Yodo Ver

1
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

EVALUACIN DE LA EFICACIA DEL DESINFECTANTE LARK
SANITIZER EMPLEADO EN LAS AREAS DE ELABORACIN DE
ENVASES Y TAPAS PLSTICAS EN ECSI S.A.

ANDREA DEL PILAR MORALES CHAPARRO

TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar por el titulo de microbiloga Industrial

FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
Bogot D.C
Enero de 2007

2

NOTA DE ADVERTENCIA

La universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por
sus alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velara por que no se
publique nada contrario al dogma y a la moral catlica y por que la tesis
no contenga ataques personales contra persona alguna, antes bien se
vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y justicia
Articulo 23 de la Resolucin N13 de julio de 1946.

3



ngela Umaa Muoz Mphill Lus David Gmez Mndez. M.Sc.
Decana Acadmica Director de las carreras de Microbiologa

4


APROBADO

Dra. Janneth Arias
Directora

Dra. Ana Karina Carrascal Dra. Paola Roja
Jurado Jurado

5
AGRADECIMIENTOS

Agradezco a Dios por permitirme desarrollar este trabajo y culminar otra
etapa de mi vida.

A ECSI S.A. por la oportunidad de desarrollar este proyecto y por permitirme
ser parte de su organizacin.

A la Dra. Rosa Edith Useche. Gerente de Calidad ECSI S.A. y Codirectora de
este proyecto por su paciencia, confianza, orientacin y valiosas enseanzas.

A la Dra. Janeth Arias. Docente de la Pontificia Universidad Javeriana y
Directora de Tesis, por su respaldo, soporte y apoyo al desarrollar el proyecto
de grado.

A la Dra. Paola Rojas. Microbiloga Industrial Flexo Spring S.A. por su
constante colaboracin .

6
DEDICATORIA

Dedico este trabajo a mis padres por su esfuerzo, apoyo y respaldo
incondicional en todas las decisiones de mi vida , a mi hermano por su
cario y confianza que me permitieron cumplir con esta meta.

7
RESUMEN

En el presente trabajo se busc evaluar el desinfectante Lark Sanitizer
usado en la desinfeccin de las superficies de las reas de produccin de
envases y tapas en ECSI S.A.

El mtodo utilizado fue el de siembra en estras, con el cual se logr calcular
el porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer a base de
Biguanidas, ante 5 microorganismos con propiedades y caractersticas
diferentes: S. aureus ATCC 25923, E. coli ATCC 25922, C. albicans ATCC
18804, B.subtillis ATCC 9372 y A. niger ATCC 16404.
Se determin la eficacia de tres concentraciones, a la mitad, a la
recomendada, y al doble de la sugerida por la casa comercial, adems se
conjugaron con tres tiempos diferentes 2-5 y 10 minutos.

De acuerdo con los resultados, se concluy que el desinfectante Lark
Sanitizer es efectivo a una concentracin de 1% por un tiempo de 5
minutos para S. aureus , E. coli , C. albicans y B.subtillis sin embargo
no tuvo ninguna accin inhibitoria contra A. niger.

8
TABLA DE CONTENIDO
Pg.
1. INTRODUCCIN 1
2. MARCO TEORICO 3
2.1 DESCRIPCIN DE LA COMPAA 3
2.1.1 Resea histrica de la empresa 3
2.1.2 Presentacin de la empresa 3
2.1.3 Misin 5
2.1.4 Visin 6
2.1.5 Poltica de calidad 6
2.2 ENVASES Y EMPAQUES DE PLSTICO 7
2.2.1 Plsticos 7
2.2.2 Historia de los Plsticos 7
2.2.3 Tipos de Plsticos 9
2.2.3.1 Termoplsticos 9
2.2.3.2 Termoestables 9
2.2.3.3 Elastmeros 10
2.2.4 Plsticos ms usados en la elaboracin de envases 11
2.2.5 Mtodos de transformacin 12
2.2.5.1 Reaccin de polimerizacin 12
2.2.5.2 Etapas de la polimerizacin en cadena 13
2.2.6 Procesado de materiales plsticos 14
2.2.6.1 Moldeo por Inyeccin 14
2.2.6.2 Moldeo por Soplado 15
2.2.6.3 Moldeo por Compresin 16
2.2.7 Funcin de los empaques 16
2.2.7.1 Funcin de contener 16
2.2.7.2 Funcin de proteger 17
2.2.7.3 Funcin de informar 17
2.3 TIPOS DE MICROORGANISMOS CONTAMINANTES 17
2.3.1 Los mohos 17
2.3.1.1 Aspergillus niger 18
2.3.2 Las levaduras 18
2.3.2.1 Candida albicans 19
2.3.3 Las bacterias 19
2.3.3.1 Escherichia coli 20
2.3.3.2 Staphylococcus aureus 20
2.3.3.3 Bacillus subtillis 21
2.4 DINAMICA DE CRECIMIENTO 22
2.4.1 Fase de retraso o de crecimiento bajo 22
2.4.2 Fase de arranque 22
2.4.3 Fase de crecimiento logartmico 22
2.4.4 Fase de crecimiento estacionario 23
2.4.5 Fase de muerte acelerada 23
9
2.4.6 Fase de muerte reducida 23
2.5 CINETICA DE MUERTE MICROBIANA 24
2.6 CONDICIONES QUE INFLUYEN EN LA ACCIN
ANTIMICROBIANA 25
2.6.1 Agua 25
2.6.2 Temperatura 26
2.6.3 pH 26
2.6.4 Formulacin 26
2.6.5 Numero de microorganismos 26
2.6.6 Naturaleza del organismo 27
2.6.7 Estado fisiolgico de los microorganismos 27
2.6.8 Tiempo 27
2.7 CARACTERISTICAS DE LOS DESINFECTANTES 27
2.7.1 Requisitos generales 27
2.7.2 Grupos de desinfectantes 29
2.7.2.1 Halgenos y sus compuestos 29
2.7.2.1.1 Cloro 29
2.7.2.1.2 Yodo 30
2.7.2.1.3 Bromo 31
2.7.2.1.4 Fluor 32
2.7.2.2 Productos superficie activos 32
2.7.2.2.1 Compuestos de amonio cuaternario 32
2.7.2.3 Desinfectantes cidos 33
2.7.2.4 Biguanidas 34
2.7.2.4.1 Clorhidrato de polihexametilenbiguanida 34
2.7.2.4.1.1 Nombre comn 34
2.7.2.4.1.2 Formula 35
2.7.2.4.1.3 Datos Fsicos 35
2.7.2.4.1.4 Espectro de actividad 35
2.7.2.4.1.5 Toxicidad 35
2.7.2.4.1.6 Usos 35
2.7.3 Modo de accin antimicrobiana 36
2.7.3.1 Compuestos clorados 37
2.7.3.2 Compuestos yodados 37
2.7.3.3 Compuestos de amonio cuaternario 38
2.7.3.4 Desinfectantes cidos 38
2.7.3.5 Desinfectantes a base de biguaninas 38
2.7.4 Desinfeccin de superficies 39
2.8 CONTROL DEL EFECTO DESINFECTANTE 40
2.8.1 Mtodos de evaluacin de desinfectantes 40
2.8.1.1 Mtodo del coeficiente fenolico 40
2.8.1.2 Tcnica de la dilucin en tubo 41
2.8.1.3 Tcnica placa de agar 41
2.8.1.4 Mtodo de siembra por estras 42

10
3. JUSTIFICACIN 43
4. MATERIALES Y METODOS 44
4.1 Formulacin del problema 44
4.1.1 Poblacin universo 44
4.1.2 Muestreo 44
4.1.3 Variables 44
4.1.3.1 Variable dependiente 44
4.1.3.2 Variable independiente 44
4.1.4 Mtodo de muestreo 44
4.1.5 Anlisis del porcentaje de inhibicin del desinfectante
Lark Sanitizer 45
4.1.6 Hiptesis de estudio 45
4.1.7 Anlisis estadstico de resultados 45
5. OBJETIVOS 46
5.1 Objetivo general 46
5.2 Objetivo especifico 46
6. METODOLOGA 47
6.1 Muestreo 47
6.2 Obtencin de las cepas 47
6.3 Obtencin de los medios de cultivo 47
6.4 Recuperacin de microorganismos liofilizados 48
6.5 Preparacin de la dilucin del desinfectante 50
6.6 Preparacin del tubo #2 del patrn de Mac Farland 51
6.7 Preparacin de la emulsin de bacterias, hongos y
levaduras 51
6.8 Evaluacin del desinfectante Lark Sanitizer 52
6.9 Lectura e interpretacin 52
6.10 Anlisis estadsticos 53
7. RESULTADOS 54
7.1 Porcentajes de inhibicin 54
7.1.1 Staphylococcus aureus 54
7.1.2 Escherichia coli 54
7.1.3 Bacillus subtillis 56
7.1.4 Candida albicans 57
7.1.5 Aspergillus niger 58
7.2 Analisis estadistico 59
8. DISCUSIN 77
11
9. CONCLUSIONES 83
10. RECOMENDACIONES 84
11. REFERENCIAS 85
ANEXOS 88

12
INDICE DE TABLAS

Pagina

Tabla 1. Plsticos ms usados en la elaboracin de envases 11
Tabla 2. Ventajas y desventajas del Cloro como desinfectante 30
Tabla 3. Ventajas y desventajas del Yodo como desinfectante 31
Tabla 4. Ventajas y desventajas de Amonio cuaternario
como desinfectante 33
Tabla 5. Ventajas y desventajas de cidos como desinfectantes 33
Tabla 6. Ventajas y desventajas de PHMB como desinfectante 36
Tabla 7. Efectividad de desinfectantes comunes 39
Tabla 8. Porcentaje de inhibicin para S. aureus 55
Tabla 9. Porcentaje de inhibicin para E.coli 56
Tabla 10. Porcentaje de inhibicin para B. subtillis 57
Tabla 11. Porcentaje de inhibicin para C. albicans 58
Tabla 12. Porcentaje de inhibicin para A. niger 59
Tabla 13. Estadsticos descriptivos y T student para S. aureus con 2 min
De contacto con el desinfectante. 60
Tabla 16. Estadsticos descriptivos y T student para E.coli con 2 min
Tabla 17. Estadsticos descriptivos y T student para E. coli con 5 min
Tabla 18. Estadsticos descriptivos y T student para E. coli con 10 min
Tabla 19. Estadsticos descriptivos y T student para B subtillis con 2 min
Tabla 20. Estadsticos descriptivos y T student para B.subtillis con 5 min
Tabla 21. Estadsticos descriptivos y T student para B. subtillis con 10 min
Tabla 22. Estadsticos descriptivos y T student para C. albicans con 2 min
Tabla 25. Estadsticos descriptivos y T student para A.niger con 2-5-10 min

13
INDICE DE FIGURAS
Pagina

Figura 1. Planta de inyeccin y soplado ECSI S.A. 5
Figura 2. Envase soplado por ECSI S.A. 15
Figura 3. Microorganismo vs tiempo de exposicin al agente 24
Figura 4. Aislamiento de A. niger 48
Figura 5. Aislamiento de C.albicans 49
Figura 6. Aislamiento de S. aureus 49
Figura 7. Aislamiento de E. coli 50
Figura 8. Aislamiento de B. subtillis 50

14

INDICE DE GRAFICAS
Pagina

Grafica 1. Porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer ante
S. aureus 63
E. coli 67
B. subtillis 71
C.albicans 74
A. Niger 76

15
INDICE DE ANEXOS
Pagina

Anexo A
Figura 9. Siembra en estra para S. aureus 88
Figura 10. Siembra en estra para E.coli 88
Figura 11. Siembra en estra para B. subtillis 89
Figura 12. Siembra en estra para C. albicans 89
Figura 13. Siembra en estra para A. niger 90
Anexo B Composicin de los medios de cultivo usados 91
Anexo C Ficha tcnica del desinfectante Lark Sanitizer

16
1. INTRODUCCIN

El mantenimiento de unas condiciones adecuadas y seguras en la
manipulacin industrial de alimentos exige la implementacin de mecanismos
que aseguren la higiene total de superficies, equipos, manos y utensilios de
trabajo. La razn de ello es que las impurezas y suciedades se fijan de
manera compleja a las superficies. Por norma general pueden estar
encerradas mecnicamente en poros, hendiduras y otras irregularidades,
eliminarlas o neutralizarlas siguiendo un Programa de medidas de Limpieza y
Desinfeccin teniendo en cuenta que es un flujo constante resulta
fundamental para prevenir contaminaciones y por lo tanto el riesgo de
infecciones alimentaras. (WILDBRETT,G.2000)

El pblico consumidor espera disponer de alimentos exentos de
microorganismos patgenos y toxinas con una capacidad de conservacin
especfica y el fabricante espera que su producto se mantenga en el
mercado, por esta razn para eliminar patgenos o elementos contaminantes
de superficies, instalaciones o manos no basta con aplicar mtodos de
limpieza convencionales por el contrario, se necesita implementar algn
sistema capaz de vencer las fuerzas de unin electrostticas o fisicoqumicas
que se dan entre las impurezas y las superficies. (WILDBRETT,G.2000)

Hoy en da existen soluciones al alcance para asegurar que la limpieza y
desinfeccin se efecte correctamente en el ambiente industrial buscando
eficiencia, eficacia y seguridad , que en las proporciones adecuadas de
agua, producto qumico, tiempo, temperatura y esfuerzo mecnico brinden
seguridad y calidad. De esta manera, con la disposicin apropiada de estos
agentes y teniendo en cuenta los factores que lo afectan se puede lograr la
17
idealizada Seguridad alimentara como objetivo comn de industriales y
consumidores.

18
2. MARCO TEORICO

2.1 DESCRIPCION DE LA COMPAA
Razn Social
ECSI S.A.
Empresa Colombiana de Soplado e Inyeccin

2.1.1 Resea histrica de la empresa
Hace ms de 30 aos el seor Gustavo Aponte junto con su esposa Maria
Luisa fundaron una pequea empresa familiar, en la cual pusieron todo su
empuje, su dedicacin y cario, tuvieron la idea de reciclar envases de aceite
para envasar grasa antes empacada en cartn con varios inconvenientes,
logrando un empaque de mejores caractersticas cuya evolucin se dara con
el tiempo. (Manual de Calidad ECSI S.A., 2004)

Con la ayuda de sus empleados y mucho esfuerzo fueron ganando la
confianza de sus clientes hasta lograr hoy un conjunto importante de
compaas dedicadas a la produccin de tapas, etiquetas, hojalata y
envases: Flexo Spring S.A., Incoltapas S.A, Inversiones AGA S.A y ECSI S.A
la cual fue fundada en 1992 y su funcin primordial es la produccin y
comercializacin de artculos de plstico. (Manual de Calidad ECSI S.A., 2004)

2.1.2 Presentacin de la empresa
ECSI S.A. fue fundada el 21 de Diciembre de 1992 con la filosofa de ser
lideres en el mercado fundamentados en la calidad y el servicio al cliente
mediante la produccin y comercializacin de artculos de plstico.
ECSI S.A. procesa alrededor de 5500 a 6000 toneladas / ao.
Genera alrededor de 400 empleos directos de los cuales 70% son mujeres y
30% hombres.
19
Directivos 5
Administrativos 35
Tcnicos 52
Operativos 318

ECSI S.A. cuenta con una avanzada tecnologa de transformacin de
plstico. En la lnea de Inyeccin se labora con 31 mquinas y tiene una
capacidad mnima de produccin de 0.5 gramos y mximo 4.8 Kilogramos.
La lnea de soplado cuenta con 26 mquinas y tiene una capacidad mnima
de produccin de 80 centmetros cbicos y mxima de 50 Litros. (Ver figura
1). (Manual de Calidad ECSI S.A., 2004)

ECSI S.A. vende productos en Colombia, Centroamrica y Sudamrica.
Exporta principalmente a: El Salvador, Panam, Republica Dominicana,
Costa Rica y Venezuela. Es proveedor de grandes empresas del sector
alimenticio, petrlero, productos de aseo, qumicos y comerciales.

Los productos principales son:

Envases Plsticos
Tapas Plsticas
Canastas
Cuetes
Bidones
(Manual de Calidad ECSI S.A., 2004)

ECSI S.A. es miembro de ICONTEC, ANDI, Cmara de comercio de Bogota
y Cmara de comercio de Centroamrica y ha sido certificada por:

ICONTEC NTC ISO 9002/ 1994
20
NTC ISO 9001/2000
PIRA INT. Shell Group world wides Basis
QUAKER Quaker Oats Corp.
(Manual de Calidad ECSI S.A., 2004)

FIGURA 1. Planta de Inyeccin y soplado ECSI S.A.

2.1.3 Misin
Nuestra empresa tiene como misin, la produccin y comercializacin de
artculos plsticos con el fin de satisfacer las necesidades de nuestros
clientes. Para esto combinamos el mejor talento humano con la ms
avanzada tecnologa. Esto nos lleva a estar en los primeros lugares del
mercado nacional y ser reconocidos en el mercado internacional. Nuestro
ms importante patrimonio es la calidad de nuestra gente y nuestra mayor
preocupacin el servicio, la atencin y el aporte que hagamos a nuestros
clientes, de esta forma estamos contribuyendo al desarrollo econmico e
21
industrial de nuestro pas y as mismo al progreso y mejoramiento de nuestra
empresa y del nivel de vida de nuestra gente.

2.1.4 Visin
ECSI S.A. ser una empresa lder: en servicio, produccin y
comercializacin de artculos plsticos, reconocida en el mercado nacional e
internacional. La calidad de nuestros productos dar completa satisfaccin a
nuestros clientes y ser el resultado de personas capaces, de tecnologa
avanzada, de procesos altamente productivos y de la oportunidad y calidad
de nuestros servicios. Estaremos colaborando en la investigacin y desarrollo
de materiales y procesos que contribuyan a la conservacin del medio
ambiente. Nuestro gran reto y desafi continuara siendo la calidad y
lograremos la excelencia en todos los aspectos de nuestra organizacin.

2.1.5 Poltica de Calidad
Ser lder en el mercado nacional e internacional a travs del sistema de
Calidad orientado por la Gerencia de ECSI S.A., fundamentado en las
normas ISO 9000, mediante el cual se asegure el cumplimiento de requisitos
establecidos y el mejoramiento del Sistema de Calidad para lograr la
satisfaccin de nuestros clientes.
Soportado por un equipo humano capacitado y motivado, por maquina de
tecnologa moderna y procesos autocontrolados por una organizacin
gil, moderna, liviana, por un manejo del recurso econmico que asegura la
permanencia y crecimiento de ECSI S.A., en el mercado.

22
2.2 ENVASES Y EMPAQUES DE PLASTICO

2.2.1 Plsticos
La palabra plstico debe entenderse como un termino general, que describe
una gran variedad de sustancias, las cuales se distinguen entre si por su
estructura, propiedades y composicin. (SENA, 1995)
Los plsticos tienen algo en comn: se originan del entrecruzamiento o
encadenamiento de molculas muy largas, denominadas macromolculas.
A menudo constan de ms de 100 unidades estructurales, una detrs de
otra. Como sus macromolculas estn conformadas por un gran nmero de
unidades estructurales sencillas llamadas monmeros ( mono:uno, meros:
parte), los plsticos reciben tambin el nombre de polmeros (poli: muchos).
La sustancia de partida de los polmeros se llama monmero, y es posible
producir diversos polmeros a partir e la misma sustancia, modificando el
proceso de produccin o mediante mezclas. (SENA, 1995)
Los plsticos son materiales susceptibles de moldearse mediante procesos
trmicos, a altas temperaturas y presiones. Presentan una serie de
propiedades fsicas y qumicas muy tiles en la produccin de envases y
embalajes de mltiples productos, ya sea lquidos, slidos o gaseosos.
(Vidales , 1995).

2.2.2 Historia de los Plsticos
Aproximadamente a mediados del siglo. XIX se realizaron con xito los
primeros ensayos para modificar la celulosa y el caucho natural de tal
manera que tuvieran propiedades completamente nuevas, las de la goma, de
la fibra vulcanizada y del celuloide. Hasta final de siglo se desarrollaron otras
modificaciones de los productos naturales: la galalita o imitacin del cuerno a
partir de la casena, la albmina de la leche, el celofn y el acetato de
celulosa pronto indujeron a la utilizacin de estos plsticos, ahora llamados
productos naturales modificados. Muchas de las maquinas y procesos de
23
transformacin , que utilizamos actualmente, arrancan de aquella poca.
(Vidales , 1995).

Tambin en este siglo se observ en diversos laboratorios que, por accin de
la luz o del calor, muchas sustancias simples, gaseosas o lquidas, se
convertan en compuestos viscosos e incluso slidos. No fue hasta despus
de cerrado el siglo XIX e inaugurado el XX que la demanda y el xito en la
fabricacin de productos derivados de los naturales permitan fabricar
materiales de caractersticas equiparables, partiendo de materias orgnicas
simples. Con la ayuda de la qumica orgnica, en auge en esta poca sali la
Resina Fenlica Baquelita en 1907, mientras que a partir de 1930 se
fabricaron ya el vidrio acrlico poli(metacrilato de metilo), Prexiglas, el poli
(cloruro de vinilo) y el poliestireno.

Cuando el qumico H. Staudinger (premio Nobel de 1953) con sus trabajos
iniciados en 1920 demostr que muchos productos naturales y todos los
plsticos contienen macromolculas, universidades y grandes industrias
qumicas concentraron sus esfuerzos en el desarrollo de nuevos plsticos.
Entre los aos 1930 y 1950 surgieron plsticos tan importantes como las
poliamidas Nylon y Perlon, el polietileno de alta presin (= baja densidad) y el
Tefln, un plstico fluorado.
Una nueva poca para los plsticos se inici en 1952 cuando K. Ziegler
descubri que el etileno, muy lento para reaccionar, se poda convertir en
polietileno por contacto con determinados slidos (catalizadores) a presin
normal y a temperatura baja, mientras que G. Natta descubri en 1954 que
estos mismos catalizadores y otros similares permiten la formacin de las
molculas gigantescas de los plsticos en un estado de alto ordenamiento
espacial.
En la dcada de los aos setenta y ochenta se inici la produccin y puesta a
punto de muchos plsticos de altas presiones, tales como polisulfones,
24
poliariletercetonas y polmeros de cristal lquido. Algunas de estas
investigaciones estn abiertas en la poca actual.

2.2.3 Tipos de Plsticos
Los plsticos son un grupo grande y variado de materiales sintticos cuya
forma se obtiene por procesos de conformado o moldeado.
Se dividen en dos:
2.2.3.1 Termoplsticos: Para ser conformados requieren la aplicacin de
calor previo al enfriamiento que les confiere la forma definitiva. Estos
materiales pueden ser recalentados y reformados varias veces sin sufrir
cambios significativos en sus propiedades. Muchos termoplsticos poseen
una larga cadena principal de tomos de Carbono unidos covalentemente
(Ver Tabla # 1). A veces existen tomos de Nitrgeno, Oxigeno o Azufre
unidos por enlaces covalentes en la cadena principal molecular. A esta
cadena tambin se le puede unir otros tomos o grupos de tomos
covalentemente. En este grupo de termoplsticos las cadenas moleculares
se unen entre si por enlaces secundarios. (Fortune, 2004)
Algunos ejemplos de termoplsticos son: Acetato de celulosa, Propionato de
celulosa, poliestireno expandido, polietileno de alta y baja densidad,
Poliamida, Polibuteno, Policarbonato, Polietileno, Polipropileno, Polipropileno,
Acetato de polivinilo, Cloruro de polivinilo, Poliesteres entre otros. (Vidales,
1995)

2.2.3.2 Termoestables: Fabricados con una fuerza permanente y
vulcanizados o endurecidos por reacciones qumicas, no se pueden refundir,
ni almacenar y son degradados a temperaturas elevadas, por ello no son
reciclables. De todos modos existen muchos plsticos llamados
termoestables que han sido endurecidos o vulcanizados a temperatura
ambiente solamente por una reaccin qumica. Muchos plsticos
25
termoestables constan de una red de tomos de Carbono unidos por enlaces
covalentes para formar un slido rgido. (Fortune, 2004)
Algunos termofijos son resinas o masas de colada melamina-formaldehido,
polimetil-metacrilato, Polimetil penteno, Poliacetal, Poliuretanos, hule natural
y sinttico etc.

2.2.3.3 Elastmeros: Este tipo de materiales posee una estructura molecular
que le proporciona gran estabilidad. Los hules sintticos o elastmeros
despus de haber sido deformados por la aplicacin temporal de una fuerza
ligera regresan rpidamente a sus dimensiones iniciales. Los elastmeros se
forman sin la adicin de diluyentes ni plastificantes y, dependiendo de su
naturaleza qumica pueden ser termofijos o termoplsticos.
Ejemplos de elastmeros son poliuretanos ntricos, silicones y butadienos-
estrenos. (Vidales, 1995)

26
2.2.4 Tabla # 1. Plsticos ms usados en la elaboracin de envases.

Material Estructura Propiedades Aplicaciones
Polipropileno

- Densidad: De 0.895 a 0.92
g/cm.
- Estructura: Termoplsticos
semicristalinos, en su mayor parte
no polares, con un grado de
cristalinidad entre el 60 y el 70%
debido al predominio del
ordenamiento isolactico de los
grupos metilo. Los copolimeros
con etileno tienen mayor
resistencia al impacto a bajas T y
mayor estabilidad a la intemperie.
- Color: Su tonalidad natural va
ligeramente transparente hasta
opaca, se puede teir en muchos
colores opacos con alto brillo
superficial.
- Caractersticas Trmicas: A T
elevadas el PP puro tiende a
oxidase. Estable hasta 140 C.

En productos para el
hogar,
electrodomsticos,
embalajes, utensilios
de laboratorio y
varios tipos de
botellas.
Poliestireno

- Material plstico transparente,
inodoro, inspido y relativamente
quebradizo.
- Con aspecto de cristal y otros
modificados con goma resistente
a los impactos.
- La presencia del anillo fenileno
en cada tomo de Carbono de la
cadena principal produce una
configuracin voluminosa rgida,
que impide la flexibilidad del
material a temperatura ambiente.

- til en el
recubrimiento de
interiores de
automviles,
electrodomsticos,
discos, manilares y
tiles de cocina en
general.
27

Polietileno

- Material termoplstico entre
transparente y blanquecino.
- Existen dos tipos: De baja
densidad que tiene una estructura
de cadena ramificada que hace
que disminuya su grado de
cristalinidad, densidad y
resistencia mientras el de alta
densidad tiene estructura de
cadena lineal.

- Se emplea en
contenedores, en la
fabricacin de
material qumico, en
la fabricacin de
productos para el
hogar y de botellas
moldeadas.

(Sena, 1995)
(Vidales. 1995)
(Fortune. 2004)

2.2.5 Mtodos de transformacin.

2.2.5.1 Reaccin de polimerizacin.
La mayor parte de los termoplsticos son sintetizados por el proceso de
polimerizacin en el que muchas pequeas molculas se enlazan
covalentemente para construir cadenas moleculares muy largas. Estas
molculas simples ligadas covalentemente en largas cadenas se llaman
monmeros. Las molculas de cadena larga formadas por las unidades de
monmeros se llaman polmeros.
Por ejemplo la molcula de etileno C2H4 est constituida qumicamente por
un enlace covalente doble entre los tomos de carbono y por cuatro enlaces
covalentes sencillos entre el carbono y los tomos de hidrgeno.
Cuando la molcula de etileno est activada, es que el enlace doble entre los
dos tomos de carbono est totalmente abierto siendo reemplazado por un
enlace covalente sencillo, como resultado de esta activacin cada tomo de
28
carbono de la anterior molcula de etileno tiene un electrn libre para el
enlace covalente con otro electrn libre de otra molcula.

La reaccin general para la polimerizacin en cadena de monmeros de
etileno a polietileno es :
Ecuacin N 1
La unidad ms pequea que se repite en la cadena de polmeros es llamada
un mero. El mero polietileno es (CHCH2). (Fortune. 2004)

2.2.5.2 Etapas de la polimerizacin en cadena
El conjunto de reacciones de polimerizacin en cadena de monmeros de
etileno hasta polmeros como el polietileno se divide en tres etapas:
- Iniciacin: Para la polimerizacin en cadena del etileno se usan muchos
tipos de catalizadores como perxidos orgnicos los cuales actan como
formadores de radicales libres. Un radical libre es un grupo de tomos que
teniendo un electrn desapareado ( e libre) de otra molcula.
Una molcula de perxido de hidrgeno H2O2 puede romperse en dos
radicales libres mediante la siguiente reaccin.

29
Ecuacin N 2

En la polimerizacin en cadena del etileno, va radicales, es necesario que un
peroxido orgnico pueda descomponerse por los mismos caminos que el
peroxido de Hidrgeno.
- Propagacin: El proceso de extensin de la cadena por la sucesiva adicin
de unidades de monmeros se llama propagacin. El doble enlace en el
extremo de una unidad monomerica del etileno reacciona en forma abierta
con un radical libre contribuyendo a su extensin por unin covalente a dicho
radical.
Ecuacin N 3
R - CH2 - CH2 + CH2 = CH2 R - CH2 - CH2 - CH2 - CH2
Las cadenas de polmeros en la polimerizacin en cadena mantienen un
crecimiento continuado debido a que la energa del sistema qumico se ve
rebajada por el proceso de polimerizacin.
- Terminacin: La terminacin puede suceder por la adicin de un radical
libre finalizador o cuando dos cadenas se combinan
Ecuacin N 4
R( CH2 - CH2 )m + R 1 ( CH2 - CH2)) n R ( CH2 - CH2 )m - ( CH2 -
CH2 )m R 1
(Fortune. 2004)

2.2.6 Procesado de materiales plsticos

2.2.6.1 Moldeo por inyeccin
Es uno de los procedimientos ms importantes de fabricacin de
termoplsticos. Las maquinas modernas de moldeado por inyeccin utilizan
30
un mecanismo de tornillo alternativo para fundir el plstico e inyectarlo dentro
del molde. Las maquinas antiguas utilizaban un pistn para inyectar la
fundicin.

En el proceso de moldeado por inyeccin, los grnulos de plstico contenidos
en una tolva caen a travs de una apertura en el cilindro de inyeccin, sobre
la superficie de un tornillo rotatorio impulsor el cual transporta los grnulos
hacia la parte anterior del molde. La rotacin del tornillo fuerza los grnulos
contra las paredes calientes del cilindro, fundindose debido al calor de
compresin, al de friccin y al calor de las paredes del cilindro. Cuando en el
molde al final del tornillo se encuentra suficiente material fundido, el tornillo
se detiene y por un movimiento de pistn inyecta un chorro de plstico
fundido en la cavidad de un molde cerrado. El eje del tornillo mantiene la
presin sobre el material plstico dentro del monde durante un corto periodo
de tiempo para permitir convertirse en slido y luego se retira. El molde se
refrigera con agua para enfriar rpidamente la parte plstica.
Finalmente el molde es abierto y la pieza es retirada del molde con aire o
expulsores de resorte, luego se cierra el molde y se prepara para otro ciclo.
(Fortune. 2004)

FIGURA 2. Envase soplado por ECSI S.A.
31
2.2.6.2 Moldeo por Soplado
Se coloca un cilindro o tubo de plstico calentado llamado preforma entre las
mordazas de un molde. El molde se cierra para sellar los extremos del
cilindro y se insufla dentro aire comprimido forzando el plstico contra las
paredes del molde (Ver figura 2).
La velocidad del proceso, es decir la cantidad de piezas obtenidas por unidad
de tiempo depende de la velocidad de solidificacin del plstico caliente.
( Mink. 1991)

2.2.6.3 Moldeo por compresin
Resinas termoestables como fenolformaldehido o ureaformaldehido son
conformadas por procesos de moldeado por compresin, la resina debe ser
precalentada, se carga dentro de un molde caliente que contiene uno o ms
cavidades. La parte superior del molde se fuerza hacia abajo sobre la resina
para que esta funda por la presin aplicada y del calor forzando que el
fundido llene la cavidad, se requiere continuar calentando para completar el
entrecruzamiento de la resina termoestable y despus se extrae de la pieza
del molde. El exceso de rebaba se recorta. (Fortune. 2004)

2.2.7 Funcin de los empaques.

2.2.7.1 Funcin de contener
El embalaje facilita el transporte, asegura determinadas unidades de tamao,
permite caracterizar o dividir la mercanca por tipos y simplifica as el
almacenaje. De esta manera el producto tambin tiene la posibilidad de
adaptarse a los formatos habituales de los estantes comerciales.
(KUHNE,D.1990)

32
2.2.7.2 Funcin de proteger
La primera misin de un embalaje es la de proteger la mercanca que
contiene frente a influencias externas. Tales influencias externas pueden ser
de tipo mecnico como choques, cadas, doblado, presin etc., o bien de
naturaleza fsico-qumica como las producidas por fuerte fri o calor,
excesiva radiacin solar o humedad o, microbiolgicas donde el producto se
ve afectado por bacterias, hongos, parsitos o virus que evidentemente
cambiaran sus propiedades iniciales. (KUHNE,D.1990)

2.2.7.3 Funcin de informar
Tareas de informacin y publicidad tambin son cumplidas por el envase, la
atraccin del cliente hacia el producto esta determinada por el nivel de
aceptacin que manifieste hacia el envase. (KUHNE,D.1990)

2.3 TIPOS DE MICROORGANISMOS CONTAMINANTES

2.3.1 Los hongos
Los hongos son microorganismos pluricelulares (clulas eucariticas) con
morfologa de micelio filamentoso. Consiste en una serie de clulas
tubulares, que oscilan entre 300 a 100 m de dimetro llamadas hifas que
forman una masa microscpica llamada micelio. (MARRIOT,N.1999).
Pueden desarrollarse numerosas y diminutas esporas que se encuentren en
el aire y que puedan esparcirse en las corrientes de aire. Las esporas
producen el crecimiento de nuevos hongos si son trasladadas a un lugar que
rena las condiciones ideales para la germinacin. (MARRIOT,N.1999).

Las paredes fngicas estn formadas por quitina, un polmero de N-acetil
glucosamina. Se dispone en grupos de microfibrillas comola celulosa, y en
algunas especies existen otros polmeros como mananos, galactanos o
quitosan (MADIGAN,M.1991).
33
En su 80-90% las paredes celulares fungicas estn compuestas de
polisacaridos, mientras que los lpidos y polifosfatos e iones inorgnicos
forman una matriz cementante. (MADIGAN,M.1991).

Los mohos son los principales responsables de las retiradas de productos
alimenticios cada ao su crecimiento se evidencia por un micelio algodonoso
con manchas de putrefaccin complicando la fabricacin y almacenaje de los
productos. (MARRIOT,N.1999).

2.3.1.1 Aspergillus niger
Las especies de Aspergillus estn distribuidas ampliamente y causan
diferentes tipos de contaminacin y descomposicin de materias. Crecen en
higos, atacan al tabaco y a los cigarrillos, descomponen las nueces y el pan.
(MARRIOT,N.1999).
Las colonias tienen consistencia aterciopelada y color pardusco negro. El
color depende de los conidios. (MARRIOT,N.1999).
2.3.2 Las Levaduras
Las levaduras son generalmente unicelulares, difieren de las bacterias por su
gran tamao y su morfologa cremosa y hmeda, adems de su tipo de
reproduccin por gemacin. (MARRIOT,N.1999).
El tiempo de generacin es generalmente es de 2 a 3 horas en los alimentos
deteriorndolo en un plazo de 40 a 60 horas realizando procesos
fermentativos alterando sus caractersticas originales .Las levaduras pueden
diseminarse a travs del aire u otros medios y se posan sobre las superficies.
(MARRIOT,N.1999).
Las levaduras pueden producir alteracin en los alimentos, en particular
cuando son azucarados. Las siguientes alteraciones son las ms
frecuentemente causadas por dichos microorganismos en los diferentes tipos
de alimentos:
34
- Incremento de la presin en los envases, de tal forma que cuando se
este abriendo hace espuma exagerada.
- Olores fermentados y prdida de sabor.
- Sedimentos o trozos ligeros en el fondo de los envases.
- Prdida o cambio de color y apariencia fsica.
- Surgimiento de puntos de color blanco a crema.
(GTC 85.2003)

2.3.2.1 Candida albicans
Son habitantes normales de boca y garganta, tubo digestivo y piel, es un
patgeno oportunista que infecta primordialmente huspedes
inmunodeprimidos.
Se han encontrado biofilms que pueden colonizar superficies inertes
formando capas. (TYLER,B.2002)
Las clulas en divisin y en crecimiento son ms susceptibles a los agentes
microbianos que llegan a la membrana puesto que el crecimiento y la divisin
requieren incorporacin del nuevo material de la pared y la membrana de la
clula. (TYLER,B.2002)
El lanzamiento de potasio al ingresar el compuesto activo del desinfectante y
alterar la pared es menor despus de la fase exponencial ya que hay
alteraciones en la qumica de la pared de las clulas.
Esta disminucin de la susceptibilidad fu atribuida a los cambios el longitud
de las cadenas de 1-3 glucano. (TYLER,B.2002)

2.3.3 Las bacterias
Las bacterias son microorganismos unicelulares, se dividen en bacilos de
forma alargada y cocos deforma esfrica. Las bacterias producen pigmentos
con variaciones desde amarillo, marrn, negro hasta naranjas y azules
produciendo colores anmalos en los alimentos. (MARRIOT,N.1999).
35
El riesgo de contaminacin para un producto natural, vegetal o animal y un
producto alimentario transformado o no, es permanente a lo largo de la
cadena alimentara y durante los procesos de fermentacin. (LEVEAU J.2002)

2.3.3.1 Escherichia coli
Bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos, no esporulados.
Su pared celular est compuesta por varias capas y es bastante compleja,
adems del peptidoglicano que solo constituye un 10% posee en su pared
una capa adicional que est compuesta de lipopolisacrido, de hecho esta
capa representa una segunda bicapa lipidica, que no costa solo de lpidos
como la membrana citoplasmtica sino que adems posee polisacaridos y
proteinas. (MADIGAM,M.1991)

E.coli forma parte de la carga normal del intestino grueso del hombre y la
mayora son apatgenas, sin embargo algunas pueden producir infecciones
del tracto urinario y causantes de intoxicaciones alimentarias, septicemia y
meningitis. La contaminacin fecal de los alimentos bien por contacto directo
o indirectamente por medio de agua es el mtodo de transmisin ms
importante. (ELEY A.1994)
El control debe ser mediante la higiene del personal: manipuladores y evitar
el uso de aguas residuales.

2.3.3.2 Staphylococcus aureus
Cocos Gram positivos, anaerobios facultativos no esporulados coagulasa y
desoxiribonucleasa (DNAsa) positivos.

La pared de las Gram positivas est formada fundamentalmente por un solo
tipo de molcula y es ms ancha comparndola con las Gram negativas.
(MADIGAN,M.1991)
36
El peptidoglicano representa hasta el 90% de la pared, aunque los cidos
teoicos tambin estn presentes en pequeas cantidades que son polmeros
de la pared, de la membrana o de la cpsula que contienen unidades de
glicerol o ribitolfosfato. Debido a su carga negativa, los cidos teoicos son, en
parte, responsables de la carga negativa neta de la superficie de las clulas y
puede intervenir en el paso de iones a travez de la pared celular. Algunos de
estos cidos contienen glicerol que estn unidos a los lpidos de la
membrana debido a esta asociacin se denominan cidos lipoteioicos.
(MADIGAN,M.1991)

Los alimentos contienen toxinas presintetizadas por las bacterias en la fase
exponencial . Por tratamiento trmico las bacterias mueren pero las toxina
sobreviven, son 8 tipos y son llamadas neurotoxinas ya que afectan el control
del vomito.
15 a 20% de los S.aureus aislados en humanos son enterotoxigenicos, esto
explica la importancia de los manipuladores de alimentos en la transmisin
ya sea directamente o mediante el uso de los utensilios previamente
contaminados. (ELEY A.1994)

2.3.3.3 Bacillus subtillis
Bacteria Gram positiva, catalasa positiva encontrada comnmente en el
suelo.
Constituye el grupo de patgenos oportunistas potenciales. Sus esporas
pueden sobrevivir al tratamiento con desinfectantes comunes y muchas
resisten al calor. (KONEMAN, E.1992)
Las esporas son estructuras complejas formadas por diversas capas,
algunas de las cuales le confieren gran resistencia. En el protoplasto est el
RNA, DNA, acido dipicolinico, Ca, K, Mg, P. El cortex tiene peptidoglicano,
45-60% de cido muramico. La membrana interna llega a ser la membrana
citoplasmtica en la germinacin.(RUSELL,A.1990)
37
2.4 DINAMICA DE CRECIMIENTO

La multiplicacin de las clulas microbianas mediante biparticin se produce
dentro de un modelo de crecimiento que consta de varias fases, siguiendo la
curva de crecimiento tpico microbiano. (MARRIOT,N.1999).

2.4.1 Fase de retraso o de crecimiento bajo ( Fase Lag)
Despus de haberse producido la contaminacin viene el periodo de
adaptacin al medio de cultivo o al alimento , con un leve descenso de la
carga microbiana debido al estrs, seguido de un limitado aumento en el
nmero de microbios que sintetizan los enzimas necesarios para metabolizar
los substratos (LEVEAU J.2002), se llama fase de bajo crecimiento microbiano.
La fase Lag puede prolongarse con una menor proliferacin microbiana
reduciendo la temperatura o mejorando las prcticas higinicas y sanitarias.
(MARRIOT,N.1999).

2.4.2 Fase de arranque
Cuando la fase de adaptacin se termina se produce un arranque de
crecimiento, la reproduccin celular comienza, la concentracin celular
aumenta al igual que la velocidad de crecimiento. (LEVEAU J.2002)

2.4.3 Fase de crecimiento Logartmico
La multiplicacin bacteriana se realiza mediante biparticin caracterizada por
la duplicacin de los componentes de cada clula.
En esta fase el nmero de microorganismos aumenta de manera exponencial
hasta que algn factor del medio ambiente actu como limite. El numero de
microorganismos y factores medioambientales como la disponibilidad de
nutrientes y la temperatura afectan el ndice de crecimiento logartmico. Una
higiene eficaz para reducir la carga microbiana puede limitar el nmero de
38
microbios que contribuyen a la proliferacin durante esta fase de crecimiento.
(MARRIOT,N.1999).

2.4.4 Fase de crecimiento estacionario
Cuando ,los factores medioambientales como la disponibilidad de nutrientes,
temperatura y competencia con otra poblacin microbiana ejerce accin
limitante, el ndice de crecimiento disminuye. El crecimiento llega a ser
constante, lo que da una fase estacionaria donde el numero de
microorganismos es lo bastante grande para que sus productos metablicos
y la competencia por espacio y nutrientes reduzcan su proliferacin al punto
que quede paralizada. (MARRIOT,N.1999).

2.4.5 Fase de Muerte acelerada
La escasez de nutrientes, la accin de los productos metablicos sobrantes y
la competencia con otras poblaciones microbianas contribuye a la rpida
destruccin de las clulas microbianas en una proporcin exponencial. Esta
etapa puede durar entre 24 horas y 30 das dependiendo de la temperatura,
abastecimiento de nutrientes, edad de los microorganismos, aplicacin de
tcnicas higinicas y desinfectantes. (MARRIOT,N.1999).

2.4.6 Fase de Muerte reducida
Esta producida por una fase de destruccin acelerada continua, lo que
reduce el nmero de poblacin microbiana hasta el punto de que el ndice de
destruccin se modera. Despus de esta fase, el organismo resulta
degradado, se ha producido una esterilizacin, u otra poblacin microbiana
continua la descomposicin. (MARRIOT,N.1999).

39
2.5 CINETICA DE MUERTE MICROBIANA

La destruccin qumica de los microorganismos es sobre todo utilizada en la
desinfeccin de superficies de materiales de equipos en la industrias.
La cintica de destruccin de los microorganismos tiene la misma tendencia
sea cual sea el agente de destruccin utilizado. Es posible en el caso de la
destruccin qumica trazar varias curvas de supervivencia haciendo variar la
concentracin del desinfectante. . (LEVEAU J.2002)
Se constata que cuando la concentracin aumenta el tiempo de reduccin de
la poblacin microbiana disminuye.
Como en el caso de la destruccin trmica las curvas de supervivencia
siempre son lineales. A dbiles concentraciones la relacin no es lineal, se
puede ver incluso que el microorganismo utilice algunos desinfectantes como
sustrato de crecimiento cuando contiene Carbono, Oxigeno y Nitrgeno .
(LEVEAU J.2002)

FIGURA 3. Microorganismos vs Tiempo de exposicin al agente

40
2.6 CONDICIONES QUE INFLUYEN EN LA ACCIN ANTIMICROBIANA

En la aplicacin de un agente fsico o qumico usado para inhibir o destruir
poblaciones microbianas hay que tener en cuenta factores ya que, no es
posible elegir un procedimiento que desinfecte o esterilice todo tipo de
materiales.
A continuacin se mencionan los factores que intervienen en la accin
antimicrobiana.

2.6.1 Agua
La inclusin del agua en las industrias, en establecimientos y casas
particulares en la preparacin de alimentos y limpieza es imprescindible por
ello, debe ser agua apta. El agua utilizada con fines tcnicos recibe el
nombre de Agua Industrial y no debe ser siempre de calidad potable , pero
los requisitos pueden ser mayores si tienen contacto con los alimentos, de
manera que elementos presentes en ella como el Hierro y el Cobre pueden
influir sobre la calidad y capacidad de conservacin de los alimentos.
(WILDBRETT,G 2000).
El agua de tipo industrial debe cumplir con diferentes especificaciones entre
ellas se encuentra un estndar mnimo en lo referente a especie y nmero de
grmenes. El empleo de aguas cargadas de microbios en la limpieza y
desinfeccin supone un peligro, al poder transmitir grmenes patgenos al
producto elaborado. Adems debe ser inspida e inodora y la tasa de
elementos indeseables no debe exceder los limites legales entre estas estn
los Hidrocarburos Clorados que al acumularse pueden desarrollar una accin
cancerigena. (WILDBRETT,G.2000).

41
2.6.2 Temperatura
Los desinfectantes qumicos son comnmente utilizados a temperatura
ambiente, pero algunos son posibles de usar en conjunto con procesos
calientes de limpieza.(GARNEDNER,J.1991).
Un aumento de temperatura con un agente qumico apresura la destruccin
de microorganismos. As una cantidad pequea de agente qumico a una
temperatura elevada lograr el mismo resultado que una cantidad mayor del
mismo agente a una temperatura ms baja.
Es importante tener en cuenta que la estabilidad de algunos desinfectantes
se ve afectada por el aumento de temperatura por ejemplo, los Halgenos, el
Cloro y el Yodo. (PELCZAR,M.1994).

2.6.3 pH
La acidez o alcalinidad de una solucin afectar la eficacia de un agente
qumico. Los bactericidas cidos (aninicos) como los cidos orgnicos y el
fenol son ms eficaces a un pH bajo. Los microbicidas catinicos tienden a
ser inhibidos por pH bajos y aniones. (FROBISHER,M.1976).

2.6.4 Formulacin
Algunos desinfectantes tienen en su formulacin soluciones que garantizan
una mayor penetracin como algunos desinfectantes de piel. Los
desinfectantes fenolicos contienen agentes activos de superficie para
promover la solubilidad de compuestos activos, los compuestos de amonio
cuaternario son formulados con detergentes.
Es importante saber que una mezcla no autorizada de diferentes
desinfectantes puede resultar en desactivacin. (GARNEDNER,J.1991).

2.6.5 Nmero de Microorganismos
La desinfeccin qumica tiene un margen menor de seguridad y la tasa de
muerte es a menudo ms lenta en los estados finales, produciendo curvas
42
erradas. A mayor nmero de microorganismos el tiempo de ajuste para
destruir a todos los microorganismos es ms largo. (GARNEDNER,J.1991).

2.6.6 Naturaleza del organismo
Las especies de microorganismos difieren en su susceptibilidad a los agentes
fsicos y qumicos. La eficacia de un agente en particular depende de las
propiedades del organismo contra el cual esta siendo probado. La produccin
de esporas o cpsulas por ejemplo hacen a los microorganismos ms
resistentes. (JOKLINK,W.1986).

2.6.7 Estado fisiolgico de los microorganismos
El estado de los microorganismos influye en la susceptibilidad a los agentes
antimicrobianos, las clulas jvenes por tener intenso metabolismo son ms
vulnerables que las viejas (PELCZAR,M.1994).

2.6.8 Tiempo
El tiempo de contacto o de aplicacin tiene gran importancia en la
desinfeccin. Los productos qumicos requieren cierto tiempo para establecer
contacto con los microorganismos y reaccionar con ellos. (FROBISHER,M.1976).

2.7 CARACTERISTICAS DE LOS DESINFECTANTES

Los desinfectantes disponibles para utilizar en el procesado de alimentos y
productos afines varan en su composicin qumica y actividad, dependiendo
de las condiciones de actuacin. Comnmente cuanto ms concentrado est
un desinfectante ms rpida y eficaz es su accin. (MARRIOT,N.1999)

2.7.1 Requisitos Generales
Los desinfectantes sirven para combatir adecuadamente los
microorganismos. En lo referente a su utilizacin en la produccin de
43
alimentos o elementos relacionados, un desinfectante debe cumplir una
extensa serie de requisitos:
El desinfectante como producto concentrado:
- Alto contenido de principio activo
- Buena capacidad de transporte y estabilidad en el almacenado
- Buena solubilidad, miscibilidad y dosificacin en la preparacin de las
diluciones habituales. (WILDBRETT,G.2000).
Propiedades del desinfectante en solucin
- Breves plazos de destruccin de grmenes con bajas
concentraciones, tambin a bajas temperaturas.
- Igual accin sobre todas las especies de microorganismos
- Ningn perjuicio para los procesos de limpieza, sino facilidad de
dispersin para conseguir contactos complejos entre el principio activo
y los grmenes.
- Indiferencia a la inclusin de suciedades.
- Suficiente estabilidad del principio activo en mojaduras prolongadas o
repetidas con soluciones preparadas y, si es el caso, almacenadas
durante cierto tiempo.
- Control sencillo, y si es posible automatizado, de la concentracin del
principio activo.
- Ningn ataque a los materiales tratados.
- Seguridad y comodidad de empleo, con tolerancia para la piel y olor
neutro. (WILDBRETT,G.2000).
Comportamiento en lo referente a residuos y otras precauciones.
- Prolongada accin protectora sobre las superficies tratadas.
- Buena capacidad de enjuagado de las superficies de contacto con el
alimento .
- Ninguna influencia sobre el olor y sabor del alimento.
- Inocuidad de los residuos para el hombre, animales y entorno.
- Inocuidad de las aguas residuales. (WILDBRETT,G.2000).
44
2.7.2 Grupos de Desinfectantes

2.7.2.1 Halgenos y sus compuestos
Por su capacidad de agentes oxidantes fuertes para atacar y destruir las
sustancias orgnicas, todos los halgenos sirven perfectamente para
operaciones de desinfeccin. Sin embargo del grupo se destacan el Yodo y
el Cloro. (WILDBRETT,G.2000).

2.7.2.1.1 Cloro
Funcionan como desinfectantes el Cloro lquido, hipocloritos, cloramina
inorgnica, cloramina orgnica y dixido de Cloro.
El cloro gaseoso puede inyectarse en agua para formar oxido hipocloroso
(HOCL), EL Cloro Liquido es una solucin de Hipoclorito slido (NaOCl) en
agua. El ion Hipocloroso es 80 veces ms activo que una concentracin
equivalente del in Hipoclorito. (MARRIOT,N.1999).
Los compuestos clorados ejercen mayor efecto antimicrobiano con un pH
bajo , en el que predomine la presencia de cido hipocloroso (pH <4), a
medida que aumenta el pH, predomina el in hipoclorito (pH >5), que no es
tan eficaz como bactericida. (MARRIOT,N.1999).
El tiempo de reaccin de los desinfectantes a base de Cloro depende de la
Temperatura. Hasta 52C, la velocidad de reaccin se duplica cada 10C de
aumento de temperatura. Aunque los hipocloritos son relativamente estables,
la solubilidad del Cl2 disminuye rpidamente por encima de 50C.
Se sabe que el cloro es eficaz como desinfectante en la limpieza mecanizada
de acero inoxidable sin corroer y superficies de policarbonato reduciendo las
poblaciones microbianas presentes a menos de 1.0 log ufc/cm.
(MARRIOT,N.1999).
Las cloraminas inorgnicas se forman en la reaccin de Cloro con Nitrgeno
y las cloraminas inorgnicas por la reaccin del cido hipocloroso con
aminas. Las esporas bacterianas son ms resistentes a estos compuestos y
45
libera lentamente el Cloro ya que sus efectos letales tambin son ms lentos.
(MARRIOT,N.1999).

TABLA #2. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL CLORO COMO DESINFECTANTE

VENTAJAS DESVENTAJAS
Eficaces contra una amplia variedad
de bacterias, hongos y Virus.
Son inestables y desaparecen
rpidamente con el calor o con la
contaminacin de materia orgnica.
Incluyen compuestos de efecto
rpido.
Su eficacia disminuye a medida que
aumenta el pH de la solucin.
Econmicos Son corrosivos para el acero
inoxidable y otros metales
Si se aplican soluciones con 200ppm
o menos no hay necesidad de
enjuagar el equipo.
Se deterioran cuando se almacenan
bajo luz solar o a temperaturas
superiores de 60C.
Se presenta de forma liquida o
granulada.
Soluciones con bajo pH pueden
formar cloro gaseoso toxico y
corrosivo.
No resultan afectados por las aguas
duras, solo si se registran variaciones
en el pH.
Concentrados en forma liquida
pueden ser explosivos.
No se originan subproductos txicos.

(MARRIOT,N.1999).

2.7.2.1.2 Yodo
El Yodo diatmico es el agente antimicrobiano ms importante, generalmente
el Yodo libre en forma de elemento y el cido hipoyodoso son los agentes
activos en la destruccin microbiana. (MARRIOT,N.1999).
Los principales compuestos yodados utilizados como desinfectantes son los
que generalmente llevan yodoforos usados en superficies y en piel.
El complejo portador del Yodo libera un ion triyoduro intermediario que, en
presencia de cido, se convierte rpidamente en cido hipoyodoso y yodo
46
diatpico, que son las formas antimicrobianas activas de los desinfectantes
portadores de Yodo. (MARRIOT,N.1999)
Los agentes inicos superficieactivos son compuestos formados por dos
grupos funcionales; una parte es lipfila y la otra es hidrfila. Introducidas en
agua estas molculas se ionizan y los dos grupos cargan a la molcula
surfactante con una carga concreta, que resulta positiva o negativa. Los
desinfectantes aninicos y catinicos tienen modos de accin semejantes.
(MARRIOT,N.1999).

TABLA #3. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL YODO COMO DESINFECTANTE

En forma concentrada tiene larga vida
comercial.
En forma liquida se evapora a una
temperatura mayor de 50C.
Tie la suciedad, facilitando su
identificacin.
Puede SER absorbido por plsticos y
gomas causando alteraciones.
No se ve afectado por las aguas
duras.
Si ya hay depsitos de aguas duras el
yodo no los destruye
Eficaces en la desinfeccin de
manos.
Ms costoso que el Cloro
Son menos eficaces contra las
esporas bacterianas y bacterifagos
que los compuestos clorados.
Su eficiencia es escasa a
temperaturas bajas, y son sensibles a
los cambios de pH.

(MARRIOT,N.1999).

2.7.2.1.3 Bromo
El Bromo solo se ha utilizado en combinacin con otros compuestos, ms en
tratamiento de aguas que como desinfectante de equipos y utensilios de
instalaciones. Con pH normal o ligeramente cido, los componentes
orgnicos de cloramina son ms eficaces en la destruccin de esporas que
47
los compuestos orgnicos de Bromo, pero la cloramina con Bromo tiende a
ser menos afectada por un pH alcalino de 7.5 o ms alto. Si se agrega Bromo
a una solucin de compuesto clorado se consiguen mejores resultados.
(MARRIOT,N.1999).

2.7.2.1.4 Fluor
El fluor en si mismo es inadecuado como desinfectante, pero el cido-fluor-
silicoso y el difloruro de amonio tienen empleo en la industria alimentara.
(WILDBRETT,G.2000).

2.7.2.2 Productos superficie Activos
Productos superficie activos o tensidos son sustancia que reducen la tensin
superficial de una solucin acuosa lo que le da propiedades emulsificantes y
humectantes, esto gracias a su acumulacin en la superficie ya que tiene
una parte hidrfila y otra hidrfoba.
Se caracterizan por disolverse bien en agua y su capacidad inhibitoria,
incluso en concentraciones relativamente bajas. Adems son termoestables
se conservan a temperaturas superiores a 90C . (WILDBRETT,G.2000).

2.7.2.2.1 Compuestos de Amonio cuaternario
Generalmente llamados Quats, son compuestos de amonio, en los que
cuatro grupos orgnicos se unen a un tomo de Nitrgeno que origina un ion
cargado positivamente (catin). En estos compuestos generalmente el radical
orgnico es el catin y el Cloro es generalmente el anin. (MARRIOT,N.1999).
Tienen buena capacidad de penetracin, lo que los hace tiles en superficies
porosas. Son agentes humectantes con propiedades detergentes
adicionales.
Los compuestos de amonio cuaternario no deben combinarse con otros
productos para limpiar ya que se inactivan. (MARRIOT,N.1999).

48
TABLA #4. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE AMONIO CUATERNARIO COMO
DESINFECTANTE
Incoloros e inodoros. Eficacia limitada frente a la mayora
de los grmenes Gram. -.
Estables en presencia de materia
orgnica.
Incompatibles con detergentes
sintticos aninicos.
Resistentes a la corrosin de
metales.
Formacin de pelcula en la
manipulacin de alimentos y en el
equipo procesador de estos.
Estables ante fluctuaciones de
temperatura.

No irritan la piel
Eficaces con pH alto.
Efectivos Frente al crecimiento de
mohos.

No txicos.
Buenos surfactantes.
(MARRIOT,N.1999).

2.7.2.3 Desinfectantes cidos.
Una serie de cidos orgnicos cuenta con propiedades antimicrobianas, se
consideran toxicologicamente seguros y biolgicamente activos y se utilizan
conjuntamente para operaciones de enjuagado y desinfeccin.
Se emplean generalmente cidos como actico, peroxiacetico, lctico,
propionico y formica. (MARRIOT,N.1999).

TABLA #5. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE ACIDOS COMO DESINFECTANTES

Neutralizan el exceso de alcalinidad,
despus de aplicar el limpiador.
Cuando aumenta el pH no son tan
eficaces contra termofilos
Evitan la formacin de depsitos
alcalinos.
Pierden toda su eficacia contra
residuos alcalinos o surfactantes
catinicos.
49
Reaccionan con las bacterias debido
a que poseen diferente carga.

De accin rpida contra levaduras y
virus

Tiene propiedades humectantes por
lo tanto no corroe.

No son afectados por aguas duras ni
materia orgnica.

(MARRIOT,N.1999).

2.7.2.4 Biguanidas
Son derivados de la guanidina, una sustancia que se encuentra en forma
natural en vegetales y cereales. El grupo incluye un pequeo numero de
materiales que han sido identificados como poseedores de propiedades
bactericidas. Estos son bis-guanidinas o biguanidas polimricas. Solamente
las biguanidas polimricas tienen un uso significativo en la desinfeccin de
plantas de alimentos.(GTC 85.2003)
Estos materiales no son tensioactivos y son esencialmente no espumantes,
no corrosivos y no irritantes. Se pueden usar solos para desinfeccin manual,
por circulacin o por atomizacin. La baja corrosividad de las biguanidas para
la mayora de los materiales, permite el uso de tiempos de contacto
prolongados.
Las biguanidas se desactivan en contacto con los materiales aninicos y con
el cloro. .(GTC 85.2003)
Las biguanidas se precipitan con hidrxido de sodio (soda custica) y otros
lcalis tales como silicatos y carbonatos, y por lo tanto no se debera permitir
su mezcla con estos agentes qumicos. .(GTC 85.2003)

2.7.2.4.1 Clorhidrato de Polihexametilen Biguanida
2.7.2.4.1.1 Nombre comn: Clorhidrato de biguanida polimerizado-clorhidrato
de polihexametilen biguanida(PHMB). (LEVEAU J. 2002)
50
2.7.2.4.1.2 Formula:
((CH2)3 NH C NH C NH - (CH2)3)n - HCl

NH NH
2.7.2.4.1.3 Datos Fsicos
El PHMB se presenta generalmente en forma de solucin acuosa, incolora o
amarillenta. Es termoestable y no voltil, de carcter cationico y soluble en
todas las proporciones de agua. Es incompatible con bases como el
hidrxido de sodio, el metasilicato de sodio, tensoactivos aninicos y
protenas.
Los aceros inoxidables, las aleaciones de Aluminio, el acero estaado, el
cobre estaado y el nquel no son afectados. (LEVEAU J. 2002)

2.7.2.4.1.4 Espectro de actividad
El PHMB posee un espectro antimicrobiano incompleto. Las actividades
funguicidas y virucidas son dbiles. (LEVEAU J. 2002)

2.7.2.4.1.5 Toxicidad
DL 50 Ratn va oral: 2500 mg/kg
El PHMB es irritante en solucin concentrada , es un principio poco agresivo
para la piel y las mucosas en las dosis de empleo y bien tolerado por el
hombre. (LEVEAU J. 2002)

2.7.2.4.1.6 Usos
Debido al dbil espectro antimicrobiano se necesita de asociaciones con
principios activos pero esta es una operacin delicada debido a la
incompatibilidad con las dems familias antimicrobianas. (LEVEAU J. 2002)

51
TABLA #6. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL PHMB COMO DESINFECTANTE

Bactericida No funguicida, virucida y esporicida
Poco toxico Incompatibilidades qumicas
No espumante Costo elevado
No corrosivo
Ausencia de olor
Buena tolerancia cutnea
(LEVEAU J. 2002)

2.7.3 Modo de accin antimicrobiana

Para obtener la reaccin deseada entre el agente qumico y el
microorganismo a combatir, debe existir un contacto entre ambos, para que
se pueda dar el proceso de destruccin.
En la primera fase se asegura el contacto directo de la solucin desinfectante
con los microorganismos. Existen consorcios microbianos que se adhieren
fuertemente a las superficies dificultando que el desinfectante penetre, son
llamados Biofilms que son microcolonias de bacterias estrechamente
asociadas a una superficie inerte y sujetas mediante una matriz de un
complejo material parecido a un polisacrido en el que otros restos o
desperdicios, incluidos nutrientes y microorganismos, pueden quedar
atrapados. (MARRIOT,N.1999). De esta manera solo se podran atacar
parcialmente, y el acceso a los estratos bacterianos ms profundos se
dificultara, sin embargo, se busca que se logre atravesar las capas
cobertoras con molculas del desinfectante sin gastar, si no se consiguen
resultados satisfactorios en la limpieza industrial, deben prolongarse
consecuentemente los tiempos de destruccin de los microbios.
El proceso de penetracin corresponde a la segunda fase del ataque, en
donde las molculas del principio activo deben tener acceso a los
componentes celulares vitales de los grmenes.
52
2.7.3.1 Compuestos Clorados
El cido hipocloroso mata a la clula microbiana impidiendo la oxidacin de
la glucosa, oxidando con el cloro los grupos sufihidrilos de ciertas enzimas
importantes en el metabolismo hidrocarbonado. (MARRIOT,N.1999).
Adems se ha observado que interrumpe la sntesis proteica,
descarboxilacin oxidativa de aminocidos y aldehdos , reacciones con
cidos nucleicos, purinas y pirimidinas, desequilibrio metablico consecuente
con la destruccin de enzimas claves, induccin de alteraciones del cido
(DNA) con la subsiguiente perdida de la capacidad de transformar el DNA ,
inhibicin del aprovechamiento de oxigeno y de la fosforilacin oxidativa,
acompaado de la perdida de algunas macromolculas, formacin de
derivados txicos N-cloro de citosina y produccin de aberraciones
cromosomicas. (MARRIOT,N.1999).
Adems se ha comprobado que los compuestos liberadores de Cloro
estimulan la germinacin de esporas para a continuacin inactivar la espora
germinada. Las esporas bacterianas son ms resistentes a los hipocloritos
que las clulas vegetativas. El tiempo necesario para una reduccin del 90%
de la poblacin microbiana puede oscilar de unos 7 seg. A ms de 20 min. La
concentracin de Cloro libre disponible requerida para inactivar esporas
bacterianas es de aproximadamente de 10 a 1.000 veces mayor que para
clulas vegetativas. (MARRIOT,N.1999).

2.7.3.2 Compuestos Yodados
Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos
nucleicos. Inactiva protenas y enzimas por oxidacin de los grupos -SH a S-
S, pudiendo atacar tambin grupos amino, ndoles, etc.
(http://www.microbiologia.com.ar/)

53
2.7.3.3 Compuestos de Amonio Cuaternario
La naturaleza superficieactiva del quat envuelve y cubre la membrana
exterior de la clula microbiana, con el trastorno funcional de la pared y
subsiguiente salida de corpsculos internos e inhibicin enzimtica.
Adems forman una pelcula bacteriosttica tras ser aplicados en las
superficies. Los quats no matan las esporas bacterianas pero inhiben su
crecimiento. (MARRIOT,N.1999).

2.7.3.4 Desinfectantes cidos
Como las bacterias tienen carga superficial positiva y los surfactantes
negativa reaccionan con ellas, las paredes celulares se tornan permeables
con lo que se altera el funcionalismo celular. Estos desinfectantes matan a
los microbios penetrando en su interior y rompiendo la membrana celular,
disocian luego la molcula cida y como consecuencia acidifican el interior.
(Marriott, N.1999)

2.7.3.5 Desinfectantes a base de Biguanidas
El blanco principal de las guanidinas en las bacterias es la membrana
citoplasmtica. La secuencia del mecanismo es la siguiente:
- Rpida atraccin hacia las cargas negativas de la superficie de las
clulas, gracias a los policationes. (IKEDA,T.1984)
- Absorcin especifica e intensa sobre algunos sitios de la pared que
poseen una funcin fosfato.
- Colapso de los mecanismos de exclusin de la pared celular.
- Fijacin sobre la membrana citoplasmtica.
- Dao sobre los fosfolipidos de la membrana interna, fuga de
componentes citoplasmticos de dbil peso molecular como por
ejemplo iones de Potasio.
- Inhibicin de los enzimas fijados sobre la membrana como la ATPasa.
54
- Precipitacin de elementos del citoplasma por formacin de complejos
que poseen funciones fosfato como el ATP y los cidos nucleicos. (Mc
Donell G. 1999)
- No es esporicida, es esporoestatico, inhibe el crecimiento de las
esporas pero no su germinacin, es decir inhibe la formacin del
cortex entre la membrana interna y externa antes de que se de la
maduracin y liberacin de la espora (RUSELL,A.1990).
- En cuanto a las levaduras causa lisis del protoplasto y salida de
material intracelular, altas concentraciones causan coagulacin
intracelular.(Mc Donell G. 1999).

TABLA #7. EFECTIVIDAD DE DESINFECTANTES COMUNES
4Excelente 3Alta 2Media 1Baja 0Ninguna
(GTC 85. 2003)

2.7.4 Desinfeccin de superficies

No solo la clase de material, sino tambin el estado de la superficie sobre la
que acta influye esencialmente sobre el xito de las medidas higinicas. En
general las superficies lisas se limpian y desinfectan mejor que las rugosas y
agrietadas. (WILDBRETT,G.2000).
Cualquier proceso de limpieza debe ser compatible con el material y no
provocar su alteracin dejando grietas o fisuras que pueden albergar
bacterias difciles de eliminar o matar.(HOBS,B.1993). La limpieza manual
requiere un grado de diligencia y aplicacin, un enjuagado rpido y
Desinfectante Gram posit. Gram neg. Levaduras Mohos
Cloro 4 4 3 3
Yodoforos 4 4 4 4
Amonio cuaternarios 4 3 4 3
Desinfectantes cidos 4 4 3 1
Acido peractico 4 4 3 1
Biguanidas 4 4 3 3
55
descuidado no contribuir a la higiene de los alimentos y productos
relacionados.

2.8 CONTROL DEL EFECTO DESINFECTANTE

La comprobacin de la eficacia de los desinfectantes consiste en constatar
su accin inhibitoria y en determinar su accin letal .
Una prueba completa de eficacia comprende: - Comprobacin cualitativa del
efecto inhibidor mediante un mtodo de difusin en agar, como el test de los
posos.-Determinacin cuantitativa de la concentracin mnima inhibitoria en
una serie de diluciones.

2.8.1 Mtodos de evaluacin de Desinfectantes.

2.8.1.1 Mtodo del Coeficiente Fenolico
Este mtodo es adecuado para probar desinfectantes que se mezclan con
agua y ejercen accin antimicrobiana en forma similar al fenol. El
microorganismo de prueba que se emplea en este procedimiento es una
cepa especifica de Salmonella Typhi o Staphylococcus aureus .
(PELCZAR,M.1994).
A una serie de diluciones del desinfectante por probar (5 ml por tubo) se
agregan 0.5 ml de un cultivo de caldo del microorganismo de prueba
cultivado en 24 h. al mismo tiempo se hacen diluciones similares en las
mismas cantidades a una serie de diluciones de fenol. Todos los tubos
(desinfectante ms microorganismo y fenol ms microorganismo) se ponen
en bao termoestatado a 20C a intervalos de 5,10 y 15 min se hacen
subcultivos por medio de una asa de siembras en medio de cultivo estril.
Los tubos as sembrados se incuban y examinan para determinar el
desarrollo. (PELCZAR,M.1994).
56
La mayor dilucin del desinfectante que mate a los microorganismos en 10
min pero no en 5 se divide por la dilucin mayor del fenol que de los mismos
resultados. El nmero que se obtiene de esta divisin es el coeficiente
fenolico de la sustancia probada. (PELCZAR,M.1994)

2.8.1.2 Tcnica de la Dilucin en tubo
Primero se realizan diferentes diluciones del agente qumico. El mismo
volumen de cada dilucin se dispensa en tubos estriles (5 ml). A cada tubo
se le aade la misma cantidad de una suspensin del microorganismo
utilizado como prueba (0.5 ml). (MATEOS,P.1999).
A determinados intervalos de tiempo se transfiere una alcuota de cada tubo
a otro que contenga medio de cultivo. Estos tubos son inoculados se incuban
a la temperatura ptima del microorganismo utilizado. (MATEOS,P.1999).
Luego se examina el crecimiento mediante la aparicin de turbidez en el tubo
de (crecimiento +) o ausencia de turbidez en el tubo ( crecimiento -).
Aquellos que no presenten crecimiento indican la dilucin a la cual ese
agente qumico mata al microorganismo utilizado como prueba cuando este
microorganismo es expuesto al agente qumico durante este periodo de
tiempo. (MATEOS,P.1999).

2.8.1.3 Tcnica Placa de Agar
Se inocula una placa que contenga medio de cultivo slido con el
microorganismo utilizado como prueba. El agente qumico se coloca en el
centro de la placa bien dentro de un cilindro o impregnado en un sensidisco.
Al cabo de 24 o 48 horas se observan las zonas de inhibicin de crecimiento
alrededor del agente qumico. Una modificacin de esta tcnica es la
incorporacin del agente qumico en el medio de cultivo antes de verterlo
sobre la placa.
Una vez solidificado se inocula con el microorganismo utilizado como prueba,
se incuba y se examina el crecimiento microbiano. (MATEOS,P.1999).
57
2.8.1.4 Mtodo de Siembra por estras
Se prepara para cada ensayo una serie de tres diluciones del desinfectante a
concentraciones por encima y debajo de las recomendadas por el fabricante,
usando agua purificada proveniente de la planta de produccin.
Se toman 2.0 ml de cada concentracin del producto y a esta se le agregan
0.2 ml de la suspensin bacteriana segn el tubo # 2 de Mac Farland. Los
tiempos de contacto microorganismo-desinfectante varan.
Pasado cada uno de los tiempos de contacto se procede a sembrar con asa
calibrada por estrias haciendo trazos sobre la superficie del Agar Tripticasa
de Soya o Agar OGY.
Se toma como control la suspensin bacteriana que no tiene contacto con el
desinfectante.
Posteriormente se incuban las cajas a 35C por 48 h y los hongos a 25C
por 5 das.
Finalmente se interpreta el crecimiento de las estrias, cada una tiene un valor
de 25% as se expresara en % de efectividad de 0 a 100% donde el 100%
significa la ausencia se estrias excepto las del control. (CARRASCAL,A. 2003)

58
3. JUSTIFICACIN

La seguridad de los alimentos se ha convertido en los ltimos aos en un
requisito imprescindible para el consumidor, se han identificado las
consecuencias socioeconmicas de la contaminacin fisicoqumica y
microbiolgica por lo tanto, las plantas productoras deben tener procesos de
fabricacin adecuados y deben cumplir como proveedores con los
requerimientos de sus clientes y ajustarse a la legislacin sanitaria.

Adems resulta rentable para la empresa disminuir el numero de productos
rechazados y los costos de produccin, al emplear los recursos en
programas que ayuden a garantizar la calidad del producto como lo es el
Programa de Limpieza y Desinfeccin, lo que genera un aumento de
productividad. Conjuntamente contribuye a consolidar la imagen y
credibilidad de la empresa frente a los clientes, aumenta la competitividad
tanto en el mercado interno como externo y se evita el costo que tendra para
la empresa una intoxicacin alimentara debida a contaminacin microbiana
y la mala publicidad que estos hechos acarrearan.

Para el desarrollo de este trabajo se evaluar la eficacia del desinfectante
LARK SANITIZER utilizado en las reas de produccin de envases y
tapas plsticas destinados a contener alimentos teniendo como referencia 5
microorganismos contaminantes.

59
4. MATERIALES Y METODOS

4.1 FORMULACIN DELPROBLEMA

4.1.1 Poblacin universo
Desinfectante Lark Sanitizer, usado en la desinfeccin de superficies de
ECSI S.A.

4.1.2 Muestreo
El estudio se llevo a cab con seis muestreos, donde se enfrentaron 5
microorganismos: E.coli, S.aureus, B.subtillis, C.albicans y A.niger ante
tres concentraciones diferentes del desinfectante: a la mitad de la
concentracin recomendada, a la concentracin recomendada y al doble de
la concentracin recomendada, exponindolos a tres tiempos diferentes: 2,5
y 10 minutos.

4.1.3 Variables

4.1.3.1 Variable Dependiente
% de inhibicin donde la unidad experimental se analizara como de caja
de Petri.

4.1.3.2 Variable Independiente
Diferentes tiempos de contacto (2-5-10 min) desinfectante-microorganismo y
diferentes concentraciones de los agentes desinfectantes( Concentracin
recomendada a la mitad y al doble).

4.1.4 Mtodo de muestreo
La cantidad de desinfectante a usar se tom de las instalaciones de ECSI
S.A. y se transport al laboratorio de microbiologa de FLEXO SPRING S.A.
60
donde se realizaron los seis muestreos en los meses de Agosto y
Septiembre.

4.1.5 Analisis del porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer

Loa anlisis fueron de tipo experimental, exponiendo el desinfectante a
diferentes concentraciones y tiempos.

4.1.6 Hipotesis de estudio
Ho= El nivel promedio del porcentaje de inhibicin del agente desinfectante
es mayor o igual al 75%.
Ho= X > 75%
Hi= El nivel promedio del porcentaje de inhibicin del agente desinfectante es
menor al 75%.
Hi= X < 75% (PINTO,J.2000)

4.1.7 Anlisis estadstico de resultados
Se realizaron por medio del programa SPSS 13.0. Se efectuaron estadsticos
descriptivos, comparacin de medias a travs de la prueba T student para
buscar diferencias significativas.

61
5. OBJETIVOS

5.1 GENERAL

Evaluar la eficacia del desinfectante LARK SANITIZER en las reas de
elaboracin de envases y tapas plsticas en ECSI S.A.

5.2 ESPECIFICOS

- Evaluar In vitro la utilizacin del desinfectante LARK SANITIZER
usado en las reas de produccin de envases y tapas plsticas en
ECSI S.A.
- Determinar los tiempos adecuados de contacto desinfectante- rea a
desinfectar.
- Determinar si las condiciones recomendadas para la utilizacin de los
desinfectantes es la ideal o se deben realizar modificaciones.

62

6. METODOLOGA

6.1 MUESTREO

Para cada muestreo, se tomaron las cantidades de desinfectante Lark
Sanitizer y de agua de la utilizada normalmente en los procedimientos de
limpieza y desinfeccin de las superficies de ECSI S.A.
Posteriormente las muestras se llevaron al Laboratorio de microbiologa de
Flexo Spring S.A. para realizar los respectivos anlisis.

6.2 OBTENCIN DE LAS CEPAS

La seleccin de los microorganismos que se trabajaron se realiz teniendo
como criterio que son las recomendados por la Farmacopea Europea por ser
posibles contaminantes y causantes de enfermedad con seres humanos
(FARMACOPEA EUROPEA, 1997).
Las cepas se obtuvieron del Instituto Nacional de Salud, se trabaj con las
siguientes cepas liofilizadas: E.coli ATCC 25922, S.aureus ATCC 25923,
C.albicans ATCC 18804, B.subtillis ATCC 9372 y A.niger ATCC 16404

6.3 OBTENCIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios se compraron en el Instituto Nacional de Salud, Agar OGY en
cajas plsticas desechables por 20 ml y Agar Tripticasa de Soya en cajas
plsticas desechables por 20ml.
Las cajas fueron colocadas en neveras que mantuvieron las condiciones In
situ del lugar de almacenamiento. Y se transportaron al laboratorio para
comenzar con los muestreos.

63
6.4 RECUPERACIN DE MICROORGANISMOS LIOFILIZADOS

6.4.1 Las cepas liofilizadas se recuperaron segn los protocolos descritos por
la casa comercial .
6.4.2 Se realizaron 2 subcultivos y pruebas de pureza mediante la coloracin
de gram y azul de lactofenol antes de utilizar el aislamiento. (Ver Figuras 4-5-
6-7-8).

FIGURA 4. Aislamiento de Aspergillus niger

64

FIGURA 5. Aislamiento de Candida albicans

FIGURA 6. Aislamiento de Staphylococcus aureus

65

FIGURA 7. Aislamiento de Escherichia coli.

FIGURA 8. Aislamiento de Bacillus subtillis

66
6.5 PREPARACIN DE LA DILUCIN DEL DESINFECTANTE

Para cada uno de los seis muestreos se prepararon las siguientes diluciones:

- A la mitad de la concentracin de la recomendada por el fabricante:
0.5 ml de desinfectante Lark Sanitizer y 50 ml de agua

- A la dosis recomendada por el fabricante:
1 ml de desinfectante Lark Sanitizer y 100 ml de agua

- Al doble de la dosis recomendada:
2 ml de desinfectante Lark Sanitizer y 100 ml de agua

6.6 PREPARACIN DEL TUBO #2 DEL PATRN DE MAC FARLAND

Se tomaron 0.1 ml de BaCl2 al 1% y 4.9 ml de H2SO4 al 1%, lo que
corresponde a una concentracin de 6x108. (ESCOBAR, M.2002). Se agit el
tubo y de esta manera se obtuvo la muestra del patrn de turbidez.

6.7 PREPARACIN DE LA EMULSIN DE BACTERIAS DE HONGOS Y
LEVADURAS.

Se tomaron 5 tubos 13x100 estriles, a cada uno se les aadi 2 ml se agua
peptonada y con asa redonda estril se aadi la cantidad de cepa adecuada
de los cultivos madre que correspondiera con el patrn de turbidez del tubo #
2 de Mac Farland.
Se realizaron en total 3 aislamientos a partir de las cepas madre de los 5
microorganismos: E.coli, S.aureus, B.subtillis. A.niger y C. albicans. Para
conservar su viabilidad.

67
6.8 EVALUACIN DEL DESINFECTANTE LARK SANITIZER.

6.8.1 Se tomaron 2ml de cada concentracin (a la mitad, a la recomendada y
al doble) y del control (agua) con pipetas estriles y se llevaron a cuatro
tubos 13x100 para cada microorganismo.

6.8.2 Se aadieron 0.2 ml de la suspensin de cada una de las 5 cepas a las
concentraciones y al control.

6.8.3 Se agitaron los tubos y a partir de este momento se empez a
contabilizar 2 min, 5 min y 10 min.

6.8.4 Posteriormente segn se iba cumpliendo el tiempo se sembraba en las
cajas con los medios de cultivo OGY para C.albicans y A.niger y Tripticasa
de soya para B.subtillis, E.coli y S.aureus.

6.8.5 Las cajas se dividieron en 4 segmentos donde por medio de estras (4),
se sembraron las muestras a la mitad, a la recomendada y al doble de la
concentracin y el control segn se iban cumpliendo los tiempos 2 min, 5 min
y 10 min para cada microorganismo.
Este procedimiento de realiz para los seis muestreos.

6.8.6 Las cajas se incubaron a 22C por 5 das para Hongos y Levaduras y a
37C por 48 horas para bacterias.

6.9 LECTURA E INTERPRETACIN

Al cumplirse el tiempo de incubacin se leyeron los resultaron para el
posterior informe.

68
6.10 ANALISIS ESTADSTICOS

Los datos se analizaron con la ayuda del programa estadstico SPSS versin
13.0, el cual al registrar los datos arroj la media, desviacin estndar y
anlisis T-student, logrando correlacionar concentraciones del desinfectante
y tiempos de contacto que cumplieran con el porcentaje formulado en la
hiptesis propuesta.

69
7. RESULTADOS

Los resultados mostrados a continuacin estn divididos en dos secciones,
en la primera parte estn los porcentajes de inhibicin del desinfectante Lark
Sanitizer ante los microorganismos E.coli, S. aureus, B. Subtillis, C.
albicans y A.niger en los diferentes tiempo de contacto desinfectante-
microorganismo 2 min, 5 min y 10 min.

La segunda seccin corresponde a los anlisis estadsticos realizados que
incluyen estadstica descriptiva, estos se realizaron por medio del programa
estadstico SPSS versin 13.0 (media y desviacin estndar), y anlisis T
STUDENT. Para cada variable aparece su respectiva estadstica y la
explicacin de la prueba Tstudent con el fin de hacer los datos ms fciles de
entender, adems de grficas que muestran claramente los resultados.

7.1 PORCENTAJES DE INHIBICIN

7.1.1 Staphylococcus aureus

La siguiente tabla corresponde a los porcentajes de inhibicin de S. aureus
para los tiempo 2min, 5min y 10 min para las tres concentraciones.

70
Tabla 8 . Porcentaje de inhibicin para S. aureus
2 min 5 min 10 min Concentracin/Tiempo
%inhibicin %inhibicin %inhibicin
0.5% R1 0 0 25
R2 12.5 12.5 50
R3 0 0 50
R4 10 0 37.5
R5 12.5 12.5 50
R6 0 0 50
1% R1 37.5 100 100
R2 37.5 62.5 100
R3 50 75 100
R4 50 75 100
R5 50 75 100
R6 50 75 100
2% R1 100 100 100
R1 100 100 100
R2 100 100 100
R3 100 100 100
R4 100 100 100
R5 100 100 100
* 0.5% Mitad de la concentracin recomendada
1% Concentracin recomendada
2% Doble de la concentracin recomendada
Todos los controles arrojaron resultados del 100%

7.1.2 Escherichia.coli

La siguiente tabla corresponde a los porcentajes de inhibicin de E.coli para
los tiempo 2min, 5min y 10 min para las tres concentraciones.

71

Tabla 9 . Porcentaje de inhibicin para E.coli

2 min 5 min 10 min
Concentracin/Tiempo
0.5% R1 25 31.25 40
R2 55 62.5 62.5
R3 50 50 50
R4 25 50 40
R5 50 50 60
R6 50 50 50
1% R1 68 100 100
R2 75 75 100
R3 75 100 100
R4 80 80 100
R5 75 75 100
R6 75 80 100
2% R1 100 100 100
R2 100 100 100
R3 100 100 100
R4 100 100 100
R5 100 100 100
R6 100 100 100
* 0.5% Mitad de la concentracin recomendada

7.1.3 Bacillus .subtillis

La siguiente tabla corresponde a los porcentajes de inhibicin de B.subtillis
para los tiempo 2min, 5min y 10 min para las tres concentraciones

72
Tabla 10 . Porcentaje de inhibicin para B.subtillis

2 min 5 min 10 min Concentracin/Tiempo
0.5% R1 0 0 0
R2 0 0 0
R3 0 0 0
R4 0 0 0
R5 0 0 0
R6 0 0 0
1% R1 50 75 100
R2 67.5 100 100
R3 75 100 100
R4 60 75 100
R5 75 100 100
R6 50 67.5 100
2% R1 82 100 100
R2 70 100 100
R3 75 100 100
R4 80 100 100
R5 82 100 100
R6 80 100 100
* 0.5 Mitad de la concentracin recomendada

7.1.4 Candida .albicans

La siguiente tabla corresponde a los porcentajes de inhibicin de
C. albicans para los tiempo 2min, 5min y 10 min para las tres
concentraciones.

73

Tabla 11. Porcentaje de inhibicin para C.albicans

2 min 5 min 10 min
Concentracin/Tiempo
0.5% R1 62.5 62.5 100
R2 55 57.5 100
R3 50 75 100
R4 37.5 55 100
R5 50 62.5 100
R6 50 62.5 100
1% R1 75 75 100
R2 72 75 100
R3 75 75 100
R4 67.5 75 100
R5 75 75 100
R6 65 75 100
2% R1 75 75 100
R2 75 75 100
R3 75 75 100
R4 75 75 100
R5 75 75 100
R6 75 75 100

7.1.5 Aspergillus niger

La siguiente tabla corresponde a los porcentajes de inhibicin de A. niger
para los tiempo 2min, 5min y 10 min para las tres concentraciones.

74

Tabla 12 . Porcentaje de inhibicin para A.niger

2 min 5min 10 min
Concentracin/Tiempo
0.5% R1 0 0 0
R2 0 0 0
R3 0 0 0
R4 0 0 0
R5 0 0 0
R6 0 0 0
1% R1 0 0 0
R2 0 0 0
R3 0 0 0
R4 0 0 0
R5 0 0 0
R6 0 0 0
2% R1 0 0 0
R2 0 0 0
R3 0 0 0
R4 0 0 0
R5 0 0 0
R6 0 0 0

7.2 ANALISIS ESTADSTICO

7.2.1 Sthapylococcus aureus

Las siguientes tablas corresponden a los anlisis estadsticos descriptivos y
anlisis T student para el porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark
Sanitizer ante S. aureus.

75
Tabla 13. Estadsticos descriptivos y T student para S. aureus con 2 min de
contacto con el desinfectante.

Estadstica Descriptiva

Nmero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
estndar

Concentracin 0.5%

6

.00

12.50

5.8333

6.45497
Concentracin 1% 6 32.50 50.00 45.0000 7.90569
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

Analisis T-Student

Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
T
Grados
de
Libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto

Concentracin
0.5%
-26.247 5 .000 .000 -69.16667 -75.9407 -62.3926
Concentracin
1%
-9.295 5 .000 .000 -30.00000 -38.2965 -21.7035

En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de 5.83
con una desviacin estndar de 6.45 ,para la concentracin 1% la media fue
de 45 y la desviacin estndar de 7.90 y para la concentracin 2% y el
control la media fue de 100 por lo tanto arrojo una desviacin estndar de 0.
(Ver tabla 13)

En la prueba de T student para las concentraciones 0.5% y 1% no existe
evidencia estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
(intervalo de confianza del 95%). Para la concentracin 2% la media fue de
100 por lo tanto el desinfectante fue efectivo en un 100%. (Ver tabla 13).

76
Tabla 14. Estadsticos descriptivos para S. aureus S. aureus S. aureus S. aureus con 5 min de contacto con
el desinfectante.

Estadstica Descriptiva

Numero
de
Desviacin
estndar

Concentracin0.5%

6

.00

12.50

4.1667

6.45497
Concentracin 1% 6 62.50 100.00 77.0833 12.28990
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

Analisis T-Student

Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
T
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto

Concentracin
0.5%
-26.879 5 .000 .000 -70.83333 -77.6074 -64.0593
Concentracin
1%
.415 5 .415 .695 2.08333 -10.8141 14.9808

En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de
4.1667 con una desviacin estndar de 6.45 ,para la concentracin 1% la
media fue de 77.08 y la desviacin estndar de 12.2 y para la concentracin
2% y el control la media fue de 100 por lo tanto arrojo una desviacin
estndar de 0. (Ver tabla 14).

En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
mientras que para la concentracin 1% existe evidencia estadsticamente
significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el
microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05 (intervalo de confianza del
77
95%). Para la concentracin 2% la media fue de 100 por lo tanto el
desinfectante fue efectivo en un 100%. (Ver tabla 14).

Tabla 15. Estadsticos descriptivos para S. aureus S. aureus S. aureus S. aureus con 10 min de contacto
con el desinfectante.

Estadistica Descriptiva

Numero de
Desviacin
estndar

Concentracin 0.5%

6

25.00

50.00

43.7500

10.45825
Concentracin 1% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

Analisis T-Student

Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto

Concentracin
0.5%
-7.319 5 .000 .001 -31.25000 -42.2253 -20.2747

con una desviacin estndar de 10.458, para las concentraciones 1 %- 2%
y el control la media fue de 100 por lo tanto arrojo una desviacin estndar
de 0. (Ver tabla 15).

mientras que para las concentraciones 1% y 2% existe evidencia
desinfectante ante el microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05
78
(intervalo de confianza del 95%), por lo tanto el desinfectante fue efectivo en
un 100%. (Ver tabla 15).

PORCENTAJE DE INHIBICIN DEL DESINFECTANTE LARK SANITIZER
ANTE S. aureus
Grafica 1 . Porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer ante S.aureus.

7.2.2 Escherichia coli

Sanitizer ante E. coli.

0
20
40
60
80
100
120
2min 5min 10min
Tiempo
%

I
n
h
i
b
i
c
i
n
Mitad concent.
Concent.
recomendada
Doble concent.
Control
79
Tabla 16. Estadsticos descriptivos y T student para E.coli con 2 min de

Estadisticos Descriptivos

Numero de
Desviacin
estndar

Concentracin 0.5%

6

25.00

55.00

42.5000

13.69306
Concentracin 1% 6 68.00 80.00 74.6667 3.82971
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

Analisis T-Student

Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
t
Grados
de
Libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto

Concentracin
0.5%
-5.814 5 .001 .002 -32.50000 -46.8700 -18.1300
Concentracin
1%
-.213 5 .419 .840 -.33333 -4.3524 3.6857

de 74.666 y la desviacin estndar de 3.829 y para la concentracin 2% y el
(Ver tabla 16).

80

Tabla 17. Estadsticos descriptivos para E. coli con 5 min de contacto con el
desinfectante.


Numero de
Desviacin
estndar

Concentracin 0.5%

6

31.25

62.50

48.9583

10.01301
Concentracin 1% 6 75.00 100.00 85.0000 11.83216
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

Analisis T-Student

Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto

Concentracin
0.5%
-6.371 5 .000 .001 -26.04167 -36.5497 -15.5337
Concentracin
1%
2.070 5 .046 .093 10.00000 -2.4171 22.4171

con una desviacin estndar de 10.01, para la concentracin 1% la media fue
de 85.0 y la desviacin estndar de 11.83 y para la concentracin 2% y el
(Ver tabla 17).

81

Tabla 18 . Estadsticos descriptivos para E. coli con 10 min de contacto con
el desinfectante.


Numero de
Desviacin
estndar

Concentracin 0.5%

6

40.00

62.50

50.4167

9.54158
Concentracin 1% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

Analisis T-Student

Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
t
Grados
de
Libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto

Concentracin
0.5%
-6.311 5 .000 .001 -24.58333 -34.5966 -14.5701

con una desviacin estndar de 9.54, para las concentraciones 1% - 2% y el
(Ver tabla 18).

82
un 100%. (Ver tabla 18)

ANTE E.coli.

Grafica 2 . Porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer ante E.coli

7.2.3 Bacillus subtillis

Sanitizer ante B. subtillis.
0
20
40
60
80
100
120
2min 5min 10min
Tiempo
%

I
n
h
i
b
i
c
i
n
Mitad concent.
Concent.
recomendada
Doble concent.
Control
83

Tabla 19 .Estadsticos descriptivos y T student para B.subtillis con 2 min de

Analisis Estadisticos

Numero de
Desviacin
estndar

Concentracin 0.5%

6

.00

.00

.0000

.00000
Concentracin 1% 6 50.00 75.00 62.9167 11.44734
Concentracin 2% 6 70.00 82.00 78.1667 4.75044
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

Anlisis T-Student

Valor = 75
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
95% Intervalo de
confianza
Bajo Alto

Concentracin
0.5%
-2.586 5 .024 .049 -12.08333 -24.0966 -.0701
Concentracin
1%
1.633 5 .081 .163 3.16667 -1.8186 8.1519

En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de 0 con
una desviacin estndar de 0 ,para la concentracin 1% la media fue de
62.91 y la desviacin estndar de 11.44, para la concentracin 2% la media
fue de 78.16 y la desviacin estndar de 4.75 mientras que el control arroj
una media de 100 por lo tanto se obtuvo una desviacin estndar de 0. (Ver
tabla 19).

En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no se realiz por tener
una media de 0, para la concentracin 1% no existe evidencia
84
95%). (Ver tabla 19)

Tabla 20. Estadsticos descriptivos para B.subtillis con 5 min de contacto


Numero de
Desviacin
estndar

Concentracin 0.5%

6

.00

.00

.0000

.00000
Concentracin 1% 6 67.50 100.00 86.2500 15.30931
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

Analisis T-Student

Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto

Concentracin
0.5%
1.800 5 .065 .132 11.25000 -4.8161 27.3161

una desviacin estndar de 0 ,para la concentracin 1% la media fue de
86.25 y la desviacin estndar de 15.30, para la concentracin 2% y el
control la media fue de 100 por lo tanto se obtuvo una desviacin estndar
de 0. (Ver tabla 20)

85
una media de 0, para las concentraciones 1% y 2% existe evidencia
(intervalo de confianza del 95%). (Ver tabla 20).

Tabla 21. Estadsticos descriptivos para B.subtillis con 10 min de contacto

Estadistica Descriptiva

Numero de
Desviacin
estndar

Concentracin 0.5%

6

.00

.00

.0000

.00000
Concentracin 1% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

una desviacin estndar de 0 ,para la concentracin 1% , 2% y el control la
media fue de 100 y la desviacin estndar de 0 (Ver tabla 21).
La prueba de T student no se realiz en este caso por tener desviaciones
estndar de 0 por lo tanto no exista diferencia de medias.

86
ANTE B.subtillis.

Grafica 3 . Porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer ante
B.subtillis

7.2.4 Candida albicans

Sanitizer ante C.albicans.

Tabla 22 . Estadsticos descriptivos y T student para C.albicans con 2 min de

0
20
40
60
80
100
120
2min 5min 10min
Tiempo
%

I
n
h
i
b
i
c
i
n
Mitad concent.
Concent.
recomendada
Doble concent.
Control
87

Numero de
Desviacin
estndar

Concentracin 0.5%

6

37.50

62.50

50.8333

8.16497
Concentracin 1% 6 65.00 75.00 71.5833 4.36368
Concentracin 2% 6 75.00 75.00 75.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

Analisis T-Student

Valor = 75
95% Confidence
Interval of the
Difference
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto

Concentracin
0.5%
-7.250 5 .000 .001 -24.16667 -32.7353 -15.5981
Concentracin
1%
-1.918 5 .056 .113 -3.41667 -7.9961 1.1627

de 71.58 y la desviacin estndar de 4.363, para la concentracin 2% la
media fue de 75.0 con una desviacin estndar de 0 y el control obtuvo una
media de 100 con una desviacin estndar de 0. (Ver tabla 22).

95%), para la concentracin 2% no se realiz la prueba ya que el valor
arrojado para la desviacin estndar corresponde a 0 por lo tanto no exista
diferencia de medias. (Ver tabla 22).
88
Tabla 23. Estadsticos descriptivos para C. albicans con 5 min de contacto


Numero de
Desviacin
Estndar

Concentracin 0.5%

6

55.00

75.00

63.3333

7.18795
Concentracin 1% 6 75.00 75.00 75.0000 .00000
Concentracin 2% 6 75.00 75.00 75.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

Analisis T-Student

Valor = 75
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
95% Intervalo de
confianza
Bajo Alto

Concentracin
0.5%
-3.976 5 .005 .011 -11.66667 -19.2100 -4.1234

de 75 y la desviacin estndar de 0, para la concentracin 2% la media fue
de 75 con una desviacin estndar de 0 y el control obtuvo una media de
100 con una desviacin estndar de 0. (Ver tabla 23)
(intervalo de confianza del 95%), para las concentraciones 1% y 2% no se
realiz la prueba ya que el valor arrojado para la desviacin estndar
corresponde a 0 por lo tanto no exista diferencia de medias. (Ver tabla 23).

89
Tabla 24. Estadsticos descriptivos para C. albicans con 10 min de contacto


Numero de
Desviacin
Estndar

Concentracin 0.5%

6

100.00

100.00

100.0000

.00000
Concentracin 1% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

En los anlisis descriptivos la media para la concentraciones 0.5%, 1%, 2% y
el control fue de 100 con una desviacin estndar de 0 por lo tanto el
desinfectante tuvo un porcentaje de inhibicin del 100% (Ver tabla 24).
La prueba de T student no se realiz ya que los datos arrojaron una
desviacin estndar de 0 por lo tanto no exista diferencia de medias

ANTE C.albicans.

Grafica 3 . Porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer ante
B.subtillis.
0
20
40
60
80
100
120
2min 5min 10min
Tiempo
%

I
n
h
i
b
i
c
i
n
Mitad concent.
Concent.
recomendada
Doble concent.
Control
90

Sanitizer ante A.niger.

Tabla 25. Estadsticos descriptivos y T student para A. niger con 2 min- 5
min-10 min de contacto con el desinfectante.


Numero de
Desviacin
estndar

Concentracin 0.5%

6

.00

.00

.0000

.00000
Concentracin 1% 6 .00 .00 .0000 .00000
Concentracin 2% 6 .00 .00 .0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000

En los anlisis descriptivos la media para las concentraciones 0.5%, 1%, 2%
el control fue de 0 con una desviacin estndar de 0 por lo tanto el
desinfectante tuvo un porcentaje de inhibicin del 0%. El control arrojo una
media de 100% con una desviacin estndar de 0 (Ver tabla 25).
desviacin estndar de 0 por lo tanto no exista diferencia de medias.

91
ANTE A. niger.

Grafica 5 . Porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer ante A.niger.

0
20
40
60
80
100
120
2min 5min 10min
Tiempo
%

I
n
h
i
b
i
c
i
n
Mitad concent.
Concent.
recomendada
Doble concent.
Control
92
8. DISCUSIN

8.1 Porcentajes de inhibicin

8.1.1 Staphylococcus aureus

Tal como se puede analizar en las tablas 8, 13 y en la figura 1 se demostr
que el desinfectante Lark Sanitizer a los dos minutos con una
concentracin a la mitad de la recomendada no tiene accin bactericida por
encima del criterio aceptado (75%) frente a este microorganismo. Al analizar
los datos empleando la concentracin al 1% que es la recomendada por la
casa comercial se observ un aumento en el porcentaje de inhibicin pero
tampoco cumpli con el mnimo de aceptacin (75%), sin embargo al
emplear una concentracin al 2% que es el doble de la recomendada se
logr un porcentaje de inhibicin del 100%.
En la tablas 8,14 y en la grfica 1 se demuestra que bajo 5 min de contacto
microorganismo-desinfectante la accin contra S.aureus es baja con la
concentracin a la mitad , al incrementarla a la recomendada y al doble
aumentan los porcentajes de inhibicin cumpliendo con el criterio de
aceptacin.
De la misma manera como se observa en la tabla 8,15 y grfica 1 a los 10
min se logr un aumento en el porcentaje de inhibicin a la mitad de
concentracin , mientras que a la concentracin recomendada y al doble el
porcentaje fue de 100%.
Esto demuestra que el dao est influido por el tiempo, y la concentracin
del agente, en este caso el desinfectante se debe usar a la concentracin
recomendada por el proveedor con un tiempo de cinco minutos, de lo
contrario al disminuir la concentracin y el tiempo no existe garanta de la
accin contra el microorganismo y al aumentar estos parmetros se corre el
riesgo de generar resistencias, y alterar el mecanismo de accin sobre estos
93
microorganismos que tal como observ en la revisin bibliografica
(MADIGAN,M.1991) se basa en la rpida atraccin del desinfectante con carga
positiva hacia la clula Gram. positiva con carga negativa en su superficie
gracias a los cidos teicicos presentes en su pared celular , posteriormente
el desinfectante acta contra los fosfolipidos presentes en la membrana
citoplasmtica inactivndola, destruyendo la integridad de la clula
liberndose al medio componentes que la integran, afectando el ATP y
cidos nucleicos compuestos de grupos fosfato (Mac Donell,G.1999)
producindose la muerte celular.

8.1.2 Escherichia coli

Los resultados de la inhibicin del desinfectante frente a E.coli se observan
en la tabla 9, al analizar las pruebas estadsticas se pudo concluir que a los
2-5 y 10 minutos de exposicin el desinfectante solo fue efectivo a la
concentracin recomendada y al doble ya que a la mitad no alcanz a
cumplir con el criterio aceptado.(Tabla16-17)

E.coli present un promedio de inhibicin de 74.7% (Tabla 16) con la
concentracin recomendada y en el menor tiempo empleado, cifra que
permite deducir que el desinfectante ejerce una buena accin sobre el
microorganismo y por ende se puede controlar (Grfica 2).

Su susceptibilidad se debi a que adems del peptidoglicano las bacterias
Gram. negativas poseen en su pared una capa adicional que no consta
solamente de fosfolipidos como la membrana citoplasmtica, sino que
contiene polisacridos y protenas (MADIGAN,M.1991). De esta manera el
compuesto activo del desinfectante polihexametilen biguanida se dirige a
los iones fosfato de los fosfolipidos ubicados en la membrana exterior y a los
que hacen parte del lipopolisacrido compuesto de (Heptosa-glucosa-
94
galactosa-n-acetilglucosamina y fosfato (MADIGAN,M.1991). As el
desinfectante desestabiliza la membrana y se une a los iones fosfato pero
de la membrana citoplasmtica que posee iones calcio y magnesio que
contribuyen a su estabilizacin a travs de interacciones inicas con los
grupos polares de carga negativa como el fsforo que al ser afectado por el
desinfectante rompe estos enlaces acabando con la estabilidad de la
membrana y permitiendo la fuga de componentes como el potasio e
interactuando con componentes que poseen la funcin fosfato como el ATP y
los cidos nucleicos (Mc Donell,G.1999), generando la muerte celular.

8.1.3 Bacillus subtillis

De acuerdo a los resultados obtenidos presentados en las tablas 10 y 20 , la
concentracin y el tiempo recomendado a utilizar para este microorganismo
es de 1% con cinco minutos de contacto.
Tal como se observa en la tabla 19 20 y 21 la concentracin a la mitad en
todos los tiempos evaluados fue totalmente ineficaz, la concentracin
recomendada (0.1%) fue til en los tiempos 5 y 10 mientras que la
concentracin al doble fue eficaz en todos los tiempos evaluados. (Grfica 3).
Comparndolo con S.aureus coco Gram. positivo la concentracin a la mitad
fue totalmente inefectiva en B. Subtillis mientras que al aumentarla a la
recomendada (concentracin al 1%) se igualaron los porcentajes de
inhibicin pero no los tiempos de contacto siendo Bacillus subtillis ms
resistente tal como se ve en las tablas 16 y 20.
Esta diferencia se debi tal vez a que est especie tiene la capacidad de
formar esporas como estructuras de resistencia , y si en el momento de
inocular el microorganismo en el tubo con la mitad de concentracin del
desinfectante existan bacterias esporuladas este tendra una dbil funcin
esporoesttica permitiendo as la recuperacin de las esporas en el medio
de cultivo al realizar la prueba de estras. Al aumentar el tiempo de contacto y
95
las concentraciones el desinfectante ejerci su accin contra las esporas
impidiendo la formacin del cortex entre la membrana interna y externa antes
de la maduracin y liberacin de la espora madura. (RUSELL,A.1990),
impidiendo nuevamente su desarrollo en el medio de cultivo propuesto para
desarrollar este estudio.

8.1.4 Candida albicans

El comportamiento de reduccin de esta especie frente al criterio de
aceptacin (75%) se evidenci a los cinco minutos con la concentracin
recomendada (tabla 23).

A los dos minutos de contacto tal y como se observa en la tabla 22 solo se
logr cumplir con el criterio de inhibicin aceptado para el desinfectante
aumentado la concentracin al doble, mientras que a los 10 minutos en todas
las concentraciones el porcentaje de inhibicin fue del 100% (Grfica 4).
No obstante se deben buscar breves plazos de destruccin de grmenes con
bajas concentraciones (WILDBRETT,G.2000) . As que para causar la lisis del
protoplasto y ocasionar la salida del material celular (MAC DONELL G.1999) se
deben manejar tiempos no mayores a cinco minutos y concentraciones que
no excedan la concentracin recomendada por la casa comercial 1% v/v.


Este microorganismo para todas las concentraciones y todos los tiempos
evaluados en este estudio obtuvo un porcentaje de crecimiento del 100%
(tabla 12), lo que demuestra que el desinfectante probado no ejerce accin
funguicida ni fungiestatica (tabla 25- Grfica 5).

96
Los hongos son generalmente ms resistentes que las levaduras y
considerablemente ms resistentes que las bacterias no esporuladas. Las
esporas de los hongos son menos resistentes que las esporas bacterianas a
los agentes biocidas, (Mac Donell and Rusell. 1999)

Lo que tambin se corrobora con referencias bibliograficas (LEVEAU,J.2002)
ya que como se ha mencionado anteriormente el agente activo del
desinfectante polihexametilen biguanida acta primordialmente contra los
grupos fosfato, las paredes fngicas estn compuestas de polisacridos,
mientras que los lpidos, polifosfatos e iones inorgnicos forman nicamente
una matriz cementante (MADIGAN,M.1991) por lo cual el desinfectante no
puede ejercer su accin contra la quitina del hongo.

Segn los autores Mac Donall and Rusell estos microorganismos presentan
mecanismos de resistencia donde la clula presenta una barrera para reducir
la entrada de un agente microbiano; por esta razn se ha propuesto el uso de
este desinfectante a base de biguanidas polimricas con otras soluciones
que no conlleven a su desactivacin.

Por ejemplo la actividad fngica de los alcoholes esta bien documentada,
destruyen eficazmente las bacterias y los hongos pero no las endoesporas.
Tienen la ventaja de actuar y evaporarse con rapidez y de no dejar ningn
residuo. Dos de los ms usados son el etanol y el isopropanol (Tortora, G.
1993). La concentracin optima del etanol es de 70% con 5 minutos de
contacto. Es importante tener en cuenta que el alcohol puro es menos eficaz
que las soluciones acuosas de esta manera, con esta solucin es suficiente
para que se de una coagulacin de las protenas que trae como
consecuencia la perdida de las funciones celulares especificas, adems
pueden interferir con el metabolismo ejerciendo una accin bacterioesttica
97
que es debida a la inhibicin de la produccin de metabolitos esenciales para
la rpida divisin celular. (Aldana-Sarasa. 1999).

As mismo se ha utilizado conjuntamente con amonios cuaternarios para
incrementar su eficacia (Mateos, F.1999). Los cuales actan sobre las
protenas, por el efecto tensoactivo desnaturaliza la protena por disociacin
a nivel del grupo prosttico.
Afecta el metabolismo ya que interacta con las enzimas a nivel
citoplasmtico, estimulndola gliclisis y alterando la dinmica enzimtica de
la clula completando la accin de las biguanidas. (Aldana-Sarasa. 1999).

Es importante tener en cuenta que una mezcla inadecuada de estas
soluciones puede resultar en desactivacin de las mismas, por esta razn
hay que realizarlas siguiendo los parmetros adecuados.

Gracias a los resultados obtenidos se puede determinar que el desinfectante
Lark Sanitizer para uso sobre superficies present un buen
comportamiento inhibitorio sobre los microorganismos excepto A. niger,
teniendo un porcentaje igual o mayor al 75% utilizando la concentracin
recomendada por la casa comercial 1% v/v con cinco minutos de contacto
microorganismo desinfectante.

Es importante anotar que los controles realizados para esta metodologa
fueron satisfactorios con un 100% de crecimiento.

98
9. CONCLUSIONES

Los datos de la evaluacin del desinfectante Lark Sanitizer
demostraron que la dilucin de uso segn la casa comercial proveedora
es efectiva para los microorganismos E.coli ATCC 25922, S.aureus
ATCC 25923, C.albicans ATCC 18804, B.subtillis ATCC 9372 .

Se logro concluir segn los datos de la evaluacin del desinfectante
Lark Sanitizer que el tiempo efectivo en este estudio contra los
microorganismos E.coli ATCC 25922, S.aureus ATCC 25923,
C.albicans ATCC 18804, B.subtillis ATCC 9372 es de cinco minutos.

La eficacia del desinfectante Lark Sanitizer frente a A.niger ATCC
16404 es nula, ya que present 0% de inhibicin.

Se comprob que el dao celular es un proceso que esta influido por
el tiempo de exposicin, la concentracin del agente y la cepa patgena.

99
10. RECOMENDACIONES

Es importante continuar con la segunda fase de este estudio, donde se
deben aislar e identificar los microorganismos que puedan encontrarse
en las reas de produccin y probar sobre estos las diluciones del
desinfectante.

Se debe incluir dentro del programa de desinfeccin desinfectantes con
alto espectro para hongos, levaduras y microorganismos esporulados.

Realizar pruebas In Vivo donde se midan cuantitativamente los
microorganismos antes y despus de realizar el proceso de desinfeccin.

Es recomendable realizar estudios similares con el otro desinfectante
usado en las superficies de ECSI S.A., as como al jabn y al gel
desinfectante empleado por los manipuladores.

100
11. BIBLIOGRAFA

ALDANA, Luisa y SARASSA, Sandra. 1999. Efecto de
desinfectantes y antimicrobianos naturales frente a cepas de Listeria
monocytogenes. Tesis de pregrado. Pontificia Universidad Javeriana.
Facultad de ciencias. Departamento de Microbiologa. Bogota.
Colombia.
CARRASCAL A. PAEZ A. 2003. Manual de Laboratorio. Microbiologa
de Alimentos. Facultad de ciencias. Departamento de
Microbiologia.Ed. Ceja. 1 Ed. 171 pag.
ECSI S.A. 2004. Manual de Calidad.5,10-15pag.
ELEY A. 1994. Intoxicaciones alimentaras de etiologa microbiana.
Editorial Acribia. Zaragoza Espaa. 208 pag.
ESCOBAR M. 2002. Fundamentos de microbiologa. Ed ceja. Bogot.
Pag 313.
Europhean Pharmacopea. 1991. 3Ed. Francia. Pag 5-8.
FORTUNE W. 2004. Ciencia e ingeniera de materiales. Tercera
edicin. Editorial Mac Graw Hill. Bogota Colombia.570 pag.
GARNEDNER J.1991. Introduction to sterilization, desinfection and
infection control. Ed Churchill. Livintone. Second edition. New York.
GAVIRIA B. Control microbiologico en la Inustria.Manual de Practicas.
Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de Ciencias. Bogota.
GTC 85. 2002. Gua de limpieza y desinfeccin para plantas de
alimentos. ICONTEC.
HERNANDEZ O. 1991. Los Antispticos y desinfectantes en el manejo
de la infeccin hospitalaria. Tesis de Pregrado Universidad Nacional
de Colombia.
101
HOBS B,1993 Higiene y toxicologa de los alimentos. Ed. Acribia.
Espaa..470 pag.
IKEDA T. 1984. New polimeric biocides: Sntesis and antibacterial
activities of polications with pendant biguanide groups. Antimicrobial
agents and chemotherapy. 26 (2). 139-144.
IKEDA T. 1986. New polimeric biocides: Polications biocides with
pendant active groups molecular weight dependence of antibacterial
activity. Antimicrobial agents and chemotherapy. 30 (1). 132-136
JOKLINK W. 1986. Zinder Microbiologa. 18 ED. Editorial Medica
Panamericana. Buenos Aires.
LEVEAU J. 2002. Manual tcnico de higiene. Limpieza y desinfeccin.
AMU Ediciones. Madrid Espaa. 623 pag.
MAC DONELL G.1999. Antiseptics and desinfectans: Activity, Action,
and Resistence. Clinical Microbiology Rewiews. 147-179 pag.
MADIGAN M. 1991. Microbiologa. Ed Prentice Hall. Mxico. 67,69,75-
79 PAG.
MARRIOT N.1999.Principios de Higiene Alimentara. Ed Acribia. 416
pag.
MERK. 2000. Microbiology Manual.
MINISTERIO DE SALUD.1997. Buenas Practicas de Manufactura.
Decreto 3075.
MINK W. 1991. El plstico en la industria. Segunda edicin. Mxico.
PELZARC M. 1994. Microbiologa. Segunda Edicin. Ed Mac Graw
Hill. Mxico.
PINTO, Jorge y ULLOA, Juan.2000.Evaluacin y validacin de tres
desinfectantes para uso en superficies, un jabn liquido desinfectante
para manos y un gel desinfectante para manos en una empresa
farmacutica. Tesis de pregrado. Pontificia Universidad Javeriana.
102
Facultad de ciencias. Departamento de microbiologa. Bogota
Colombia.
SENA. 1995. IV Seminario internacional de Procesos de
Transformacin de plsticos por Inyeccin. Aplicaciones en materiales
de Ingenieria. Cali. Colombia. 718 pg.
TORTORA, G. 1993. introduccin a la microbiologa. Ed Acribia.
Barcelona Espaa. Pag 175-191.
TYLER B. 2002. Actino of clorhexidine digluconato againts yeast and
filamentous forms in a early stages Candida albicans biofilm
antimicrobial agents and chemotherapy. 46 (11) 3522-3531.
VIDALES M. 1995. El mundo del envase, manual para el diseo y
produccin de envases y embalajes. Barcelona.
WILBRETT G. 2000. Limpieza y desinfeccin en la industria
alimentara. Ed. Acribia.

Recursos electronicos

http://www.microbiologia.com.ar (Consulta: Agosto 20. 2006)
www.infodynamics.com.uy/validation.as (Consulta: Septiembre 8.
2006)
www.paho.org/spanish/ad/ths/ev/mot (Consulta: Septiembre 8. 2006)

103

12. ANEXOS
ANEXO A. IMGENES

FIGURA 9. Siembra en estra para S. aureus.

FIGURA 10. Siembra en estra para E. coli.

104

FIGURA 11. Siembra en estra para B. subtillis.

FIGURA 12. Siembra en estra para Calbicans.
105

FIGURA 13. Siembra en estra para Calbicans.

106
ANEXO B
Composicin de los Medios de Cultivo

OGY AGAR (Oxitetraciclina Glucosa Levadura Agar)

Extracto de Levadura 5.0
Glucosa 10
Agar-agar 15
Oxitetraciclina 0.1
Gentamicina 0.05

TRIPTICASA DE SOYA AGAR

Peptona de Caseina
Peptona de soya
Lactosa
Cloruro de sodio
Polisorbato
Lecitina
Agar-agar

107
EVALUACIN DE LA EFICACIA DEL DESINFECTANTE LARK SANITIZER
EMPLEADO EN LAS AREAS DE ELABORACIN DE ENVASES Y TAPAS
PLSTICAS EN ECSI S.A.

EVALUACIN DE LA EFICACIA DEL DESINFECTANTE LARK SANITIZER

Correo electrnico: and1716@yahoo.com
BOGOT

108
Resumen

La contaminacin de los alimentos y bebidas por parte de los
microorganismos, es un tema de gran precaucin, debido a la capacidad que
tienen de afectar la seguridad del producto y la aceptacin por parte del
consumidor. Problemas de calidad se asocian directamente con la
contaminacin microbiana de materias primas, antes o durante el
procesamiento del producto o a travs del empaque. Los errores en los
planes de saneamiento y desinfeccin son generalmente los responsables de
la contaminacin y por lo tanto la perdida del producto.

En el presente trabajo se busc evaluar el desinfectante Lark Sanitizer
usado en la desinfeccin de las superficies de las reas de produccin de
envases y tapas en ECSI S.A.

El mtodo utilizado fue el de siembra en estras, se evalu el porcentaje de
inhibicin del desinfectante a base de Biguanidas cuyo compuesto activo es
el polihexametilenbuguanida ante 5 microorganismos con propiedades y
caractersticas diferentes: S. aureus ATCC 25923, E. coli ATCC 25922,
C. albicans ATCC 18804, B.subtillis ATCC 9372 y A. niger ATCC 16404.
Se determin la eficacia de tres concentraciones, a la mitad, a la
recomendada, y al doble de la sugerida por la casa comercial, adems se
conjugaron con tres tiempos diferentes 2-50 y 10 minutos.

Segn los resultados, se concluy que el desinfectante Lark Sanitizer es
efectivo a una concentracin de 1% por un tiempo de 5 minutos para
S. aureus , E. coli , C. albicans y B.subtillis sin embargo no tuvo ninguna
accin inhibitoria contra A. niger.

Palabras clave: Desinfectante, microorganismos, porcentaje de inhibicin.

109
Abstract

The food and drink contaminate for microbial is a topic of big precaution
because the capacity that they have to affect the product, safety and the
acceptation for the client. Quality problems are associated directly with the
microbe contamination of primary ingredients before or during the product
process, or through of the pack. The mistakes in surety and safety are
commonly culprit of the contaminate and the loss product.

The purpose of this study was evaluate the disinfectants Lark Sanitizer
used in cleaner and disinfections process of surface in the production rooms
of container and cover.

The technique used was sowing in groove, the inhibit percentage was
evaluate with the disinfectant with PHMB, opposite to 5 microbes with
property different: S. aureus, E. coli, B. subtillis, C. albicans and A. niger.
The efficacy was determinate with three concentrations : the middle,
recommend and the double recommended by the business house, further
more this concentrations were combine with three different times: 2-5-10
minutes.

According to the result, was deduce that Lark Sanitizer disinfectant is
effective with 1% concentration whit 5 minutes of time for S. aureus, E. coli,
B. subtillis and C. albicans, in the other hand this hadn any inhibit action
with A. niger.

Keywords: Disinfectant, microbes, inhibit percentaje.

110
1. Introduccin

El mantenimiento de unas condiciones adecuadas y seguras en la
manipulacin industrial de alimentos exige la implementacin de mecanismos
que aseguren la higiene total de superficies, equipos, manos y utensilios de
trabajo.
Eliminar o neutralizar las impurezas y suciedades siguiendo un Programa de
medidas de Limpieza y Desinfeccin teniendo en cuenta que es un flujo
constante resulta fundamental para prevenir contaminaciones y por lo tanto el
riesgo de infecciones alimentaras.
El pblico consumidor espera disponer de alimentos exentos de
microorganismos patgenos y toxinas con una capacidad de conservacin
especfica y el fabricante espera que su producto se mantenga en el
mercado, por esta razn para eliminar patgenos o elementos contaminantes
de superficies, instalaciones o manos no basta con aplicar mtodos de
limpieza convencionales por el contrario, se necesita implementar algn
sistema capaz de vencer las fuerzas de unin electrostticas o fisicoqumicas
que se dan entre las impurezas y las superficies.

El objetivo de este trabajo fue evaluar la eficacia del desinfectante LARK
SANITIZER utilizado en las reas de produccin de envases y tapas
plsticas destinados a contener alimentos teniendo como referencia 5
microorganismos contaminantes.

2. Materiales y mtodos

2.1 Muestreo: Para cada muestreo, se tomaron las cantidades de
desinfectante Lark Sanitizer y de agua de la utilizada normalmente en los
procedimientos de limpieza y desinfeccin de las superficies de ECSI S.A.
Posteriormente las muestras se llevaron al Laboratorio de Microbiologa de
Flexo Spring S.A. para realizar los respectivos anlisis.

2.2 Preparacin de la dilucin del desinfectante : Para cada uno de los seis
muestreos se prepararon las siguientes diluciones: A la mitad de la
concentracin de la recomendada por el fabricante: 0.5 ml de desinfectante
Lark Sanitizer y 50 ml de agua. A la dosis recomendada por el fabricante: 1
ml de desinfectante Lark Sanitizer y 100 ml de agua. Al doble de la dosis
recomendada: 2 ml de desinfectante Lark Sanitizer y 100 ml de agua.

2.3 Preparacin de la emulsin de bacterias de hongos y levaduras.
Se tomaron 5 tubos 13x100 estriles, a cada uno se les aadi 2 ml se agua
peptonada y con asa redonda estril se aadi la cantidad de cepa adecuada
de los cultivos madre (E.coli, S.aureus, B.subtillis. A.niger y C. albicans )
que correspondiera con el patrn de turbidez del tubo # 2 de Mac Farland.
111
2.4 Evaluacin del desinfectante lark sanitizer: Se tomaron 2ml de cada
concentracin (a la mitad, a la recomendada y al doble) y del control (agua)
con pipetas estriles y se llevaron a cuatro tubos 13x100 para cada
microorganismo posteriormente se aadieron 0.2 ml de la suspensin de
cada una de las 5 cepas a las concentraciones y al control. Se agitaron los
tubos y a partir de este momento se empez a contabilizar 2 min, 5 min y 10
min. Luego se sembr por el mtodo de estras en las cajas con los medios
de cultivo OGY para C.albicans y A.niger y Tripticasa de soya para
B.subtillis, E.coli y S.aureus.
Las cajas se incubaron a 22C por 5 das para Hongos y Levaduras y a 37C
por 48 horas para bacterias.

2.5 Al cumplirse el tiempo de incubacin se leyeron los resultaron para el
posterior informe.

3. Resultados

3.1 S. aureus

Para los 2 min en los anlisis descriptivos la media para la concentracin
0.5% fue de 5.83 con una desviacin estndar de 6.45 ,para la concentracin
1% la media fue de 45 y la desviacin estndar de 7.90 y para la
concentracin 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto arrojo una
desviacin estndar de 0.
En la prueba de T student para las concentraciones 0.5% y 1% no existe
evidencia estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
100 por lo tanto el desinfectante fue efectivo en un 100%.
A los 5 Min en los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5%
fue de 4.1667 con una desviacin estndar de 6.45 ,para la concentracin
1% la media fue de 77.08 y la desviacin estndar de 12.2 y para la
concentracin 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto arrojo una
desviacin estndar de 0.
desinfectante fue efectivo en un 100%.
Por ultimo con 10 min de contacto En los anlisis descriptivos la media para
la concentracin 0.5% fue de 43.75 con una desviacin estndar de 10.458,
para las concentraciones 1 %- 2% y el control la media fue de 100 por lo
112
tanto arrojo una desviacin estndar de 0. En la prueba de T student para la
concentracin 0.5% no existe evidencia estadsticamente significativa de que
el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el microorganismo sea
mayor al 75% ya que p<0.05 mientras que para las concentraciones 1% y 2%
existe evidencia estadsticamente significativa de que el porcentaje de
inhibicin del desinfectante ante el microorganismo es mayor al 75% ya que
p>0.05 (intervalo de confianza del 95%), por lo tanto el desinfectante fue
efectivo en un 100%.

3.2 E. coli

En los anlisis descriptivos a loS 2 minutos la media para la concentracin
0.5% fue de 42.50 con una desviacin estndar de 13.69 ,para la
concentracin 1% la media fue de 74.666 y la desviacin estndar de 3.829 y
para la concentracin 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto arrojo
una desviacin estndar de 0.
En la prueba de T student a los 2 minutos para la concentracin 0.5% no
existe evidencia estadsticamente significativa de que el porcentaje de
inhibicin del desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya
que p<0.05 mientras que para la concentracin 1% existe evidencia
100 por lo tanto el desinfectante fue efectivo en un 100%.
Con 5 minutos de contacto En los anlisis descriptivos la media para la
concentracin 0.5% fue de 48.9 con una desviacin estndar de 10.01, para
la concentracin 1% la media fue de 85.0 y la desviacin estndar de 11.83 y
para la concentracin 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto arrojo
una desviacin estndar de 0.
desinfectante fue efectivo en un 100%.
Finalmente a los 10 minutos En los anlisis descriptivos la media para la
concentracin 0.5% fue de 50.41 con una desviacin estndar de 9.54, para
las concentraciones 1% - 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto
arrojo una desviacin estndar de 0.
113
un 100%.

3.3 B. subtillis

A los dos minutos en los anlisis descriptivos la media para la concentracin
0.5% fue de 0 con una desviacin estndar de 0 ,para la concentracin 1% la
media fue de 62.91 y la desviacin estndar de 11.44, para la concentracin
2% la media fue de 78.16 y la desviacin estndar de 4.75 mientras que el
control arroj una media de 100 por lo tanto se obtuvo una desviacin
estndar de 0.
una media de 0, para la concentracin 1% no existe evidencia
95%).
Con cinco minutos de contacto en los anlisis descriptivos la media para la
concentracin 0.5% fue de 0 con una desviacin estndar de 0 ,para la
concentracin 1% la media fue de 86.25 y la desviacin estndar de 15.30,
para la concentracin 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto se
obtuvo una desviacin estndar de 0.
una media de 0, para las concentraciones 1% y 2% existe evidencia
(intervalo de confianza del 95%).
En ltimo lugar a los 10 minutos en los anlisis descriptivos la media para la
concentracin 0.5% fue de 0 con una desviacin estndar de 0 ,para la
concentracin 1% , 2% y el control la media fue de 100 y la desviacin
estndar de 0 .La prueba de T student no se realiz en este caso por tener
desviaciones estndar de 0 por lo tanto no exista diferencia de medias.

3.4 C. albicans

Alos dos minutos en los anlisis descriptivos la media para la concentracin
0.5% fue de 58.83 con una desviacin estndar de 8.164 ,para la
concentracin 1% la media fue de 71.58 y la desviacin estndar de 4.363,
para la concentracin 2% la media fue de 75.0 con una desviacin estndar
de 0 y el control obtuvo una media de 100 con una desviacin estndar de 0.
114
95%), para la concentracin 2% no se realiz la prueba ya que el valor
arrojado para la desviacin estndar corresponde a 0 por lo tanto no exista
diferencia de medias.
Con cinco minutos de contacto la media para la concentracin 0.5% fue de
63.33 con una desviacin estndar de 7.187 ,para la concentracin 1% la
media fue de 75 y la desviacin estndar de 0, para la concentracin 2% la
media fue de 75 con una desviacin estndar de 0 y el control obtuvo una
media de 100 con una desviacin estndar de 0.
(intervalo de confianza del 95%), para las concentraciones 1% y 2% no se
realiz la prueba ya que el valor arrojado para la desviacin estndar
corresponde a 0 por lo tanto no exista diferencia de medias.
A los 10 minutos la media para la concentraciones 0.5%, 1%, 2% y el control
fue de 100 con una desviacin estndar de 0 por lo tanto el desinfectante
tuvo un porcentaje de inhibicin del 100% .

3.5 A. niger

En los anlisis descriptivos la media con los tiempos 2-5-10 min y para las
concentraciones 0.5%, 1%, 2% el control fue de 0 con una desviacin
estndar de 0 por lo tanto el desinfectante tuvo un porcentaje de inhibicin
del 0%. El control arrojo una media de 100% con una desviacin estndar de
0.

4. Discusin

4.1 S. aureus

El dao est influido por el tiempo, y la concentracin del agente, en este
caso el desinfectante se debe usar a la concentracin recomendada por el
proveedor con un tiempo de cinco minutos, de lo contrario al disminuir la
concentracin y el tiempo no existe garanta de la accin contra el
microorganismo y al aumentar estos parmetros se corre el riesgo de
115
generar resistencias, y alterar el mecanismo de accin sobre estos
microorganismos que se basa en la rpida atraccin del desinfectante con
carga positiva hacia la clula Gram. positiva con carga negativa en su
superficie gracias a los cidos teicoicos presentes en su pared celular ,
posteriormente el desinfectante acta contra los fosfolipidos presentes en la
membrana citoplasmtica inactivndola, destruyendo la integridad de la
clula liberndose al medio componentes que la integran, afectando el ATP
y cidos nucleicos compuestos de grupos fosfato (Mac Donell,G.1999)
producindose la muerte celular.

4.2 E. coli

La susceptibilidad del microorganismo se debi a que adems del
peptidoglicano las bacterias Gram. negativas poseen en su pared una capa
adicional que no consta solamente de fosfolipidos como la membrana
citoplasmtica, sino que contiene polisacridos y protenas (MADIGAN,M.1991).
De esta manera el compuesto activo del desinfectante polihexametilen
biguanida se dirige a los iones fosfato de los fosfolipidos ubicados en la
membrana exterior y a los que hacen parte del lipopolisacrido compuesto de
(Heptosa-glucosa-galactosa-n-acetilglucosamina y fosfato (MADIGAN,M.1991)).
As el desinfectante desestabiliza la membrana y se une a los iones fosfato
pero de la membrana citoplasmtica que posee iones Calcio y Magnesio
que contribuyen a su estabilizacin a travs de interacciones inicas con los
grupos polares de carga negativa como el Fsforo que al ser afectado por el
desinfectante rompe estos enlaces acabando con la estabilidad de la
membrana y permitiendo la fuga de componentes como el potasio e
interactuando con componentes que poseen la funcin fosfato como el ATP y
los cidos nucleicos (Mc Donell,G.1999), generando la muerte celular.

4.3 B.subtillis

Esta especie tiene la capacidad de formar esporas como estructuras de
resistencia , y si en el momento de inocular el microorganismo en el tubo con
la mitad de concentracin del desinfectante existan bacterias esporuladas
este tendra una dbil funcin esporoesttica permitiendo as la recuperacin
de las esporas en el medio de cultivo al realizar la prueba de estras. Al
aumentar el tiempo de contacto y las concentraciones el desinfectante ejerci
su accin contra las esporas impidiendo la formacin del cortex entre la
membrana interna y externa antes de la maduracin y liberacin de la espora
madura. (RUSELL,A.1990), impidiendo nuevamente su desarrollo en el medio
de cultivo propuesto para desarrollar este estudio.

116
4.4 C. albicans

Para causar la lisis del protoplasto y ocasionar la salida del material celular
(MAC DONELL G.1999) se deben manejar tiempos no mayores a cinco minutos
y concentraciones que no excedan la concentracin recomendada por la
casa comercial 1% v/v.

4.5 A. niger

Este microorganismo para todas las concentraciones y todos los tiempos
evaluados en este estudio obtuvo un porcentaje de crecimiento del 100% , lo
que demuestra que el desinfectante probado no ejerce accin funguicida ni
fungiestatica .
El agente activo del desinfectante polihexametilen biguanida acta
primordialmente contra los grupos fosfato, las paredes fngicas estn
compuestas de polisacridos, mientras que los lpidos, polifosfatos e iones
inorgnicos forman nicamente una matriz cementante (MADIGAN,M.1991) por
lo cual el desinfectante no puede ejercer su accin contra la quitina del
hongo.

5. Agradecimientos

Este estudio fue realizado gracias a la colaboracin de ECSI S.A quien
financi y asesoro la realizacin de este proyecto. Gracias a la Dra Janeth
Arias por su colaboracin, a la Dra Rosa Edith Useche por su apoyo y a la
Dra Paola Rojas su constante ayuda.

6. Literatura citada

1) BROCK T. 1991. Microbiologa. Ed Prentice Hall. Mxico.
2) MAC DONELL G.1999. Antiseptics and disinfectants: Activity, Action,
and Resistance. Clinical Microbiology Reviews. 147-179 pag.
3) RUSELL A. 1990. Bacterial spores and chemical sporicidal agents.
Clinical microbiology Rewiew.3 (2). 99-119.

Yodo Ver

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