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Ciclo celular
Kinases dependentes de Ciclinas (CDKs)
e
Ciclinas
27-02-2014
Faculdade de Cincias -
Dep. Biologia, U.P.
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Foram identificados dezenas de genes cdc, atravs de mutaes, em
cada uma das 2 espcies de leveduras, Schizosaccharomyces pombe e p y p
Saccharomyces cerevisiae
Estudos bioqumicos revelaram a funo exacta de alguns produtos
gnicos (exDNA ligases)
Por tecnologia de DNA recombinante foi possvel isolar clones dos
genes cdc. O DNA clonado e introduzido num organismo pode
complementar o respectivo mutante conduzindo ao fentipo normal complementar o respectivo mutante conduzindo ao fentipo normal.
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Genes cdc (cell-division-cycle) identificados, um
conhecido como cdc2 em Schizosaccharomyces pombe (levedura c/
cissiparidade) e
cdc28 (start) em Saccharomyces cerevisiae (levedura c/ gemiparidade),
difi P t i h l d MPF ( it ti codifica uma Protena cinase homloga do MPF (mitose promoting
factor dos vertebrados)
- Outro, cdc13, em levedura, codifica uma protena homloga de ciclina
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Funo
Ocdc28ecdc2codificamumaprotenade34000Da(p34
cdc2
)que
umcomponenteessencialdosmecanismosdeStart ede
l d d i controlodeentradaemmitose
Genescodificandoprotenassemelhantesestopresentesem
diferentesorganismos,talvezemtodososeucariontes.
Levedurasmutantesparaogenecdc28(levedurasque
normalmente no se dividem) quando so transformadas com o
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normalmentenosedividem)quandosotransformadascomo
genedap34
cdc2
deArabidopsis voltamadividirse.
Aproteina p34
cdc2
umacinase quefosforila resduosdeserina e
treonina emprotenas.
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A actividadecinasedap34
cdc2
controlada pela interacocom
ciclinas que a activam. Em diferentes fases do ciclo celular interage
com diferentes ciclinas(identificadas cerca de 12).
O incio da mitose desencadeado pela activao da p34
cdc2
pela
ciclina B.
Entre as protenas fosforiladasno incio da mitose esto as laminas
(protenas semelhantes s protenas dos filamentos intermdios do
citoesqueleto que formam uma rede na face interna do invlucro
nuclear responsvel pela integridade do invlucro)
Ciclinasactivam fosforila
cinasep34
cdc2
laminas
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cinasep34
cdc2
laminas
Laminas fosforiladas despolimerizaminvlucro nuclear desorganiza-se
desfosforila
Fosfatase laminas
Laminas desfosforiladaspolimerizamreorganizaodo invlucro nuclear
no fim da telofase
.
A diviso celular, uma das caractersticas mais notrias da vida,
apresenta elementos de controlo que so comuns quer a
Procariontes quer a Eucariontes.
N E i l i id Nos Eucariontes a conservao evolutiva evidente porque em
espcies to diversas como leveduras e humanos a progresso
atravs das sucessivas fases do ciclo celular (G1,S,G2 e M)
controlada por uma classe de Kinases heterodimricas
(heterodimeric serine/threonine proteinkinases).
Complexos kinase
Subunidade cataltica, kinase-dependentede-ciclina (CDK)
Subunidade activadora, ciclina (CYC)
Activados mediante fosforilao por uma kinase activadora de CDK (CAK).
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Regulaoda actividade
dos complexosCDK-CYC
A actividade dos complexos CDK-CYC
regulada a diversos nveis. eguada a d e sos es
Pode ser regulada pela abundncia dos
seus componentes CDK ou Ciclina (CYC)
mediante controlo de transcrio,
traduo, localizao intracelular,
destruio regulada,
ou pela regulao da actividade de
fosforilao de uma Kinase activadora de
CDK (CAK).
(E t Ki ti d d CDK (CAK) ti
CAK
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(Esta Kinase activadora de CDK (CAK) activa
os complexos CDK-CYC fosforilando-os).
Adicionalmente a actividade pode ser
inibida por fosforilao que impede a
dimerizao, ou pela ligao de protenas
inibidoras, KRP, ao local activo.
CKS - CDK subunit proteins scaffold interactions with target
substrates.
KRP - Kip-relatedproteins.
Diversidade de CDKs e Ciclinas nas plantas
Nos ltimos anos, estudos de biologia molecular permitiram identificar em diversas
espcies vegetais vrias protenas (>150) semelhantes a Cyclin-Dependent Kinases CDKs.
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Tipo A classe melhor caracterizada; compreende kinases relacionadas com as tpicas CDKs, cdc2 /
cdc28 de leveduras, e CDK1 e CDK2 de animais, que utilizam um motivo conservado PSTAIRE no
domnio de ligao Ciclina; (Pro, Ser, Thr, Ala, Ile, Arg, Glu)
Tipo B - Vrias CDKs no-PSTAIRE nas plantas;
Tipos C, D, E, F, G
Outras no includas nestas classes de CDKs com base nas suas sequncias de similaridade esto
includas na CDK like kinases (CKLs); acresce, ainda, que algumas espcies tm mais do que uma
representante de um determinado tipo de CDK.
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Foram identificadas numerosas Ciclinas em diversas espcies vegetais.
As ciclinas compreendem vrias classes (A, B, D, H e L - homlogas em mamferos e plantas; E, F,
G, I - sem homlogos em plantas) com base em anlises de sequncias de um motivo conservado
cyclinbox.
As letras A, B, D... reflectem a semelhana com as ciclinas A, B, D, ... de mamferos.
Das diversas CDKs e Ciclinas actualmente identificadas em leveduras e animais, muitas no tm qualquer
relao com o controlo do ciclo celular.
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:. Nas plantas, foram identificadas diversas CDKs e respectivas Ciclinas, que
incluem as que actuamno controlo do ciclo celular.
Destas protenas (CDKs e Ciclinas) algumas so capazes de substituir as
funes das suas homlogas em leveduras e em animais (tabelas 1 e 2).
CDKs:
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Ciclinas:
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Localizao intracelular de CDKse Ciclinasnas plantas
As Ciclinas abundam nas fases G2e Mdo
ciclo celular.
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Diversas experincias mostraram que no controlo do ciclo celular intervm :
CDKs como CDC2aAt (G1-S e G2-M) e CDC2bAt (aumenta a fase G2) e
Ciclinas como CYCB1;1 (limita a diviso celular)
E ( RNA Expresso (mRNA
e protena) e
actividade de CDKs
(cdc2)
CDKs
Expresso (mRNA)
de Ciclinas
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Controlo do
ciclo celular
A progresso do ciclo celular
mittico envolve sucessivamente
a formao, activao e
subsequente inactivao de
Kinases Dependentes de Ciclinas
(CDKs). As Kinases ligam-se
sequencialmente a uma srie de
Ciclinas (responsveis por
activao diferencial de Kinases
durante o ciclo celular).
A transio G1-S controlada por
complexos CDKs-CycD que
fosforilama protena
Retinoblastoma Retinoblastoma libertando factores
de transcrio E2F, envolvidos na
transcrio de genes necessrios
transio G1-S.
A transio G2-M desencadeada
por CDKs-CycA ou CycB. Os
complexos CDK so mantidos
inactivos atravs de fosforilao inactivos atravs de fosforilao
por uma Kinase WEE, e de
interaco com protenas
inibidoras (CKIs). Na transio G2-
M a kinase activada pela
libertao de CKI por
desfosforilao por uma fosfatase
e por fosforilao por CAK.
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Genetics and Molecular Biology, 24 (1-4), 61-68 (2001)
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Controlo do ciclo celular nas plantas umModelo
Aps estimulo mitognicoso sintetizadas
ciclinas D (CycD) que se associam com CDKs
Tipo A. O complexo resultante fosforilauma
protena tipo Retinoblastoma (Rb), tal como
acontece nos animais, resultando na libertao
de Protenas de Interaco com Rb RB-
InteractingProteins, RIP (E2F/DP). g ( )
Estas RIP (E2F/DP) desencadeiam a fase S. As
CycD tm tempo de vidacurto devido
presena de sequncias PEST que as marcam
para degradao.
Durante a fase S, so sintetizadas CycA que
activam CDKs-A. medida que a fase S
progride, a actividade de CDKs inibida por
fosforilao da tirosina (Tyr).
CDKs-A e CDKs-B podem associar-se com
CycB (que surgem em G2 ), estes complexos
tm actividade kinase no ponto G2/M.
A activao e funcionamento de CDKs
mitticos requer a sua associao com o factor
de acoplamento Cks1 e a remoo do grupo
fosfato inibidor. Este processo final
dependente de citocininas.
As Cyc A/B so destruidas durante a fase M
(na sua estrutura proteica tm motivos
especficos de degradao).
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E2F/DP
Controlo do ciclo celular nas plantas umModelo
O ciclo celular pode ser interrompido pela
associao de inibidores CKIs (ICK) com os
complexos CDKs-A.
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E2F/DP
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When plant cells decide to divide Stals H, Inz D. 2001. Trends in Plant Science, 6(8):359-364
Modelo para as transies G1-S e G2-M nas plantas, baseado nos resultados obtidos em plantas e no paralelismo
com o controlo do ciclo celular nos mamferos.
Durante G1 fito-hormonas como Auxinas, Citocininas,
ABA, Giberelinas, Brassinoesteroides (BR) e H.C.,
regulam a expresso de CycD e da sua unidade
cataltica CDK CDK--AA.
A activao do complexo CDK CDK--AA/CycD requer: A activao do complexo CDK CDK AA/CycD requer:
dissociao da proteina Inibidora de CDK (ICK) (cuja
transcrio induzida pela hormona sensvel ao
stress, ABA), e
fosforilao de Thr160 na CDK-A pela Kinase
Activadora de CDK (CDKD;1) que regulada
positivamente pelo GA.
O complexo CDK CDK--AA/CycD activo fosforila a proteina
Retinoblastoma (RB) no final da fase G1, libertando o
complexo E2F-DP (RIP) que promove a transcrio
gnica necessria para a progresso para a fase S.
Auxinas, Citocinina e GA, como activadores mitticos,
promovendoa transcrio de CDKs CDKs e de Cyc A e B
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Citocininainduz actividademitticadaCDK promovendo asua
associao comCyc efosforilaes-desfosforilaes especficas
promovendo a transcrio de CDKs CDKs e de Cyc-A e B
regulam a actividade kinase de CDKs CDKs- -AA e BB.
A transio G2-M est associada com activao da
CDK, por fosforilaoda Thr160 pela Kinase Activadora
de CDK (CAK) e pela desfosforilao(por uma
fosfatase, cdc25) dos locais (Thr14 e Tyr15) de
fosforilao inibitria, induzidas pela citocinina.
Uma via de degradao dependente da ubiquitina marca
a Cyc-B para protelise pelo Complexo Promotor da
Anafase(APC), na transio metafase-anafase
activando, assim, a sada de mitose