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SISTEMAS DE PRODUCCION DE
ALIMENTOS (OTRAS ESPECIES)
TALLER #2
TEMA: TECNICA DE TRANSPLANTE
DE EMBRIONES















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INDICE

Pg.
1. Introduccin..3
2. Preparacin fisiolgica de las receptoras......5
2.1 Especie caprina....5
2.2 Especie ovina....6
3. Preparacin fisiolgica de las donadoras.......7
3.1 Especie caprina.....7
3.2 Especie ovina......8
4. Mtodos de trasplante de embriones....9
4.1 mtodo por laparoscopia.10
4.2 mtodo por va laparotoma o quirrgico ..11
4.3 mtodo por va cervical ...12
5. medios lquidos para la recoleccin de embriones ..13
6. bsqueda y evaluacin de la calidad de los embriones15
7. Tcnica de duplicacin de embriones.17.
7.1 tcnica de separacin de blastmeros..17
7.2 tcnica de biparticin de embriones18
8. conclusin19
9. bibliografa 20










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1. INTRODUCCION

La tcnica de trasplante embrionario esta revelndose como una de las
ms eficientes biotecnicas de la reproduccin, teniendo en vista el
mejoramiento gentico del rebao.
La importacin de razas exticas sin riesgos de enfermedades o de otros
problemas, como aquellos relacionados a la calidad gentica de los animales,
es prcticamente inexistente cuando se utiliza el trasplante embrionario.
La tcnica permite a los criadores costos bien bajos si son comparados al de
los animales vivos, adems de no presentar cualquier peligro sanitario, pues
los embriones son prcticamente inmunes a virus y bacterias, por el hecho
de ser sometidos a sucesivos lavados antes de su congelamiento.
La adaptacin al medio ambiente de los animales nacidos de trasplante de
embriones es extremadamente beneficiosa, por tanto las cras maman el
calostro de la receptora, siendo un animal normalmente adaptado al
ambiente y ms resistente a determinadas enfermedades, a travs de las
inmunoglobulinas y anticuerpos con otras enfermedades propias del medio
tropical.

El trmino Transferencia de Embriones es la tcnica por medio de la cual
se colectan embriones en animales donantes y son transferidos o
implementados en animales receptores. Este proceso se lleva a cabo con los
elementos necesarios como droga y equipo y se desarrolla en el campo
gracias al trabajo en conjunto del elemento humano donde se integran los
conocimientos y la prctica diaria de la actividad.




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Historia


En 1890 Walter Heape report que una camada de conejos haba nacido en
su laboratorio como resultado de un trasplante de embriones. Este impacto
fue muy importante y aos ms tarde se reporta las primeras transferencias
de embriones en bovinos y el nacimiento en 1951 del primer ternero a
travs de este medio. A medida que pas el tiempo el inters por la T.E. se
fue haciendo mayor y su aplicacin industrial en ganado se realiz en
Estados Unidos, Australia y Nueva Zelanda a mediados de los setentas.

Los mtodos iniciales usaban la ciruga bajo el efecto de anestesia, tanto
para la recoleccin como para la transferencia. El desarrollo y la
investigacin permiten hoy que este proceso se lleve a cabo sin cirugas y
usando anestesia local.







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2. PREPARACIN FISIOLGICA DE LAS RECEPTORAS:
2.1 Especie caprina:

Se utiliza el mtodo francs Chrono gest (I.N.R.A) que consiste en el
uso de esponjas intravaginales impregnadas con 45 mg de acetato de
fluorogestona, depositadas en la porcin craneal de la vagina por un periodo
de 10 das. En el 8 da se realiza la aplicacin intramuscular de 200 UI de
ECG (gonadotrofina corionica equina) y 75 ug de cloprostenol (anlogo
sinttico de PGF 2C).
En el 10 da se retiran las esponjas y enseguida son observados los celos
con el auxilio de machos vasectomizados o por observacin del
comportamiento de las hembras trabajadas.
En el 15 da del tratamiento, las hembras son sometidas a un ayuno hdrico
y alimentar por 24 horas y en el 16 da son transportadas en el inicio de la
maana al laboratorio para la realizacin de los trasplantes.






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2.2 Especie ovina:

Se utiliza el mtodo francs Chrono gest (I.N.R.A) que consiste en el uso
de esponjas intravaginales impregnadas con 45 mg de acetato de
fluorogestona, depositadas en la porcin craneal de la vagina por un periodo
de 12 das, donde es realizada tambin la aplicacin intramuscular de 400
U.I de E.C.G.
En el 12 da, se retiran las esponjas y enseguida son observados los celos
con el auxilio de machos vasectomizados o por observacin del
comportamiento de las hembras trabajadas.
En el 18 da del tratamiento, las hembras son sometidas a un ayuno hdrico
y alimentar por 24 horas y en el 19 da son transportadas en el inicio de la
maana al laboratorio para la realizacin de los trasplantes.







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3. PREPARACION FISIOLOGICA DE LAS DONADORAS:
3.1 Especie caprina:

Se utiliza el mtodo francs anteriormente citado, Chrono gest
(I.N.R.A), que consiste en el uso de esponjas intravaginales impregnadas con
45 mg de FGA, en la porcin craneal de la vagina, permaneciendo por 10
das. En el 6 da, se aplican por va intramuscular 8 mg de FSH (hormona
folculo estimulante), siendo 4 mg en la maana y 4 mg en la tarde. En el 7
da 4mg de FSH, siendo 2 mg en la maana y 2 mg en la tarde ye n el da 8, 4
mg de FSH, siendo 2 mg en la maana y 2 mg en la tarde, haciendo un total
de 16 mg.
En el 10 da se procede a la retirada de las esponjas, realizndose 3
servicios, con un reproductor genticamente superior y de comprobada
fertilidad, en intervalos de 12, 24 y 36 horas.
Transcurrido 17 das del tratamiento, se procede a la recolecta de
embriones, los cuales pueden ser transferidos a fresco por las receptoras
preparadas dentro del mismo periodo de las donadoras. Caso contrario, se
puede procesar el congelamiento de los referidos embriones siendo que, en
promedio, de cada 10 embriones colectados, 6 de ellos son perfectamente
congelables y 4 pueden ser trasplantados a fresco. As como las receptoras,
las donadoras tambin debe ser sometidas a ayuno hdrico y alimentar 24
horas antes de realizar la recolecta de los embriones.



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3.2 Especie ovina:
Se utiliza el mtodo francs anteriormente citado, Chrono gest (I.N.R.A),
que consiste en el uso de esponjas intravaginales impregnadas con 45 mg de
FGA, en la porcin craneal de la vagina, permaneciendo por 12 das. En el 9
da, se aplican por va intramuscular 10 mg de FSH (hormona folculo
estimulante), siendo 5 mg en la maana y 5 mg en la tarde. En el 10 da 6mg
de FSH, siendo 3 mg en la maana y 3 mg en la tarde y en el da 11, 4 mg de
FSH, siendo 2 mg en la maana y 2 mg en la tarde, haciendo un total de 20
mg.
En el 12 da se procede a la retirada de las esponjas, realizndose 3
servicios, con un reproductor genticamente superior y de comprobada
fertilidad, en intervalos de 24, 48 y 60 horas.
Transcurrido 19 das del tratamiento, se procede a la recolecta de
embriones, los cuales pueden ser transferidos a fresco por las receptoras
preparadas dentro del mismo periodo de las donadoras. Caso contrario, se
puede procesar el congelamiento de los referidos embriones siendo que, en
promedio, de cada 10 embriones colectados, 6 de ellos son perfectamente
congelables y 4 pueden ser trasplantados a fresco. As como las receptoras,
las donadoras ovinas, tambin deben ser sometidas a ayuno hdrico y
alimentar 24 horas antes de realizar la recolecta de los embriones.








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4. METODOS DE TRASPLANTE DE EMBRIONES:

Tratamiento de induccin















Recolecta y
Trasplante
Laparotomia
Via Cervical
Laparoscopia
Sper ovulacin
(donadora) esponja+ FSH

Sincronizacin (receptora)
esponja + E.C.G
Caprinos y Ovinos
Caprinos y ovinos
Caprinos
RESULTADOS
Ecografas 2 embriones trasplantados
por receptoras.
85% de receptoras gestantes
1.6 producto por receptora (embriones frescos);
1.5 producto por receptora (embriones descongelados)


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4.1 Mtodo por Laparoscopia

Este mtodo fue desarrollado con el fin de mejorar las posibilidades de
repetir en hembras donantes permanentes, la recoleccin de embriones,
evitando adherencias en el tero, oviducto y ovarios.
El animal es anestesiado y colocado sobre la hamaca de sujecin con una
inclinacin antero-posterior de 30 a 45, afeitndose y desinfectndose el
campo operatorio. Se realiza una primera puncin a unos 4-5 cm delante de
la ubre y a 10-15 am a la izquierda de la lnea blanca para colocar una cnula
que se conecta con el endoscopio. Despus de haber colocado aire en la
cavidad abdominal para separar la vsceras de los rganos genitales, se
coloca una segunda cnula, al otro lado de la primera, con el objetivo de
introducir una pinza, se sujeta uno de los cuernos por la base con el fin de
punzarlo (aguja de Mintz). Es colocada una tercera cnula, para pasar una
sonda de tres vas, donde se introduce el extremo de la misma por el orificio
de la puncin dentro de la luz uterina.
El globito introducido con la sonda (va 1) es inflado con la finalidad de
obstruir la luz uterina en la base del cuerno, donde es colocado el extremo
de un catter (va 2). El otro catter (va 3) es introducido por el otro su
extremidad lo ms cerca posible de la unin tero- tubrica. La pinaza es
colocada sobre el istmo con el fin de evitar que el lquido pase para el
oviducto. Es inyectado por la sonda (va 3) en torno de 40-50 ml de lquido
fisiolgico de recoleccin que se recupera junto con los embriones por la
sonda (va 2) colocada en la base del cuerno.
Para efectuar el trasplante en la receptora se sigue prcticamente el mismo
procedimiento realizado en la recoleccin de la donadora. Esta operacin


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permite decidir si efectuar o no el trasplante, asi como seleccionar el cuerno,
a travs de la respuesta ovulatoria. El operador ya decidido que es posible
realizar el trasplante en la receptora, escoge el cuerno uterino que recibir
los embriones, siendo sujetado por su parte superior (tercio prximo a la
unin tero- tubrica) con la ayuda de la pinza traumtica y punzado con
una aguja de Mintz, por donde sern colocados los embriones.
4.2 mtodo por laparotoma o quirrgico

Despus de la anestesia se prepara el campo operatorio igual como para la
recoleccin para laparoscopia. Es hecha una incisin de 8 a 10 cm sobre la
lnea blanca que comienza a 3-4 cm delante de la ubre, de permitiendo as
exteriorizar los cuernos uterinos y contar con los cuerpos lteos presentes
en los ovarios. Como fue visto, la recoleccin de embriones se realiza en los
das 6-7, despus del ultimo servicio, en la cual se lava cada cuerno, a nivel
del ligamento intercornual para introducir una sonda de folley y una aguja
en la luz uterina, obstruyndola a travs del globo inflado en el extremo de la
sonda. En el otro lado del cuerno, cerca de la unin tero- tubrica, se
realizar una segunda puncin, donde se introduce un catter el cual se fija a
una pinza atraumtica, permitiendo con que se de una buena obstruccin,
evitando el reflujo de lquido para la cavidad peritoneal. Son inyectados
despus de esto, entorno de 40 a 50 ml de lquido de recoleccin a +37c, ya
sea en la base del cuerno (va retrgada) o cerca de la unin tero- tubrica
(va antergrada). Por el extremo opuesto mediante la sonda o el catter, es
recuperado el lquido, junto con los embriones, que sern depositados en
una placa de Petri.


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Para el trasplante es realizado una incisin de 7-8 cm en la lnea blanca, para
exteriorizar los cuernos uterinos junto con los ovarios, con el fin de decidir
si conviene o no efectuar el trasplante el operador selecciona el cuerno y
realiza una pequea puncin con aguja de punta cnica, evitando lesionar la
mucosa uterina, depositando delicadamente los embriones. Terminado el
trasplante o la recolecta, se coloca en la cavidad abdominal un antibitico
(para evitar infecciones) y posteriormente se sutura el peritoneo y la piel.

4.3mtodo por va cervical

Para la recolecta de embriones por va cervical el animal es anestesiado y
enseguida es introducido en la vagina un especulum con iluminacin para
visualizar el cuello uterino el cual es sujetado con una pinza atraumtica. El
tcnico introducir un dedo en el recto del animal con el fin de guiar el paso
de la sonda de recoleccin en el orificio de la crvix. El paso del catter
dentro del orificio del cuello no siempre es posible en la cabra y menos
todava en la oveja. Al pasar los anillos de la crvix, llegando al cuerpo del
tero evitando el reflujo liquido de la vagina. Despus de obstruido el canal
se inyecta el medio de recoleccin (10 a 20 ml de PBS) en el tero (lavado
los dos cuernos), recuperndose despus con la ayuda de la sonda de
recoleccin. Son practicados varios lavados sucesivos hasta totalizar 100 a
200 ml de medio lquido de recoleccin por hembra. Debido a la dificultad
de sobrepasar el cuello uterino y la imposibilidad de manipular los cuernos
uterinos por palpacin rectal como en los bovinos y equinos, la recoleccin
de embriones por la via genital natural es todava una tcnica poco
desarrollada en los que respecta a los pequeos rumiantes.
De la misma forma ocurre con el trasplante, donde los embriones se
expulsan en la base de una de los cuernos o dentro del cuerpo del tero,
siendo siempre incierto el punto exacto alcanzado por el extremo del
catter. Por otra parte, este mtodo no nos permite conocer el estado


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ovrico de la receptora, pudiendo depositar el embrin en el ovario que no
posee el cuerpo o cuerpos lteos, incluso en hembras sin ovulacin.

5 MEDIOS LQUIDOS PARA LA RECOLECCIN DE EMBRIONES.
La preparacin del medio para la recoleccin y conservacin de los
embriones se detalla en la siguiente tabla:











Es necesario aadir protenas a esta solucin salina para la supervivencia
del embrin y las aporta el 4% de albmina sdica que se aade (BSA)., o
bien un 10% de suero fetal de oveja o de cabra.
En el caso de emplearse suero, ste deber ser descomplementado,
con el fin de inactivar la protena complemento que puede ser txica para el
embrin.

Debido a la dificultad de sobrepasar el cuello uterino y la
imposibilidad de manipular los cuernos uterinos por palpacin rectal como
en los bovinos y equinos, la recoleccin de embriones por va genital natural
es una tcnica poco desarrollada por lo que respecta a los pequeos
rumiantes. La recoleccin de huevos por este mtodo es en general baja e
inferior a la obtenida por laparoscopia o ciruga.
MEDIO DE RECOLECCIN PBS
SOLUCIN 1 MG/L SOLUCIN 2 MG/L
CaCl2 2H2O 132,5 NaCl 8000
MgCl2 6H2O 100,0 KCl 200
KH2PO4 200
Na2HPO4 1150
BSA 4000
D-glucosa 1000
Na piruvato 36
Sulfato de
estreptomicina
50
Na penicilina-
G
1000000
U.I.
Disolver los reactivos de las soluciones 1 (en 200 ml) y 2
(en 800 ml de agua destilada)
Ajustar el pH a 7,3
Esterilizar la solucin final y conservar a 4C


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La recoleccin quirrgica es la que ms frecuentemente se utiliza, lo
que permite exteriorizar los cuernos uterino y contar los cuerpos lteos
presentes en el ovario.
Cuando la recoleccin se realiza los das 2-4 despus del inicio del
celo, la mayor parte de los embriones todava estn en el oviducto por lo que
la tcnica se puede realizar mediante dos tcnicas:
- Introducir el catter de un milmetro de dimetro a 2 cm en el
oviducto por el pabelln de las trompas, luego se inyectan el PBS que se
recoge a travs de un catter tipo Folley que se habr colocado en el final del
cuerno uterino.
- La otra consiste en recoger en el pabelln el lquido inyectado en la
base del cuerno uterino.
Cuando la recoleccin se realiza los das 6-7, el lavado de cada cuerno
uterino se realiza separadamente. Se efecta una puncin en la base del
cuerno, a nivel del ligamento intercornual para introducir una sonda Folley.
La luz uterina se obstruye mediante el inflado de la ampolla situada en el
extremo de la sonda o comprimiendo el cuerno alrededor de la misma por
medio de una pinza a traumtica. En el extremo opuesto del cuerno, cerca de
la unin tero-tubrica, se realiza una segunda puncin, mediante la cual se
introduce un catter de 1-2 cm en la luz y se fija con un clamp vascular o una
pinza a traumtica.
Se inyecta el lquido colector a 37C cerca de la unin tero-tubrica y
se recupera por la sonda. Terminado el lavado se introduce antibitico en la
cavidad abdominal.
La eficacia de la recoleccin es del 70 al 90%, pero disminuye segn se
va repitiendo la tcnica en los mismos animales ya que aparecen
adherencias en el tero, oviductos y ovarios. Este fenmeno puede paliarse
mediante la aspersin del tracto genital con suero fisiolgico heparinizado
(50 U.I. de heparina/ml).






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6 BSQUEDA Y EVALUACIN DE LA CALIDAD DE LOS EMBRIONES.

El lquido de recoleccin recuperado despus del lavado de los
cuernos uterinos debe ser revisado mediante una lupa binocular de 10
aumentos como mnimo, de manera que los embriones recuperados se
aspiran con una pipeta pina de vidrio en un volumen lo ms reducido
posible y se colocan en una placa de petri con PBS filtrado y un 4% de BSA.
Una vez agrupados e identificados los embriones el operario debe proceder
al control de calidad de los embriones.
Con el fin de limitar los riesgos de contaminacin externa y evitar
eventuales choques trmicos, es preciso o interesante efectuar las
operaciones de manipulacin bajo una cmara de flujo laminar o dentro de
una cmara provista de filtracin de Aire y regulacin trmica.
La calidad de los embriones se basa en aspectos morfolgicos y se
examinan con lupa binocular a 80 aumentos, dando vueltas a stos con una
pipeta de vidrio para apreciar toda su morfologa.
- La zona pelcida debe aparecer ntegra.
La clasificacin es la siguiente:
Excelente: Embrin ideal, esfrico, simtrico, con clulas de tamao,
color y textura uniforme.
Bueno: embrin con pequeas desigualdades entre los blastmeros,
algo de picnosis y pequeas vesculas.
Regular: embrin con algunas clulas degeneradas, vesiculacin y
blastmeros irregulares.
Malo: embrin con muchas clulas degeneradas, grande y gran
cantidad de vesculas.
El grado de desarrollo embrionario debe ser el adecuado con respecto
al momento de recogida. Los embriones que presenten un retraso en el


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desarrollo superior a 48 horas deben ser eliminados. Tampoco se
conservar ningn embrin para el transplante o congelacin a causa del
excesivo retraso de su desarrollo. En los caprinos, el desarrollo embrionario
precoz presenta un retraso de 12 a 24 horas respecto al observado en
ovinos. Al sptimo da despus del inicio del celo la proporcin de
embriones en estadio entre blastocisto y blastocisto fuera de la pelcida, es
ms elevada en la oveja que en la cabra.
ESTADO DE DESARROLLO DE EMBRIONES EN LA OVEJA Y LA CABRA
DA DE
RECOLECCIN
OVEJA CABRA
2 2-4 clulas 1-2 clulas
3 8 clulas 4-8 clulas
4 8-20 clulas 8-20 clulas
5 mrula joven 20 clulas-mrula joven
6 mrula compactada-
joven blastocisto
mrula
7 blastocisto expandido y
fuera de la zona pelcida
mrula compactada.
blastocisto expandido
8 blastocisto fuera de la
zona pelcida
blastocisto expandido y
fuera de la zona pelcida

Cualquiera que sea el desarrollo, el embrin debe ser esfrico y con
los contornos de las clulas perfectamente visibles.
En el estado de mrula compacta, los blastmeros estn muy unidos y
no se pueden apreciar bien los lmites celulares. La presencia de algunas
clulas separadas en el espacio perivitelino no constituye un motivo de
eliminacin, si la mayora de los blastmeros forman una masa esfrica sin
opacidad marcada.
En el estadio de blastocisto las diferentes estructuras deben ser
visibles. Se pueden observar blastmeros en el espacio perivitelino con
granulaciones de las clulas lo que supondra la eliminacin de estos
embriones, as como una opacidad marcada de los blastmeros. Los
embriones con un aspecto dudoso se conservarn de una a dos horas para
ser sometidos a un nuevo examen.
El examen morfolgico no es un test absoluto de viabilidad pero a
veces se constata una diferencia importante entre la apreciacin de la
calidad de los embriones y su supervivencia tras el trasplante.


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7 TCNICA DE DUPLICACIN DE EMBRIONES
cuando el trasplante de embriones de forma convencional limita los
resultados satisfactorios en lo que se refiere los nmeros de
embriones producidos por las donantes, nuevas biotcnicas son
aplicadas para conseguir el mximo aprovechamiento gentico de la
matriz en el caso de la oveja, que produce entorno de 5 a 6 embriones,
que da lugar a 3 o 4 corderos, estos resultados pueden ser mejorados
a travs de las tcnicas de duplicacin de embriones que consisten en
el aislamiento de los blastmeros y la tcnica de biseccin o
biparticin de los embriones de las cuales sern abordadas a seguir.

7.1 Tcnica de separacin de blastmeros
Consiste en el aislamiento de los blastmeros a travs de la
micromanipulacin. Despus de separados, los blastmeros son
colocados en una zona pelcida individualmente, dando origen a
nuevos embriones genticamente idnticos.
La obtencin de dos individuos a partir de un solo embrin parece ser
un lmite, pero, excepcionalmente, se han obtenido trillizos a
cuatrillizos a partir de pares de blastmeros de un embrin con 8
clulas. Este resultado demuestra que se puede aumentar el nmero
de animales producidos aislando grupos de clulas originarias, este
mtodo original es relativamente complejo y a pesar de haberse
obtenido nacimientos viables, el mismo reduce las probabilidades
numerosas manipulaciones. De hecho, algunas clulas aisladas y
despus depositadas en una zona pelcida muy abierta, son incapaces
de desarrollarse in vivo, esto se debe principalmente a que la zona
pelcida protege el embrin permitiendo as su divisin y dispersin
de los blastmeros.
El embrin joven de ovinos se desarrolla mal despus de las 8-16
clulas en las condiciones de cultivo in vitro, por esto, es necesario
trasplantar los embriones reconstituidos y envueltos en agarosa,
depositndolos en el oviducto de una receptora intermediaria. Estos
debern recuperarse algunos das ms tardes cuando hayan
alcanzado el estadio de mrula o blastocito, para extraerlos del
manguito de agarosa.
Estos sern definitivamente trasplantados en el tero de una hembra
receptora que asegurar su desarrollo hasta el parto.





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7.2 tcnica de biparticin de embriones

la principal biotcnica, que complementa el trasplante de embriones,
para conseguir un mayor ndice de gestacin, se llama biparticin o
biseccin de embriones. Bsicamente es un procedimiento en el cual
los embriones en el estadio de mrula compactada o blastocito, son
divididos en el medio en el medio dado origen a dos hemiembriones.
La divisin es hecha con la ayuda de una lmina y un
micromanipulador, que permite movimientos delicados los cuales no
perjudican el embrin. Esta tcnica es dividida en cuatro etapas,
mencionadas a seguir:
Se abre la zona pelcida con micromanipuladores
Se extrae delicadamente el embrin;
Con una lmina de vidrio, el embrin es dividido en dos partes
iguales;
Una parte es introducida en la zona pelcida de origen y la otra
en una zona pelcida diferente.
La biseccin de los blastocitos en los das 9 y 10 permite obtener corderos
con una eficacia elevada. Este fenmeno se puede explicar por la
intervencin de una seleccin natural.
En el 10 da el embrin ya ha superado la etapa crtica que supone la
formacin del blastocito.








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8. CONCLUSIN



La TE puede incrementar el nmero de cras de una hembra
genticamente superior, permitiendo obtener en promedio 4 cras
por tratamiento de ovulacin mltiple.

Los recientes Avances en el incremento de la eficiencia
reproductiva en la TE han ampliado la posibilidad de su utilizacin
en los programas de mejoramiento gentico aumentando la
difusin de los genes de las ovejas y caprinos de alto valor
productivo.

Futuras investigaciones sern necesarias para reducir los costos e
incrementar el nmero de cras por oveja donante para facilitar su
aplicacin comercial, como se ha logrado en la especie bovina.
























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9. BIBLIOGRAFA



Biotcnicas de la reproduccin caprina y ovina. Jos
Ferreira Nunes, Rene Prez Fernndez. 1. Edicin. Cear-
Brasil. 2001. Pginas 61-75

http://www.uco.es/zootecniaygestion/img/pictorex/16_11
_35_ESTADO_ACTUAL_Y_PERSPECTIVAS_DE_LA_REPRODU
CCI%C3%93N_CAPRINA_2_DEF.pdf

http://www.produccion-
animal.com.ar/produccion_ovina/inseminacion_ovinos/28-
MANUAL.pdf