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). Os animais com
glicemia maior ou igual a 200 mg/dl, foram considerados diabticos (includos no
grupo experimental) e aqueles com glicemia inferior foram descartados do
experimento. Outra observao importante para avaliar a diabete o elevado
consumo de gua, reduo de peso, alterao na pelagem e intensa diurese. O
nmero de mortes foi reduzido pela limpeza diria das gaiolas e manuteno de
gua nas garrafas. Pesagem e confirmao da diabete foram realizadas
semanalmente.
4.1.4 Tcnica de Imobilizao
Previamente os animais foram anestesiados com Cetamina 60 mg/kg e
Xilasina 8 mg/kg de peso do animal por via intraperitoneal, ataduras de algodo com
4 cm de largura foram utilizadas nas articulaes para prevenir a formao de
lceras de presso. Para os grupos imobilizados, o membro posterior direito foi
imobilizado com esparadrapo impermevel (marca Cremer com 10 cm de largura),
que incluram a pelve, quadril, joelho (ambos em extenso) e o tornozelo (em flexo
plantar). Em seguida os animais foram enfaixados com o esparadrapo de modo
convencional em pequenas tiras de 5 cm de largura e 15 cm de comprimento cada,
tiras diferentes para o membro e o tronco, sem muita presso de torque. A
imobilizao foi substituda quando danificada e mantida por duas semanas. Os
animais j divididos em seus respectivos grupos foram colocados em gaiolas
plsticas com livre acesso rao e gua. A imobilizao no impediu a locomoo
dentro da gaiola.
A imobilizao foi realizada quando os ratos completaram oito semanas
de vida permanecendo duas semanas de imobilizao.
39
4.1.5 Sacrifcio dos animais
Os animais foram sacrificados por concusso cerebral de acordo com a
Resoluo do Conselho Federal de Medicina Veterinria (CFMV) N 714,
20/06/2002, e em seguida pesados para posterior dissecao do nervo citico direito
para anlise do potencial de ao composto no sistema extracelular e dos gnglios
direitos da raiz dorsal no sistema intracelular.
4.1.6 Soluo
O nervo citico e gnglio da raiz dorsal foram nutridos com soluo de
Locke modificada, contendo a seguinte composio (em mM): NaCl: 140, KCl: 5,6;
MgCl
2
: 1,2; CaCl
2
: 2,2; Tris-Hidroximetil-Aminometano (TRIS): 10; Glicose: 10.
A soluo de Locke teve o pH ajustado para 7,4 0,01 utilizando
Hidrxido de sdio (NaOH) ou cido clordrico (HCl) temperatura ambiente.
Os sais que foram utilizados no preparo da soluo fisiolgica so de grau
de pureza analtica, obtidos das companhias Sigma Chemical Corporation (St. Louis,
Missouri, USA), Merck (Darmstadt, Germany) ou Reagen (Rio de Janeiro, RJ, Br).
4.1.7 Dissecao do nervo citico e montagem do sistema extracelular
O nervo citico direito dos ratos foi cuidadosamente submetido cirurgia
de disseco, sendo removido de sua origem e insero e imediatamente
acondicionado em soluo de Locke modificada at o momento de sua utilizao.
40
Em seguida, a cmara de registro (cmara de Harvard) foi preenchida
com 8 ml de soluo de Locke e o nervo foi posicionado horizontalmente sobre os
eletrodos de platina desta cmara. Manteve-se uma ala de aproximadamente 20
milmetros do nervo submerso na soluo a fim de que, por capilaridade, a soluo
fosse administrada ao tecido. A cmara foi mantida hermeticamente fechada para
evitar a desidratao da preparao.
Uma das extremidades do nervo foi eletricamente estimulada por pares
de eletrodos acoplados a um estimulador de Grass, modelo S-48 (Grass Instrument
Co., Quincy, MA, USA), atravs de uma unidade isoladora de estmulo Grass,
modelo SIU 4678 (Grass Instrument Co.). O pulso gerado pelo estimulador foi do
tipo onda quadrada, com amplitude de 40 Volts, durao de 100 microssegundos e
aplicados nas frequncias de 0.2, 20, 50, 100, 200, 300 e 400 Hertz.
O potencial de ao evocado foi coletado por eletrodos de registro na
outra extremidade do nervo. O sinal foi aumentado em 1000X por um amplificador
(AM 01/UECE) de alta impedncia de entrada e visualizado em osciloscpio
(KENWOOD, modelo CS4125).
Uma placa de interface anlogo-digital (A/D) (DIGIDATA 1322A)
transformou o sinal para tornar possvel a sua leitura e armazenamento em um
computador por meio do software Axoclamp (AxonScope, da Axon Instruments Inc.,
Foster City, CA, USA).
O nervo direito passou por um perodo de estabilizao do registro de 120
minutos, tempo este mais do que suficiente para que ocorra uma boa estabilizao
da amplitude do registro do potencial de ao composto. Considerou-se estabilizada
a preparao em que no houve variao na amplitude do PAC por mais de 30
minutos. Em seguida foi medida a reobase e a cronaxia. Posteriormente colhidos
registros de estmulos do potencial de ao composto com frequncias de 20, 50,
100, 200, 300, 400 Hz com intervalos entre as mesmas de 0,2 Hz, conforme Tabela
02.
41
Tabela 02. Protocolo experimental de coleta de registros de freqncias do
potencial de ao composto do nervo citico direito.
Freqncia (Hz) Tempo (min.) Tempo Acumulado (min.)
20 Hz 2 2
0,2 Hz 5 7
50 Hz 2 9
0,2 Hz 5 14
100 Hz 2 16
0,2 Hz 5 21
200Hz 2 23
0,2 Hz 5 28
300 Hz 2 30
0,2 Hz 5 35
400 Hz 2 37
0,2 Hz 5 42
O tempo total previsto para a coleta dos registros do nervo direito de cada
animal ser de aproximadamente 4 horas.
42
Figura 02. Esquema ilustrativo do setup para registro extracelular do potencial de ao
composto.
4.1.8 Dissecao do gnglio da raiz dorsal e montagem do sistema intracelular
Aps a remoo do nervo citico direito, foram dissecados os gnglios da
raiz dorsal a nvel dos segmentos L4 e L5, paravertebral direito. Em seguida foram
acondicionados em soluo de Locke e fixados sobre uma cmara de acrlico com
fundo Silgard. A cmara de registro foi montada sob uma lupa (modelo COLLEGE
STEREO, MLW Intermed, Schneiche, Alemanha), com aumento de 20X, para
auxiliar a fixao com microalfinetes inoxidveis e observao dos procedimentos do
gnglio da raiz dorsal.
A nutrio do tecido ocorreu atravs de perfuso por meio de fluxo por
gravidade, ajustado entre 1 a 1,5 ml/min, com soluo de Locke. Para minimizar os
efeitos de capacitncia do eletrodo, o nvel de lquido da cmara foi controlado na
menor altura possvel acima da superfcie do gnglio. Para a retirada de lquido da
cmara foi utilizada uma bomba de infuso, com uma de suas extremidades
43
conectada a um estreito tubo (para agir como um sugador de lquido) e a outra a um
depsito de descarte de soluo. Essa montagem foi instalada fora do local onde
estava a cmara, para evitar a adio de vibrao ao sistema. Por fim, a soluo
que ficou na cmara considerada como meio extracelular foi aterrada e, portanto,
atribudo valor do potencial igual a zero.
O impalamento dos neurnios do gnglio da raiz dorsal foi realizado com
microeletrodos de borossilicato (dimetro externo de 1,0 mm e interno de 0,5 mm),
que foram confeccionados por um puxador de micropipetas (modelo P-97, Sutter
Instrument, Novato, CA, EUA) e preenchidos com soluo de KCl 3M a fim de obter
resistncia entre 40 a 90M. Em seguida, o microeletrodo foi montado em um pr-
amplificador, que estava conectado a um eletrmero (modelo AXOCLAMP 2B, Axon
Instruments, Foster City, CA, EUA). A movimentao do eletrodo, bem como o
impalamento das clulas, foi realizada com um micromanipulador hidrulico (modelo
MWO-3, Narishige International Inc., Long Island, NY, EUA).
As propriedades eltricas da membrana foram registradas no modo de
clampeamento de corrente (current-clamp), no qual h fixao do valor da corrente a
ser injetada, de forma a medir as variaes de potencial advindo do sistema. Para
monitoramento do sinal, utilizamos dois osciloscpios: um para o monitoramento do
potencial de membrana (V
m
) e da corrente injetada (modelo 5111A, TEKTRONIX,
Beaverton, OR, EUA) e outro para monitoramento da carga e descarga do
microeletrodo (modelo HM303-6, HAMEG Instruments, Mainhausen, Alemanha).
Ambos os osciloscpios, bem como uma placa de interface A/D (modelo DIGIDATA
1200, Axon Intruments, Foster City, CA, EUA) estavam conectados s sadas do
eletrmero. A aquisio dos registros eletrofisiolgicos foi feita atravs de um
software (CLAMPEX, verso 6.0) e os dados armazenados em computador para
posterior anlise. O esquema do setup experimental est ilustrado na Figura 03
44
Figura 03. Esquema ilustrativo do setup para registro intracelular do potencial de ao dos
neurnios do gnglio da raiz dorsal.
4.1.9 Laboratrios
Os experimentos envolvendo os animais e anlises foram conduzidos nos
laboratrios: Bioqumica e Cultura de Clulas e de Eletrofisiologia, ambos nas
dependncias do Instituto Superior de Cincias Biomdicas (www.uece.br/cmacf)
pertencentes Universidade Estadual do Cear - UECE.
45
4.2 Anlise Eletrofisiolgica
As alteraes da excitabilidade e da condutibilidade nervosa foram
avaliadas atravs das mudanas observadas na amplitude pico-a-pico, na amplitude
positiva das componentes e na velocidade de conduo do potencial de ao
composto evocado. Para caracterizar o efeito da excitabilidade do nervo, foram
avaliados a reobase e a cronaxia. Os dados coletados para observao de possveis
alteraes nos parmetros acima citados foram analisados pelo mesmo software
Clampfit, da Axon Instruments Inc., Foster City, CA, USA.
A amplitude pico-a-pico foi estabelecida atravs da soma da maior
amplitude positiva com o mdulo da maior amplitude negativa atingidas no registro
do potencial de ao composto, proporcional ao nmero de axnios que conduzem o
impulso em uma dada velocidade (MEIRI et al., 1996).
A amplitude dos componentes foi estabelecida atravs da amplitude
mxima positiva de cada um dos trs componentes.
Em relao ao clculo da velocidade de conduo nervosa do PAC,
utilizamos a proporo entre a distncia percorrida pelo potencial de ao composto,
desde o eletrodo de estimulao que estava mais prximo do ponto de imerso do
nervo na soluo at o eletrodo de registro e o tempo decorrido at a finalizao
deste trajeto. Consideramos o intervalo entre o ponto inicial do artefato de estmulo
observado no grfico de registro, assim como, o ponto onde a inflexo ascendente
do grfico de potencial de ao composto atingiu 50 % de sua amplitude pico-a-pico
para definio de tempo. Para anlise da velocidade dos componentes utilizamos a
relao entre a distncia percorrida pelo PAC, como descrito anteriormente e o
intervalo entre o ponto inicial do artefato de estmulo e o pico positivo de cada
componente.
A curva de intensidade-durao com onda quadrada de voltagem-
constante foi usada para determinar reobase e cronaxia (HOLSHEIMER et al.,
2000). A reobase mensurada como a voltagem limiar para uma resposta ativa, com
uma longa durao do pulso (1000 s) e cronaxia como a durao limiar com um
pulso a uma voltagem igual ao dobro da reobase.
46
4.3 Tratamento Estatstico
Os resultados foram apresentados como mdia erro padro da mdia
(EPM). O nmero total de experimentos est representado pela letra n. A anlise
estatstica e os grficos foram realizados utilizando os softwares SigmaPlot
for
Windows (verso 10.0, Systat Software) e Prism
). Os animais dos
grupos diabtico e diabtico imobilizado foram induzidos com STZ na semana 1
(Figura 4). Identificou-se um aumento da mdia de glicemia nos grupos diabtico e
diabtico imobilizado comparados com os grupos controle e imobilizado. As mdias
erro padro de glicemia atingiram os seguintes valores: controle: 86,870,87 mg/dl;
imobilizado: 84,451,29 mg/dl; diabtico: 286,2913,45 mg/dl; diabtico imobilizado:
279,5614,01 mg/dl. As anlises estatsticas indicaram um grau de significncia
(p<0,05) entre os grupos: controle com diabtico e diabtico imobilizado; imobilizado
com diabtico e diabtico imobilizado.
48
Figura 04. Evoluo da mdia da glicemia nos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e
diabtico imobilizado (DI), durante seis semanas aps induo da STZ. Os resultados expressos em
valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa
significncia do grupo controle com os grupos diabtico e diabtico imobilizado; #(p<0,05) do grupo
imobilizado com os grupos diabtico e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de animais. O
trao pontilhado indica a semana da imobilizao.
5.2 Massa Corprea
A Figura 05 representa a comparao do resultado da mdia da massa
corprea dos grupos controle, imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado durante
a quarta semana, onde foi realizada a imobilizao da pata traseira direita nos
grupos imobilizado e diabtico imobilizado e durante a sexta semana, onde foi o
sacrifcio dos animais. As mdias erro padro da massa corprea na quarta
semana nos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado foram
respectivamente 269,409,56 g; 298,819,26 g; 228,9011,17 g; 217,079,90 g e na
sexta de 320,429,90 g; 277,129,26 g; 199,2711,17 g; 190,929,90 g. As anlises
estatsticas indicaram um grau de significncia (p<0,05) na quarta semana entre os
Semanas
0 1 2 3 4 5 6 7
G
l
i
c
e
m
i
a
(
m
g
/
d
l
)
0
100
200
300
400
500
C (n=15)
I (n=16)
D (n=11)
DI (n=14)
*
*
*
*
*
*
#
#
#
#
#
#
49
grupos: controle com diabtico e diabtico imobilizado; imobilizado com diabtico e
diabtico imobilizado. J na sexta semana todos apresentaram diferena
estatisticamente significante (p<0,05) com o controle e o grupo imobilizado com os
grupos diabtico e diabtico imobilizado. Quando comparadas as semanas, o grupo
controle apresentou um ganho de massa corprea e nos grupos imobilizado,
diabtico e diabtico imobilizado um dficit da massa corprea.
Figura 05. Comparao da mdia da massa corprea dos grupos controle (C), imobilizado (I),
diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI), durante a quarta e sexta semana aps induo da STZ. Os
resultados expressos em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA).
*(p<0,05) representa significncia em relao ao grupo controle com os grupos diabtico e diabtico
imobilizado; #(p<0,05) do grupo controle com os grupos diabtico e diabtico imobilizado. O n indica
o nmero de animais.
5.3 Ingesto de rao
O controle da ingesto de rao diria iniciou-se em todos os grupos a
partir da semana de induo (semana 0 na Figura 06) de STZ nos grupos diabtico
e diabtico imobilizado, havendo acompanhamento dirio durante seis semanas
Semana
P
e
s
o
(
g
)
0
50
100
150
200
250
300
350
C (n=15)
I (n=16)
D (n=11)
DI (n=14)
*
*
*
*
#
*
#
#
#
6 4
50
consecutivas. Identificou-se um consumo alimentar semelhante entre os grupos
controle e imobilizado e entre os grupos diabticos e diabticos imobilizados a partir
da terceira semana. Os dois ltimos grupos mencionados tambm apresentaram um
consumo superior em relao ao controle e imobilizado, caracterizando o efeito da
diabetes. Durante o perodo de imobilizao correspondente entre a quarta e sexta
semana, os grupos imobilizado e diabtico imobilizado no apresentaram reduo
do consumo de rao. A mdia erro padro geral de todas as semanas apresentou
os seguintes valores: controle 33,092,16 g/dia/rato; imobilizado 31,651,68
g/dia/rato; diabtico 42,633,24 g/dia/rato; diabtico imobilizado 40,984,00
g/dia/rato. As anlises estatsticas para cada semana indicaram um grau de
significncia (p<0,05) a partir da terceira semana entre os grupos: controle com
diabtico e diabtico imobilizado; imobilizado com diabtico e diabtico imobilizado.
Figura 06. Evoluo da ingesto de rao nos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e
diabtico imobilizado (DI), durante seis semanas aps induo da STZ. Os resultados expressos em
valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa
significncia do grupo controle com os grupos diabtico e diabtico imobilizado; #(p<0,05) do grupo
imobilizado com os grupos diabtico e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de animais. O
trao pontilhado indica a semana da imobilizao.
Semanas
0 1 2 3 4 5 6 7
C
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n
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M
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g
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d
i
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r
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)
0
10
20
30
40
50
60
70
C (n=15)
I (n=16)
D (n=11)
DI (n=14)
*
*
* *
#
#
# #
51
5.4 Registro Extracelular
5.4.1 Caracterizao
A formao do potencial de ao composto (PAC) apresentou at trs
componentes de onda, porm com o aumento da frequncia de estmulo a partir de
100Hz a terceira componente no foi apresentada em 74% do total dos registros.
Como o estudo foi realizado para as freqncias 0,2Hz, 20Hz, 50Hz, 100Hz, 200Hz,
300Hz e 400Hz, a terceira componente foi desconsiderada para este estudo.
5.4.2 Traados eletrofisiolgicos das componentes do potencial de ao composto
do nervo citico direito
Os traados eletrofisiolgicos representativos do potencial de ao
composto dos grupos diabtico (Figura 07C) e diabtico imobilizado (Figura 07D)
mostraram uma tendncia de prevalncia da segunda componente positiva possuir
uma amplitude superior que as demais, caracterizando uma predominncia de fibras
nervosas sensitivas. No grupo controle (Figura 07A) houve uma tendncia da
amplitude da primeira componente positiva ser superior que as demais,
caracterizando uma predominncia das fibras nervosas motoras. No grupo
imobilizado (Figura 07B) houve uma tendncia da amplitude da segunda
componente ser igual ou superior amplitude da primeira componente.
52
Figura 07. Traados eletrofisiolgicos representativos do potencial de ao composto (PAC) do nervo
citico direito dos grupos controle (A), imobilizado (B), diabtico (C), diabtico imobilizado (D). A seta
() indica o artefato.
A
1,13 mV
0,67 ms
B
C
D
53
5.4.3 Anlise eletrofisiolgica da amplitude positiva da 1 componente do potencial
de ao composto do nervo citico direito
Na anlise da amplitude positiva da 1 componente do PAC, os resultados
apresentados na Tabela 03 (Apndice I), representam a distribuio das mdias
erro padro dos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado em
relao as frequncias de estmulo. O aumento da frequncia de estmulo
apresentou uma diminuio da curva em todos os grupos e os valores da amplitude
dos grupos imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado foram inferiores comparados
com o grupo controle (Figura 08). Houve diferena estatisticamente significante
(p<0,05) dos grupos imobilizado e diabtico em relao ao grupo controle nas
frequncias de 0,2 Hz at 100 Hz. Nas frequncias de 200 Hz, 300 Hz e 400 Hz no
houve diferena estatisticamente significante.
Figura 08. Amplitude positiva da 1 componente do PAC, em nervo citico direito dos grupos controle
(C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado imobilizado nos
animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores absolutos esto
apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa significncia entre controle e
imobilizado nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz, 50 Hz e 100 Hz; #(p<0,05) entre controle e diabtico
nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz, 50 Hz e 100 Hz. O n indica o nmero de nervos citicos direito de
ratos.
Frequncia (Hz)
0 100 200 300 400
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m
p
l
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t
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d
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n
t
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(
m
V
)
0
2
4
6
8
C (n=13)
I (n=15)
D (n=8)
DI (n=13)
*
*
*
*
#
#
#
#
54
5.4.4 Anlise eletrofisiolgica da amplitude positiva da 2 componente do potencial
de ao composto do nervo citico direito
Na anlise da amplitude positiva da 2 componente do PAC, os resultados
apresentados na Tabela 04 (Apndice II), representam a distribuio das mdias
erro padro dos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado em
relao as frequncias de estmulo. O aumento da frequncia de estmulo
apresentou uma diminuio da curva em todos os grupos e os valores da amplitude
dos grupos imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado foram significativamente
superiores comparados com o grupo controle (Figura 09). Houve diferena
estatisticamente significante (p<0,05) comparando o grupo diabtico imobilizado em
relao ao controle nas frequncias de 0,2 Hz, 20 Hz, 50 Hz e nas frequncias de
100 Hz, 200 Hz, 300 Hz e 400 Hz no houve diferena estatisticamente significante.
Frequncia (Hz)
0 100 200 300 400
A
m
p
l
i
t
u
d
e
P
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a
2
C
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m
p
o
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e
n
t
e
(
m
V
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0
2
4
6
8
C (n=13)
I (n=14)
D (n=7)
DI (n=10)
Figura 09. Amplitude positiva da 2 componente do PAC, em nervo citico direito dos grupos controle
(C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado imobilizado nos
animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores absolutos esto
apresentados como mdia EPM (ANOVA). (p<0,05) representa significncia entre controle e
diabtico imobilizado nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz e 50 Hz. O n indica o nmero de nervos
citicos direito de ratos.
55
5.4.5 Anlise eletrofisiolgica da amplitude pico-a-pico do potencial de ao
composto do nervo citico direito
Na anlise da amplitude pico-a-pico do PAC, os resultados apresentados
na Tabela 05 (Apndice III), representam a distribuio das mdias erro padro
dos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado em relao s
frequncias de estmulo. O aumento da frequncia de estmulo apresentou uma
diminuio da curva em todos os grupos e os valores da amplitude dos grupos
imobilizado e diabtico imobilizado foram inferiores comparados com o grupo
controle (Figura 10). J o grupo diabtico imobilizado foi superior ao grupo controle
at a frequncia de 50 Hz por apresentar uma maior hiperpolarizao e
consequentemente elevou a amplitude pico a pico, mantendo o resultado
semelhante ao grupo controle em 100 Hz e 200 Hz. Aps esta frequncia
comportou-se semelhante aos grupos diabtico e diabtico imobilizado. Houve
diferena estatisticamente significante (p<0,05) comparando o grupo diabtico
imobilizado com os grupos imobilizado e diabtico na frequncia de 0,2 Hz. J nas
frequncias de 20 Hz e 50 Hz houve diferena estatstica entre diabtico imobilizado
e diabtico. Nas demais frequncias no houve diferena estatstica.
56
Figura 10. Amplitude pico-a-pico do PAC, em nervo citico direito dos grupos controle (C),
imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado imobilizado nos
animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores absolutos esto
apresentados como mdia EPM (ANOVA). (p<0,05) representa significncia entre diabtico
imobilizado e imobilizado na freqncia de 0,2 Hz; (p<0,05) entre diabtico imobilizado e diabtico
nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz e 50 Hz. O n indica o nmero de nervos citicos direito de ratos.
5.4.6 Anlise eletrofisiolgica da velocidade de conduo da 1 componente do
potencial de ao composto do nervo citico direito.
Na anlise da velocidade de conduo da 1 componente do PAC, os
resultados apresentados na Tabela 06 (Apndice IV), representam a distribuio das
mdias erro padro dos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico
imobilizado em relao s frequncias de estmulo. Na comparao entre os grupos,
observou-se uma reduo no imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado, em
relao ao grupo controle (Figura 11), havendo diferena estatisticamente
significante (p<0,05) nas freqncias de 0,2 Hz at 100 Hz do grupo controle em
relao aos grupos imobilizado e diabtico imobilizado. Observou-se uma tendncia
Frequncia (Hz)
0 100 200 300 400
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2
4
6
8
10
C (n=15)
I (n=16)
D (n=8)
DI (n=9)
57
de reduo da velocidade de conduo dos grupos diabtico, imobilizado e diabtico
imobilizado em relao ao controle.
Figura 11. Velocidade de conduo da 1 componente do PAC, em nervo citico direito dos grupos
controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado
imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores absolutos
esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa significncia entre controle e
imobilizado nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz, 50 Hz e 100 Hz; #(p<0,05) entre controle e diabtico
imobilizado nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz, 50 Hz e 100 Hz. O n indica o nmero de nervos
citicos direito de ratos.
Frequncia (Hz)
0 100 200 300 400
V
e
l
o
c
i
d
a
d
e
d
e
C
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40
60
80
100
120
C (n=15)
I (n=15)
D (n=8)
DI (n=14)
*
*
#
#
#
#
*
*
58
5.4.7 Anlise eletrofisiolgica da velocidade de conduo da 2 componente do
potencial de ao composto do nervo citico direito.
Na anlise da velocidade de conduo da 2 componente do PAC, os
resultados apresentados na Tabela 7 (Apndice V), representam a distribuio das
mdias erro padro dos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico
imobilizado em relao s frequncias de estmulo. Embora houvesse uma discreta
reduo das velocidades de conduo dos grupos em relao ao grupo controle
(Figura 12), no houve diferena estatisticamente significante.
Figura 12. Velocidade de conduo da 2 componente do PAC, em nervo citico direito dos grupos
controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado
imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores absolutos
esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). No houve significncia estatstica com p<0,05. O
n indica o nmero de nervos citicos direito de ratos.
Frequncia (Hz)
0 100 200 300 400
V
e
l
o
c
i
d
a
d
e
d
e
C
o
n
d
u
o
d
a
2
C
o
m
p
o
n
e
n
t
e
(
m
/
s
)
0
20
40
60
C (n=14)
I (n=9)
D (n=8)
DI (n=13)
59
5.4.8 Anlise eletrofisiolgica da reobase e cronaxia do nervo citico direito
Na anlise da reobase, o resultado apresentado na Figura 13, obteve-se
no grupo controle a mdia erro padro de 3,130,05 volts, no grupo imobilizado
2,840,06 volts, no grupo diabtico 2,730,08 volts e no grupo diabtico imobilizado
3,230,10 volts. Houve diferena estatisticamente significante (p<0,05) entre os
grupos controle e imobilizado, controle e diabtico, imobilizado e diabtico
imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado. Na Figura 14 correspondente a
cronaxia, obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 52,311,95 s, no
grupo imobilizado de 59,712,79 s, no grupo diabtico de 50,572,08 s e no grupo
diabtico imobilizado de 59,751,41 s, havendo diferena estatisticamente
significante com p<0,05 entre os seguintes grupos: controle e imobilizado;
imobilizado e diabtico; diabtico e diabtico imobilizado.
Figura 13. Reobase em nervo citico direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e
diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao.
Os resultados expressos em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA).
*(p<0,05) representa significncia entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os grupos
imobilizado e diabtico imobilizado; #(p<0,05) entre os grupos diabtico e diabtico imobilizado;
(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico. O n indica o nmero de nervos citicos direito de
ratos.
C
I
D
D
I
0
1
2
3
4
I (n=15)
C (n=13)
D (n=6)
DI (n=13)
Grupos
R
e
o
b
a
s
e
(
v
o
l
t
s
)
#
**
*
60
Figura 14. Cronaxia em nervo citico direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e
diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao.
Os resultados expressos em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA).
*(p<0,05) representa significncia entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os grupos
imobilizado e diabtico; #(p<0,05) entre os grupos diabtico e diabtico imobilizado. O n indica o
nmero de nervos citicos direito de ratos.
5.5 Registro Intracelular
5.5.1 Caracterizao e distribuio dos neurnios
Este estudo foi baseado nos dados de neurnios do GRD que foram
classificados como sem inflexo (N
si
) (Figura 15A) e com inflexo (N
ci
) (Figura 15B),
na fase de repolarizao do PA, para os grupos controle, imobilizado, diabtico e
diabtico imobilizado.
Os neurnios sem inflexo apresentaram valores superiores para os
parmetros corrente limiar, potencial de repouso, dV/dt ascendente e dV/dt
descendente comparados com os neurnios com inflexo. J os parmetros
C
I
D
D
I
0
20
40
60
80
C (n=13)
I (n=14)
D (n=7)
DI (n=12)
Grupos
C
r
o
n
a
x
i
a
(
u
s
)
#
*
**
61
resistncia de entrada, amplitude e durao do PA apresentam valores inferiores,
conforme descritos nas Tabelas 08 e 09 (Apndice VI e VII).
Figura 15. Traados representativos da derivada do potencial de ao nos neurnios sem inflexo
(N
si
)(A) e com inflexo (N
ci
)(B). A seta indica a inflexo presente na fase de repolarizao dos
neurnios com inflexo.
A
B
7 mV
2 ms
62
5.5.2 Anlise eletrofisiolgica da corrente limiar
Na anlise da corrente limiar do GRD direito, os resultados apresentados
na Figura 16A, correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
). Nesses neurnios,
obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 2,040,17 nA, no grupo
imobilizado 1,320,19 nA, no grupo diabtico 1,190,13 nA e no grupo diabtico
imobilizado 1,110,17 nA. Na Figura 16B, correspondente aos neurnios com
inflexo (N
ci
), obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 1,490,23 nA,
no grupo imobilizado 0,890,10 nA, no grupo diabtico 0,810,13 nA e no grupo
diabtico imobilizado 0,840,10 nA. Houve diferena estatisticamente significante
(p<0,05) nos neurnios com e sem inflexo, entre o grupo controle e os grupos
imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado, observando-se em ambas as figuras
uma reduo das mdias em relao ao grupo controle.
63
Figura 16. Corrente limiar avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo (B) do GRD direito
dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o
lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores
absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa significncia entre
os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico; #(p<0,05) entre os
grupos controle e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de clulas dos gnglios da raiz dorsal
de ratos.
B
*
#
**
Neurnios N
ci
C
I
D
D
I
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
C (n=25)
I (n=32)
D (n=20)
DI (n=30)
Grupos
C
o
r
r
e
n
t
e
L
i
m
i
a
r
(
n
A
)
A
Neurnios N
si
C
I
D
D
I
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
C (n=29)
I (n=14)
D (n=14)
DI (n=19)
Grupos
C
o
r
r
e
n
t
e
L
i
m
i
a
r
(
n
A
)
*
#
**
64
5.5.3 Anlise eletrofisiolgica da resistncia de entrada
Na resistncia de entrada do GRD direito, os resultados apresentados na
Figura 17A, correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
), obteve-se no grupo
controle a mdia erro padro de 6,600,78 M, no grupo imobilizado 7,541,88
M, no grupo diabtico 13,001,41 M e no grupo diabtico imobilizado 14,772,12
M. Na Figura 17B, correspondente aos neurnios com inflexo (N
ci
), obteve-se no
grupo controle a mdia erro padro de 10,241,47 M, no grupo imobilizado
14,551,75 M, no grupo diabtico 22,932,77 M e no grupo diabtico imobilizado
24,503,37 M. Houve diferena estatisticamente significante (p<0,05) nos N
si
(Figura 17A) e N
ci
(Figura 17B) entre os seguintes grupos: controle e diabtico;
controle e diabtico imobilizado; imobilizado e diabtico imobilizado. Pode-se
observar que em ambas as figuras apresentaram uma tendncia de aumento das
mdias em relao ao grupo controle e so inversamente proporcionais aos
respectivos resultados da corrente limiar (Figura 16AB).
65
Figura 17. Resistncia de entrada avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo (B) do
GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado
direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em
valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa
significncia entre os grupos controle e diabtico; **(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico
imobilizado; #(p<0,05) entre os grupos imobilizado e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de
clulas dos gnglios da raiz dorsal de ratos.
A
Neurnios N
si
C
I
D
D
I
0
10
20
30
C (n=28)
I (n=13)
D (n=13)
DI (n=19)
Grupos
R
e
s
i
s
t
n
c
i
a
d
e
e
n
t
r
a
d
a
(
M
)
**
#
Neurnios N
ci
B
C
I
D
D
I
0
10
20
30
C (n=25)
I (n=33)
D (n=18)
DI (n=31)
Grupos
R
e
s
i
s
t
n
c
i
a
d
e
e
n
t
r
a
d
a
(
M
)
#
**
66
5.5.4 Anlise eletrofisiolgica do potencial de repouso
Na Figura 18A representando o potencial de repouso do GRD direito
dos neurnios sem inflexo, apresentou mdia erro padro nos grupos controle de
-64,831,75 mV, imobilizado -65,692,47 mV, diabtico -67,333,49 mV e diabtico
imobilizado -57,261,69 mV. Na Figura 18B, representando o potencial de repouso
do GRD direito dos neurnios com inflexo apresentou mdia erro padro nos
grupos controle de -60,222,22 mV, imobilizado -57,002,01 mV, diabtico
-57,002,85 mV e diabtico imobilizado -54,832,05 mV. No houve diferena
estatisticamente significante (p<0,05).
67
Figura 18. Potencial de repouso avaliado nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo (B) do GRD
direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito
foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores
absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). No houve significncia com p<0,05. n
indica o nmero de clulas dos gnglios da raiz dorsal de ratos.
C
I
D
D
I
-80
-60
-40
-20
0
C (n=29)
I (n=13)
D (n=12)
DI (n=19)
Grupos
P
o
t
e
n
c
i
a
l
d
e
R
e
p
o
u
s
o
(
m
V
)
Neurnios N
si
A
C
I
D
D
I
-80
-60
-40
-20
0
C (n=27)
I (n=31)
D (n=17)
DI (n=30)
Grupos
P
o
t
e
n
c
i
a
l
d
e
R
e
p
o
u
s
o
(
m
V
)
Neurnios N
ci
B
68
5.5.5 Anlise eletrofisiolgica da amplitude do potencial de ao
Na amplitude do potencial de ao do GRD direito, os resultados
apresentados na Figura 19A, correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
),
obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 75,921,75 mV, no grupo
imobilizado 64,222,79 mV, no grupo diabtico 61,133,53 mV e no grupo diabtico
imobilizado 63,862,85 mV. Na Figura 19B, correspondente aos neurnios com
inflexo (N
ci
), obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 82,703,05 mV,
no grupo imobilizado 71,751,81 mV, no grupo diabtico 68,832,84 mV e no grupo
diabtico imobilizado 72,172,82 mV. Houve diferena estatisticamente significante
(p<0,05) nos N
si
(Figura 19A) e N
ci
(Figura 19B), entre o grupo controle e os grupos
imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado.
69
Figura 19. Amplitude do potencial de ao avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo
(B) do GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI).
O lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos
em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa
significncia entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico;
#(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de clulas dos
gnglios da raiz dorsal de ratos.
C
I
D
D
I
0
20
40
60
80
100
C (n=29)
I (n=14)
D (n=14)
DI (n=19)
Grupos
A
m
p
l
i
t
u
d
e
d
o
P
o
t
e
n
c
i
a
l
d
e
A
o
(
m
V
)
Neurnios N
si
A
*
#
**
*
#
**
Neurnios N
ci
B
C
I
D
D
I
0
20
40
60
80
100
C (n=27)
I (n=34)
D (n=21)
DI (n=32)
Grupos
A
m
p
l
i
t
u
d
e
d
o
P
o
t
e
n
c
i
a
l
d
e
A
o
(
m
V
)
70
5.5.6 Anlise eletrofisiolgica da inclinao mxima ascendente (dV/dT
asc
)
Na dV/dt
asc
do GRD direito, os resultados apresentados na Figura 20A,
correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
), obteve-se no grupo controle a
mdia erro padro de 192,6010,26 V/s, no grupo imobilizado 136,6014,44 V/s,
no grupo diabtico 127,4012,29 V/s e no grupo diabtico imobilizado 145,6012,44
V/s. Na Figura 20B, correspondente aos neurnios com inflexo (N
ci
), obteve-se no
grupo controle a mdia erro padro de 128,8013,83 V/s, no grupo imobilizado
86,045,42 V/s, no grupo diabtico 67,4810,19 V/s e no grupo diabtico imobilizado
92,347,30 V/s. Houve diferena estatisticamente significante (p<0,05) nos N
si
(Figura 20A) e N
ci
(Figura 20B), entre o grupo controle e os grupos imobilizado,
diabtico e diabtico imobilizado.
71
Figura 20. Inclinao mxima ascendente avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo (B)
do GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O
lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos
em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa
significncia entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico;
#(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de clulas dos
gnglios da raiz dorsal de ratos.
Neurnios N
si
A
*
#
**
C
I
D
D
I
0
50
100
150
200
250
C (n=27)
I (n=12)
D (n=14)
DI (n=19)
Grupos
I
n
c
l
i
n
a
o
M
x
i
m
a
A
s
c
e
n
d
e
n
t
e
(
V
/
s
)
C
I
D
D
I
0
50
100
150
200
250
C (n=26)
I (n=33)
D (n=20)
DI (n=31)
Grupos
I
n
c
l
i
n
a
o
M
x
i
m
a
A
s
c
e
n
d
e
n
t
e
(
V
/
s
)
*
#
**
Neurnios N
ci
B
72
5.5.7 Anlise eletrofisiolgica da inclinao mxima descendente (dV/dT
desc
)
Na dV/dt
desc
do GRD direito, os resultados apresentados na Figura 21A,
correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
), obteve-se no grupo controle a
mdia erro padro de -122,95,70 V/s, no grupo imobilizado -93,006,80 V/s, no
grupo diabtico -88,466,83 V/s e no grupo diabtico imobilizado -100,205,83 V/s.
Na Figura 21B, correspondente aos neurnios com inflexo (N
ci
), obteve-se no grupo
controle a mdia erro padro de -66,356,39 V/s, no grupo imobilizado -47,912,78
V/s, no grupo diabtico -40,332,42 V/s e no grupo diabtico imobilizado -49,194,09
V/s. Houve diferena estatisticamente significante (p<0,05) nos N
si
(Figura 21A) e N
ci
(Figura 21B), entre o grupo controle e os grupos imobilizado, diabtico e diabtico
imobilizado.
73
Figura 21. Inclinao mxima descendente avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo
(B) do GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI).
O lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos
em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa
significncia entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico;
#(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de clulas dos
gnglios da raiz dorsal de ratos.
*
#
**
A
Neurnios N
si
C
I
D
D
I
-150
-100
-50
0
C (n=28)
I (n=13)
D (n=14)
DI (n=19)
Grupos
I
n
c
l
i
n
a
o
M
x
i
m
a
D
e
s
c
e
n
d
e
n
t
e
(
V
/
s
)
C
I
D
D
I
-150
-100
-50
0
C (n=27)
I (n=31)
D (n=21)
DI (n=29)
Grupos
I
n
c
l
i
n
a
o
M
x
i
m
a
D
e
s
c
e
n
d
e
n
t
e
(
V
/
s
)
*
#
**
B Neurnios N
ci
74
5.5.8 Anlise eletrofisiolgica da durao do potencial de ao
Na durao do potencial de ao do GRD direito, os resultados
apresentados na Figura 22A, correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
),
obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 0,710,02 ms, no grupo
imobilizado 0,840,10 ms, no grupo diabtico 1,010,06 ms e no grupo diabtico
imobilizado 0,960,07 ms. Na Figura 22B, correspondente aos neurnios com
inflexo (N
ci
), obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 2,040,17 ms,
no grupo imobilizado 2,750,21 ms, no grupo diabtico 3,240,30 ms e no grupo
diabtico imobilizado 3,140,33 ms. Houve diferena estatisticamente significante
(p<0,05), nos N
si
Houve diferena estatisticamente significante (p<0,05) nos N
si
(Figura 22A) e N
ci
(Figura 22B), entre o grupo controle e os grupos diabtico e
diabtico imobilizado.
75
Figura 22. Durao do potencial de ao avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo (B)
do GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O
lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos
em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa
significncia entre os grupos controle e diabtico; **(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico
imobilizado. O n indica o nmero de clulas dos gnglios da raiz dorsal de ratos.
C
I
D
D
I
0
1
2
3
4
C (n=29)
I (n=14)
D (n=14)
DI (n=19)
Grupos
D
u
r
a
o
d
o
p
o
t
e
n
c
i
a
l
d
e
a
o
(
m
s
)
Neurnios N
si
A
#
**
Neurnios N
ci
B
C
I
D
D
I
0
1
2
3
4
C (n=24)
I (n=32)
D (n=21)
DI (n=30)
Grupos
D
u
r
a
o
d
o
p
o
t
e
n
c
i
a
l
d
e
a
o
(
m
s
)
#
**
76
6 DISCUSSO
A imobilizao de um membro do corpo acarreta limitaes fsicas
provisrias podendo resultar numa alterao de sua funcionalidade. Entretanto, esta
situao poder agravar-se quando o paciente for diabtico. Tendo em vista poucos
estudos relatados na literatura correlacionando imobilizao e diabetes, o
Laboratrio de Eletrofisiologia da Universidade Estadual do Cear (UECE), props
investigar a caracterizao dos efeitos da imobilizao e da interao
imobilizao/diabetes em animais experimentais, avaliando os parmetros
eletrofisiolgicos do nervo citico e gnglio da raiz dorsal, os quais podem contribuir
para um melhor entendimento dos efeitos da imobilizao e da interao
imobilizao/diabetes.
No presente trabalho optou-se pelo estudo da imobilizao da pata direita
de ratos associada ou no ao diabetes experimental, tendo como base a anlise de
quatro grupos experimentais: controle, imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado,
acompanhados por um perodo de seis semanas, sendo as primeiras quatro
semanas de diabetes e mais duas semanas de imobilizao.
O mtodo proposto de imobilizao por Carvalho (2001), no foi adotado
por apresentar o aparecimento de edemas na regio imobilizada. Ento, o mtodo
de imobilizao foi alterado utilizando esparadrapo impermevel que envolveu o
membro posterior direito. A imobilizao realizada nos grupos imobilizado e
diabtico imobilizado foi mantida por duas semanas, sendo necessria a
manuteno em virtude da diurese e desgaste do esparadrapo.
A induo do diabetes experimental utilizando-se de substncias qumicas
que destroem seletivamente as clulas do pncreas extremamente conveniente,
e de fcil manuseio devido s suas semelhanas clnicas, laboratoriais e
histopatolgicas com o diabetes do ser humano (GREENE et al., 1975; JAKOBSEN,
1976; MERING; MINKOWSKI, 1889; HETHERINGTON; RANSON, 1940; MORDES;
ROSSINI, 1985). Por essa razo, em nosso trabalho foi utilizada a droga
streptozotocina.
Os animais do grupo controle e imobilizado apresentaram mdias de
glicemia de jejum compatveis com o metabolismo normal da glicose na espcie, em
77
todo perodo experimental. J, os grupos diabtico e diabtico imobilizado
mostraram nveis glicmicos significantemente elevados, decorrentes do diabetes
induzido pela estreptozotocina (SPADELLA et al., 1996, 1998, 2000, 2002, 2005;
LERCO et al., 2006).
Na anlise da massa corprea ao final das seis semanas do perodo
experimental, houve um dficit da massa corporal em relao a idade, nos grupos
imobilizado e diabtico imobilizado em relao aos grupos controle e diabtico,
devido possivelmente, a atrofia muscular decorrente da imobilizao da pata traseira
direita.
A ingesta alimentar apresentou-se alterada nos grupos diabtico e
diabtico imobilizado. A polifagia, produzida em resposta diminuio relativa ou
absoluta de glicose no interior das clulas, em decorrncia da reduo na produo
e/ou ao da insulina (COSTA; ALMEIDA NETO, 2004), um sinal detectado nos
ratos diabticos utilizados neste estudo. Nos animais do grupo diabtico e diabtico
imobilizado, os valores da varivel ingesto alimentar foram maiores que os
apresentados pelos grupos controle e imobilizado, respectivamente.
Quando analisada a ingesta alimentar os grupos imobilizado e diabtico
imobilizado no deixaram de consumir o alimento comparados aos grupos controle e
diabtico, confirmando assim que, durante as duas semanas de imobilizao, os
animais no deixaram de se alimentar.
Os dados obtidos dos parmetros eletrofisiolgicos demonstraram que de
uma maneira geral houve uma reduo da primeira componente do potencial de
ao composto da fibra do nervo citico e uma tendncia ao aumento da segunda
componente para os grupos imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado
comparados com o grupo controle. A diminuio da primeira componente
provavelmente devida ao comprometimento das fibras motoras decorrentes das
alteraes da imobilizao e da diabetes. Como no presente estudo utilizamos
apenas o nervo, esta alterao da primeira componente mostra uma alterao
primria do citico. Este um aspecto importante a ressaltar, pois sabido que com
a imobilizao, h uma reduo de unidades motoras distais em junes
neuromusculares, como tambm, alterao do mecanismo de disparo subsequentes
imobilizao, que representam modificao do grau de atividade neural, vista
atravs da eletroneuromiografia sobre o tecido muscular, podendo ter alterao no
78
sistema nervoso perifrico, gerando um padro de leses degenerativas que
comeam nos terminais distais, resultando em alteraes sensitivas (McCOMAS et
al., 1971). Por outro lado o aumento na segunda componente do PAC do nervo
citico pode representar um aumento da excitabilidade de neurnios sensoriais, que
inclui componentes inflamatrios a nvel tecidual. Esse aumento da excitabilidade
quando relacionado ao gnglio da raiz dorsal (GRD), devido ao aumento de canais
de sdio e clcio ao nvel celular (NOKES et al., 1991; CATTERALL et al., 2001;
HONG; WILEY, 2006).
O nervo citico constitudo em sua maior parte por fibras do tipo A,
segundo a classificao de Erlanger e Gasser, apresentando os subtipos A, A, A,
A e fibras do tipo C. Estas fibras apresentam dimetros, velocidades, limiar de
excitabilidade e possivelmente populaes de canais de Na
+
diferentes (NOKES et
al., 1991; CATTERALL; MACKIE, 1996; JUNGE, 1976). A primeira componente do
potencial de ao constituda pelas respostas das fibras do tipo A e A. A
segunda e terceira componentes so constitudas por respostas de fibras sensoriais
e motoras (A e A).
A amplitude pico-a-pico reflete a quantidade de fibras que esto sendo
despolarizadas simultaneamente. Os resultados apresentados demonstraram que
um aumento da frequncia de estmulo gera uma diminuio da amplitude do sinal
de todos os grupos. Os valores da amplitude dos grupos imobilizado e diabtico
foram inferiores, comparados com o grupo controle. No grupo diabtico imobilizado
ocorreu o inverso, sendo superior ao grupo controle at a frequncia de 50 Hz por
apresentar uma maior amplitude negativa. Ainda no temos explicao para o fato
da amplitude pico-a-pico no grupo diabtico imobilizado ser superior ao grupo
controle nas frequncias de estimulao de 0,2 Hz a 50 Hz.
Os valores da velocidade de conduo da primeira componente do nervo
citico direito foram menores nos grupos diabtico imobilizado, imobilizado e
diabtico em relao ao controle. Havendo diferena estatisticamente significante
(p<0,05) nos grupos imobilizado e diabtico imobilizado em relao ao controle nas
frequncias de 0,2 Hz at 100 Hz. J a velocidade de conduo da segunda
componente, embora houvesse uma discreta reduo das velocidades de conduo
dos grupos em relao ao grupo controle, no foi significante.
79
A alterao do axnio pode ser originada de dois grandes grupos:
degenerao axonal e desmielinizao (LUNDBORG, 2000). Malone et al. (1996)
encontraram uma diminuio do dimetro da fibra nervosa, da espessura da bainha
de mielina e do nmero de fibras mielinizadas de maior calibre, em animais com
diabetes induzido na 6 semana de vida. Esses dados esto de acordo com a
reduo da amplitude e da velocidade de conduo do primeiro componente do PAC
aqui documentadas. Os animais em processo de maturao, tanto estrutural quanto
funcional, do nervo perifrico, e expostos hiperglicemia crnica, apresentaram
maiores alteraes patolgicas quando comparados aos ratos com nervos j
maduros e submetidos s mesmas condies experimentais. Os autores sugerem
que modelos-animais de neuropatia diabtica que utilizem ratos com o sistema
nervoso ainda imaturo podem no ser apropriados para compreender o processo
que comumente ocorrem em humanos, os quais tornam-se diabticos aps a
maturao dos nervos perifricos. No presente estudo trabalhamos com ratos
maturos (iniciando com ratos de oito semanas) e as alteraes eletrofisiolgicas
encontradas so coerentes com o que se esperaria das alteraes morfolgicas
escrita por Malone et al. (1996).
Os nervos mielinizados apresentam uma conduo saltatria do potencial
de ao, pois a excitabilidade destes nervos est localizada nos ndulos de Ranvier.
A mielina age como um conjunto de resistores e capacitores em paralelo, sem
participao direta na gerao do potencial de ao (FALK; STALBERG, 1995). Nos
segmentos desmielinizados ou durante a remielinizao parcial, a diminuio da
espessura de mielina resulta em um aumento da capacitncia e condutncia
internodal, resultando na perda ou diminuio de corrente local. As falhas para se
ativar o ndulo de Ranvier subseqente resultam em bloqueio de conduo, porm
quando h um retorno da funo, os impulsos se propagam mais lentamente do que
o normal, porque a corrente dissipada despende um maior tempo para gerar um
potencial de ao (KIMURA, 1984).
A velocidade de conduo nervosa em um nervo saudvel depende do
dimetro da fibra nervosa, da relao entre o dimetro do axnio e da bainha de
mielina e da distncia entre os ndulos de Ranvier (FALK; STALBERG, 1995). A
desmielinizao segmentar das fibras nervosas, comum no diabetes, produz um
bloqueio do impulso nervoso, o qual restabelecido aps o incio do processo de
80
remielinizao. No processo de remielinizao das fibras nervosas so gerados
novos ndulos de Ranvier, os quais apresentam uma menor distncia entre si,
resultando em uma mudana das caractersticas funcionais do nervo correspondente
(FALK; STALBERG, 1995; HILBURN, 1996).
Segundo Karsidag et al. (2005) as alteraes de conduo nervosa so
mais freqentes nas fibras mielinizadas de maior dimetro nos estgios iniciais do
diabetes, embora tambm haja um envolvimento das fibras desmielinizadas e
mielinizadas de menor calibre, especialmente nas extremidades inferiores. As
alteraes da conduo nervosa no presente estudo parecem haver sido mais
profundas nos axnios de maior dimetro (aqueles com maior velocidade de
conduo). Este achado concorda com os dados de Karsidag et al. (2005).
Em relao aos nervos dos ratos que sofreram apenas imobilizao, as
alteraes neuronais eletrofisiolgicas so muito semelhantes aquelas do animal
diabtico. No encontramos na literatura dados de alteraes neurais morfolgicas
por imobilizao com protocolo similar ao nosso, aqui empregado. Contudo a
similaridade das alteraes funcionais com o diabetes demonstra que a imobilizao
pode causar modificaes importantes do nervo.
Durante a imobilizao h um perodo adaptativo funcional do organismo
em reorganizar esta velocidade de conduo, j que possivelmente h uma atrofia
na estrutura muscular. E quando h interao diabetes/imobilizao sugere-se haver
uma reduo da velocidade de conduo tambm pela alterao metablica e
sistmica do organismo. Um dado dos nossos achados nos pareceu surpreendente,
trata-se do conspcuo aumento da amplitude da segunda componente do PAC. No
temos ainda uma explicao clara para este fenmeno. Uma hiptese que nos
parece atraente, contudo, aquela de que fibras de velocidade de conduo de
primeira componente passarem a ter velocidade de conduo de segunda
componente, e assim passarem a reforar a amplitude da segunda componente. A
velocidade de conduo pode ser diminuda por reduo da corrente de Na
+
ou por
aumento da capacitncia de membrana, como j discutido. Mas, independentemente
da origem da reduo, ela iria aumentar o nmero de potenciais com velocidade de
segunda componente.
A reobase a intensidade mnima necessria para se obter uma
despolarizao da fibra atravs de um impulso de longa durao. Em nosso estudo,
81
houve uma reduo das mdias nos grupos diabtico e imobilizado em relao ao
controle, resultando um aumento da excitabilidade nervosa. Este aumento da
excitabilidade no nervo citico est correlacionado com a reduo da corrente limiar
no gnglio da raiz dorsal que sofre alteraes dos canais de sdio e potssio. No
grupo diabtico imobilizado observou-se o inverso, apresentando um aumento da
mdia comparada com os demais grupos. Uma hiptese para explicar este aumento
da reobase no grupo diabtico imobilizado que talvez o curso temporal das
alteraes seja acelerado, pois sabido da literatura que no incio da diabetes h
aumento da excitabilidade e depois, com a progresso da doena h uma
diminuio.
Os resultados da cronaxia demonstraram um aumento da mdia nos
grupos que sofreram imobilizao (imobilizado, diabtico imobilizado) em relao
aos grupos controle e diabtico, havendo diferena estatisticamente significante
entre os grupos controle e imobilizado; imobilizado e diabtico; diabtico e diabtico
imobilizado. O aumento da cronaxia do nervo pode-se originar de uma diminuio da
mielinizao do axnio ou de uma diminuio de canais de sdio no nodo de
Ranvier. No presente estudo, com a imobilizao houve uma tendncia do aumento
da excitabilidade (diminuio da reobase) e aumento da cronaxia. Esse dado
poderia sugerir que haveria diminuio na imobilizao, mas esta hiptese necessita
de confirmao por estudos morfolgicos.
A forma do potencial de ao registrado intracelularmente est
relacionada com a modalidade sensorial conduzida pelo neurnio. McCarthy e
Lawson (1987) mostraram que os neurnios do gnglio da raiz dorsal que
expressam substncia P e gene relacionado calcitonina (dois peptdeos ligados a
nocicepo) esto associados com os PAs que apresentam uma inflexo na fase de
repolarizao. Estes neurnios, por sua vez, esto relacionados com as clulas de
menor dimetro que conduzem lentamente o PA, sendo representados
predominantemente por neurnios sensoriais do tipo A e C. Os PAs sem inflexo
caracterizam neurnios de grande dimetro do tipo A/ muitos dos quais so
mecanoceptores (McCARTHY; LAWSON, 1997; DJOUHRI et al., 1998; RUSH et al.,
2007). Com base na informao contida na literatura cientfica e a construo do
plano de fase desses neurnios, ns classificamos N
si
como neurnios
mecanoceptores e N
ci
como nociceptores.
82
Estudos anteriores demonstraram que os neurnios nociceptivos
apresentaram durao e amplitude maiores do que os neurnios mecanoceptivos.
Estas observaes esto de acordo com os valores de controle obtidos por ns
neste estudo, o que sugere uma classificao fidedigna dos nossos estudos.
Em relao a corrente limiar no GRD, houve uma reduo das mdias
dos grupos imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado comparados com o grupo
controle. Este fato deve-se ao aumento da excitabilidade provavelmente devida e
alterao nos canais de sdio e/ou potssio.
As alteraes nos canais de sdio e potssio podem implicar alteraes
do fluxo de ons do fluxo inico normalmente a membrana citoplasmtica, em
repouso, mais permevel aos ons K
+
e os valores de potencial de membrana
aproximam-se do valor do potencial eletroqumico deste on (HODGKIN; HUXLEY,
1939; HODGKIN; KATZ, 1949). Quando a membrana excitada, ocorre o aumento
de sua condutncia ao Na
+
, direcionando esse on para o interior da clula a favor
de um gradiente eletroqumico. Esse processo promove uma despolarizao. Esta,
ao atingir o limiar de excitabilidade, desencadeia o potencial de ao, considerado
como a resposta tipo tudo ou nada, que se propaga por toda a fibra nervosa (BEST;
TAYLOR, 1990; BERNE; LEVY, 2004). O potencial de ao ocorre com uma
inverso no potencial de membrana, aproximando-o do valor do potencial
eletroqumico do Na
+
(HODGKIN; HUXLEY, 1939; HODGKIN; KATZ, 1949). Dessa
forma, para que haja o potencial de ao neural, necessrio que haja um grande
aumento da condutncia ao Na
+
em relao condutncia ao K
+
. Assim, o aumento
da excitabilidade no neurossoma do GRD do rato diabtico imobilizado deve-se ao
aumento do nmero de canais de Na
+
da membrana ou alteraes dos parmetros
cinticos dos canais de Na
+
ou uma diminuio da condutncia de membrana ao K
+
ou ambos. No presente estudo, como houve tendncia aumento na resistncia de
entrada da membrana, muito provvel que tenha havido uma diminuio na
condutncia ao K
+
, a qual contribui para o aumento da excitabilidade.
Coincidentemente com a fase de repolarizao do PA, a condutncia
aumentada aos ons Na
+
logo cessa e a permeabilidade aos ons K
+
rapidamente
restaurada, fazendo com que o potencial de membrana retorne ao seu estado
original de negatividade atravs da abertura dos canais de K
+
e, principalmente,
atravs de um processo chamado inativao do canal de Na
+
. O potencial de ao
83
nervoso um fenmeno muito rpido, da ordem de apenas alguns milissegundos. A
amplitude do potencial de ao demonstrou ser amplamente dependente da
concentrao externa de Na
+
e insensvel diminuio do K
+
extracelular para
valores inferiores aos fisiolgicos (BEST; TAYLOR, 1990).
No que concerne resistncia de entrada da membrana do GRD, os
resultados demonstraram uma tendncia a aumento dos grupos diabtico
imobilizado, diabtico e imobilizado em relao ao controle, semelhante durao
do PA. Este fato deve-se muito provavelmente ao fechamento dos canais de
potssio, o que causa a diminuio da permeabilidade dos ons potssio, aumento
da durao do PA e da excitabilidade.
Uma diminuio da condutncia ao K
+
pode resultar ou no na alterao
do potencial de repouso. Isso se deve a que algumas condutncia ao K
+
, como a da
corrente M, podem no incluir a voltagem transmembrana ao potencial de repouso
na sua faixa da modificao do estado da ativao dependente de voltagem. No
presente estudo houve uma tendncia alterao do potencial de repouso apenas
nos neurnios sem inflexo do grupo diabtico imobilizado em relao ao controle.
Esses dados sugerem, portanto que a alterao da condutncia ao K
+
, se real,
ocorreu apenas para uma condutncia que no contribuiu de maneira importante
para o potencial de repouso. Uma candidata atraente a corrente M de potssio.
Esta corrente M (I
M
) carreada por ons potssio, ativada e desativada lentamente e
no possui mecanismo de inativao. Essa corrente est ligada ao controle da
gerao do PA, pois ela atua na repolarizao da membrana celular em direo ao
valor de repouso do potencial de membrana. Alm disso, a inibio da I
M
resulta em
pequena ou nula despolarizao, aumento da resistncia da membrana e um
conspcuo aumento na excitabilidade celular (IKEDA; KAMMERMEIER, 2002).
O potencial de ao foi alterado. Houve uma tendncia reduo
significante e da dV/dT mxima ascendente e da dV/dT mxima descendente,
sugerindo diminuio dos canais de Na
+
e fechamento de canais de K
+
. Esse dado
corrobora que o aumento da excitabilidade foi devido a uma diminuio da
condutncia ao potssio, tornando assim tambm mais lenta a repolarizao e
aumento da durao.
84
7 CONCLUSO
1. Houve uma reduo da amplitude e da velocidade de conduo da 1 componente
do potencial de ao composto da fibra do nervo citico e um aumento da 2
componente em relao ao controle para os grupos imobilizados, diabticos e
diabticos imobilizados. Sugerindo um comprometimento das fibras motoras
decorrentes das alteraes da imobilizao e da diabetes, e um aumento da
excitabilidade dos neurnios sensoriais.
2. Houve de uma maneira geral uma tendncia a aumento da excitabilidade medida
atravs de vrios parmetros, que possivelmente resulta de uma diminuio da
condutncia de repouso ao potssio, j que nos neurossomas do GRD houve
aumento da resistncia de membrana e diminuio da dV/dT ascendente e dV/dT
descendente.
3. Devido a no alterao do potencial de repouso, sugere-se que a alterao da
excitabilidade se deva principalmente ao bloqueio da corrente M de potssio.
85
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96
APNDICES
97
APNDICE I
Tabela 03. Amplitude positiva da 1 componente do potencial de ao composto, em
diferentes frequncias de estimulao no nervo citico direito de ratos. Os resultados
expressos em valores absolutos esto apresentados como mdia erro padro da
mdia (ANOVA). O n indica a quantidade de nervos citicos direito de ratos.
Freqncias
(Hz)
Controle
(n=13)
Imobilizado
(n=15)
Diabtico
(n=8)
Diabtico
Imobilizado
(n=13)
0,2 6,870,67 4,480,48 * 5,290,77 5,730,53
20 7,180,71 4,650,46 * 4,940,67 # 5,460,58
50 6,740,70 4,190,43 * 4,230,61 # 4,810,55
100 5,510,62 3,150,37 * 3,070,51 # 3,630,49
200 3,010,37 1,650,27 1,820,44 2,430,29
300 1,660,19 0,800,11 0,880,20 0,800,19
400 1,290,15 0,620,12 0,740,19 0,900,25
Estatistiscamente significante: *(p<0,05) entre os grupos controle e imobilizado; #(p<0,05) entre os
grupos controle e diabtico.
98
APNDICE II
Tabela 04. Amplitude positiva da 2 componente do potencial de ao composto, em
diferentes frequncias de estimulao no nervo citico direito de ratos. Os resultados
expressos em valores absolutos esto apresentados como mdia erro padro da
mdia (ANOVA). O n indica a quantidade de nervos citicos direito de ratos.
Freqncias
(Hz)
Controle
(n=13)
Imobilizado
(n=14)
Diabtico
(n=7)
Diabtico
Imobilizado
(n=10)
0,2 3,100,31 4,870,70 4,620,75 5,241,06
20 3,040,31 4,900,66 4,160,61 4,580,90
50 2,740,29 4,460,61 3,510,55 3,930,78
100 2,200,28 3,280,47 2,460,44 2,720,55
200 0,880,18 1,620,29 1,430,40 1,820,35
300 0,160,06 0,260,10 0,260,13 0,390,12
400 0,200,16 0,020,02 0,170,11 0,350,28
Estatisticamente significante: (p<0,05) entre os grupos controle e diabtico imobilizado.
99
APNDICE III
Tabela 05. Amplitude pico-a-pico do potencial de ao composto, em diferentes
frequncias de estimulao no nervo citico direito de ratos. Os resultados
expressos em valores absolutos esto apresentados como mdia erro padro da
mdia (ANOVA). O n indica a quantidade de nervos citicos direito de ratos. O n
indica a quantidade de nervos citicos direito de ratos.
Freqncias
(Hz)
Controle
(n=15)
Imobilizado
(n=16)
Diabtico
(n=8)
Diabtico
Imobilizado
(n=9)
0,2 7,270,78 6,290,81 6,020,62 8,740,69
20 7,520,82 6,350,79 5,690,55 8,330,70
50 7,040,80 5,910,78 4,870,51 7,420,69
100 5,730,72 4,370,63 3,450,46 5,660,65
200 3,110,43 2,140,40 1,950,43 3,110,30
300 1,870,31 1,010,15 0,980,23 1,220,17
400 1,360,17 0,760,15 0,870,22 1,080,27
Estatisticamente significante: (p<0,05) entre os grupos diabtico e imobilizado; (p<0,05) entre os
grupos diabtico imobilizado e diabtico.
100
APNDICE IV
Tabela 06. Velocidade de conduo da 1 componente do potencial de ao
composto, em diferentes frequncias de estimulao no nervo citico direito de
ratos. Os resultados expressos em valores absolutos esto apresentados como
mdia erro padro da mdia (ANOVA). O n indica a quantidade de nervos
citicos direito de ratos.
Freqncias
(Hz)
Controle
(n=15)
Imobilizado
(n=15)
Diabtico
(n=8)
Diabtico
Imobilizado
(n=14)
0,2 93,637,48 79,145,58 * 85,865,67 73,394,95 #
20 87,684,88 73,206,12 * 83,245,06 71,814,59 #
50 84,494,90 70,045,99 * 77,434,69 68,614,44 #
100 76,574,75 60,925,45 * 75,261,58 61,173,95 #
200 62,154,09 52,393,70 60,084,20 50,133,00
300 57,993,48 50,084,24 51,996,42 51,144,13
400 62,764,88 60,355,05 58,045,35 59,4010,68
Estatisticamente significante: *(p<0,05) entre os grupos controle e imobilizado; #(p<0,05) entre os
grupos controle e diabtico imobilizado.
101
APNDICE V
Tabela 07. Velocidade de conduo da 2 componente do potencial de ao
composto, em diferentes frequncias de estimulao no nervo citico direito de
ratos. Os resultados expressos em valores absolutos esto apresentados como
mdia erro padro da mdia (ANOVA). O n indica a quantidade de nervos
citicos direito de ratos.
Freqncias
(Hz)
Controle
(n=14)
Imobilizado
(n=9)
Diabtico
(n=8)
Diabtico
Imobilizado
(n=13)
0,2 32,461,54 29,852,67 32,163,32 34,922,10
20 31,271,46 30,853,08 30,743,21 33,762,04
50 29,721,49 29,092,94 28,473,00 31,831,77
100 26,901,40 25,152,63 25,422,92 28,331,83
200 21,511,15 21,092,17 21,373,95 23,781,40
300 25,161,25 20,943,73 15,085,75 23,180,66
400 11,874,70 13,488,41 15,739,60 19,077,01
102
APNDICE VI
Tabela 08. Distribuio dos parmetros eletrofisiolgicos do registro intracelular dos
neurnios sem inflexo. Os resultados, expressos em valores absolutos, esto
representados com a mdia erro padro da mdia (ANOVA). O n indica o nmero
de amostras.
Parmetros Eletrofisiolgicos Neurnios sem inflexo
C
si
I
si
D
si
DI
si
Corrente Limiar (nA)
2,040,17
(n=29)
1,320,19*
(n=14)
1,190,13**
(n=14)
1,110,17
#
(n=19)
Resistncia (M) 6,600,78
(n=28)
7,541,88
(n=13)
13,001,41
**
(n=13)
14,772,12
#
(n=19)
Potencial de Repouso (mV) -64,831,75
(n=29)
-65,692,47
(n=13)
-67,333,49
(n=12)
-57,261,69
(n=19)
Amplitude PA
(mV)
75,921,75
(n=29)
64,222,79*
(n=14)
61,133,53**
(n=12)
63,862,85
#
(n=18)
dV/dt
asc
(V/s)
192,6010,26
(n=27)
136,6014,44*
(n=12)
127,4012,29
**
(n=14)
145,6012,44
#
(n=19)
dV/dt
desc
(V/s)
-122,905,70
(n=28)
-93,006,80*
(n=13)
-88,466,83
**
(n=14)
-100,205,83
#
(n=19)
Durao PA
(ms)
0,710,02
(n=29)
0,840,10
(n=14)
1,010,06
**
(n=14)
0,960,07
#
(n=19)
Estatisticamente significante: *(p<0,05) entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os
grupos controle e diabtico; #(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico imobilizado; (p<0,05)
entre os grupos imobilizado e diabtico imobilizado.
103
APNDICE VII
Tabela 09. Distribuio dos parmetros eletrofisiolgicos do registro intracelular dos
neurnios com inflexo. Os resultados, expressos em valores absolutos, esto
representados com a mdia erro padro da mdia (ANOVA). O n indica o nmero
de amostras.
Parmetros Eletrofisiolgicos Neurnios com inflexo
C
ci
I
ci
D
ci
DI
ci
Corrente Limiar (nA)
1,380,21
(n=25)
1,080,13*
(n=32)
0,970,18**
(n=19)
0,840,10
#
(n=30)
Resistncia (M) 13,752,08
(n=25)
17,562,32
(n=33)
24,282,94
**
(n=18)
24,503,37
#
(n=31)
Potencial de Repouso (mV) -60,222,22
(n=27)
-57,002,01
(n=31)
-57,002,85
(n=17)
-54,832,05
(n=30)
Amplitude PA
(mV)
82,703,05
(n=27)
78,092,24*
(n=34)
71,762,91
**
(n=21)
73,533,04
#
(n=30)
dV/dt
asc
(V/s)
121,1011,91
(n=26)
106,507,28*
(n=33)
58,354,76
**
(n=20)
104,8011,01
#
(n=31)
dV/dt
desc
(V/s)
-60,896,02
(n=27)
-56,843,55*
(n=31)
-46,483,97**
(n=21)
-67,696,47
#
(n=29)
Durao PA
(ms)
2,420,23
(n=24)
2,480,21
(n=32)
3,130,30**
(n=21)
3,420,36
#
(n=30)
Estatisticamente significante: *(p<0,05) entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os
grupos controle e diabtico; #(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico imobilizado; (p<0,05)
entre os grupos imobilizado e diabtico imobilizado.