiloplastos; stos se encuentran en diferentes
rganos de reserva (rizomas, tubrculos).
Mtodo y Observacin
Cloroplastos
En un portaobjetos se coloca una gota de agua con unos filamentos del alga y se
protege con un cubre. Se observa al microscopio con un objetivo de pocos aumentos
para localizar la zona que se observe mejor. Pasar a mayores aumentos.
La forma y tamao de los cloroplastos es variable, pudiendo ser acintados,
estrellados, etc.
Cromoplastos
De un tomate maduro y cortado, se coge una pequea porcin de la parte pulposa. Se
coloca sobre un portaobjetos sin agua y se protege con un cubre, comprimiendo
suavemente la preparacin. Al microscopio se observan unas clulas muy separadas
unas de otras, aprecindose en el citoplasma una serie de grnulos rojizos-
anaranjados que son los cromoplastos. Tambin se puede ver el ncleo redondeado,
y en las zonas poco alteradas por la compresin, grandes vacuolas incoloras.
Leucoplastos
El reactivo lugol, que se utiliza para observar estas estructuras, es a la vez una fijador
(agente qumico que destruye las clulas sin modificar su estructura) y un colorante
de algunos tejidos vegetales (celulsicos, lignificados y suberificados), as como de
sustancias de reserva (almidn), siendo de gran inters para el reconocimiento de
diferentes especies vegetales, pues cada especie, dentro del mismo gnero, presenta
distinta organizacin de los tejidos y almacena el almidn de forma diferente.
Se toma una porcin de tubrculo de patata y se raspa con la punta de la lanceta. Se
deposita el raspado sobre un porta y se aade una gota de agua y otra de lugol. Se
coloca un cubre y se observa al microscopio.
Los grnulos de almidn se tien de color azul-violeta intenso por el yodo. Se pueden
observar las capas de crecimiento excntricas, que presentan los grnulos de almidn
alrededor de un punto central o "hilo".

OBSERVACIN DE PLASTOS DE CLULAS DE TUBRCULO DE PAPA
Los plastos son orgnulos tpicos de clulas vegetales. En la parte anterior de la
prctica se han observado cloroplastos de clulas estomticas y de
clulas parenquimticas. En este parte se observar la estructura y propiedades de
los amiloplastos de patata.

Mtodo y Observacin
Los leucoplastos son orgnulos incoloros, con formas diversas, cuya funcin es
almacenar distintos tipos de sustancias. Concretamente, los amiloplastos de patata,
almacenan almidn que se deposita en capas sucesivas, por lo que poseen forma de
concha de mejilln, donde se distingue un punto muy refringente en la punta,
llamado hilo (donde se acumula mayoritariamente la amilosa), y unos anillos de
crecimiento que en conjunto constituyen la loncilla(donde se acumula
mayoritariamente la amilopectina). Debido a la presencia de almidn,
los amiloplastos se pueden teir con lugol o tintura de Iodo


1. Raspar suavemente con el bistur la superficie de un trozo de patata pelada, y
extender sobre un portaobjetos una pequesima cantidad del raspado.
2. Aadir una gota de agua y colocar un cubreobjetos.
3. Observar al microscopio.
4. Levantar el cubreobjetos y aadir una gota de tintura de Iodo volver a colocar el
cubreobjetos
5. Observar la preparacin

Observacin de vacuolas
Las vacuolas que se encuentran en las clulas vegetales son regiones rodeadas de
una membrana "tonoplasto" o "membrana vacuolar" y llenas de un lquido muy
particular llamado "jugo celular".
La clula inmadura contiene una gran cantidad de vacuolas muy pequeas que
aumentan de tamao y se van fusionando en una sola y grande, a medida en que la
clula va creciendo. En la clula madura, el 90 % de su volumen puede estar ocupado
por una vacuola, con el citoplasma reducido hacia una capa muy estrecha apretada
contra la pared celular.
Debido al transporte activo y retencin de ciertos iones en el interior de la vacuola que
hace el tonoplasto, los iones se pueden acumular en el lquido vacuolar en
concentraciones muy superiores a las del citoplasma exterior. A veces la
concentracin de un determinado material es suficientemente grande como para
formar cristales.
stos estn formados de oxalato de calcio pueden adoptar distintas formas: Drusas,
con forma de estrellas; y Rafidios, con forma de agujas. Algunas vacuolas son cidas,
como por ejemplo la de los ctricos.
La vacuola, es a menudo un lugar de concentracin de pigmentos. Los colores azul,
violeta, prpura, rojo de las clulas vegetales se deben, usualmente, a un grupo de
pigmentos llamados antocininas (responsables de las coloraciones de frutas y
verduras).
En el microscopio fotnico se puede observar la clula vegetal, y en ella plastidios
(cloroplastos, amiloplastos, etc.) y refirindose a la vacuola, no se puede divisar su
membrana (tonoplasto), pero se deduce su ubicacin porque se pueden ver las
cristalizaciones (drusas y rafidios) de algunas sustancias que componen el jugo
celular.

Mtodo y Observacin
Haz una preparacin temporal, utilizando un corte fino de la capa blanca de la
sanda.
Tela con violeta de genciana. Absorbe el excedente de colorante con una tira de
papel filtro.
Obsrvala al microscopio con objetivo de 10X y 43X. Trata de identificar las vacuolas.
Repite el procedimiento ahora con una hoja de Elodea.

OBSERVACIN DE CLULAS DEL EPITELIO DE LA MUCOSA BUCAL
Este epitelio est constituido por clulas de un contorno irregular, prcticamente
incoloras a la luz blanca, por lo que, para su observacin es preciso realizar un
proceso previo de tincin, en este caso con azul de metileno, que permitir observar
un citoplasma granulado y un ncleo claramente diferenciado.

1. Raspar suavemente la cara interior de la mejilla con un palillo, y depositar el
contenido en un portaobjetos extendindolo con cuidado.
2. Fijar la muestra a la llama para estabilizar las estructuras y adherirla al porta. Para
ello, se pasa la cara inferior del porta por encima de la llama brevemente, con
cuidado de no quemar las clulas.
3. Aadir 1-2 gotas de azul de metileno sobre las clulas fijadas y dejar teir durante
3 minutos.
4. Lavar suavemente la preparacin para eliminar el exceso de colorante. Para ello,
colocar el porta en pendiente bajo el grifo y dejar caer lentamente un chorro fino
de agua.
5. Secar la parte inferior del porta y colocar un cubreobjetos.
6. Observar la preparacin

OBSERVACIN DE LAS CLULAS DE LA SANGRE

Mtodo y Observacin
Depositar una gota de sangre en el borde de un portaobjetos limpio. Seguidamente,
con un porta de borde esmerilado, se hace un frotis o extensin de la sangre. El porta
con el que se hace la extensin debe deslizarse bien colocado y lo ms
perfectamente aplicado en su borde contra el otro porta sobre el que se efecta la
extensin, solo debe pasarse una vez de forma continua e ininterrumpida. Estas
extensiones o frotis deben secarse al aire lo ms rpidamente posible. La desecacin
se facilita con movimientos en forma de abanico, nunca soplando o por el calor. La
rpida desecacin evita la deformacin de los glbulos.
A pocos aumentos explorar la preparacin para localizar la zona en la que el frotis es
ms perfecto. Consideramos como ms apta, aquella en la que los glbulos estn en
una sola capa, bien teidos y no se han producido precipitados de colorantes. Si los
glbulos presentan formas irregulares, bordes dentados, aspecto erizado, etc., ser
indicio de que el secado del frotis fresco no fue todo lo rpido que se requiere.
Localizada la zona adecuada se cambia a mayor aumento.
En la extensin predominan los glbulos rojos, hemates o eritrocitos, teidos de color
rojo. Son ms delgados por el centro que por los bordes. Los de mamferos no
poseen ncleo pero los del resto de los animales si lo tienen.
Los glbulos blancos o leucocitos se identifican fcilmente por la presencia del ncleo.
Hay dos clases de leucocitos.
A) Granulocitos o Polimorfonucleares: con ncleo fragmentado o arrosariado y
granulaciones en el citoplasma. Se dividen en:
- Neutrfilos : con granulaciones de color salmn. Con ncleo multilobulado.
- Eosinfilos : con granulaciones abundantes teidas en rojo. Con ncleo bilobulado.
- Basfilos: con granulaciones violetas que eclipsan al ncleo bilobulado.
B) Agranulocitos: sin granulaciones en el ciptoplasma. Se dividen en:
- Linfocitos : con un solo ncleo que ocupa casi toda la clula de manera que solo se
observa un pequeo anillo de citoplasma.
- Monocitos : son los de mayor tamao y poco frecuentes, ncleo bilobulado y
excntrico, son los ms mviles y su funcin principal es la fagocitosis.





Observacin de microorganismos presentes en agua dulce

Introduccin
Dentro de una gota de agua procedente de estanques o charcas, se puede observar
la gran diversidad existente en el mundo de los seres vivos. Los organismos ms
comunes pertenecen a alguno de los grupos siguientes :

2.- Preparacin de una infusin
2.1.- En un vaso de precipitados o en un recipiente de unos 300-500 ml. de capacidad
se depositan hojas y ramas secas, granos de arroz o en su defecto las hojas
desechadas de las lechugas o de cualquier otra verdura de las que venden en las
fruteras.
2.2.- Rellenar el vaso de precipitados con agua de charca. Se puede utilizar agua
procedente de un grifo, pero en este caso se debe hervir previamente para eliminar el
cloro y una vez que se haya enfriado rellenar el vaso de precipitados. Conviene aadir
fango y hojas procedentes de un charco para as aumentar la cantidad de materia
orgnica.
2.3.- El recipiente, destapado para que se renueve el aire, se deja a la temperatura
del laboratorio (20 a 28) durante una semana aproximadamente.
2.4.- Al cabo de esta semana aparecern numerosos microorganismos vegetales y
animales, fundamentalmente protozoos.
Notas: 1.- Es aconsejable aadir lentejas de agua (Lemma) a la infusin para
aumentar las posibilidades de que se vean vorticelas. 2.- Para la posible observacin
de amebas deja flotando un cubreobjetos, durante 24 horas, sobre la pelcula formada
en la superficie de la infusin. Recogerlo con las pinzas y colocarlo sobre un
portaobjetos, dejndolo en reposo durante 15 minutos para que las amebas entren en
actividad. Se pueden teir de rojo neutro.

Observacin directa
1.1.- Con un cuentagotas tomar unas gotas de lquido de la infusin, procurando que
sea de las cercanas de residuos vegetales.
1.2.- Depositar dos o tres gotas en un portaobjetos limpio.
1.3.- Con unas pinzas finas coger una muestra muy pequea de algn residuo
vegetal, en avanzado estado de descomposicin, y depositarlo en el mismo
portaobjetos utilizado anteriormente.
1.4.- Colocar el cubreobjetos de tal manera que se evite la formacin de burbujas.
1.5.- Secar el exceso de agua con ayuda de un trozo de papel de filtro.
1.6.- Observar al microscopio comenzando con el objetivo de menor aumento.
2.- Coloracin vital
2.1.- Sobre un portaobjetos limpio realiza una nueva preparacin siguiendo las
instrucciones marcadas en el punto anterior.
2.2.- Aadir en el borde del cubre una gota del colorante, esperando que penetre en la
preparacin muy lentamente. Puede facilitarse la difusin del colorante colocando en
el lado opuesto del cubre, al que se puso la gota de rojo neutro, una tirita de papel de
filtro. Al embeber el papel de filtro algo de agua de la preparacin, se facilita la
penetracin del colorante. El rojo neutro, al impregnar muy ligeramente al
microorganismo, da mayor contraste a los elementos morfolgicos citoplasmticos.
2.3.- Observar al microscopio comenzando con el objetivo de menor aumento para
luego hacerlo con los de mayor aumento.


Registra tus observaciones, dibujando en el espacio correspondiente.