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Fisiologa de la

Nutricin Mineral

Ing. M Sc. Hilvio Castillo
2.1 General
IMPRESCINDIBLE: sin su presencia la planta
no se desarrolla normalmente o no completa
su ciclo de vida
ESPECFICO: no puede ser reemplazado por
otro elemento
DIRECTO: el elemento en cuestin interviene
en la nutricin de la planta y no a travs de una
accin indirecta en el suelo o medio de cultivo
Un nutriente esencial es:
Ventajas de un Control de Procesos del Sistema de Riego en el Cultivo
Palto
Por lo general hay una gran discrepancia entre:
La concentracin de nutrientes minerales en el suelo o solucin nutritiva, y
El requerimiento vegetal de nutrientes minerales.
Adems, el suelo y tambin en algunos casos las soluciones nutritivas pueden contener
altas concentraciones de elementos minerales no necesarios para el crecimiento
vegetal. Por lo tanto, los mecanismos por los cuales las plantas toman los
nutrientes deben ser selectivos. Esta selectividad puede ser bien demostrada
particularmente en clulas de algas (Tabla 2.1), donde las soluciones externas e
internas (savia celular) estn separadas por solo dos membranas: la membrana
plasmtica y el tonoplasto.
Tabla 2.1
Relacin entre la concentracin inica en el sustrato y en la savia celular de
Nitella y Valonia
a

In
Nitella
concentracin (m)
Valonia
concentracin (m)
A,
agua
tanque
B,
Savia
celular
Relacin
B/A
A,
Agua de
mar
B,
Savia
celular
Relacin
B/A
Potasio
Sodio
Calcio
Cloruro
0.05
0.22
0.78
0.93
54
10
10
91
1080
45
13
98
12
498
12
580
500
90
2
597
42
0.18
0.17
1
a
Modificado a partir de Hoagland (1948).
2.1 General
Aunque usualmente menos dramtica, tambin es un caracterstica
tpica en plantas superiores la selectividad en la toma inica. Cuando las
plantas son cultivadas en volmenes limitados de solucin nutritiva, la
concentracin externa cambia en pocos das (Tabla 2.2). Las concentraciones
de potasio, fosfato y nitrato disminuyen marcadamente, mientras que pueden
aumentar las de sodio y sulfato, indicando que el agua es tomada ms rpido
que cualquiera de estos dos iones. Entre las dos especies vegetales (maz y
frjol) difieren las tasas de toma, especialmente para el potasio y calcio. La
concentracin inica en la savia radical exprimida es generalmente mayor que
en la solucin nutritiva; esto es mas evidente en el caso del potasio, nitrato y
fosfato.
Tabla 2.2
Cambios en la concentracin inica en la solucin (nutritiva) externa y en la savia radical exprimida en maz y frjol
In
Concentracin externa (m) Concentracin en la savia
radical exprimida (m)
Inicial
Despus de 4 das
a

Maz Frjol Maz Frjol
Potasio
Calcio
Sodio
Fosfato
Nitrato
Sulfato
2.00
1.00
0.32
0.25
2.00
0.67
0.14
0.94
0.51
0.06
0.13
0.61
0.67
0.59
0.58
0.09
0.07
0.81
160
3
0.6
6
38
14
84
10
6
12
35
65
a
No se reemplaza el agua perdida por transpiracin.


Los resultados obtenidos en ambas plantas inferiores y superiores
demuestran que la toma de iones se caracteriza por lo siguiente:

Selectividad. Ciertos elementos minerales son tomados
preferentemente, mientras que otros son en contra discriminados
casi excluidos

Acumulacin. La concentracin de elementos minerales puede ser
mucho mayor en la savia celular vegetal que en la solucin externa.

Genotipo. Hay notables diferencias entre especies vegetales en las
caractersticas de la toma inica.

Estos resultados plantean muchas preguntas: Por ejemplo, cmo las
clulas individuales y las plantas superiores regulan la toma inica? Es la toma
inica un reflejo de la demanda o son iones que no juegan un rol en el
metabolismo vegetal o es txico incluso el tomarlos? Para discutir la regulacin
de la toma inica a un nivel celular es necesario seguir la va de los solutos
(iones, molculas cargadas y no cargadas) desde la solucin externa a travs
de la pared celular y la membrana plasmtica hacia el citoplasma y la vacuola
2.2 Va de los solutos desde la
solucin externa hacia las clulas
2.2 Va de los solutos desde la solucin externa hacia las clulas
2.2.1. Influjo al apoplasto.

2.2.2. Paso al citoplasma y vacuola (Simplasto)
1
2
3
Uptake of soil solution by the
hydrophilic walls of root hairs
provides access to the apoplast.
Water and minerals can then
soak into the cortex along
this matrix of walls.
Minerals and water that cross
the plasma membranes of root
hairs enter the symplast.
As soil solution moves along
the apoplast, some water and
minerals are transported into
the protoplasts of cells of the
epidermis and cortex and then
move inward via the symplast.
Within the transverse and radial walls of each endodermal cell is the
Casparian strip, a belt of waxy material (purple band) that blocks the
passage of water and dissolved minerals. Only minerals already in
the symplast or entering that pathway by crossing the plasma
membrane of an endodermal cell can detour around the Casparian
strip and pass into the vascular cylinder.
Endodermal cells and also parenchyma cells within the
vascular cylinder discharge water and minerals into their
walls (apoplast). The xylem vessels transport the water
and minerals upward into the shoot system.
4
5
2.2 Va de los solutos desde la solucin externa hacia las clulas
2.2.1 Influjo al apoplasto
El movimiento de solutos de bajo peso molecular (e.g., iones,
cidos orgnicos, aminocidos, azucares) desde la solucin externa
hacia las paredes celulares de clulas individuales o races (el
espacio libre) es un proceso no metablico, pasivo, conducido
por difusin o flujo msico (Fig. 2.1). No obstante, las paredes
celulares pueden interactuar con los solutos y as pueden facilitar o
limitar el ulterior movimiento a los centros de toma de la membrana
plasmtica de clulas individuales o races.
MOVIMIENTO DE IONES EN EL SUELO
MECANISMOS DE
TRASLADO DE LOS
NUTRIENTES A LA RAIZ:
z FLUJO MASIVO: los
nutrientes se mueven en
la solucin del suelo
hacia las races en la
corriente de la
transpiracin (Ca)
z DIFUSIN: segn el
gradiente de
concentraciones (P)
z INTERCEPCIN: las
races interceptan los
iones al crecer en las
zonas donde estn los
nutrientes
MOVIMIENTO DE IONES
INTERCEPCION
RADICULAR
FLUJO DE
MASAS
DIFUSION
INGRESO DE NUTRIENTES A RAZ

Difusin simple: de acuerdo a la ley de Fick

J = PA(C - Ci)

J = cantidadad soluto atravieza membrana por
unidad de tiempo
P = coeficiente de permeabilidad (mide la
velocidad cmS
-1
con que soluto atraviesa
membrana
A = rea de seccin transversal de membrana
C - Ci = diferencia entre concentracin iones,
exterior e interior de la clula.

Difusin facilitada
Membrana es particularmente
impermeable a solutos cargados o
iones.
En memb. protenas de transporte
que permiten o facilitan su
difusin
Direccin de transporte
determinada por gradiente de cc.
(s. no cargados) o por gradiente
electroqumico (iones).
Ion Coeficiente de difusin
NO
3
-
1,0.10
-10

K
+
1 28.10
-12

Cl
-
2,0 29,0.10
-10

H
2
PO
4
-
0,3 3,3.10
-13

SO
4
=
2- 1,0 2,0.10
-10

Clarkson, D.T. 1981. Nutrient interception and transport by roots sytem.
In: Physiological factors limiting plant productivity. C:B: Johnson (ed). Butterworths,
London, PP 307-314.
Valores para el coeficiente de difusin (m.s-1) de
diferentes iones para distintos Suelos
Flujo de masas
Movimiento de grupos de molculas por
diferencial de presin hidrosttica.
El volumen del flujo depende no slo del
gradiente de presin, sino tambin del radio que
atraviesa (considerando un tubo) o de la
viscosidad. Viene descrito por la ecuacin de
Poiseuille:
Flujo (m
3
s-1) = (r4/8)*(dp/dx)
r = radio del tubo
= viscosidad del fluido
(dp/dx) = gradiente de presin

Este es el movimiento predominante en el
xilema, durante el transporte de agua desde la
raz al resto de tejidos de la planta a travs del
xilema, tambin a travs del suelo o de las
paredes celulares.
Fig. 2.1 Seccin transversal de dos clulas rizodrmicas
en una raz de maz. V, vacuola; C, citoplasma; W, pared
celular; E, solucin externa. (Cortesa de C. Hecht-Buchholz)
Las paredes celulares primarias consisten de una red de celulosa,
hemicelulosa, (incluyendo pectinas) y glicoprotenas, las ultimas pueden
representar entre 5 y 10% del peso seco de las paredes celulares. Esta
red contiene poros, los llamados espacios intermicelares e interfibrilares,
que difieren en tamao. Se ha calculado para clulas de pelos
radicales de rbano un dimetro mximo de 3.5 3.8 nm (35-38 );
los valores mximos para poros en paredes celulares vegetales
estn en el rango de 5.0 nm.
En comparacin, los iones hidratados como K+ y Ca
2+
como se
muestra abajo son pequeos estando en el orden de solo 10 20% del
tamao del poro de la pared celular. No se espera que los poros por ellos
mismos ofrezcan restriccin al movimiento de iones en el espacio libre.
Estructura
Dimetro (nm)

Pared celular rizodrmica (maz; Fig. 2.1)
Pared celular cortical (maz)
Poros en pared celular
Sacarosa
Iones hidratados
K
+

Ca
2+

500-3000
100-200
<5.0
1.0

0.66
0.82

En contraste a los nutrientes minerales y solutos orgnicos de bajo
peso molecular, los solutos de alto peso molecular (e.g., quelatos
metlicos, cidos flvicos, y toxinas) o virus y otros patgenos cualquiera
son severamente limitados o evitados por el dimetro de los poros de
entrar al espacio libre de la clulas radicales.
En esta red, una proporcin variable de pectinas consisten de
cido poligalacturnico originado principalmente de la lamela media.
Por consiguiente ambos en races y en el continuo de pared celular
de otros tejidos vegetales, el llamado apoplasto, los grupos
carboxlicos (RCOO) actan como intercambiadores catinicos.
Por lo tanto, en las races, los cationes de la solucin externa pueden
acumularse en un paso no metablico en el espacio libre, mientras
que los aniones son repelidos (Fig. 2.2) .
Debido a que estas cargas negativas el apoplasto no proporcionan un
espacio libre para el movimiento de solutos cargados, Hope & Stevens
(1952) introdujeron los trminos espacio libre aparente (AFS). Este
comprende el espacio libre acuoso (WFS), el cual es fcilmente asequible
a iones y molculas cargadas y no cargadas, y el espacio libre de Donnan
(DFS), donde sucede el intercambio catinico y la repulsin aninica (Fig.
2.2)
Acido poligalacturonico
grupos carboxlicos (RCOO)
Paso no metablico en el espacio libre
Espacio libre de agua (WFS) + Equilibrio de Donan (DFS) = Espacio libre aparente (AFS)
Fig. 2.2 Diagrama esquemtico del sistema de poros del
espacio libre aparente. DFS, espacio libre de Donan; WFS,
espacio libre acuoso, gracias al potencial electroqumico
generado por iones no difusibles se supera el equilibrio a
uno de los lados de una membrana.
La distribucin inica dentro del DFS se caracteriza por la tpica
distribucin de Donnan que se presenta en suelos en superficies de
partculas de arcilla cargadas negativamente. Por lo tanto, los cationes
divalentes como Ca
2+
son enlazados preferentemente a estos centros de
intercambio catinico. Las especies vegetales difieren
considerablemente en su capacidad de intercambio catinico (CEC),
esto es, en el nmero de centros de intercambio catinico (aniones
fijados; RCOO), localizados en paredes celulares, como se muestra
en la Tabla 2.3.
Tabla 2.3
Capacidad de intercambio catinico de peso seco radical en diferentes
especies vegetales
a

Especie vegetal
Capacidad de intercambio catinico
meq (100g)
-1
peso seco
Trigo
Maz
Frjol
Tomate
23
29
54
62
a
En base a Keller & Deuel (1957).


Por lo general, la CEC de especies dicotiledneas es mucho mayor
que en especies monocotiledneas. La CEC efectiva disminuye como
el pH externo caiga, y es usualmente mucho menor en races intactas
que los valores mostrados en la Tabla 2.3. Debido a limitaciones
espaciales (banda de Caspari y exodermis, Seccin 2.5.1) solo son
accesibles directamente parte de los centros de intercambio del AFS a
los cationes de la solucin externa. No obstante, las diferencias
mostradas son tpicas de las que existen entre especies vegetales.
La adsorcin de intercambio en el AFS (espacio libre aparente) del
apoplasto no es un paso esencial para la toma transporte inico a travs de
la membrana plasmtica hacia el citoplasma. No obstante, el ligamiento
preferencial de cationes di- y polivalentes aumenta la concentracin de
estos cationes en el apoplasto de las races y de este modo en la cercana
de los centros de toma activa de la membrana plasmtica.
Como resultado de este efecto indirecto, se puede observar una
correlacin positiva entre la CEC y la relacin Ca
2+
a K
+
en contenido
en diferentes especies vegetales. La competencia efectiva entre H
+
o
especies de aluminio mono- y polivalentes o ambas con el magnesio
por sitios de ligamiento en el apoplasto radical es obviamente un
factor principal responsable de la depresin en la toma de magnesio y
la aparicin de deficiencia de magnesio en especies anuales y rboles
forestales cultivados en suelos minerales cidos (Seccin 16.3).
La importancia del ligamiento catinico en el AFS para la toma y
subsiguiente transporte al vstago tambin es indicada por
experimentos con las mismas especies vegetales pero con diferentes
formas de ligamiento de un catin divalente como el zinc (Tabla 2.4).
Cuando el zinc es suplido en forma de sal inorgnica (i.e., Zn
2+
libre), el
contenido de zinc no solo radical sino tambin caulinar es varias veces
mayor que cuando el zinc es suplido como quelato (ZnEDTA), esto es,
sin un ligamiento sustancial del soluto en el AFS.

Adems, puede contribuir la restringida permeabilidad del zinc quelatado
en los poros del AFS. Usando estas diferencias en la tasa de toma entre
cationes metlicos como Zn2+ (y tambin Cu2+ y Mn2+) y sus complejos
con quelantes sintticos en las llamadas soluciones quelatadas-tamponadas
se pueden hacer clculos de la concentracin de cationes metlicos libres
en la solucin externa requerida para el crecimiento vegetal ptimo. De
acuerdo a estos clculos, concentraciones externas extremadamente bajas
en la membrana plasmtica de clulas corticales radicales parecen ser
adecuadas para satisfacer la demanda vegetal de estos micronutrientes
catinicos (Seccin 2.5.4).
Tabla 2.4
Toma y translocacin del zinc en plantas de cebada
a


Zinc suplido como b
Tasa de toma y translocacin
(g Zn g
-1
peso seco por 24 h)
Radical Caulinar
ZnSO
4

ZnEDTA
4598
45
305
35
a
En base a Barber & Lee (1974).
b
Concentracin de zinc en la solucin nutritiva: 1 mg l
-1

Con cationes metales pesados en particular, el ligamiento en el
apoplasto puede ser bastante especfico. El cobre, por ejemplo, puede ser
enlazado en la pared celular en forma no inica (ligamiento coordinado) a
grupos con nitrgeno cualquiera de glicoprotenas protenas de
ectoenzimas, como fosfatasas peroxidasas. Este ligamiento catinico
en el apoplasto puede contribuir significativamente al contenido
catinico radical total, como se mostr en estudios de toma de
cationes polivalentes como el cobre, zinc y hierro. Tambin se
demuestra por los datos en la Tabla 2.4. Por lo tanto cuando se suple en
formas no quelatadas, los altos contenidos radicales de cationes
polivalentes comparando con el caulinar no necesariamente refleja la
inmovilizacin en el citoplasma o vacuolas sino que pueden resultar del
ligamiento preferencial en el apoplasto del cortex radical.
El apoplasto radical puede tambin servir como un pool
transitorio de reserva para metales pesados como hierro y zinc que
pueden ser movilizados, por ejemplo por exudados radicales especficos
como los fitosiderforos, y ulteriormente translocados a los vstagos. El
tamao de este pool de almacenamiento para hierro probablemente
juegue un rol en las diferencias genotpicas sobre la sensibilidad a la
deficiencia de hierro en soya. Por otro lado, puede limitarse la excesiva
toma de calcio por precipitacin como oxalato de calcio en las paredes
celulares del cortex.

A pesar de la poca selectividad en el ligamiento catinico en la
pared celular (Seccin 2.1.1), los principales centros de selectividad
en la toma catinica y aninica as como de solutos en general estn
localizados en la membrana plasmtica de clulas individuales.
La membrana plasmtica es una barrera efectiva contra la difusin de
solutos cualquiera desde el apoplasto hacia el citoplasma (influjo) o desde
el citoplasma hacia el apoplasto y solucin externa (eflujo). La membrana
plasmtica es tambin el principal centro de transporte activo en cualquier
direccin. La otra barrera principal a la difusin es el tonoplasto
(membrana vacuolar). En la mayora de clulas vegetales maduras la
vacuola comprende mas del 80-90% del volumen celular (Fig. 2.1)
actuando como compartimiento central de almacenamiento para iones,
tambin para otros solutos (e.g., azucares, metabolitos secundarios).
Puede demostrarse fcilmente que la membrana plasmtica y el
tonoplasto funcionan como barreras efectivas a la difusin e intercambio
inico, como se muestra por ejemplo, K
+
y Ca
2+
(Fig. 2.3). La mayora del
Ca2+ (45Ca) tomado dentro de 30 min. (influjo) es todava fcilmente
intercambiable (eflujo) y est seguramente localizado en el AFS. En
contraste solo una fraccin mnima del K
+
(42K) es fcilmente
intercambiable dentro de este periodo de 30 min, siendo la mayora del K+
ya transportado a travs de membranas hacia el citoplasma y vacuolas
(espacio interno).
2.2.2 Paso al citoplasma y vacuola (Simplasto)
Fig. 2.3 Curso de tiempo de influjo (I) y eflujo (E) de
45
Ca y
42
K en
races aisladas de cebada. Despus de 30 min. (flecha) algunas de las
races se transfirieron a soluciones con Ca
2+
y K
+
no marcado. Se
calculo la proporcin de fraccin intercambiable en el espacio libre
aparente al extrapolar a tiempo cero (x).
Aunque la membrana plasmtica y el tonoplasto son las
principales biomembranas directamente involucradas en la toma
y transporte radical de solutos, debe tenerse en cuente que la
compartimentacin por biomembranas es un prerrequisito
general para sistemas vivos. Por lo tanto el transporte de solutos
hacia organelos como mitocondria y cloroplastos tambin debe
ser regulado por membranas que separan estos organelos del
citoplasma circundante. Un ejemplo del transporte de solutos a
travs de la membrana externa del cloroplasto es dado en la
Seccin 8.4 para fsforo y azucares.
La capacidad de las biomembranas para el transporte de solutos y
su regulacin esta estrechamente relacionada con su composicin
qumica y estructura molecular. Antes de que los mecanismos de
transporte de solutos a travs de las membranas sean discutidos en
mayor detalle (Secciones 2.4 y 2.5), es apropiado por lo tanto
considerar algunos aspectos fundamentales de la composicin y
estructuras de las biomembranas
2.3 Estructura y
composicin membranal
2.3 Estructura y composicin membranal
La relacin inversa entre la penetracin de la membrana y el dimetro de
molculas no cargadas y las tasas a las que penetran las membranas. Se
han confirmado recientemente estas propiedades de las membranas como
ultrafiltros, por lo menos en su principio (Tabla 2.5).
Tabla 2.5
Coeficiente de reflexin () de algunos no electrolitos en las membranas celulares de
Valonia utricularis
a

Compuesto
b
Radio de la molcula (nm)
Rafinosa
Sacarosa
Glucosa
Glicerol
Urea
1.00
1.00
0.95
0.81
0.76
0.61
0.53
0.44
0.27
0.20
a
En base a Zimmermann & Steudle (1970).
b
1.00 indica que las membranas son impermeables al soluto; 0 indica que las
membranas son fcilmente permeables al soluto.
De este modo, adems de las paredes celulares (Seccin 2.2.1) las
membranas celulares son barreras efectivas para solutos de alto peso
molecular. La mayora de quelatantes sintticos como EDTA (ver tambin
Tabla 2.4) y siderforos microbianos como los quelatantes especficos de
hierro (Seccin 16.5) son de alto peso molecular y esta limitada su tasa de
penetracin a travs de la membrana plasmtica de las clulas radicales.
Es posible, por lo tanto, usar altas concentraciones externas de solutos
orgnicos de alto peso molecular como el polietilenglicol como efectivos
osmticos a fin de inducir una deficiencia hdrica (estrs hdrico) en
plantas.
Las molculas que son altamente solubles en solventes orgnicos, i.e.,
con propiedades lipoflicas, penetran las membranas mucho mas rpido
que lo que se predice en base a su tamao. Presumiblemente los
principales factores responsables de la rpida penetracin son la
solubilidad de estas molculas en la membrana y su habilidad para
difundirse a travs del corazn lipdico de las membranas.
Las membranas se componen tpicamente de dos clases
principales de compuestos: protenas y lpidos. Los carbohidratos
comprenden solo una mnima fraccin de las membranas. La abundancia
relativa de protenas y lpidos puede ser bastante variable dependiendo de
si la membrana es plasmtica, mitocondrial o del cloroplasto. Las
membranas tambin difieren en dimetro, por ejemplo en espinaca desde
10.5 nm (membrana plasmtica) a 8.1 nm (tonoplasto) y 6.3 nm (retculo
endoplasmtico). Sin embargo, todas las biomembranas tienen alguna
estructura bsica comn como se muestra en el modelo de la Fig. 2.4
Los lpidos polares (e.g., fosfolpidos) con cabezas cargadas
hidroflicas (grupos fosfato, amino y carboxlicos) se orientan hacia la
superficie membranal. Las molculas proteicas pueden estar
adheridas (protenas extrnsecas), por ejemplo, por ligamiento
electrosttico a las superficies como enzimas de membrana. Otras
protenas pueden estar integradas dentro de las membranas (protenas
intrnsecas), cruzar las membranas para formar protenas de canal
(protenas transportadoras) que funcionan en el transporte membranal
de solutos polares como los iones (Seccin 2.4).

Tres lpidos polares representan los mayores componentes
lipdicos de membranas: los fosfolpidos, los glucolpidos, y menos
abundantes, los sulfolpidos (excepto en las membranas tilacoidales de
los cloroplastos, donde ellas estn en cantidades considerables). Se
muestran a continuacin ejemplos de estos lpidos polares: Otro grupo
importante de lpidos de membrana consisten los esteroles, por
ejemplo el -sitosterol:
A travs de su rol estructural en las membranas los esteroles
pueden afectar indirectamente los procesos de transporte como la
actividad de la ATPasa bombeadora de protones de la membrana
plasmtica. De acuerdo con esta afirmacin el contenido de
esteroles es muy bajo en las endomembranas (e.g., retculo
endoplasmtico) pero puede ascender hasta ms del 30% de los
lpidos totales en la membrana plasmtica y tambin en el
tonoplasto (Tabla 2.6).

A pesar de estas diferencias en los lpidos, la composicin de
cidos grasos de fosfolpidos es similar en ambas membranas. Los
cidos grasos de cadena larga en los lpidos polares de membrana
varan en ambos en longitud y en grado de insaturacin (i.e., numero
de enlaces dobles) que influyen el punto de fusin (Tabla 2.6).
Tabla 2.6
Composicin de lpidos y cidos grasos en membrana plasmtica y tonoplasto en frjol
mungo
a

Lpidos Membrana plasmtica
mol mg
-1
protena
Tonoplasto
mol mg
-1
protena
Fosfolpidos
Esteroles
Glucolpidos
1.29
1.15
0.20
1.93
1.05
0.80
Composicin de cidos grasos en los fosfolpidos
cidos grasos Longitud de
cadena
Punto de fusin
(C)
Membrana
plasmtica
(% del total)
Tonoplasto
(% del total)
cido palmtico
cido esterico
cido olico
cido linoleico
cido linolnico
Otros
C
16

C
18

C
18:1
b


C
18:2
b

C
18:3
b


+62.8
+70.1
+13.0
-5.5
-11.1

35
6
9
21
19
10
39
6
9
22
20
4
a
En base a Yoshida & Uemura (1986). Reimpreso con permiso de of Plant
Physiologists.
b
Numeral a la derecha de los dos puntos indica el nmero de enlaces dobles.




La composicin lipdica caractersticamente no solo difiere entre
membranas de clulas individuales sino tambin entre clulas de
diferentes especies vegetales, tambin fuertemente afectada por factores
ambientales. En hojas, por ejemplo, se presentan marcadas variaciones
anuales en los niveles de esteroles y en races disminuyen ambos el
contenido de fosfolpidos y la proporcin de cidos grasos altamente
insaturados bajo deficiencia de zinc.
En muchos casos los cambios en la composicin lipdica reflejan
la adaptacin vegetal a su ambiente mediante el ajuste de las
propiedades de la membrana. Generalmente, los cidos grasos
altamente insaturados predominan en plantas que crecen en clima
fro. Durante la aclimatacin vegetal a bajas temperaturas tambin se
observa frecuentemente un aumento en cidos grasos altamente
insaturados.
Tal cambio mueve el punto de congelamiento (i.e., la temperatura de
transicin) de las membranas a una temperatura menor y puede as ser
de importancia para el mantenimiento de las funciones de la membrana a
bajas temperaturas. Es cuestionable, sin embargo, generalizar acerca del
efecto de la temperatura sobre la composicin lipdica de las membranas.
En centeno, por ejemplo, que es una especie vegetal tolerante al fro, la
proporcin de cidos grasos poliinsaturados en las races disminuye en
vez de incrementarse cuando las races fueron refrigeradas.
Durante la aclimatacin de races a bajas temperaturas tambin se
realza la sntesis de nuevas protenas de membrana y aumentan
considerablemente los fosfolpidos. Ya que los fosfolpidos
probablemente actan como receptores para fitohormonas como el
cido giberlico, puede estar relacionada con estos cambios la creciente
sensibilidad de membranas a bajas temperaturas al cido giberlico.
Frecuentemente estn altamente correlacionadas las propiedades de
membrana entre la selectividad inica y composicin lipdica como por
ejemplo entre la toma del cloruro y los esteroles y galactolpidos
(Seccin 16.6). Adems, los cultivos frjol, remolacha azucarera y cebada
difieren no solo en la composicin de cidos grasos de las membranas
radicales sino tambin considerablemente en la toma de sodio (Seccin
10.2).
Las alteraciones en la composicin lipdica de las membranas radicales
son tambin respuestas tpicas a cambios en el suministro de nutrientes
minerales o exposicin a la salinidad. De los nutrientes minerales, el calcio
juega el rol ms directo en el mantenimiento de la integridad de la membrana,
una funcin que es discutida en la Seccin 2.5.2. En races de soya, los
cambios en el suministro de calcio y de nitrgeno afectan la relacin de cidos
grasos saturados a insaturados as como la tasa de toma de ciertos
herbicidas. Puede observarse un incremento en la permeabilidad de
membrana en races que sufren de deficiencia de fsforo y zinc. En caso de
deficiencia de fsforo, se asume que el factor responsable es el agotamiento
de fosfolpidos en las membranas. En caso de deficiencia de zinc, se presume
que esta involucrada en el agujereado de membrana la autooxidacin de los
cidos grasos altamente insaturados en las membranas.
Se demuestra claramente la naturaleza dinmica de las
membranas, por ejemplo, por la rpida disminucin en el eflujo de
solutos de bajo peso molecular (potasio, azucares, aminocidos)
despus de reabastecer de zinc a races deficientes en zinc. Otro
ejemplo es la rpida incorporacin de constituyentes de membrana
suplidos externamente como los fosfolpidos a la estructura de la
membrana. Para la membrana plasmtica las tasas de recambio
parecen estar en el orden de solo unas pocas horas. Tales tasas de
recambio indican que ciertas subunidades (e.g., con protenas
intrnsecas; Fig. 2.4) son ya sintetizadas y transportadas a la
membrana plasmtica va vesculas secretoras como por ejemplo el
aparato de Golgi.
La incorporacin de adems compuestos suplidos externamente, sin
embargo, deja a las membranas ms sensibles al dao. La incorporacin
de antibiticos como la nistatina induce la formacin de poros (huecos) en
las membranas y una correspondiente rpida filtracin de solutos de bajo
peso molecular como el potasio. Los cidos monocarboxlicos como el
cido actico y el cido butrico, tambin inducen dao a la membrana. Las
especies no disociadas de estos cidos son tomadas rpidamente y
conducen al sbito incremento del agujereado de membrana, como lo
indica la filtracin de potasio y nitrato desde el tejido radical. La capacidad
de los cidos monocarboxlicos para inducir el agujereado de membrana se
incrementa con el largor de la cadena del cido [C2(cido actico)
C8(cido caprlico)] y por lo tanto con el incrementado comportamiento
lipoflico, as como con una disminucin del pH externo (RCOO- + H+
RCOOH).
Los cidos monocarboxlicos no disociados pueden incrementar el
agujereado de la membrana al cambiar la composicin de cidos grasos
de la membrana, particularmente al disminuir la proporcin de cidos
grasos poliinsaturados como el cido linolnico. Es de considerable
importancia ecolgica el efecto de los cidos monocarboxlicos sobre la
permeabilidad de la membrana radical, ya que estos cidos se acumulan
en suelos inundados (Seccin 16.4).
Como se muestra en la Fig. 2.5, estas especies txicas de oxigeno
son cualquiera radicales como el superxido (O
2
.-) hidroxilo (OH.),
la molcula perxido de hidrogeno (H
2
O
2
). Todas se forman en
varias reacciones y procesos metablicos donde el oxigeno este
involucrado, por ejemplo en la fotosntesis y en la respiracin,
incluyendo la oxidacin de NADPH NADH en la interfase membrana
plasmticapared celular. La toxicidad por especies activadas de
oxigeno y sus derivados se causa, por ejemplo por la oxidacin de
grupos tioles (-SH) de enzimas y la peroxidacin de los cidos grasos
poliinsaturados de membrana. Los organismos aerbicos incluyendo
plantas poseen un rango de sistemas de defensa (Fig. 2.5) para la
detoxificacin de radicales de oxigeno y perxido de hidrogeno,
incluyendo la superxido dismutasa (O
2
.-H
2
O
2
) y la
peroxidasa/catalasa (H
2
O2 H
2
O ).
Fig. 2.5 Modelo de generacin de, y peroxidacin lipdica membrana
por, radicales de oxgeno y perxido de hidrgeno, y sistemas de
secuestro y detoxificacin. (I. Cakmak, no publicado.)
La nutricin mineral vegetal puede afectar en varios niveles
ambos, la generacin de especies txicas de oxigeno de perxido de
hidrogeno, y los mecanismos para su detoxificacin. Esto puede
resumirse as:

1. Como un componente de enzimas detoxificantes (e.g., zinc, cobre,
manganeso, o hierro en las superxido dismutasas; hierro en peroxidasas
y catalasas);
2. Por acumulacin de precursores para la formacin de radicales
(e.g., fenoles y quinonas) bajo deficiencia nutricional (e.g., deficiencia de
boro);
3. A travs de la disminucin en la actividad demanda (i.e., la
demanda) y la acumulacin de fotosintatos y correspondientemente
elevados niveles de especies txicas de oxigeno en hojas fuente bajo
deficiencia de nutrientes minerales (e.g., potasio y magnesio).

Varios de estos aspectos son discutidos en mayor detalle en secciones
relevantes sobre fotosntesis (Capitulo 5) y sobre las funciones de los
nutrientes minerales (Captulos 8 y 9).
2.4 Transporte de solutos
a travs de membranas
2.4.1 Transporte y demanda energtica.

2.4.2 Transporte activo y pasivo: bombas electrognicas,
carriers, canales inicos.

2.4.3 La cintica del transporte.
2.4 Transporte de solutos a travs de membranas
2.4.1 Transporte y
demanda energtica
Las membranas intactas son barreras efectivas al paso de iones
y molculas no cargadas. Por otro lado, ellas tambin son centros de
selectividad y transporte contra el gradiente de concentracin de los
solutos. En el experimento registrado en la Tabla 2.2, por ejemplo, la
concentracin de potasio en la savia radical exprimida de maz (que es
aproximadamente igual a la concentracin de potasio en las vacuolas) se
eleva 80 veces del valor de la solucin externa.
En contraste, la concentracin de sodio en la savia radical exprimida
permanece menor que en la solucin externa. Se acepta generalmente
que tal selectividad y acumulacin requiere ambos, de un suministro de
energa como fuerza motriz y de sitios de ligamiento especficos, carriers
permeasas de membrana, mas probablemente protenas como la protena
ligadora de sulfato aislada de microorganismos la sulfato permeasa en
races (Seccin 2.5.6).
2.4.1 Transporte y demanda energtica
Tabla 2.2
Cambios en la concentracin inica en la solucin (nutritiva) externa y en la savia radical exprimida en maz y frjol
In
Concentracin externa (m) Concentracin en la savia
radical exprimida (m)
Inicial
Despus de 4 das
a

Maz Frjol Maz Frjol
Potasio
Calcio
Sodio
Fosfato
Nitrato
Sulfato
2.00
1.00
0.32
0.25
2.00
0.67
0.14
0.94
0.51
0.06
0.13
0.61
0.67
0.59
0.58
0.09
0.07
0.81
160
3
0.6
6
38
14
84
10
6
12
35
65
a
No se reemplaza el agua perdida por transpiracin.


Fig. 2.6 (A) Toma del in potasio (influjo) y (B) actividad ATPasa (ATP
ADP + P
i
) en races aisladas de diferentes especies vegetales. Clave:
, cebada; , avena; , trigo; , maz. (Despus de Fisher et al., 1970.)
Se propuso en este proceso un acoplamiento directo del
transporte selectivo de iones mediado por carriers y el consumo de
fosfatos ricos en energa en forma de ATP. En este modelo se
suministro ATP va respiracin (fosforilacin oxidativa en la
mitocondria; Seccin 8.4.3) y se requiri para la activacin del
carrier, para el ligamiento del in al carrier, para el transporte
membranal del complejo carrierin, para la liberacin del in del
carrier en la superficie interna de la membrana. Fisher et al (1970)
fue el primero en presentar un fuerte apoyo a la participacin del
ATP en el transporte inico mediado por carriers.
Estudiando la toma radical de K+ en varias especies vegetales,
estos trabajadores demostraron una estrecha relacin entre la toma
de K+ y la actividad ATPasa (Fig. 2.6). Adems, las MgATPasas
(Seccin 8.5) de la membrana plasmtica son fuertemente
estimuladas por el K+, as que cuando se aaden a la solucin
externa iones como el K+, aceleran su propio transporte a travs de
la membrana plasmtica.
Es considerable la demanda energtica para la toma inica
radical, especialmente durante el rpido crecimiento vegetativo (Tabla
2.7). Del costo de energa respiratoria total, expresado como consumo
de ATP, se requiere hasta 36% para la toma inica. Con el incremento
de edad vegetal est proporcin declina a favor de la demanda de ATP
para crecimiento y mantenimiento de la biomasa. Se han encontrado
en principio resultados similares con el maz.
Tabla 2.7
Costos de energa respiratoria para la toma inica radical de Carex diandra a
Proporcin del ATP demandado
total requerido para
Edad vegetal (das)
40 60 80
Toma inica
Crecimiento
Mantenimiento de biomasa
36
39
25
17
43
40
10
38
52
a
En base a Werf et al. (1988).
Estos clculos al nivel de planta entera sobre la demanda de ATP
para la toma inica radical tienen que interpretarse con cuidado
respecto a la demanda energtica para el transporte membranal
inico en clulas radicales. En primer lugar, estos clculos incluyen
la demanda energtica para el transporte radial a travs de las
races y la secrecin hacia el xilema (Secciones 2.7 y 2.8).
En segundo lugar, una proporcin relativamente grande de
carbohidratos suministrada desde el vstago hacia las races se oxida va
la cadena de transporte de electrones mitocondrial no fosforilante (va
alternativa; Seccin 5.3) desarrollando menos ATP sintetizado por
molcula de carbohidrato oxidado. Tomando en cuenta este cambio en la
va respiratoria, se ha calculado un requerimiento de una molcula ATP
por in transportado a travs de la membrana plasmtica.
Tales clculos se basan en la toma neta e incluyen el requerimiento
energtico para la re-toma (recuperacin) de iones desde el apoplasto
radical (costos de eflujo) que se asumen estar en el rango de 20% de
los costos de influjo. En tercer lugar, el acoplamiento directo del consumo
de ATP y del transporte inico a travs de la membrana es la excepcin
en vez de la regla. Como se discuti antes, las ATPasas de membrana
plasmtica y de tonoplasto tambin tiene otras funciones aparte del
transporte de nutrientes minerales y solutos orgnicos a travs de la
membrana.
2.4.2 Transporte activo y pasivo:
bombas electrognicas, carriers,
canales inicos
El transporte de solutos a travs de las membranas no es
necesariamente un proceso activo. Los solutos pueden estar mas
concentrados en un lado de la membrana (i.e., ellos puede poseer mas
energa libre) y as difundirse de una concentracin mayor a una menor (o
potencial qumico). Este transporte cuesta abajo a travs de una
membrana es, en trminos termodinmicos, un transporte pasivo con la
ayuda de carriers, a travs de poros acuosos. En clulas, tal transporte
inico cuesta abajo a travs de la membrana plasmtica puede
mantenerse al disminuir la actividad inica en el citoplasma, por ejemplo,
debido a la adsorcin en grupos cargados (e.g., RCOO RNH ) o la
incorporacin en estructuras orgnicas (e.g., fosfatos en cidos
nucleicos). Esto es particularmente cierto en tejidos meristemticos (e.g.,
puntas radicales).
En contraste, el transporte membranal contra el gradiente de energa
potencial (cuesta arriba) debe enlazarse directamente indirectamente a un
mecanismo consumidor de energa, una bomba de membrana. Sin embargo
para determinar si un in es transportado activamente a travs de la
membrana, se deben conocer ambos la actividad concentracin del in en
cualquier lado de la membrana (i.e., el gradiente del potencial qumico) y el
gradiente del potencial elctrico (i.e., diferencias en milivoltios) a travs de la
membrana. Por medio de microelectrodos insertados en las vacuolas, se
puede medir un potencial elctrico fuertemente negativo entre la savia celular y
la solucin externa (Fig. 2.7). Las primeras mediciones de esta clase se
hicieron en clulas de algas gigantes como Chara, donde se encontr
potenciales elctricos fuertemente negativos entre -100 y -200 mV.
Higinbotham et al. (1967) y Glass & Dunlop (1979) usaron el mismo mtodo
para demostrar la existencia de gradientes de potenciales elctricos similares
en clulas de plantas superiores.
Fig. 2.7 A . Representacin esquemtica del sistema para medir
electropotenciales en clulas vegetales. B. Ejemplo del clculo de la
distribucin inica en equilibrio qumico y electroqumico asumiendo un
potencial de -59 mV.
Se puede calcular la concentracin a cada lado de la membrana a la cual cationes y
aniones estn en equilibrio electroqumico a la que los iones en la solucin externa estn
en equilibrio con aquellos en la vacuola de acuerdo a la ecuacin de Nernst:
Getting nutrients into the symplasmic pathway








Cytoplasm








Vacuole
Plasma
membrane
Tonoplast
Marschner, 2002
Nitrate, phosphate, chloride:
co-transport via a
proton pump
H
+
Anion
Cell wall
H
+
Proton-ATPase pump
(requires energy - ATP)
Moves H
+
uphill against
the electrical potential gradient and
the chemical potential gradient (pH)
ATP
pH 7.3-7.6 pH 5.5
-120 to -180 mV
Absorcin de agua desde el suelo al xilema radical
Getting nutrients into the symplasmic pathway








Cytoplasm








Vacuole
Plasma
membrane
Tonoplast
Marschner, 2002
Cations (except K)
Uniport
Cell wall
Cation

Uniport:
downhill of electrical potential gradient,
but energy is still needed
to maintain the gradients
-120 to -180 mV
Absorcin de agua desde el suelo al xilema radical
De acuerdo a esta ecuacin, a un electropotencial negativo de -59 mV,
los cationes monovalentes como el K+ aniones como el Cl- podran
estar en equilibrio electroqumico si su concentracin en la vacuola fuera
10 veces mayor (K+) 10 veces menor (Cl-) que en la solucin externa
(Fig. 2.7). En cationes aniones divalentes la diferencia entre equilibrio
qumico y electroqumico difiere por un factor an mayor al 100. En
clulas de plantas superiores las diferencias de potencial elctrico entre
vacuolas y la solucin externa son generalmente mayores a -59 mV (Tabla
2.8).

De este modo, por lo general, en trminos de electrofisiologa, solo la
toma aninica hacia las vacuolas siempre requerir de un proceso de
transporte activo. Esto se indica en la Tabla 2.8 en las diferencias entre
las concentraciones vacuolares aninicas basadas en clculos de
acuerdo al equilibrio electroqumico y las reales concentraciones
vacuolares aninicas halladas en el experimento. En este ejemplo, el
nico catin que requerira transporte activo para su toma es el K+ en las
races de avena. A baja concentracin externa de K+, usualmente se
requiere del transporte activo. Para Na+ y Ca2+ en particular, la
concentracin en equilibrio en la savia celular (i.e., la calculada) ser
mucho mayor que aquella encontrada experimentalmente en el estado
estable (Tabla 2.8).
Tabla 2.8
Concentracin inica (m) determinada experimentalmente y calculada de
acuerdo a las diferencias de potencial elctrico en races de arveja y avena
a

In
Races de arveja (-110 mV) Races de avena (-84 mV)
Experimental Calculada Experimental Calculada
Potasio
Sodio
Calcio
Cloruro
Nitrato
75
8
2
7
28
74
74
10800
0.014
0.027
66
3
3
3
56
27
27
1400
0.038
0.076
a
Composicin de la solucin externa: 1 m KCl, 1 m Ca(NO3)2, y 1 m
NaH2PO4. En base a Higinbotham et al. (1967).
Una explicacin posible para esta discrepancia es que le membrana
plasmtica restringe fuertemente la penetracin de estos iones o que los
iones son bombeados (transportados) de vuelta a la solucin externa. Se
ha establecido en varias especies vegetales una bomba de eflujo de Na+
en la membrana plasmtica de clulas radicales. La expulsin activa de
Ca
2+
(bomba de eflujo de Ca
2+
) de la membrana plasmtica tambin existe
en clulas radicales. En la seccin 8.6 se discute la importancia general
de esta bomba de eflujo de Ca2+ de ambos membrana plasmtica y
tonoplasto para el funcionamiento celular. Ya que las concentraciones de
Ca2+ en las soluciones de suelos son usualmente mayores a 1m, la
bomba de eflujo de Ca2+ tendr un considerable requerimiento de
energa para evitar el transporte de Ca2+ a lo largo del gradiente qumico
(e.g., Tabla 2.8). Es probable, por lo tanto, que factores fisicoqumicos
adicinales como el tamao y la carga del Ca2+ limite fuertemente la
penetracin a lo largo del gradiente del potencial electroqumico a travs
de la membrana plasmtica.
Algunos de los principios del transporte inico membranal se muestran en
la Fig. 2.8. Una ATPasa-H+ (fuerza motriz de protones) transporta H+ a travs
de la membrana de la superficie interna hacia la externa, por ejemplo en la
membrana plasmtica desde el citoplasma al apoplasto, creando por lo tanto
un gradiente de pH y electropotencial. El transporte catinico y aninico a lo
largo del gradiente es mediado cualquiera por carriers o canales con
selectividad inica. Este modelo adems toma en cuenta otra funcin
importante de la membrana, es decir aquella de receptora de seales externas
e internas (e.g., pH, concentracin inica) y la transformacin de estas seales
en procesos de transporte membranal-
Tambin un consenso general de que en plantas las bombas de
protones estn localizadas en ambos membrana plasmtica y
tonoplasto, y que su principal funcin es la regulacin del pH en el
citoplasma. Estas bombas transportan H+ desde el citoplasma
cualquiera a travs de la membrana plasmtica hacia el apoplasto o
a travs del tonoplasto hacia la vacuola conduciendo a las tpicas
diferencias del pH entre estos compartimentos.
Por lo general, el pH del citoplasma (citosol) es de 7.3-7.6, el de
la vacuola 4.5-5.9 y el del apoplasto cerca de 5.5. De acuerdo con
esto, en clulas vegetales la extrusin de protones desde el
citoplasma a travs de la membrana plasmtica y el tonoplasto es el
principal proceso energizado y proporciona la fuerza motriz para los
procesos de transporte energizados secundarios de cationes a lo
largo del gradiente electroqumico.
TRANSPORTE PASIVO Y ACTIVO
Sea cual sea la forma de entrada de los iones a la raz (apoplstica,
simplstica o micorrcica), deben atravesar la membrana plasmtica,
donde la bicapa lipdica es una barrera impermeable a ellos.

La diferente concentracin de iones entre ambos lados de la
membrana genera un gradiente de concentracin y de cargas
elctricas (potencial de membrana). El transporte de nutrientes (en
forma inica) puede llevarse a cabo de forma pasiva o activa

Para saber si un ion especfico atravesar la membrana de forma
pasiva o activa se tiene que determinar su potencial electroqumico y
compararlo con el potencial de membrana.

El potencial electroqumico de un ion depende de sus
caractersticas intrnsecas, de su concentracin y de las condiciones
elctricas donde se encuentre, y viene definido por la ecuacin de
Nernst.
ECUACIN DE NERNST
ENj = Potencial de Nernst para el ion (j)
R = Constante de la ecuacin general de los gases (8.31 J K
-1
mol
-1
)
T = Temperatura absoluta (K)
z = Carga del ion (j)
F = Constante de Faraday (96.5 J mol-1 mV
-1
)
Cej = Concentracin del in (j) en el exterior de la clula
Cij = Concentracin del in (j) en el interior de la clula

Para saber si un in va a ser transportado activa o pasivamente se
debe comparar el potencial de Nerst para ese in con el potencial
de la membrana por el que tiene que ser transportado.

Si el potencial de Nerst para un in iguala el
potencial de membrana el in es distribuido
pasivamente a travs de membrana.
ENj = (RT/zF) x ln (Cej/ Cij)
Protenas transportadoras de iones
Bombas de protones. protenas que expulsan H
+

contra gradiente utilizando ATP como fuente de
energa. Su funcin: mantener el potencial de
membrana para favorecer el transporte de otros
iones.
Transportadores. Utilizan el potencial de
membrana creado por las bombas de protones
para transportar otros iones. Este transporte
puede ser simporte o antiporte dependiendo de
la direccin de los iones involucrados.
Canales. Son poros selectivos para el transporte
pasivo de distintos iones (K
+
, Cl
-
, Ca
2+
).
Fig. 2.8 Mecanismos principales de transporte inico en membranas
plasmticas. (A) ATPasa bombeadora de H
+
; (B) canal inico; (C) carrier;
(D) protenas acopladoras para percepcin y transduccin de seales.
(Modificado de Hedritch et al., 1986; con permiso de Trends in
Biochemical Sciences.)
ATPasa-H+ (fuerza
motriz de protones)
transporta H+
ATPasa
H
+
ATP + H
2
O ADP + Pi
H
+
Membrana
plasmtica
Citosol pH 7
Pared celular pH 5
H
+
NO
3
-
H
+
Sac H
+
H
+
Na
+
Ca
++
Transporte a travs de la membrana
simporte
antiporte
Pared celular pH 5
Citosol pH 7
El funcionamiento y localizacin de las bombas de protones y
del transporte catinico y aninico a travs de la membrana
plasmtica y el tonoplasto se resumen en un modelo en la Fig. 2.9.
El transporte membranal de aminocidos y azucares sigue los
mismos principios, i.e., es conducido por bombas de protones de
membrana (Seccin 5.4.1).
Fig. 2.9 Modelo para el funcionamiento y localizacin de bombas electrognicas
de protones (ATPasa, PP
i
asa-H
+
), bomba redox transmembranal (NAD(P) oxidasa),
canales inicos, y transporte catinico y aninico a travs de la membrana
plasmtica y tonoplasto
En el modelo mostrado en la Fig. 2.9 la H +-ATPasa de la membrana
plasmtica juega un rol clave en ambos la regulacin del pH citoplsmico y
en la fuerza motriz para la toma catinica y aninica. Se considera por lo
tanto como la enzima maestra. Se ha hecho considerable progreso en el
entendimiento de cmo es regulada la actividad de esta enzima, tambin a
nivel gentico. La actividad de la H +-ATPasa de la membrana plasmtica
es particularmente alta en pelos radicales donde esta consume tanto como
25-50% del ATP celular.
Por consiguiente, bajos niveles radicales de carbohidratos no solo
disminuyen la extrusin neta de protones hacia el medio externo sino
tambin disminuye el pH citoslico. La H +-ATPasa de la membrana
plasmtica es estimulada por cationes monovalentes en el orden K+ > Na+
y es relativamente insensible a aniones. Un ejemplo de la estimulacin por
el K+ se ha dado en la Fig. 2.6. El calcio en general y la concentracin de
Ca2+ libre citoslico en particular juega un rol clave en la estimulacin de
esta enzima. Un incremento en el Ca2+ libre citoslico incrementa
fuertemente la actividad de esta enzima de la membrana plasmtica,
presentndose la mxima estimulacin ya a valores menores a 7 m Ca2+
libre. La activacin se logra presumiblemente por los efectos del Ca2+ libre
sobre una protena quinasa asociada con la superficie interna de la
membrana plasmtica (Seccin 8.6.7).
Los cationes son transportados cuesta abajo a lo largo del gradiente
del potencial elctrico (alrededor de -120 a -180mV) a travs de la
membrana plasmtica hacia el citoplasma pon un uniporte, mediado por
estructuras especficas (carriers, permeasas) en la membrana (Fig. 2.9).
Para el potasio (K+), sin embargo, a bajas concentraciones externas (<1m)
opera la alta afinidad de toma del sistema contra la diferencia del potencial
electroqumico imperante (e.g., actividad exterior de 10 m K+; actividad
citoplsmica de ~80 m K+).De este modo, se requerira un transporte
energizado de K+ cualquiera como antiporte K+-protn mediado por carriers
(contratransporte) , mas probablemente como un simporte cotransporte
K+-protn 1:1.
Potencial Hdrico (
w
)
Transporte a travs de membranas
Hidroliza ATP de forma directa para transportar el compuesto en cuestin
Mecanismos de absorcin de nutrimentos

Un transportador puede movilizar diversos iones y molculas; segn la
direccionalidad, se distinguen:
Antiportadores:aqullos que transportan un tipo de molcula en contra
de su gradiente al mismo tiempo que desplazan uno o ms iones
diferentes a favor del suyo, siendo ambos gradientes contrapuestos,
Simportadores: los que desplazan el compuesto a transportar en contra
de su gradiente acoplando este trasiego al desplazamiento de unoo ms
iones diferentes a favor del suyo, que, en este caso, es equivalente al de
la molcula a transportar.
Mecanismos de absorcin de nutrimentos
Mecanismos de absorcin de nutrimentos
Na
+
-H
+
antiporter to transport Na
+
out, Cl
-
, NO
3
-
, H
2
PO
4
-
, sucrose and
amino acid enter the cell via specific proton symporter. How about K
+?

Movimiento de iones por el plasmalema y el tonoplasto
ATPasa-
H+
(fuerza
motriz de
protones)
transport
a H+
Para el potasio (K+), sin embargo, a bajas
concentraciones externas (<1m) opera la alta afinidad de
toma del sistema contra la diferencia del potencial
electroqumico imperante (e.g., actividad exterior de 10 m
K+; actividad citoplsmica de ~80 m K+).De este modo, se
requerira un transporte energizado de K+ cualquiera como
antiporte K+-protn mediado por carriers (contratransporte) ,
mas probablemente como un simporte cotransporte K+-
protn 1:1.
Potencial Hdrico (
w
)
Potencial Hdrico (
w
)
Para el transporte de aniones a travs de la membrana plasmtica
opera un cotransporte protnanin ( simporte); usando los abruptos
gradientes elctricos (diferencia de potencial) y qumicos (diferencia de
pH) de los protones como fuerza motriz. Se ha presentado evidencia del
cotransporte protnanin en la membrana plasmtica para cloruro,
fosfato y nitrato, as como aminocidos. Todava no es clara la
estequiometra de este cotransporte; ms de un protn puede ser
transportado por una carga negativa del anin,.
Hay tambin otros enfoques sobre los mecanismos de transporte
aninico a travs de la membrana plasmtica. De acuerdo a Liu (1979), la
toma radical de fosfato en maz es mediada por un contratransporte OH
/fosfato en que el transporte cuesta abajo del OH desde el alto potencial
electroqumico en el citoplasma (alto pH y fuerte carga negativa) hacia el
apoplasto est acoplado con un contratransporte de aniones fosfato al
citoplasma. Sin embargo, es dbil la evidencia experimental para el
intercambio transporte del OH HCO a travs de la membrana como
fuerza motriz para el transporte aninico, ya que no estn disponibles
inhibidores especficos del transporte de OH y HCO .
Se ha establecido la existencia en el tonoplasto de dos bombas de
protones funcionalmente y fsicamente distintas, una H+-ATPasa y una
pirofosfatasa inorgnica, la PPiasa (Fig. 2.9). Ambas bombas de protones
son fosfohidrolasas que usan cualquiera ATP pirofosfato inorgnico como
fuente energtica (Seccin 8.4). El magnesio es esencial para ambas
bombas, indicando que el MgATP y el MgPPi son los sustratos. El
pirofosfato inorgnico es generado en varias vas biosintticas principales
como en la sntesis de almidn (Seccin 8.4) en la activacin del sulfato
(Seccin 8.3.2). Se asume que la concentracin del PPi, en el citosol esta
en el rango de 50390 que es la adecuada para mover esta bomba de
protones.
La contribucin relativa de la PPiasa a la actividad de bombeo total de
protones en el tonoplasto parece ser menor que de la ATPasa , y ambas
bombas se afectan de manera bien diferente por cationes y aniones
inorgnicos (Tabla 2.9). Excepto por la esencialidad del Mg2+ en ambas
bombas, la Mg ATPasa es estimulada por el cloruro e inhibida ( no
afectada) por el potasio y el nitrato mientras que lo contrario es cierto en la
Mg PPiasa. La Mg PPiasa-H+ exhibe una dependencia obligatoria de
presencia de K+ y se presenta la activacin por K+ en la fase citoplsmica.
No son claras las implicaciones de estas diferencias en la capacidad y
sensibilidad de ambas bombas en la acumulacin de iones en las vacuolas
en el transporte radial de iones a travs de las races (Seccin 2.7). La
diferente proporcin de actividades de ambas bombas del tonoplasto radical
puede estar involucrada en las diferencias genotpicas entre plantas en la
translocacin de cloruros hacia los vstagos (Captulo 16).
Tabla 2.9
Algunas caractersticas de las bombas de protones del tonoplasto
ATPasa PP
i
asa
Actividad bombeadora
a
de H
+
(mol H
+
m
-2
s
-1
)
Actividad afectada
b

Estimulada por
No afectada inhibida por
214
Mg
2+
, Cl
-

K
+
, NO


95
Mg
2+
, K
+
, NO


Cl
-

a
A partir de Hoffmann & Bentrup (1989).
b
Datos compilados a partir de Bennet et al. (1984); Marquardt & Lttge (1987) y
Pugliarello et al. (1991).
Las bombas de protones del tonoplasto se requieren para el
mantenimiento de un alto pH citoslico y simultneamente proporcionan
la fuerza motriz para el transporte catinico hacia la vacuola como
contratransporte ( antiporte, Fig. 2.9). Este contratransporte no solo es
importante por ejemplo, para la regulacin del turgor (altas
concentraciones vacuolares de K+, Seccin 8.7) sino tambin para el
mantenimiento de las bajas concentraciones citoslicas de sodio
(Seccin 16.6.5) y calcio (Seccin 8.6).
Para aniones la situacin es menos clara. Mientras que se ha
demostrado en clulas foliares de plantas con metabolismo cido de las
crasulceas (CAM, Seccin 5.2.4) un cotransporte estequiomtrico
protn-anin malato en vacuolas, es dbil la evidencia para races del
acoplamiento de tal transporte protn-anin. El transporte aninico desde
el citoplasma hacia la vacuola puede seguir el gradiente del
electropotencial el cual es menos negativo en la vacuola comparando
con el citoplasma (Fig. 2.9).
Fig. 2.9 Modelo para el funcionamiento y localizacin de bombas
electrognicas de protones (ATPasa, PP
i
asa-H
+
), bomba redox
transmembranal (NAD(P) oxidasa), canales inicos, y transporte catinico
y aninico a travs de la membrana plasmtica y tonoplasto
Mientras que se ha establecido la existencia de dos bombas de
protones del tonoplasto (ATPasa; PPiasa) y la H +-ATPasa en la
membrana plasmtica, todava es materia de controversia si esta
involucrado un segundo sistema de translocacin de protones a travs de
la membrana plasmtica desde el citoplasma al apoplasto en la
formacin y mantenimiento del electropotencial y del pH transmembranal
(Fig. 2.9). Este segundo sistema est ligado a una cadena redox con el
NAD(P)H como donador de electrones. Hay buena evidencia de la
intervencin de este sistema en el realzado crecimiento inducido por
auxinas, en la actividad antimicrobiana en la reduccin del Fe(III) en la
superficie de las membranas plasmticas radicales.
Sin embargo, hasta ahora principalmente el ferrocianuro u otros
compuestos artificiales tienen que ser usados como aceptores de
electrones para lograr una capacidad considerable de transporte
transmembranal de protones. Permanece cuestionable el rol de este
sistema redox para el gradiente transmembranal de protones y el
transporte inico hasta que se encuentre un aceptor de electrones
fisiolgico. En vista de la efectividad del ascorbato (radical libre del
ascrbico) como aceptor de electrones para la bomba redox
transmembranal y las relativamente altas concentraciones de ascorbato
en el apoplasto foliar, no se puede excluir un rol de este sistema en el
transporte inico y de otros solutos en la membrana plasmtica foliar.
Mas recientemente, se ha establecido la existencia de canales
inicos tambin en membranas de las clulas vegetales y de este
modo, los canales se incluyen en los modelos actuales de transporte
inico membranal (Fig. 2.8 y 2.9). Los canales inicos son nicos entre
las protenas transportadoras en su habilidad para regular vigilar el
flujo inico sujeto al ambiente fsico-qumico de la protena canal. Estos
canales permiten rpida penetracin pasiva (uniporte) de iones a travs
de la membrana. Los canales abiertos catalizan la penetracin de 106
a 108 iones por segundo que es por lo menos tres an cinco veces
mas rpido que el transporte inico mediado por carriers.
Sin embargo, los canales de iones estn cerrados la mayora del
tiempo, y su nmero por clula parece ser bastante pequeo. Por
ejemplo se asumen en la membrana plasmtica de clulas foliares
cerca de 200 canales K+ por clula. Hasta ahora, se han identificado
canales especficos para K+, Ca2+, H+ y Cl-, y se ha postulado un
canal para NO en el tonoplasto.
Fig. 2.9 Modelo para el funcionamiento y localizacin de bombas
electrognicas de protones (ATPasa, PP
i
asa-H
+
), bomba redox
transmembranal (NAD(P) oxidasa), canales inicos, y transporte catinico
y aninico a travs de la membrana plasmtica y tonoplasto
Hay muchas suposiciones acerca de la funcin de estos canales
inicos en las clulas vegetales. Ellos son importantes para la
osmorregulacin, por ejemplo en clulas guarda foliares y en los
movimientos foliares seismonsticos y nictinsticos, i.e., en procesos
donde se requiere el rpido transporte de solutos de bajo peso molecular
como K+ Cl- entre compartimentos celulares como una respuesta a
seales ambientales (Seccin 8.7). Los canales selectivos de Ca2+ en la
membrana plasmtica y tonoplasto que conducen al rpido incremento en
la concentracin del Ca2+ citoslico libre son considerados de clave
importancia en la transduccin de seales y funcionamiento del Ca2+
como mensajero secundario en el citoplasma al modular las actividades
enzimticas (Seccin 8.6.7).
Adems de estas funciones especficas de canales inicos, no es muy
claro su papel en la toma inica, por ejemplo radical. Para la toma de
cationes divalentes en general y de Ca2+ en particular, la apertura de los
canales facilita el rpido influjo al citoplasma de las clulas radicales Para
la toma de K+ se propone un canal rectificante de entrada el cual se abre
por la hiperpolarizacin de la membrana plasmtica y facilitara el influjo
de K+ en presencia de altas concentraciones externas (>1m K+). Otro
canal de alta conductancia en la membrana plasmtica de clulas
radicales sera permeable para cationes ambos monovalentes y
divalentes, abierto en la despolarizacin (i.e., cada en el potencial de
membrana) y permite el rpido influjo de cationes como el Ca2+ pero
facilita el rpido eflujo de K+ a lo largo del gradiente del potencial
electroqumico (canal de K+rectificante de salida) a bajas (<1m)
concentraciones externas de K+.
De este modo, los canales catinicos en la membrana plasmtica de
las clulas radicales presumiblemente juegan una parte importante en la
toma de cationes divalentes an a bajas concentraciones externas pero
para cationes monovalentes y el K+ en particular solo a altas
concentraciones.
Aunque los canales en membranas permiten flujos rpidos y pasivos
de solutos, las dimensiones de estos canales no son aptas para la
penetracin de macromolculas. No obstante, las clulas vegetales
tambin toman macromolculas como protenas (e.g., insulina)
partculas de ferritina (Seccin 8.4.5).
Ms probablemente, la endocitosis (pinocitosis) es el mecanismo
responsable en el cual las vesculas de la membrana plasmtica median la
penetracin. Interesantemente, la toma de insulina en clulas vegetales
va endocitosis requiere un acoplamiento de la protena con la vitamina
biotina.
Esta capacidad de toma de macromolculas refleja las propiedades
dinmicas de las estructuras membranales (Seccin 2.4.1). No debe
sobreestimarse la importancia de esta capacidad de toma en plantas, sin
embargo, ya que los poros en las paredes celulares limitan fuertemente la
penetracin de macromolculas (Seccin 2.2.1).
2.4.3 La cintica del transporte
Por lo general la toma inica por clulas y races vegetales tiene
caractersticas de cintica de saturacin. Esto concuerda con la
suposicin de control, como por ejemplo por el nmero de centros de
ligamiento inico (carriers, permeasas), por la capacidad de las
bombas de eflujo de protones, en la membrana plasmtica y tonoplasto
(Seccin 2.4.2). El trabajo pionero de Emmanuel Epstein y su grupo a
inicio de 1950 contribuyo fundamentalmente al mejor entendimiento de la
toma inica y su regulacin en plantas con respecto a la cintica del
transporte inico a travs de membranas de clulas vegetales
equivalente formalmente a la relacin entre un enzima y su substrato
usando trminos de enzimologa (Fig. 2.10). Al comparar un carrier con
una molcula enzimtica y el in al sustrato para la enzima, la tasa de
transporte de un in depende de los siguientes dos factores:

Vmax Un factor de capacidad que denota la tasa mxima de
transporte cuando se cargan todos los centros disponibles del carrier, es
decir, la tasa mxima de transporte.
Km La constante de Michaelis, equivalente a la concentracin del in
sustrato dada la mitad de la tasa mxima de transporte.
2.4.3 La cintica del transporte
Fig. 2.10 Tasa de toma de K
+
(v) en funcin de la concentracin externa de
KCl () K
2
SO
4
(); K
m
= 0.023 m). (Despus de Epstein, 1972)
Cuando el rango de concentracin es bajo, la toma frecuentemente es
bien descrita por la cintica de Michaelis-Menten, como se mostr en un
ejemplo en la Fig. 2.10 para la toma radical de potasio en cebada. Es
evidente de esta Figura que la isoterma de la toma de potasio es la misma
si la fuente de potasio es KCl o K2SO4.

Como veremos despus, sin embargo, cuando las concentraciones del
sustrato son mayores, el anin acompaante tiene efecto en la tasa de
toma del catin y viceversa. El valor Km refleja la afinidad de los centros del
carrier por el in, justo como en reacciones enzimticas donde este indica
la afinidad de la enzima por el sustrato.
Como primera aproximacin al rango de baja concentracin, la
cintica de Michaelis-Menten tambin puede emplearse para describir
tasas de toma del sulfato y fosfato. Sin embargo, como resumi Jensen
et al. (1987), y demostrado en unos pocos ejemplos citados abajo, es
muy limitada la aplicacin formal de la cintica de Michaelis-Menten por
razones tericas (Seccin 2.4.2) y frecuentemente no concuerda con
los resultados experimentales.
El concepto original de un mecanismo de transporte inico mediado
por un solo carrier (un sistema carrier para cada in) no describe
suficientemente la cintica de la toma cuando se probaron amplios
rangos de concentraciones. A concentraciones de K+ por encima de
1m, por ejemplo, la cintica difiere considerablemente de aquella a
menores concentraciones. La selectividad de los centros de ligamiento
es menor (el Na+ compite con el K+) y el anin acompaante tiene un
efecto sobre la tasa de toma (Seccin 2.5.5). Estas diferencias
conducen a la hiptesis de un sistema dual, el Sistema I con mayor
selectividad y el Sistema II con menor selectividad, localizados
cualquiera en la misma o en diferentes membranas (i.e., membrana
plasmtica, tonoplasto, respectivamente). Para mas detalles ver Epstein
(1972).
Las desviaciones en la isoterma de la toma, cuando se considera
para un amplio rango de concentracin, especialmente a altas
concentraciones externas fueron interpretadas como indicadores de
sistemas carriers multifsicos o como inhibicin alostrica
(retroregulacin negativa) de los centros del carrier a altas
concentraciones celulares. En vista de usualmente muy bajas
concentraciones en la solucin del suelo particularmente de fsforo y
potasio (Seccin 13.2.2), y de los resultados de estudios en toma inica
en el rango de baja concentracin (<10 ) se introdujo el termino
(Cmin) definiendo la concentracin a la cual la toma inica neta cesa
antes que se agoten completamente los iones (Fig. 2.11).
La concentracin Cmin es un factor importante en la toma inica
del suelo, debido a que es la menor concentracin a la cual las races
pueden extraer un in de la solucin del suelo (Seccin 13.2). Las
concentraciones Cmin difieren considerablemente entre especies
vegetales. Para fsforo, se encontr por ejemplo un valor de 0.12
en tomate, 0.04 en soya y 0.01 en ryegrass. Para potasio, los
valores correspondientes fueron 2 en maz y 1 en cebada. Las
concentraciones Cmin para nitrato pueden variar entre ms de 50 y
menos de 1 dependiendo no solo de la especie vegetal sino
tambin de las condiciones ambientales; para amonio las
concentraciones Cmin disminuyen desde 30 a 1.5 como la
temperatura de la zona radical aumente.
Fig. 2.11 Presentacin esquemtica de las relaciones entre la tasa de
toma (influjo neto = I) inica y su concentracin externa; C
min
= toma neta
cero (influjo = eflujo).
A fin de interpretar la cintica de la toma inica radical vegetal, al
usar la ecuacin de Michaelis-Menten no solo se introdujo el trmino
Cmin sino tambin el termino I para influjo el cual reemplaza velocidad
(v) (Fig. 2.11). Sin embargo, muy frecuentemente solo se determina la
toma neta inica que es resultante del influjo y eflujo. Particularmente a
bajas concentraciones externas el eflujo puede volverse similar en
magnitud al influjo y de este modo ser un componente importante al
determinar la toma neta como se muestra en la Tabla 2.10 para fsforo.

A una concentracin externa dada, el eflujo de fsforo as mismo es
5-8 veces mayor en races de plantas suficientes en fsforo comparando
con plantas deficientes en fsforo. De acuerdo con esto, las
concentraciones Cmin son de 0.34 en plantas suficientes en fsforo y
0.08 en plantas deficientes en fsforo.
Tabla 2.10
Efecto de las bajas concentraciones de fsforo en el influjo y eflujo
radical de fsforo en maz
a

Concentracin
suministrada de P
()
Flujo de P
(nmol P g
-1
peso fresco radical
min
-1
) Eflujo
(%) Influjo Eflujo
0.2
2.0
0.21
4.40
0.15
0.32
71
7
a
Elliott et al.(1984).
El eflujo de iones y otros solutos no solo es afectado por el
electropotencial transmembranal y la integridad de la membrana
plasmtica sino tambin por la concentracin y actividad de los respectivos
iones en el citoplasma. En arveja, por ejemplo, la alta toma neta de sulfato
en races deficientes en azufre cae cerca del 30% en 1 h debido a un
marcado aumento en el eflujo de sulfatos, a pesar de an un ligero
incremento en el influjo. Para nitrato y amonio tambin el componente
eflujo puede explicar la alta proporcin casi 40-50% de influjo
relacionado muy probablemente con las altas concentraciones de nitrato y
amonio en el citoplasma.
El rpido intercambio inico entre la solucin externa y el citoplasma se
refleja en el tiempo medio para el intercambio (t1/2) que para sulfato est
en el rango de 10-20 min. y para nitrato entre 4 y 107 min. Estas tasas de
intercambio con el pool citoplsmico son usualmente rdenes de magnitud
superiores que las tasas de intercambio inico en la vacuola (e.g.,
alrededor de 700h para nitrato). Debido a ambos las altas tasas de
intercambio y el pequeo volumen del compartimiento citoplsmico (~5%
del volumen celular total en clulas diferenciadas), el rol del eflujo en la
toma neta solo puede medirse en estudios a corto plazo, usualmente con
radioistopos (e.g., 13N; 32P). En vista de los actuales modelos sobre
estructura y funcionamiento de la membrana plasmtica (Fig. 2.9), las
relativamente altas tasas de eflujo inico pueden estar relacionadas con
cualquiera canales inicos transporte mediado por protones desde el
citoplasma al apoplasto por cotransporte (aniones) contratransporte
(cationes).
Estos parmetros de la cintica de la toma de iones tambin son
fuertemente afectados por el estado nutricional vegetal. Esto es cierto no
solo para Cmin sino tambin para Km y particularmente para Imax. Se da
un ejemplo en la Tabla 2.11 para fsforo. Con el creciente contenido de
fsforo en plantas, disminuyen ligeramente el Km y rpidamente el Imax,
indicando una retroregulacin efectiva.
Ya que en este experimento los valores Imax se basan en la toma neta,
no se puede evaluar el aporte del aumentado eflujo con las mayores
concentraciones internas de fsforo. Al menos para nitrato, sin embargo,
las mediciones del influjo indican claramente que adems del eflujo
contribuyen otros mecanismos para el descenso en la toma neta cuando
las concentraciones internas son altas. En races de cebada con crecientes
concentraciones internas de nitrato disminuyen ambos Imax y Km por un
factor de 45, indicando una retroregulacin efectiva del componente
influjo.
Las evaluaciones de los parmetros cinticos de la toma de nitrato se
complican por el hecho que obviamente hay dos sistemas de transporte y
toma localizados en la membrana plasmtica. Uno es constitutivo, con un
sistema de baja capacidad, y el otro es un sistema que es inducible por
nitratos, y tiene para el nitrato ambos una mayor afinidad (menor Km) y
una mayor capacidad de transporte (mayor Imax). Por consiguiente, ambos
Km y Imax son bastante diferentes en plantas no inducidas comparando
con plantas inducidas.
Los inhibidores de la sntesis proteica deprimen fuertemente la
formacin de este sistema de transporte inducible en el cual los grupos
arginina parecen jugar un rol esencial en el ligamiento transporte de
nitrato en ambos. Algunas de las implicaciones de la retroregulacin
para la toma de nutrientes minerales se discuten en la seccin 2.5.6.
En el rango de altas concentraciones se halla frecuentemente una
relacin lineal entre la concentracin externa (>1m) y la tasa de influjo
inico, como por ejemplo para rubidio y nitrato. Es bastante probable que
las relaciones lineales (tambin definidas inicialmente como Sistema II),
son reflejo del flujo pasivo de iones por canales inicos a travs de la
membrana plasmtica a lo largo del gradiente de concentracin
actividad inica. En vista de las usualmente bajas concentraciones inicas
en la solucin del suelo, la importancia ecolgica de estos mecanismos
que operan en rangos de alta concentracin para la nutricin mineral en
plantas cultivadas en suelo puede cuestionarse para potasio, pero no para
cationes divalentes (Seccin 2.4.2).
El influjo no energizado (pasivo) inico a travs de canales de la
membrana plasmtica juega ciertamente un rol importante en suelos
salinos (Seccin 16.6), en el transporte de elementos minerales en la
planta, especialmente en la carga del xilema en las races (Seccin 2.8) y
en la descarga del xilema, i.e., la toma en clulas a lo largo de la va y en
clulas foliares (Seccin 3.2).
Tabla 2.11
Efecto de las bajas concentraciones de fsforo en el influjo y eflujo de fsforo
en races de maz
a

Concentracin
suministrada de P
()
Contenido de P (% peso
seco)
I
max

(mol cm
-1
s
-1
x
10
-14
)
K
m

() Caulinar Radical
0.03
0.3
3.0
30.0
0.22
0.34
0.59
0.66
0.23
0.30
0.56
0.90
17.6
16.9
6.5
3.7
1.6
1.7
1.2
1.0
a
En base a Jungk et al. (1990).
La planta ajusta la concentracin y la actividad NR y NiR en
respuesta a diferentes seales: Abundacia de NO
3
- , luz ,
compuestos nitrogenados, CO2, metabolitos del carbono,
citoquininas

Regulacin de la Actividad NR y NiR
NO
3
-
+ 8H
+
+ 8e
-
NH
3
+
+ 2H
2
O + OH
-


NO
3
-
LUZ
azcares
Reguladores positivos
Inhibida por:
Productos de asimilacin del NH
4
+
(glutamina)

Regulacin de la Actividad NR y NiR
La Nitrato Reductasa es inducida por NO3-
NO3- seal primaria
Tambin responde a seales que ligan la reduccin del NO3- a la
fotosintesis, metabolismo de C y los ritmos diurnos
La Nitrato Reductasa es inducida por NO3-
Regulacin post-transcripcional de la NR
Un canal de aniones tambin puede ser el mecanismo para la salida de nitrato. La
direccin del flujo de aniones a travs de un canal est determinada por el gradiente
electroqumico del in. La regulacin de la actividad de un canal aninico en la
membrana plasmtica podra ser importante en determinar la concentracin de nitrato
en el citoplasma, dado que si el transporte activo se mantiene, la salida a travs del
canal disminuir rpidamente la concentracin de nitrato en el citoplasma. Un canal
abierto tiene una permeabilidad selectiva permitiendo que algunos iones fluyan
pasivamente en funcin del gradiente electroqumico a un gran ritmo (106- 108 iones
seg-1). Un simple canal de aniones abierto con un ritmo de salida de 107 iones seg-1
permitir la cada de la concentracin de nitrato citoplasmtico de 4 mol m-3 a un valor
de mmol m-3 (distribucin pasiva del nitrato) en 50 200 segundos.
Por otra parte, el transporte activo es requerido en las membranas plasmticas para
mantener la concentracin intracelular de nitrato. La fuerza protn motriz a travs de la
membrana plasmtica puede proveer la energa necesaria para el transporte de nitrato.
Se considera que el transporte de nitrato es un simporte con H+ (figura 3).
Las protenas de los STAAI, son de 507 a 509 aminocidos, con una masa molecular de
54 a 55 kD, incluyendo 12 regiones hidrofbicas (transmembranas). Ha sido mostrado
que el nivel de ARNm de estas protenas aumenta rpidamente en respuesta al
suministro de NO3- en plantas que crecan en condiciones con limitaciones de NO3-. El
incremento en el nivel de transcriptos est correlacionado con el incremento en el
ingreso de NO3-. Los genes involucrados en la adquisicin y reduccin del NO3- fueron
coordinadamente expresados bajo condiciones de induccin por NO3- . Por otra parte,
la abundancia de los transcriptos est regulada por un efecto feedback de las formas
reducidas del nitrgeno ms que por el nivel de nitrato. A nivel fisiolgico la inhibicin de
los STAAI en un bajo estado estacionario despus de alcanzar un pico de induccin ha
sido argumentado que es el resultado de efectos de la acumulacin de NO3- y/o los
productos de su asimilacin. Esta conclusin est basada en correlaciones entre la [
NO3-]en la clula y el ingreso de NO3-.Existen evidencias que el ingreso de [ NO3-] es
inhibido por el NH4+ celular y /o los aminocidos. Siendo regulado la absorcin de
nitrgeno por el ciclo de los aminocidos entre la raz , tallo y raz (Cooper and Clarkson,
1989) (Figura 4).
Absorcin de Nitrato por las Races
La nitrito reductasa es un polipptido monomrico de cerca de 60-63 kDa que
contiene un grupo prosttico sirohemo. En contraste a la nitrato reductasa que est
localizada en el citoplasma, la nitrito reductasa est localizada en los cloroplastos en
las hojas y en los proplastidios en races y otros tejidos no fotosintticos. En hojas
verdes, el donador de electrones es la ferredoxina reducida, generada en la luz por el
fotosistema I (Capitulo 5). En la oscuridad y particularmente en las races y otros
tejidos no fotosintticos una protena similar a la ferredoxina puede hacer esta funcin
y la energa para la produccin de equivalentes reductores es proporcionada por la
gliclisis.

A pesar de la separacin espacial de la nitrato reductasa y la nitrito reductasa (Fig.
8.2.), por lo general, el nitrito raramente se acumula en plantas intactas bajo
condiciones normales. Los ndulos radicales de leguminosas son obviamente
excepciones a este control en la sincronizacin de la actividad de ambas enzimas
(Seccin 7.4.6). Ciertos herbicidas como el diuron inhiben fuerte y selectivamente la
nitrito reductasa en las hojas y correspondientemente incrementan el contenido de
nitritos en el tejido.

Reduccin y Asimilacin del Nitrato
Reduccin y Asimilacin del Nitrato
Fig. 8.2 Representacin esquemtica de la secuencia de asimilacin del
nitrato en clulas foliares. (En base a Beevers & Hageman, 1983 y Warner &
Kleinhofs, 1992)
En plantas C
4
, las clulas del mesfilo y de la vaina del haz difieren en sus funciones
no solo en la asimilacin de CO
2
, sino tambin en la asimilacin de nitrato. Ambas, la
nitrato reductasa y la nitrito reductasa estn localizadas en las clulas del mesfilo y
estn ausentes en las clulas de la vaina del haz.

Esta divisin de labor en plantas C
4
, en que las clulas del mesfilo utilizan la
energa de la luz para la reduccin y asimilacin del nitrato las clulas de la vaina del
haz para la reduccin del CO
2
, es mas probablemente la causa de la mayor eficiencia
en el uso del nitrgeno fotosinttico (NUE) en las C
4
comparando con las plantas C
3
.

Debido al particular mecanismo de concentracin de CO
2
en las clulas de la vaina
del haz, se requiere menos concentracin de RuBP carboxilasa (Rubisco) en las
plantas C
4
que en las plantas C
3
. En plantas C
3
el nitrgeno en la Rubisco explica el
20-30% del nitrgeno total foliar comparando con el menos del 10% en plantas C
4
,
ms el 2-5% nitrgeno por la PEP carboxilasa en plantas C
4
.
Reduccin y Asimilacin del Nitrato
La nitrato reductasa es una enzima que es regulada mediante varios modos diferentes
ejercidos en diferentes niveles, es decir, en la sntesis y degradacin de la enzima, la
inactivacin reversible, y en la concentracin del sustrato y efectores. La enzima tiene
una vida media de solo unas pocas horas, y en plantas que no reciben nitrato esta
simplemente ausente. La nitrato reductasa puede ser inducida en pocas horas por la
adicin de nitrato y ser suprimida por ciertos aminocidos.

Como se espera la actividad nitrato reductasa es muy baja en plantas deficientes de
molibdeno (Tabla 8.1). La incubacin de segmentos foliares deficientes en soluciones
que contienen molibdeno incrementa marcadamente la actividad de la enzima. La
enzima puede an ser reactivada in vitro si la apoenzima sin molibdeno es tratada con
complejos que contengan molibdeno. Las notables diferencias entre las actividades
nitrato reductasa en plantas deficientes y suficientes en molibdeno y la rpida
respuesta al suministro de molibdeno pueden ser usadas para determinar el estado
nutricional del molibdeno en las plantas (ver tambin Capitulo 12).
Reduccin y Asimilacin del Nitrato
Tabla 8.1
Efectos del pretratamiento con molibdeno en la actividad nitrato reductasa en
segmentos foliares de trigo
a

Suministro de molibdeno
durante el crecimiento
vegetal
(g por planta)
Pretratamiento de
los segmentos
foliares
(g Mo l
-1
)
Actividad nitrato reductasa
(mol NO

g
-1
peso fresco)
despus de
24 h 70 h
0.005
0.005
5.0
5.0
0
100
0
100
0.2
2.8
-
-
0.3
4.2
8.0
8.2
a
A partir de Randall (1969).
La alta tasa de recambio de la nitrato reductasa y la notable modulacin de su
actividad por efectores como la luz, nitrato, fitohormonas, ha iniciado muchos
estudios usando a est enzima como un modelo para la regulacin gnica por
factores ambientales en general (Seccin 5.6.3) y por el nitrato en particular. El bien
conocido incremento en la actividad nitrato reductasa por las citoquininas (CYT) es
expresado al nivel de mRNA de nitrato reductasa que se incrementa por las CYT pero
se suprime por el ABA. El nitrato no solo induce la nitrato reductasa sino tambin la
nitrito reductasa al alterar la expresin gnica principalmente al realzar la transcripcin
de los respectivos genes. La disminucin en la eficiencia del uso de transcriptos de
nitrato reductasa para la produccin de la protena nitrato reductasa es obviamente el
principal factor responsable de la mucho menor actividad de la nitrato reductasa en
hojas viejas comparando con las jvenes (Fig. 8.5). La disminucin en la importacin
de CYT hacia las hojas ms viejas (Seccin 5.6.5) puede estar involucrada en esta
declinacin en la transcripcin dependiente de la edad
Reduccin y Asimilacin del Nitrato
Reduccin y Asimilacin del Nitrato
Adems de su funcin en la induccin de la sntesis de nitrato reductasa, el
nitrato, junto con la luz, puede actuar como una seal que altera el
particionamiento del flujo del carbono fotosinttico en las hojas (Fig. 8.3). Para la
asimilacin del amonaco hay una alta demanda de esqueletos de carbono y se
puede asumir que se presenta competencia entre la sntesis de sacarosa y la
sntesis de aminocidos como se ha mostrado en hojas de tomate. El flujo de
carbono entre ambas vas parece estar regulada va protenquinasas citoslicas
que modulan la actividad de dos enzimas clave, la sacarosa-P sintasa y la PEP
carboxilasa, mediante la fosforilacin.

El nitrato por si mismo funciona como una metabolito seal (Fig. 8.3). Sin
embargo, ambas enzimas responden a la fosforilacin en un modo inverso, la
sacarosa-P sintasa es inactivada y la PEP carboxilasa activada, y por lo tanto hay
un particionamiento de fotosintatos desde la sntesis preferencial de sacarosa
haca la sntesis de aminocidos. Se requiere una alta actividad de PEP
carboxilasa para reabastecer los cidos tricarboxlicos proporcionados por el TCA
para la asimilacin del amonaco, de acuerdo al principio mostrado para la
asimilacin de cationes excesivos tomados radicalmente (Seccin 2.5.4).
Reduccin y Asimilacin del Nitrato
Fig. 8.3 Modelo del NO y luz como seales para la fosforilacin proteica y
desactivacin de sacarosa-P sintasa y activacin de PEP carboxilasa. (Modificado
de Champigny & Foyer, 1992; reimpreso con permiso de la American Society of
Plant Physiologists.)
Reduccin y Asimilacin del Nitrato
Localizacin en Races y Vstagos. En la mayora de especies vegetales ambos
races y vstagos son capaces de la reduccin del nitrato, y las races pueden
reducir entre un 5 y 95% del nitrato tomado. La proporcin de la reduccin llevada a
cabo en las races y vstagos depende de varios factores, que incluyen el nivel del
suministro de nitrato, de la especie vegetal, de la edad vegetal, y tiene importantes
consecuencias para la nutricin mineral y la economa del carbono vegetal. En
general, cuando el suministro externo de nitrato es bajo, una alta proporcin del
nitrato es reducida en las races. Con un suministro creciente de nitrato, la
capacidad para la reduccin del nitrato en las races se vuelve un factor limitante y
una proporcin creciente del nitrgeno total es translocada a los vstagos en la
forma de nitrato (Fig. 8.4).
Existen notables diferencias entre especies vegetales en ambas, la proporcin de
nitrato reducido en las races y la respuesta a crecientes concentraciones externas
de nitrato. Por ejemplo, a un suministro de 1 m nitrato la proporcin del nitrgeno
en la savia del xilema como nitrato fue de 15% en trbol blanco (Trifolium repens),
33% en arveja (Pisum sativum) y 59% en Xanthium stumarium, y a 10 m nitrato
estas proporciones se incrementaron a 66%, 41% y 69%, respectivamente. Sin
embargo, como se discuti en la Seccin 3.4.4 el reciclaje del nitrgeno reducido
puede ser un componente importante del nitrgeno reducido encontrado en la savia
del xilema y de esta manera, el porcentaje del N total como nitrato en la savia del
xilema no es un parmetro muy fiable sobre la proporcin de la reduccin del nitrato
en la raz. No obstante, hay un patrn general entre especies vegetales en el
particionamiento de la reduccin y asimilacin del nitrato entre las races y
vstagos.
Reduccin y Asimilacin del Nitrato
Localizacin en Races y Vstagos. En la mayora de especies vegetales ambos
races y vstagos son capaces de la reduccin del nitrato, y las races pueden
reducir entre un 5 y 95% del nitrato tomado. La proporcin de la reduccin llevada a
cabo en las races y vstagos depende de varios factores, que incluyen el nivel del
suministro de nitrato, de la especie vegetal, de la edad vegetal, y tiene importantes
consecuencias para la nutricin mineral y la economa del carbono vegetal. En
general, cuando el suministro externo de nitrato es bajo, una alta proporcin del
nitrato es reducida en las races. Con un suministro creciente de nitrato, la
capacidad para la reduccin del nitrato en las races se vuelve un factor limitante y
una proporcin creciente del nitrgeno total es translocada a los vstagos en la
forma de nitrato (Fig. 8.4).
Reduccin y Asimilacin del Nitrato
Existen notables diferencias entre especies vegetales en ambas, la proporcin de
nitrato reducido en las races y la respuesta a crecientes concentraciones externas
de nitrato. Por ejemplo, a un suministro de 1 m nitrato la proporcin del nitrgeno
en la savia del xilema como nitrato fue de 15% en trbol blanco (Trifolium repens),
33% en arveja (Pisum sativum) y 59% en Xanthium stumarium, y a 10 m nitrato
estas proporciones se incrementaron a 66%, 41% y 69%, respectivamente. Sin
embargo, como se discuti en la Seccin 3.4.4 el reciclaje del nitrgeno reducido
puede ser un componente importante del nitrgeno reducido encontrado en la savia
del xilema y de esta manera, el porcentaje del N total como nitrato en la savia del
xilema no es un parmetro muy fiable sobre la proporcin de la reduccin del nitrato
en la raz. No obstante, hay un patrn general entre especies vegetales en el
particionamiento de la reduccin y asimilacin del nitrato entre las races y
vstagos.
Absorcin de Nitrato por las Races
Absorcin de Nitrato por las Races
Absorcin del nitrato por las races
La absorcin de NO3- est sujeta a una regulacin positiva o de induccin y negativa.
La ltima parece depender del nivel de N de la planta. Ha sido sugerido que el ciclo de
los aminocidos entre los tallos y las races sirve para proveer la informacin
necesaria respecto del nivel de N en la planta, que le permite a las races regular la
absorcin de N (Cooper and Clarkson, 1989).
El transporte de NO3- al citoplasma a travs del plasmalema es un proceso
termodinmicamente desfavorable, tanto en trminos de gradiente de potencial
elctrico (interior negativo) y un gradiente de potencial qumico [NO3-]ext < [NO3-]cit.
Lo ltimo est basado en estimaciones de la [NO3-]cit las que varan entre 5-30 mM,
mientras que los valores de [NO3-] del suelo varan entre 0.1 y 1.0 mM (Henriksen
and Spanswick, 1993).
Transportadores
En las plantas superiores la absorcin est mediada por al
menos 3 sistemas transportadores distintos que co-existen en
las clulas radiculares.

2 clases:
alta (HATS)
baja afinidad (LATS)
La absorcin del NO3- en las plantas
terrestres est mediado al menos por
tres sistemas de transporte que
coexisten en las membranas
plasmticas de las clulas radicales.
Estos sistemas pueden ser divididos
en dos clases, referidos como
sistemas de transporte de alta (STAA)
y baja afinidad (STBA) por el NO3-
(baja y alta Km, respectivamente). Por
otra parte, los STAA pueden ser
constitutivos (STAAC) o inducibles
(STAAI). Los STBA estn involucrados
en la absorcin de altas
concentraciones de NO3- (> 0.2mM),
mientras que los STAAI y los STAAC
estn saturados con una baja
concentracin de NO3- externa
(aproximadamente 100 M) (Figura 2).
En races de cebada, la actividad de
los STBA es expresada sin una
exposicin previa al NO3- y este
sistema de transporte estara regulado
negativamente por el nitrgeno
acumulado en la planta (Vidmar et al.
2000).
El movimiento pasivo del nitrato a
travs de las membranas plasmticas
es probablemente va canales inicos;
un canal permeable al nitrato el cual
permite el flujo de aniones hacia la
clula ha sido identificado en la
membrana plasmtica de protoplastos
de trigo. Tal canal podra tener un rol
en el sistema de absorcin
constitutivo. Aparentemente aunque la
absorcin pasiva slo produzca
concentraciones micromolares de
nitrato en el citoplasma, stas seran
suficientes para inducir el transporte y
asimilacin del nitrato, sin la
necesidad de un receptor de nitrato
fuera de la clula (figura 3) (Miller and
Smith, 1996).
CHATS (Constitutive High Affinity transport System)
Se caracterizan por su bajos valores de Km (6-20M) y de
Vmax (0.3-0.82 mol g. h-1)
Aunque son constitutivos su actividad aumenta hasta 3 veces
en presencia de NO3-

IHATS (Inducible High Affinity Transport System)
Km (20-100M) y de Vmax (3-8 mol g. h-1)
se inducen dentro de las horas o das posteriores a la exposicin
con NO3-
Su actividad corresponde al mecanismo 1 para la de absorcin de
NO3- de Epstein
LATS (Low Affinity Transport System)
Constitutivos
Contribuyen a la absorcin a [ ] > 1 mM
Pueden presentar saturacin a concentraciones tan altas como 50
mM.
Su actividad corresponde al mecanismo 2 de los estudios de
Epstein
Transporte activo a pesar de su respuesta lineal a la concentracin.

Regulacin de la absorcin de NO3-
Reguladores positivos: NO3-: Azcares

Reguladores Negativos: NH4+: Aminocidos