Vous êtes sur la page 1sur 30

CONTROL RESPIRATORIO

CURVAS DE CONSUMO DE OXIGENO

Prof. Dra. Silvia González-Calvar


Prof. Dr. Héctor Coirini
Instrucciones

En la siguiente presentación encontrará cuadros con texto y


cuadros con gráficos.
Para favorecer la lectura de los primeros, cada cuadro está
preparado para avance manual, es decir cuando termine de leer
este cuadro, deberá pulsar la tecla o bien AvPag para avanzar
y si desea retroceder o RePag.
En los cuadros con gráficos, espere a que aparezca una flecha
verde en el ángulo inferior derecho, antes de pulsar las teclas de
avance o retroceso.
Introducción

En condiciones fisiológicas, el transporte de electrones


en la cadena respiratoria mitocondrial está acoplado a la
fosforilación de ATP. Recordemos que, desde el punto de
vista termodinámico, dos procesos están acoplados cuando la
energía libre liberada por uno de ellos (proceso exergónico) es
utilizada por el otro (proceso endergónico), el cual, de otra
manera, no podría ocurrir espontáneamente. Esto se pone en
evidencia cuando observamos que en la cadena respiratoria
(proceso exergónico), los electrones pueden fluir sólo si el
ADP es simultáneamente fosforilado a ATP (proceso
endergónico). Así, el consumo de oxígeno mitocondrial está
regulado no sólo por el aporte de NADH, sino también por los
niveles de ADP y Pi.
Introducción

La regulación de la velocidad de fosforilación oxidativa


por los niveles de ADP se denomina CONTROL RESPIRATORIO.
Este mecanismo regulatorio permite que, cuando los niveles de
ADP se incrementan como consecuencia de un gasto de ATP,
paralelamente aumenta la velocidad de fosforilación oxidativa
para reponer el ATP consumido. Debido a que la fosforilación
oxidativa está acoplada a la cadena de transporte de electrones,
el incremento en la velocidad de la fosforilación oxidativa se
refleja por un aumento en el flujo de electrones a través de la
cadena respiratoria y, por lo tanto, del consumo de oxígeno (o
bien por una disminución en la concentración del oxígeno del
entorno).
Introducción

En condiciones experimentales, el control respiratorio


puede evaluarse en suspensiones mitocondriales de un dado
tejido en presencia de oxígeno. Las mitocondrias deben estar
intactas y ser incubadas con un medio con sustratos
oxidables que permitan la generación de coenzimas
reducidas. Las variaciones en el consumo de oxígeno son
evaluadas por un dispositivo que tiene un electrodo sensible a
las concentraciones de oxígeno (polarógrafo). Observar que
un aumento en el consumo de oxígeno se traduce en una
disminución en la concentración de oxígeno.
Introducción
Los cambios en la velocidad de consumo de oxígeno
(consumo de oxígeno en la unidad de tiempo) de la
suspensión mitocondrial puede comprobarse agregando ADP
al medio: esto provoca un rápido aumento en el consumo de
oxígeno.
Cuando las mitocondrias son suspendidas en un
medio en el cual existe una alta concentración de sustratos,
fosfatos y oxígeno, se encuentran en un estado metabólico
llamado “estado 4” y la respiración es lenta. Cuando se añade
ADP se estimula la síntesis de ATP y se incrementa la
velocidad del transporte de electrones, y por lo tanto, del
consumo de oxígeno: este estado metabólico se lo llama
“estado 3”, y permanece así hasta que se consume el ADP
añadido.
Gráfico 1
Mitocondrias de hígado en suspensión
Concentración de

ADP + Pi
oxígeno

E4
E3

TIEMPO
Se denomina CONTROL RESPIRATORIO a la relación entre la
respiración en el estado 3 y la correspondiente al estado 4.

Otro índice útil para evaluar la actividad mitocondrial


es la relación P:O, es decir, la relación entre el fosfato
incorporado al ATP y el oxígeno consumido al oxidar el
sustrato. Tanto el control respiratorio como la relación P:O,
son utilizados para expresar el grado de acoplamiento entre
los procesos de oxidación y de fosforilación. Valores bajos de
control respiratorio o de índice P:O indican mitocondrias
dañadas o desacopladas.
ESTADOS METABÓLICOS MITOCONDRIALES

Estado O2 Nivel de ADP Nivel de Velocidad de Factor


Metabólico sustrato de la respiración determinante
cadena de la actividad
respiratoria respiratoria

1 Disponible Bajo Bajo Lenta ADP

2 Disponible Alto Muy bajo Lenta Sustrato de la


cadena
respiratoria

3 Disponible Alto Alto Rápida Cadena


respiratoria

4 Disponible Bajo Alto Lenta ADP

5 No disponible Alto Alto Nula Oxígeno


(anaerobiosis)
La evolución de la concentración de oxígeno en una
suspensión mitocondrial en función de los niveles de ADP y
sustrato se puede ver en el
Gráfico 2

Inicialmente, las mitocondrias están suspendidas en un


medio con bajo nivel de sustrato y de ADP, en presencia de
oxígeno.
A.- Las mitocondrias no consumen oxígeno porque al
carecer de sustrato oxidable no generan coenzimas
reducidas y por lo tanto no requieren oxígeno para su
reoxidación.

B.- El agregado de malato no modifica marcadamente el


consumo de oxígeno por falta de ADP, por lo tanto no se
observa variación en la concentración de oxígeno. El bajo
nivel de ADP sólo produce una ligera disminución de la
concentración de oxígeno (o bien, un ligero incremento en
el consumo de oxígeno.
C.- El agregado de ADP exógeno permite que ocurra la
fosforilación oxidativa y, por lo tanto, hay una disminución en
la concentración de oxígeno (aumento en el consumo de
oxígeno). El ADP agregado se va agotando a medida que la
fosforilación oxidativa ocurre. Esto se refleja con el cambio de
pendiente que se observa al final de esta fase.

D.- El agregado de ADP no modifica los niveles de oxígeno


presentes. Esta situación se debe al agotamiento del sustrato.

E.- El agregado de más sustrato reestablece el sistema y la


suspensión mitocondrial respira activamente.
Mitocondrias de hígado en suspensión

Malato
Concentración de

A
B ADP + Pi

C Malato
oxígeno

D
E

TIEMPO
ALGUNOS COMPUESTOS QUE INTERFIEREN
EN LA CADENA RESPIRATORIA Y LA
FOSFORILACION OXIDATIVA
Tipo de interferencia: Inhibición de la transferencia de electrones

Cianuro (CN-)
Inhiben la citocromo oxidasa
Monóxido de carbono (CO)
(Complejo IV)
Azida sódica (Na3N)

Bloquea la transferencia de electrones


Antimicina A
desde el citocromo b al citocromo c1

Inhiben la transferencia de electrones


Rotenona
desde un centro Fe-S de la NADH
Amital
deshidrogenasa (Complejo I) a la
Piercidina A
ubiquinona (CoQ)
Inhibe la transferencia de electrones a
Malonato nivel de la succinato deshidrogenasa
(Complejo II)
CH3 CH3
CH2CH
CH3
CH3 CH2CH2CH2CH2CH2CH3

Antimicina A
ALGUNOS COMPUESTOS QUE INTERFIEREN
EN LA CADENA RESPIRATORIA Y LA
FOSFORILACION OXIDATIVA

Tipo de interferencia: Inhibición de la ATPsintasa

Oligomicina
Bloquea el flujo de protones a través de Fo
Venturicidina

Tipo de interferencia: Inhibición del intercambio ATP-ADP

Atractilósido Inhibe la adenina nucleótido translocasa.


Oligomicina
H2C-OH CH2
O H3C
KO3SO O

KO3SO OH
O
O
COOH

H3C CH3

Atractilósido
ALGUNOS COMPUESTOS QUE INTERFIEREN
EN LA CADENA RESPIRATORIA Y LA
FOSFORILACION OXIDATIVA

Tipo de interferencia: Desacoplamiento de la fosforilación oxidativa y


el transporte de electrones

Dinitrofenol Actúan como ácidos débiles,


Carbonil-cianuro disminuyendo la concentración de
fenil hidrazona protones en el espacio intermembrana.

Ionóforo del K+, disminuyendo el


Valinomicina
gradiente eléctrico

Forma poros conductores de protones


Proteína desacopladora
en la membrana interna de la
(termogenina)
mitocondria del tejido adiposo marrón.
HO
NO2

NO2
2,4-Dinitro-fenol
2,4-Dinitro-fenol

Valinomicina
EJEMPLOS DE CURVAS DE CONSUMO DE
OXÍGENO CON EL AGREGADO DE
COMPUESTOS QUE INTERFIEREN EN LA
CADENA RESPIRATORIA Y LA
FOSFORILACION OXIDATIVA
Mitocondrias de hígado en suspensión

Succinato
Concentración de

ADP + Pi
CN-
oxígeno

DNF

TIEMPO
A.- La suspensión mitocondrial en un entorno aeróbico y sustratos
oxidables consume oxígeno.

B.- Al agregar un sustrato oxidable se aumenta la velocidad de consumo


de oxígeno y por lo tanto la concentración de oxígeno disminuye y
también la del ADP endógeno, por lo tanto este compuesto comienza a ser
limitante.

C.- Al agregarle ADP + Pi, la velocidad de consumo de oxígeno aumenta


significativamente y entonces, la concentración de oxígeno disminuye en
forma abrupta.

D.- Al agregar cianuro, que es un inhibidor del complejo IV (citocromo


oxidasa) se bloquea el transporte de electrones y, por lo tanto, no hay
consumo de oxígeno. La concentración de oxígeno no se modifica.

E.- Al agregar 2,4 dinitro-fenol que es un desacoplante de la fosforilación


oxidativa, sigue sin variar la concentración de oxígeno, es decir no se
reanuda el consumo de oxígeno porque la cadena respiratoria continúa
bloqueada por el cianuro que se agregó en los pasos anteriores.
Mitocondrias de hígado en suspensión

Succinato
ADP + Pi
Concentración de

OLIG
oxígeno

DNF

[O2] = 0

TIEMPO
A.- La suspensión mitocondrial en un entorno aeróbico y sustratos
oxidables consume oxígeno.

B.- Al agregar un sustrato oxidable se aumenta la velocidad de consumo


de oxígeno y por lo tanto la concentración de oxígeno disminuye y
también la del ADP endógeno, por lo tanto este compuesto comienza a
ser limitante.

C.- Al agregarle ADP + Pi , la velocidad de consumo de oxígeno aumenta


significativamente y entonces, la concentración de oxígeno disminuye
en forma abrupta.

D.- Al agregar oligomicina, que es un inhibidor de la fracción Fo de la


ATP sintasa, se bloquea la síntesis de ATP y por lo tanto, también se
bloquea el transporte de electrones porque ambos procesos están
acoplados. Así, no hay consumo de oxígeno y la concentración del
mismo se mantiene constante.

E.- Al agregar 2,4 dinitro-fenol que es un desacoplante de la fosforilación


oxidativa, se reanuda el consumo de oxígeno (disminuye la
concentración del mismo) porque la cadena respiratoria puede funcionar
normalmente a pesar de que no hay síntesis de ATP.
Bibliografía

Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations. T.M. Devlin


(ed). Wiley Liss, New York, 1997.

Principios de Bioquímica. A.L. Lehninger, D.L. Nelson, M.M.


Cox. Ediciones Omega, Barcelona, 1995.

Alvarez S, Novoa Bermúdez MJ, Boveris A. La mitochondria:


estructura, función y especies reactivas del Oxígeno.
Antioxidantes y calidad de vida. 2 (5): 14-22, 1995.
Muchas gracias por su atención !

En el archivo adjunto puede encontrar una


cryco.pdf

copia de esta presentación