UNIVERSIDAD DE COLIMA

POSGRADO INTERINSTITUCIONAL DE CIENCIAS PECUARIAS

ELABORACIN DE CULTIVOS MICROBIANOS A PARTIR DE PASTA
DE COCO Y SU UTILIZACIN EN DIETAS PARA BORREGOS EN
ENGORDA



TESIS QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
MAESTRA EN CIENCIAS PECUARIAS
P R E S E N T A:

Mnica Flores Nocedal

ASESOR DE TESIS: Dr. Fernando Prez-Gil Romo
COASESORES: M. en C. Leonor Sangins Garca
M. en C. Jess Carmona de la Torre.


Tecomn, Col. 2000.



AGRADECIMIENTOS.



Quiero hacer patente mi agradecimiento al Instituto Nacional de
la Nutricin Salvador Zubirn, en especial al Departamento de
Nutricin Animal, por integrarme a su equipo de trabajo durante
este periodo que dur la maestra.

Agradezco a mis asesores Fernando Prez-Gil Romo, Leonor
Sangins Garca y Jess Carmona de la Torre, por su ayuda,
comentarios, amistad y paciencia durante todo este tiempo que
convivimos y trabajamos.

Agradezco a la Unidad Ovina (UEEE en ganado Ovino) de San Juan
Tlacotenco, en el Estado de Morelos, en especial a la familia
Rojas Cuevas, por el prstamo del paraje Descansadero y de los
borregos durante la prueba de comportamiento de este proyecto.
Por sus consejos, su ayuda y su amistad, gracias.

Agradezco muy especialmente a la Dra. Blanca Cervantes por su
amistad, sus consejos y comentarios. Por ensearme a convivir con
la gente de pueblo, por su sencillez y generosidad mil gracias.

Agradezco la participacin de Susana Quintana Escobar, Raquel
Prez Saavedra y Margarita Rodrguez en la realizacin de este
proyecto pero sobre todo por su gran amistad.

Agradezco a Irene Torres Acosta, Mara Eugenia Jurez S. y
Lourdes Solorzano, del Departamento de Nutricin Animal, por el
apoyo de laboratorio proporcionado durante este tiempo para la
realizacin de este proyecto.


Agradezco a los Doctores Jos Manuel Palma Garca, Sergio
Gonzlez Muoz y Rubn Barajas Cruz por sus comentarios,
sugerencias y conocimientos, por estar conmigo durante esta etapa
tan importante.

Agradezco a Alltech y Chr. Hansen BioSystems de Mxico por el
material bibliogrfico proporcionado.

...y agradezco a todos aquellos que participaron de alguna forma
en la realizacin de este proyecto.





















DEDICATORIA








...y la vida continua, aqu no se detiene, es solo un momento, un
lapso... abro mis alas a nuevos horizontes a dnde quiero
llegar?, qu quiero alcanzar?... en mi vida Dios me gua, subo y
me detengo, reflexiono y un rayo del cielo me ilumina... cunto
me falta?.
En mi ser esta la verdad, la sencillez del alma y entre mas me
conozco, ms libre me siento.
Dios gua mi vida... y yo?...solo soy el medio.
















INDICE.

INDICE............................................................................................................ I
INDICE DE CUADROS Y FIGURAS.............................................................. III
INDICE DE GRFICAS.................................................................................. IV
RESUMEN..................................................................................................... V
JUSTIFICACIN............................................................................................ 1
INTRODUCCIN.................................................................................. 2
REVISION DE LA LITERATURA.
I. Produccin ovina.
a) Situacin actual de la ovinocultura en Mxico............................. 4
b) Sistemas de produccin............................................................... 6
c) Engorda intensiva de ovinos........................................................ 7
d) Variables productivos.
- Ganancia diaria de peso y consumo voluntario...................... 8
- Rendimiento, calidad y composicin de la canal.................... 11
II. Digestibilidad de cereales o concentrados.
a) La digestibilidad en el rumiante................................................... 14
b) Anlisis qumico del alimento....................................................... 17
c) Tcnica in situ para la digestibilidad y desaparicin de la MS..... 18
d) Factores que afectan la fermentacin ruminal.
- Acidos grasos voltiles........................................................... 20
- pH, cido lctico y acidosis..................................................... 21
- Amoniaco................................................................................. 27
- Metano..................................................................................... 28
e) Manipulacin de la fermentacin ruminal y la produccin............ 29







III. Los MAD en la alimentacin de rumiantes
a) Antecedentes............................................................................. 32
b) Cultivos bacterianos.................................................................. 35
c) Cultivos fngicos y de levadura.
- Caractersticas...................................................................... 38
- Elaboracin........................................................................... 38
IV. Pasta de coco.
a) Generalidades............................................................................ 51
OBJETIVOS............................................................................................... 53
HIPOTESIS................................................................................................ 54
MATERIAL Y METODOS........................................................................... 55
- Etapa I.
a) Reacti vacin de las cepas....................................................... 56
b) Produccin del probitico......................................................... 57
c) Evaluacin in situ..................................................................... 58
- Etapa II.
a) Comportamiento productivo....................................................... 60
RESULTADOS Y DISCUSIN.................................................................... 64
CONCLUSIONES........................................................................................ 81
LITERATURA CITADA................................................................................ 82
ANEXOS.














INDICE DE CUADROS Y FIGURAS


Cuadro 1. Produccin de carne ovina en Mxico.......................................... 4
Cuadro 2. Caractersticas de digestin de varios tipos de dietas.................. 17
Cuadro 3. Microorganismos GRAS para crear productos MAD.................... 36
Cuadro 4. Condiciones ptimas de crecimiento para Lp y Pr....................... 39
Cuadro 5. Composicin qumica de la pasta de coco.................................. 50
Cuadro 6. Proporcin de los ingredientes utilizados en los tratamientos...... 57
Cuadro 7. Distribucin de los tratamientos (n=10)....................................... 60
Cuadro 8. Propiedades del sustrato (Pasta de coco).................................... 63
Cuadro 9. Composicin proximal de los ingredientes utilizados en la racin
(g g
-1
de materia seca)..................................................................................... 71
Cuadro 10. AQP de las dietas utilizadas en base seca.................................. 71
Cuadro 11. Desaparicin in situ de la materia seca a las 24, 48 horas y tiempo medio de
retencin...................................................................................................... 72
Cuadro 12. Cintica de la desaparicin in situ de la MS................................. 74
Cuadro 13. Promedios de la ganancia diaria de peso, peso inicial y Peso final
Cuadro 14. Promedios del consumo de materia seca, conversin y eficiencia
alimenticia
Cuadro 15. Relacin de consumo de alfalfa y concentrado........................... 78
Figura 1. Reaccin en cadena de la acidosis en rumiantes........................... 22
Figura 2. Principales sitios para la manipulacin de la fermentacin ruminal.. 31
Figura 3. Esquema alternativo de investigacin que muestra el modo primario de
accin de los aditivos fngicos.......................................................................... 43
Figura 4. Funcin central de un incremento en el nmero de bacterias en el rumen con
la adicin de SC y respuestas en la produccin........................................... 46






INDICE DE GRFICAS.


Grfica 1. Consumo de sustrato (azcares totales) con respecto al tiempo...... 64
Grfica 2. Variacin del pH respecto al tiempo de incubacin de Lp................. 65
Grfica 3. Produccin de biomasa con respecto al tiempo............................... 65
Grfica 4. Representacin grfica de la ecuacin para obtener la produccin de
biomasa de Lp..................................................................................................... 66
Grfica 5. Consumo de sustrato (azcares totales) con respecto al tiempo de incubacin
de Pr. ............................................................................................... 67
Grfica 6. Variacin de pH con respecto al tiempo de Pr................................. 68
Grfica 7. Produccin de CO
2
con respecto al tiempo de Pr.. ......................... 68
Grfica 8. Produccin de biomasa con respecto al tiempo de Pr..................... 69




















RESUMEN


El objetivo del presente trabajo fue producir dos cultivos basados en Penicillum roqueforti
(Pr) y Lactobacillus plantarum (Lp) sobre pasta de coco como substrato slido y evaluar su
efecto sobre la desaparicin in situ de la materia seca y el comportamiento productivo de
borregos en engorda. Las cepas utilizadas en el presente estudio, Lp (ATCC tipo 8014) y Pr
(aislada del queso roqueforti), fueron reactivadas en medios lquido y slido respectivamente,
elaborados a partir de una infusin de pasta de coco, posteriormente fueron cultivados en gran
escala sobre fermentacin en substrato slido (FSS), utilizando la pasta de coco como substrato,
para la elaboracin de los cultivos. Para las pruebas in situ y de comportamiento productivo, se
utiliz una racin base elaborada a partir de concentrado y alfalfa achicalada en una relacin de
59.5%:39.5% y el 1% del cultivo, y un suplemento de sales minerales. Se realiz el anlisis
qumico de la racin. Los cultivos fueron probados en cuatro borregos machos, de 35 kg,
fistulados ruminalmente con una cnula fija para medir la cintica de digestibilidad in situ de la
MS. Los animales permanecieron en jaulas individuales y se asignaron tres tratamientos: T1 (Pr),
T2 (Lp), T3 (testigo). Los resultados se analizaron utilizando SAS para un anlisis de varianza
con un diseo completamente aleatorizado; la diferencia entre medias se analiz mediante la
prueba de Tukey con un nivel de significancia del 0.05. Para evaluar el efecto de los cultivos
sobre el comportamiento productivo se emplearon 30 corderos machos de 60 das de edad, en los
cuales se distribuyeron al azar tres tratamientos: T1 (Pr), T2 (Lp) y T3 (testigo). Se llev un
registro del consumo y para medir la ganancia diaria de peso (GDP), la conversin alimenticia
(CA) y eficiencia alimenticia (EA) se pesaron al inicio y al final de la prueba. Los resultados se
analizaron utilizando SAS para un anlisis de covarianza con el objeto de eliminar sesgos debidos
a la diferencias entre el peso inicial de los animales; la diferencia entre medias se analiz
mediante la prueba de Tukey con un nivel de significancia del 0.05. Pr y Lp presentaron un
crecimiento rpido sobre la pasta de coco que aporta una cantidad suficiente de nutrientes de fcil
degradacin por ambos microorganismos. Adems Lp y Pr aportaron una cantidad relevante de
protena en la pasta de coco. El aporte promedio de protena y energa de la racin fue de 16.81%
y 3.31 Mcal kg
-1
, respectivamente. No se encontraron diferencias (P>.05) entre los tratamientos
para la digestibilidad de la MS a las 24 h. (61.13), 48 h (78.32) y para el tiempo medio de
retencin (30.34) (horas promedio entre los tres tratamientos). Para las diferentes variables
medidas en la cintica in situ tampoco se hallaron diferencias (P>.05) entre los tratamientos. Para
la prueba de comportamiento no hubo diferencias (P>.05) en la GDP, CA y EA entre
tratamientos. Al ajustar el peso inicial con el anlisis de covarianza y empleando el peso
metablico, si hubo diferencias (P<.05) entre tratamientos para el consumo, el cual fue mayor
para el T2 (122 g pv
.75
) y T1 (121

g pv
.75
) contra el T3 (115 g pv
.75
), pero esto no repercuti en la
GDP y en la CA. La adicin de cultivos microbianos con P. roqueforti y L. plantarum a dietas
con un 60% de concentrado para borregos en engorda no afecta su comportamiento productivo
en las condiciones experimentales descritas



Palabras claves: Cultivos microbianos, digestibilidad, dietas altas en concentrados, borregos.




ABSTRACT


The objective of the present work was to produce two DFM based on Penicillum
roqueforti (Pr) and Lactobacillus plantarum (Lp) on coconut meal like solid substrate and to
evaluate the probiotic effect on in situ dry matter disappearence and the productive behavior of
intensively fed lambs. The strains used in the first trial were Pr (isolated of the roqueforti cheese)
and Lp (ATCC type 8041). They were reactivated respectively in means liquid and solid,
elaborated from an infusion of coconut meal, subsequently they were cultivated in great scale in
FSS, using the coconut meal like substrate for the elaboration of the DFM. For the second trial, in
situ dry matter disappearance and of productive behavior in feedlot lambs, a diet was used it
bases elaborated from concentrated and lucerne hay in a relationship of 59.5% : 39.5% and 1% of
the DFM. The chemical analysis of the diet was evaluate. The DFM was given in 4 male lambs,
of 35 kg, with a fixed ruminal cannulate to determine the kinetics of the in situ dry matter
disappearance. The animals remained in individual pens. Three treatments was assigned where
T1 (Pr), T2 (Lp) and T3 (control). The results were analyzed for a variance analysis with a design
totally at random, the difference among means was analyzed by the test of Tukey with a level of
the 0.05. For the evaluation of the DFM on the productive behavior 30 male lambs crosses
Suffolk of 60 days of age were used, which were distributed at random in three treatments: T1
(Pr), T2 (Lp) and T3 (control). A registration of the dry matter intake was taken and to measure
the daily gain of weight (DGW) , the conversion (FC) and feed efficiency (FE) the animals were
weighed to the beginning and the end of the trial. The results were analyzed for a covariance
analysis in order to eliminating slants due to the difference among the initial weight of the
animals. Pr and Lp had a quick growth on the coconut meal that contributes an enough quantity
of nutritious of easy degradation for both microorganisms. They also contributed an excellent
quantity of protein on the coconut meal. The contribution protein average and energy of the diet
was of 16.81% and 3.31 Mcal / Kg respectively. There were not differences (P>.05) among the
treatments for the digestibility from the MS to the 24 hors (61.13), 48 hrs (78.32) and for the half
time of retention (30.34) (hours average among the three treatments). For the different parameters
measured in the in situ kinetics there werent neither significant differences (P>.05) among
treatments. For the productive behavior trial there were not significant differences (P>.05) in the
daily gain of weight, CA and EA among treatments. When adjusting the initial weight with the
covariance analysis and using the metabolic weight, there were differences (P<.05) among
treatments for the dry matter intake being bigger for T2 (122 g/pv
75
) and T1(121 g/pv
75
) against
T3 (115 g/pv
75
) respectively, but this didn't rebound in the DGW and in the FC. Adding DFM as
a feed supplement in lambs given high concentrate diets, it doesn't affect their productive
behavior.




Keywords: DFM, in situ digestibility, Feedlot lambs.







JUSTIFICACIN



En Mxico, la ovinocultura se caracteriza por un crecimiento lento, debido
principalmente a varios factores como el acelerado incremento de los costos de
materias primas utilizadas en la elaboracin de dietas para rumiantes, a la insuficiente
produccin de alimentos balanceados y sus costos, a la competencia establecida por el
nmero de hectreas destinadas para la produccin de forrajes y para la ganadera, lo
cual disminuye el potencial de cultivos para la alimentacin humana.

Numerosos estudios se han realizado con el objetivo de incrementar la
productividad animal, tal es el caso de los aditivos biotecnolgicos como los
Microorganismos para Alimentacin Directa (MAD), producidos a partir de los
subproductos agroindustriales, que contribuyen en el mantenimiento de la salud animal
sin repercusiones en la salud de los consumidores de carne ovina.

Por tanto, es importante evaluar los efectos de estos aditivos utilizados en dietas
concentradas para borregos en engorda.





















INTRODUCCIN



Mxico cuenta con grandes recursos para la explotacin de ovinos, adems
parte de su poblacin tiene una fuerte tradicin como consumidor de carne de ovino.
Sin embargo, la ovinocultura nacional se caracteriza por un crecimiento lento. En la
actualidad las importaciones en pie y canal han ido aumentando, con el propsito de
reactivar la ovinocultura en el pas, debido a ese incremento, los ovinocultores
necesitan mantener a sus animales en reas de pastoreo por lo que las ganancias de
peso disminuyen y la conversin alimenticia en producto (carne, lana o leche) se ve
limitada.

Recientes avances en el entendimiento de los procesos digestivos de la
microbiota ruminal han estimulado el inters en el uso de aditivos microbianos para
incrementar o alterar la eficiencia digestiva de los rumiantes (Wiedmeier et al. , 1987;
Harrison et al. , 1988; Williams et al. , 1991; Mutsvangwa et al. , 1992). Los Microbianos
para Alimentacin Directa (MAD) adicionados a las dietas de los rumiantes
generalmente consisten de Aspergillus oryzae (AO) o Saccharomyces cerevisiae (SC)
(Wiedmeier et al. , 1987; Wallace and Newbold, 1992; Higginbotham et al. , 1994;
Chiquette, 1995) Algunos aditivos comerciales adems de AO y SC contienen algunas
cepas de Lactobacillus, Bifidobacterias, Selenomonas, Bacillus y Penicillum (Hurbant,
1985; Dawson et al. , 1990; Tapia et al. , 1991). En algunos experimentos han mostrado
pequeos efectos de estos aditivos en el pH ruminal, amoniaco, cidos grasos voltiles
(AGVs) y sobre la digestin de fibra (Williams et al. , 1991; Newbold et al. , 1995;
Callaway and Martin, 1997; Roa et al. , 1997). Estos microorganismos producen
enzimas, como ? -amilasa, proteasas, lipasas y celulasas las cuales quizs ayuden en la
digestin y desdoblamiento de nutrientes, pueden ser una buena fuente de vitaminas
del complejo B (Higginbotham et al. , 1994) y estimulan el crecimiento de bacterias que
consumen lactato en dietas ricas en almidn (Nisbet and Martn, 1991; Waldrip and
Martin, 1993).



En el complejo ecosistema del rumen existen muchos factores que afectan a
microorganismos exgenos que no se adaptan a las condiciones de pH y disponibilidad
de nutrientes o estn sujetos a fagocitosis, lisis por bacteriocinas y la dilucin en el
fluido ruminal. Desde el punto de vista nutricional es necesario el balance de la
microflora para mantener la salud del animal hospedero; sin dicho balance sera
imposible la realizacin de procesos celulolticos, amilolticos o an aquellos procesos
complejos como la biosntesis de vitaminas, el transporte de algunos nutrientes,
estimulacin del sistema inmune en la prevencin de enfermedades, mejoramiento de
la conversin alimenticia y estabilizacin de la flora de todo el tracto gastrointestinal. El
empleo adecuado de los MAD directamente en la alimentacin de rumiantes con dietas
ricas en concentrados puede ser de gran utilidad para mantener el balance de la
microflora ruminal.

Para elaborar los MAD se ha utilizado una gama de substratos entre los que se
encuentran los desechos agroindustriales como la cascarilla de arroz, residuos de la
cosecha del maz, la flor de cempaschil, yuca, centeno, pulpa de caf, pasta de coco,
entre otros (Tapia et al. , 1991; Campos et al. , 1995; Flores et al. , 1995; Montiel,
1998). Con los probiticos obtenidos de diferentes substratos se realizan pruebas in
vitro con cepas puras o un consorcio de microorganismos ruminales y pruebas in situ en
borregos y vacas para la produccin de leche o carne, con el objeto de transferir
resultados; sin embargo, la dosis, las diferencias entre las cepas y entre los diferentes
aditivos comerciales con MAD producen diferentes resultados (Tapia et al. , 1991;
Corona et al. , 1999).

El objetivo fundamental del presente trabajo es evaluar dos probiticos, uno
bacteriano y otro fngico, cultivados en sustrato slido, adicionado a una dieta rica en
concentrados para borregos en engorda, mejore el consumo, la ganancia diaria de
peso, la conversin y la eficiencia alimenticia.



REVISIN DE LA LITERATURA


I. Produccin ovina.

a) Situacin actual de la ovinocultura en Mxico.

La ovinocultura nacional se caracteriza por un crecimiento lento ocupando el
ltimo lugar en la industria pecuaria nacional y en el producto interno bruto solamente
representa del 1 al 2 % (Lpez et al. , 1997; Ortz, 1999). Dentro del subsector
ganadero es una actividad importante por su valor como componente de la economa
del campesino de escasos recursos, ya que sus productos tienen una alta demanda, en
especial entre la poblacin urbana de las grandes ciudades (Ortz, 1999). La notable
disminucin del ganado ovino en las ltimas dcadas ha sido de 6.4 millones de
cabezas en 1972 a 5.7 millones en 1993 (SAGAR, 1993). En el ltimo censo del INEGI
(1994), se seala que la poblacin ovina fue de 4.5 millones de cabezas. Los datos de
FAO para 1998 y 1999 de la produccin de carne se presentan en el cuadro 1.

Cuadro 1. Produccin de carne ovina en Mxico.
Concepto Produccin (t ) Ao
Carne ovina y caprina 68, 651 1998
Carne cordero y carnero 30,466 1998
Carne ovina y caprina 69,143 1999
Carne cordero y carnero 30,645 1999
Records? Copyright FAO 1990-1998


La distribucin del ganado ovino en Mxico es de la siguiente manera: estados
del norte (regin rida y semirida) que comprenden Aguascalientes, Baja California
Norte, Baja California Sur, Coahuila, Chihuahua, Durango poseen el 39 %; estados del
centro (regin templada montaosa) que comprenden Colima, Distrito Federal,
Guanajuato, Hidalgo, Jalisco, Michoacn, Estado de Mxico, Morelos, Nayarit, Puebla,


Quertaro, Sinaloa y Tlaxcala poseen el 42 %; y los estados del sur (regin trpico
seco y hmedo) que comprenden Campeche, Yucatn, Tamaulipas, Tabasco,
Veracruz, Quintana Roo, Oaxaca, Guerrero y Chiapas poseen entre el 12 % y 14%
(Ortz, 1999). La zona norte se caracteriza por manejar raza Rambouillet o sus cruzas,
en el centro se manejan criollos, Suffolk, Hampshire, Pelibuey y Black Belly, y en el sur
criollo y Pelibuey. La mayor parte de los ovinos se encuentran en manos de
campesinos sin tierra, para alimentar a su rebao dependen de pastizales nativos cuya
calidad y cantidad vara grandemente a travs del ao, lo que trae como consecuencia
condiciones de desnutricin se agrega una mayor susceptibilidad a las enfermedades
respiratorias y estrs por el encierro nocturno practicado. Generalmente no tienen
asistencia tcnica y utilizan prcticas tradicionales de produccin; empadre continuo,
cruzamiento entre animales estrechamente emparentados, no hay una temporada de
destete con criterios de seleccin que se basan en aspectos fenotpicos. Otro tipo de
productor minotario es el ovinocultor en pie de cra, son personas con mayor poder
econmico que reciben atencin tcnica especializada, son sujetos de crdito, poseen
instalaciones funcionales y especializadas empleando tcnicas de vanguardia en la
ovinocultura. Un productor intermedio lo constituye el ovinocultor que tiene una
situacin econmica desahogada con un objetivo zootcnico definido, manteniendo
una actitud abierta a la tecnologa de punta para lograr una produccin eficiente (Elba
et al. , 1997).

b) Sistemas de produccin.

El tipo de sistema usado en cualquier rea depende de muchos factores, incluso
la raza de la oveja, el tipo de programa de cra, el terreno, las condiciones
meteorolgicas, la disponibilidad de agentes nutritivos, los depredadores, los costos de
tierras e instalaciones, el albergue, la disponibilidad de trabajadores preparados y las
relaciones con otro ganado o sistemas de agricultura. La divisin de los sistemas de
cra es muy diversa, dependiendo de los distintos criterios que se adopten para basar
su clasificacin. El primero es el de la intensidad de mano de obra aplicada por unidad
animal, contando aqu los siguientes sistemas (Ortz, 1999; De Lucas y Arbiza, 1999,
comunicacin personal):


a) Confinamiento total o intensivo: las ovejas se albergan en instalaciones con luz y
temperatura controlados y con acceso mnimo a los cereales al aire libre o campos de
pastoreo.
b) Semiconfinamiento o semiintensivo: se usan galpones abiertos al frente para las
pariciones y las ovejas tienen acceso a campos de pastoreo durante seis a ocho meses
del ao.
c) La paricin al aire libre con vigilancia mnima o extensivo en donde las ovejas se
encuentran en agostadero con praderas y una rotacin por potrero.

El segundo criterio est basado en la movilidad de los animales, en sedentarios y
nmadas o trashumantes. El tercero, es el de los distintos rubros de produccin
prioritarios, as existen sistemas especializados en producir lana, carne (engorda y
finalizacin de cordero), leche y de pieles. El cuarto es de los sistemas especiales de
acuerdo a las distintas tecnologas y tipos de alimentacin. Ejemplos son los sistemas
de cra ovina combinados con la agricultura, ya sea de cereales, industrial, forestal,
hortcola, etctera. Sistemas de aldea o de traspatio, importantes en Asia, Africa y
algunas regiones de Amrica. Sistemas adaptados a condiciones tropicales o de
montaa.

En los ovinos los sistemas extensivos pastoriles sedentarios o mviles son los
prioritarios. Estos sistemas se basan en extensiones de tierra, de medianas a grandes,
divididas en potreros cercados, donde los animales ingieren pasturas naturales (De
Lucas y Arbiza, 1999, comunicacin personal).

c) Engorda intensiva de ovinos.

El uso de una cantidad limitada de cereales para ganado de engorda, puede
justificarse solo para permitir niveles aceptables de funcionamiento y para ser
mantenido cuando se limita la produccin de pastura (durante el invierno o en pocas
de seca). El cordero requiere de 7 8 kg de alimento por kg de carne por canal. Para
la finalizacin de corderos con cereales, mantenidos en confinamiento, una alternativa


es comprar corderos de un tamao y una condicin similar de un nmero de rebaos
manejados extensivamente (Speedy, 1986; Arbiza y De Lucas, 1996; Lara, 1999).

El destete de los corderos es de 4 a 6 semanas de edad, de manera precoz,
luego se engordan en una forma intensiva, en Mxico, el destete se realiza entre las 8
y las 12 semanas de edad (Arbiza y De Lucas, 1996). La dieta consiste en un cereal
entero con un complemento proteico/energtico/mineral, ya que los corderos
destetados de manera precoz tienen una mayor necesidad de protena, con la finalidad
de obtener una tasa mxima de crecimiento; la utilizacin del creep feeding para
alimentar a los corderos con concentrados altos en energa a libre acceso, hace que se
aproveche su excelente conversin (7-8:1) durante los primeros 60 das de vida (Lara,
1999), la ingestin del alimento por los corderos aumentar de 0.6 a 1.5 kg d
-1
durante
el periodo de engorda. Los ndices de crecimiento sern entre 250 y 300 g por da y los
corderos deben llegar al peso de matanza de 40 kg en aproximadamente 90 das. Se
requerir un total de 100 kg aproximadamente de alimento para tomar al cordero del
destete (15 kg) a 40 kg de peso vivo. Se engorda a los corderos en grupos con dietas
basadas en cereales, diseadas para dar mxima ganancia de peso y mejor conversin
alimenticia (Speedy, 1986; Jones et al. , 1989; Fayez et al. , 1994; Lara, 1999). Los
corderos retirados del criadero hasta el comedero necesitan ser introducidos
lentamente a una racin de concentrados. Por lo general, se les introduce primero a
una dieta de forraje; luego se agrega un 25 % de grano durante unos das, se aumenta
al 50%, luego al 75% y finalmente una racin del 80 al 90 % de concentrado (con forraje
limitado). Alternativamente, se les administra una dieta alta en forraje con grano
administrando por separado, aumentando de 100 g d
-1
de grano a 200, 400, 600 y ms,
hasta satisfacer el apetito en dos semanas despus mientras que se reduce el forraje a
un mximo de 200 g d
-1
(Speedy, 1986).

d) Variables productivas.

- Ganancia diaria de peso y consumo voluntario



El crecimiento se define como un incremento en la masa muscular. La masa
incrementa por hiperplasia tempranamente en la vida y despus por hipertrofia. La
curva de crecimiento, siendo la masa o trazando el peso acumulado contra la edad, es
sigmoidea y asinttica; hay una fase prepubertal acelerada ms una fase de
desaceleracin. El peso maduro generalmente es considerado el punto en el cual la
masa muscular alcanza un mximo, mientras que el crecimiento neto es la diferencia
entre la sntesis y la degradacin del tejido corporal; ambos son procesos continuos. La
masa corporal est compuesta del producto que se vende ms otros componentes de
la canal, el tubo digestivo y sus contenidos y las menudencias (piel, sangre, etc.); as,
el peso del animal no siempre correlaciona bien con la cantidad de producto vendible
(Owens et al. , 1993).

El porcentaje de ganancia de peso se calcula como cambio en el peso durante
un intervalo especfico de tiempo. Matemticamente, el logaritmo natural del peso final
menos el logaritmo natural del peso inicial dividido por el intervalo de tiempo produce el
porcentaje de crecimiento fraccional (Owens et al. , 1993).

En recientes investigaciones se presenta la hiptesis que los rumiantes tienen
una capacidad finita para masticar ya sea comiendo o rumiando, y que el total de
masticaciones no debera exceder alrededor de 16 h d
-1
. En otros estudios se describi
la importancia de la densidad de partculas en el rumen y sus efectos en el tiempo de
retencin en el rumen el cual, a su vez, podra afectar el consumo. Los rumiantes
que son ms selectivos, normalmente tienen el volumen ruminal ms pequeo (? rskov,
1995).

El consumo voluntario (CV) es el peso ingerido por un animal o grupo de
animales durante un periodo de tiempo en el cual tienen acceso libre al alimento
adems es un factor importante con el fin de comprobar que las raciones pueden ser
ntegramente ingeridas por el animal, y para estimar el nivel de produccin de acuerdo
con la disponibilidad de alimentos es necesario conocer: (? rskov, 1995; Forbes, 1995)


1) La capacidad de ingestin del animal, un aumento en el consumo de alimentos
provoca un incremento en la razn de pasaje de la ingesta y el paso de materia seca
al rumen se incrementa.
2) La aceptacin de los forrajes a utilizar por los animales.
3) La influencia del consumo de concentrados sobre el consumo de forrajes.

Algunas investigaciones realizadas en Francia sobre las medidas de CV de
materia seca permiten medir la capacidad de ingestin de ovinos que reciben raciones
normales y comparar el CV (ingestibilidad) de diferentes forrajes por corderos al final de
su crecimiento. Para eliminar las variaciones de las interacciones en cuanto a consumo
de forraje, se ha transformado el consumo de materia seca en la unidad lastre (UL) que
permite calcular la proporcin de forraje y concentrado que debe contener la racin
teniendo en cuenta sus interacciones (INRA, 1989; Jarrige, 1990).

Por otro lado, los movimientos de los compartimentos gstricos determinan la mezcla
adecuada del alimento finalmente ingerido, con los microorganismos del rumen, la regurgitacin
y eructacin de gas facilitan la absorcin en las paredes del rumen y aseguran el pasaje del
alimento de las porciones inferiores del tubo digestivo, ya que el llenado del rumen parece ser
un factor regulador en el mecanismo de la fisiologa del CV de los alimentos en los ovinos
(Dearriba, 1988).

El consumo en rumiantes es t regulado por mecanismos de largo y corto plazo. Los
mecanismos de largo plazo estn ajustados a suplir los requerimientos en orden de mantener el
peso corporal del animal. Los mecanismos a corto plazo, dentro de una comida y un da,
regulan la actividad de alimentacin con bastante precisin (periodos de ingestin y rumiacin).
En este caso el retculorumen tiene una funcin esencial en la regulacin del consumo. Por otro
lado el mecanismo bsico del consumo a corto plazo es simplemente mecnico, durante una
comida, particularmente la primer comida del da, el rumen ser llenado a su mximo nivel, el
cual luego determinar el fin de la comida. El consumo diario es as determinado en cualquier
etapa fisiolgica, por la tasa del material digestible y la tasa de trnsito de material no
digestible (Dulphy y Demarquilly, 1994).



Entre los factores que afectan el pasaje de alimentos, adems de la gravedad especfica
y el tamao de las partculas estn los siguientes: 1) caractersticas fsicas de la dieta, alimento
peletizado o molido disminuye el tiempo de retencin, 2) rompimiento de las partculas, al
utilizar forraje de baja calidad con un bajo contenido de nitrgeno no proteico se incrementa la
digestibilidad de la fibra en el rumen y se obtiene un aumento en la excrecin de partculas del
rumen debido a una disminucin en su tamao. Al aumentar la velocidad de pasaje, disminuye
la digestibilidad del alimento, por el menor tiempo de exposicin a la accin de la microflora
ruminal; sin embargo, el mayor consumo que realiza el animal compensa positivamente esta
circunstancia (Dearriba, 1988).


II. Digestibilidad de cereales y concentrados.


a) La digestibilidad en el rumiante.

La digestin en rumiantes es el resultado neto de una secuencia de procesos
que incluye la fermentacin de los componentes en la dieta por los microorganismos
presentes en el retculorumen, la hidrlisis cida y la degradacin por enzimas del
animal hospedador en el abomaso e intestino delgado y una segunda fermentacin en
el ciego e i ntestino grueso. El sitio de digestin afecta la naturaleza de los productos
finales absorbidos y el porcentaje de nutrientes perdidos durante la digestin (Van
Soest, 1982; Mertens, 1993; Merchen et al. , 1997).

La digestibilidad de un alimento generalmente se define como la porcin que no
es excretada en las heces. La digestibilidad de los forrajes disminuye en raciones que
tienen un alto contenido de carbohidratos de fcil digestin como los almidones, ya que
los microorganismos ruminales los utilizan ms fcilmente que carbohidratos ms
resistentes como la hemicelulosa o celulosa, escapando stos a la fermentacin o no
siendo fermentados completamente. La mayor digestibilidad se observa cuando la
cantidad de alimento consumido cubre nicamente las necesidades de mantenimiento
tanto en ovinos como en bovinos. La causa por la que se reduce la digestibilidad del


alimento al elevarse el consumo es que aumenta la velocidad de paso del alimento a
travs del tubo digestivo, con lo que se reduce el tiempo que est expuesto a la
fermentacin y a la accin enzimtica, dando por resultado el que se digiera en menor
proporcin (Ortega, 1987).

Uno de los principales problemas de cambiar a dietas altas en concentrados es
la incapacidad para medir la cantidad de forraje que consume el animal. La digestin de
la celulosa puede fcilmente inhibirse cuando el animal es alimentado con mucho
concentrado. Si los animales estn sometidos nicamente a dietas de mantenimiento,
entonces la digestin de celulosa no se altera si se otorga hasta un 50 % de
concentrado. Los granos de cereales son el mayor componente de dietas usadas para
la produccin intensiva de los rumiantes y el nutriente primario es el almidn que
constituye aproximadamente entre el 50 al 80 % del peso del grano. La digestibilidad
del almidn en el rumiante es alta (99 %), pero hay considerable variacin en el sitio de
esta digestin. El almidn que escapa de la digestin ruminal, y esto incluye el almidn
de origen microbial, es digerido en el intestino delgado, normalmente en 70 % o ms.
La alta tasa de fermentacin ruminal del almidn depende del grano, el mtodo de
proceso del cereal y la dieta. Dentro del ecosistema microbiano del rumen, la habilidad
para hidrolizar el almidn est dada principalmente por bacterias, protozoarios
entodinomorfos y algunos hongos. La proporcin de bacterias amilolticas y utilizadoras
de lactato en el rumen se incrementa al agregar un suplemento concentrado a dietas de
forrajes (Nozire y Doreau, 1997).
El tiempo de trnsito es un factor importante que determina la eficiencia de
utilizacin de una cantidad dada de alimento, en la literatura se pueden encontrar diversos
trminos para describir el paso de material ingerido a travs del tubo digestivo:

1) Tiempo medio de retencin: Tiempo en que se retiene la mitad de la digesta en la
primera porcin del tubo gastrointestinal. La ecuacin empleada para su medicin es
la siguiente

t = (In2)/ - K = .693/ - 3 = .693 T.



Donde :
K es la tasa constante de desaparicin.
T es el tiempo de pasaje.

2) Tiempo de recambio: Tiempo requerido para cambiar una cantidad de digesta igual
a la presentada en la porcin superior del tracto digestivo.

3) Tiempo de trnsito: Tiempo que tarda la digesta de un alimento en pasar a travs
del tubo digestivo o por algn segmento de ste. El flujo fuera del rumen incluyendo
bacterias y algunos residuos del alimento potencialmente digestibles.

4) El trmino tasa de digestin se refiere a la cantidad de alimento que se
puede digerir por unidad de tiempo y es esencialmente una funcin de la dieta. La
tasa total de desaparicin de alguna fraccin de alimento (dC/dt) ser igual a la suma
de digestin y la tasa de trnsito, Ks y Kp respectivamente.
DC/dt = C (Ks + Kp)
Sin embargo, la proporcin de la materia potencialmente digestible que escapa de la
digestin est dada por la proporcin Kp/ (Ks + Kp).

5) Tiempo de retencin: Tiempo requerido para cambiar una cantidad (volumen) de
digesta igual a la presentada en el rumen, o bien, es el tiempo promedio que
permanecen las partculas en el rumen (Van Soest, 1982).

Es posible manipular la velocidad de fermentacin de los cereales utilizando
diferentes tipos de procesamiento y el nivel de procesamiento ptimo es aquel que
provoca el estado ms cercano a la digestibilidad mxima. Para ovinos el
procesamiento ptimo es el de dar granos sin procesar (peletizado), ya que prolonga el
tiempo de rumia y de consumo, provocando un incremento en la produccin de saliva.
Como resultado se eleva el pH y ocurre una menor interferencia en la digestin de la
celulosa en el rumen. Con referencia a la fermentacin es preferible definir concentrado


como un carbohidrato con bajo o nulo contenido de celulosa. En el cuadro 2, se
muestran algunas caractersticas de digestin de varios tipos de dietas con
concentrados y cereales.

b) Anlisis qumico del alimento.

El valor nutritivo potencial de un alimento puede ser determinado en primera
instancia, por el anlisis qumico proximal, pero su valor real para el animal slo se
puede lograr a travs de un anlisis de las prdidas inevitables que ocurren durante la
digestin, absorcin y metabolismo (Minson, 1982).

Mientras los alimentos han sido divididos convencionalmente en dos categoras -
forrajes y concentrados -, tal divisin no es realmente una lgica. Es mucho ms lgico
clasificar los alimentos de acuerdo a la proporcin de MS presente como azcares
solubles, como el almidn y como distintas formas de ? polmeros unidos,
particularmente celulosa insoluble o paredes celulares de plantas (? rskov, 1989).


Cuadro 2. Caractersticas de la digestin de varios tipos de
dieta.
Caractersticas Mezcla de cereal/forraje Niveles altos de cereal
Tipo de dieta y
condiciones de
alimentacin
Moderado o altos niveles de
alimentacin, especialmente
cuando el forraje es de alta calidad
Altos niveles de alimentacin
especialmente cuando la
proporcin de forraje es baja
Tipo de fermentacin
ruminal
Acido propinico (25-33 % C3) Altas concentraciones de cido
propinico (>33 % C3)





Caractersticas de
fermentacin
pH 5.1 6-6. Poblacin bacteriana
variable, a menudo con gran
cantidad de microorganismos
productores de cido propinico y
Lactobacillus. Baja cantidad de
protozoarios y Butyrivibrios . Bajas
proporciones de metano y digestin
de celulosa. Parcial hidrogenacin
de cidos grasos poliinsaturados.
Eficiencia de la sntesis de PC por
clula bacterial alrededor de 13
20 g/ 100g de MO aparentemente
digerida
pH 5.1- 5.9. Gran cantidad de
bacteri as productoras de cido
propinico y cido lctico,
protozoarios ausentes o en baja
cantidad. Proporciones muy bajas
de produccin de metano y
digestin de celulosa.
Hidrogenacin de cidos grasos
poliinsaturados restringida.
Eficiencia de la sntesis de P C por
clula bacterial alrededor de 13
20 g/ 100g de MO aparentemente
digerida.
Substratos absorbidos Proporcin de energa absorbida
como varios cidos grasos de
La proporcin de energa
absorbida como cidos grasos de


cadena corta, con la eficiencia de
sntesis microbial pero es a
menudo muy baja para la
fermentacin de cido butrico y es
ms baja la proporcin de cido
actico. Cantidades significativas
de azcar obtenida del intestino
delgado, pero la cantidad vara
dependiendo el tipo de almidn en
la dieta
cadena corta vara con la
eficiencia de sntesis microbial
pero quizs sea menos que para
otro tipo de fermentacin, y la
proporcin de cido actico es
ms baja. La absorcin de
azcares en el intestino delgado
vara con el tipo de almidn
dietario
Thomas y Rook, 1977


c) Tcnica in situ para medir la digestibilidad y la desaparicin de MS.

La digestibilidad medida in vitro se ha usado para calcular la digestibilidad
aparente de alimentos; sin embargo, esta tcnica se limita a describir los efectos
digestivos del tubo intestinal y no permite diferenciar entre lo que se degradado en el
rumen y lo que se digiere postruminal. Esta tcnica tambin se ha usado para evaluar la
cintica de degradacin de la fermentacin en rumen. Un mtodo ms directo para
medir la degradacin de un alimento en el rumen es poner una pequea cantidad de
alimento en una bolsa porosa no degradable y suspenderla en el rumen; sta es la
tcnica in situ o in sacco en bolsas de nylon, dacrn o polister para medir la
degradacin de un alimento en rumen va cnula en un rumiante fistulado y mide los
efectos combinados del alimento y el animal. La justificacin para usar esta tcnica est
basada en el concepto de que las interacciones dinmicas animal-dieta son importantes
y tal vez sea ms til para estudiar la digestin de concentrados (granos) en el rumen
(Udn y Van Soest, 1984; Church y Pond, 1987; Mertens, 1993; Huntington y Givens,
1995; ? rskov, 1995). Adems esta tcnica se puede usar para cuantificar las fracciones
no degradables y potencialmente degradables en rumen, as como la tasa de
degradacin. Las cinticas de degradacin obtenidas son la resultante de las
correspondientes a los tejidos o constituyentes qumicos, los cuales se pueden
caracterizar por su accesibilidad y por su resistencia a la degradacin microbiana
(Jarrige, 1990). Este procedimiento no puede ser usado para cuantificar la tasa a la cual
la fraccin soluble es degradada (Nocek y English, 1986).



Un modelo matemtico para describir el tiempo de degradacin para una
muestra individual fue adaptado por ? rskov y McDonald (1979), donde se llev a cabo
para una serie de incubaciones en un tiempo determinado. Las prdidas de MS fueron
trazadas contra un tiempo y se ajust un modelo no lineal a la siguiente ecuacin:

p = a + b (1 e
-ct
).

Donde:

p = Fraccin potencialmente degradable (% de degradacin). Es la porcin de alimento
que puede desaparecer debido a la digestin dada en un tiempo infinito en un sistema
especfico. Esta fraccin ha sido descrita como la tasa constante de la cintica de
primer orden. Una suposicin primariamente asociada con la cintica de primer orden
es que el pool o fraccin en cuestin es homogneo y que la concentracin del sustrato
ser degradada como una funcin lineal del tiempo en el rumen (Nocek y English,
1986).

t = Tiempo de incubacin.

a = Y intercepto al tiempo 0. Representa el sustrato soluble y completamente
degradable.

b = La diferencia entre el intercepto (a) y la asntota. Representa el sustrato insoluble
pero potencialmente degradable, el cual, es degradado por los microorganismos segn
la cintica de primer orden.

c = Porcentaje constante en la funcin a + b

1 (a + b) = Es la porcin no degradable de una muestra.



Las fuentes de variacin en esta tcnica pueden ser el periodo de incubacin, el
procesamiento de lavado post-incubacin, sitio de incubacin en el rumen, tamao de la
muestra incubada dentro de la bolsa, la porosidad de la bolsa, acumulacin de gas
dentro de la bolsa, los animales, el tipo de dieta, residuos microbianos y componentes
matemticos (Mertens, 1993; Ortega y Carranco, 1993; Huntington y Givens,
1995; Vanzant et al., 1998). Los resultados obtenidos de la cintica empleando esta
tcnica en condiciones estado-no-fijo, quizs sean parciales por el tiempo en que las
muestras fueron colocadas en el rumen, ya que los patrones de fermentacin varan
relativamente al tiempo de alimentacin del animal (Mertens, 1993).
Una medicin de las 48 a 72 h (para componentes de rpida digestin) o de 72 a
96 h (para componentes de lenta digestin) se ha necesitado para establecer un
estimado certero del potencial de extensin de digestin. Tres o ms tiempos de
fermentacin que frenan el punto de inflexin son necesarios para establecer la curva
de la lnea de digestin y estimar con precisin la tasa fraccional de digestin (Mertens,
1993).


d) Factores que afectan las variables de fermentacin ruminal.

- AGVs

Las dietas ricas en concentrados o cereales distribuidas ad libitum con un
mnimo de forraje, son ingeridas rpidamente, por lo que aportan en un tiempo muy
corto una cantidad importante de almidn, que es rpidamente fermentable en el
rumen, favoreciendo la formacin de cido propinico (ms del 30%) y menos
cantidad de cido actico y butrico, contrario a lo que ocurrira con dietas a partir de
forraje (Thomas y Rook, 1977; Dearriba, 1988; INRA, 1989).

Cuando la fermentacin es caracterizada por una alta proporcin molar de cido
propinico el grado de digestin ruminal tiende a ser deprimido e incrementa la
digestin en el intestino (Thomas y Rook, 1977). Normalmente el cido propinico es


metabolizado en el hgado, apareciendo muy poca cantidad en la circulacin perifrica.
En los corderos pueden presentarse problemas cuando la proporcin de cido
propinico es mas alta de lo normal, superando la capacidad del hgado para
metabolizarlo; como consecuencia, tanto el cido propinico como su intermediario, el
cido metilmalnico, aparecen en sangre perifrica. De este modo, se interfiere la
sntesis normal de grasa y se forma una gran cantidad de cidos grasos de nmero
impar de tomos de carbono as como una elevada proporcin de cidos grasos de
cadena ramificada, determinando que la grasa del cordero sea blanda, inadecuada e
indeseable para el comercio de la carne (Fayez et al. , 1994).

- pH, cido lctico y acidosis

La ingestin de grandes cantidades de alimentos ricos en carbohidratos
susceptibles de fermentacin, provoca una enfermedad denominada acidosis, la cual
se define como una disminucin de los lcalis (bases) en los fluidos del cuerpo relativo
al contenido de cido, ion hidrgeno (McAllister et al. , 1990; Owens et al. , 1998).
Etiologa de la acidosis (Figura 1)

I. Concentracin y conversin del almidn a glucosa.
La fragmentacin del almidn a glucosa vara dependiendo de la fuente del
grano, el proceso del grano y el tipo de almidn. Los tratamientos por calor y presin, la
reduccin en el tamao de partcula y la alta humedad de almacenaje del grano
incrementa la disponi bilidad del almidn.

La glucosa es liberada de los grnulos del almidn por cepas especficas de
microorganismos que atacan las partculas del grano. La presencia de glucosa libre en
el rumen (su concentracin normal en rumen es baja) puede tener por lo menos tres
efectos adversos: primero, las bacterias ruminales que normalmente no son
competitivas pueden crecer rpidamente cuando son abastecidas con grandes
cantidades de glucosa, como el Streptococcus bovis, bacteria gram positiva, causante
de la produccin de grandes cantidades de cido lctico, excediendo de100 mM (Styler,


1976; Wiryawan y Brooker, 1995; Owens et al. , 1998). Segundo, otros
microorganismos oportunistas, incluyendo coliformes y microbios aminocidos
descarboxilados, pueden crecer en el rumen y producir durante la lisis, liberacin de
endotoxinas o amidas (ejemplo histamina) cuando la glucosa es realmente disponible.
Tercero, la glucosa liberada del almidn incrementa la osmolalidad del contenido
ruminal. Un incremento en la osmolalidad exacerba la acumulacin de cido dentro de
rumen con la inhibicin en la absorcin de AGVs. Para contrarrestar estos efectos se
puede modular el consumo de almidn o el empleo de forrajes en la dieta que
incrementan el tiempo de masticacin y disminuyen el tamao de las partculas del
grano dentro del rumen y as incrementan el porcentaje de fermentacin, un incremento
en la entrada de amortiguadores de la saliva por un gran tiempo de masticacin o de
rumia, neutraliza y diluye el cido ruminal (Owens et al. , 1998)




Figura 1. Reaccin en cadena de la acidosis en rumiantes (Owens et al. , 1998)



Grano(almidn)
Protozoarios FACTORES QUE PUEDEN
Glucosa ALTERAR LA INCIDENCIA
DE ACIDOSIS
0
Osm Piruvato Acido lctico (D y L)

pH
AGVs
Acidos Absorbidos pH
Osm AGV D-Lactato
CO
2
y H
2
O Excrecin


II. Produccin de AGVs y produccin y utilizacin de lactato.


Los microorganismos ruminales y del ensilado producen dos ismeros de lactato,
la forma D
+
y L
-
. La forma L
-
puede ser fcilmente metabolizada por el tejido heptico y
del corazn; el D
+
lactato, normalmente del 30 al 38 % del total de lactato hallado en el
rumen, no es producido por el tejido de mamferos. El D
+
y los AGVs estn
involucrados con la acidosis y otros productos microbianos, incluyendo etanol, metanol,
histamina, tiramina y endotoxina a menudo son identificados durante la acidosis y
pueden ejercer efectos sistmicos. La conversin de piruvato a AGVs presenta
mltiples pasos y genera aproximadamente la mitad del ATP para el crecimiento
microbiano en el rumen, la otra mitad es derivada de la conversin de glucosa a
piruvato. Normalmente los AGVs no se acumulan en suficientes concentraciones en el
rumen hasta reducir el pH drsticamente. Sin embargo, cuando la proporcin del cido
producido excede la proporcin del cido absorbido debido a su rpida produccin,
inhiben la absorcin o se reduce la dilucin, los AGVs se acumulan en altas
concentraciones (Dawson y Allison, 1988; Owens et al. , 1998).
III. Control de la produccin de lactato
La inoculacin de microorganismos utilizadores de lactato que pueden tolerar un
pH bajo, es utilizada para prevenir la acumulacin de cido. La inoculacin repetida
con Megasphaera elsdenii, Lactobacillus acidophilus y tres especies presentes de
microbios activados en el rumen son probados para aumentar la utilizacin de lactato.
El uso de cidos dicarboxlicos como aspartato, fumarato y malato estimulan la
utilizacin de lactato por la bacteria ruminal Selenomonas ruminantium, si se reducen
los equivalentes (H
2
) acumulados en el medio, la bacteria S. ruminantium lactato
deshidrogenasa no puede convertir lactato a piruvato. Por tanto, la bacteria es incapaz
de fermentar lactato en la presencia de H
2
pero puede fermentar aspartato, fumarato y
malato en la presencia de H
2
apoyando la sugerencia que el malato (cido orgnico)
puede proveer un electrn libre para H
2
que permite incrementar la utilizacin de lactato
por esta bacteria. (Martn, 1998; Owens et al. , 1998).

IV. Los protozoarios en la acidosis.
Varias especies de protozoarios ciliados del rumen producen ms lactato y
menos acetato o butirato cuando el suplemento de carbohidratos es abundante.


Adems de la regulacin debida a los cambios en la velocidad de crecimiento de los
microorganismos en rumen, el pH bajo en el medio ruminal tambin sirve para cambiar
el metabolismo de Selenomonas bovis hacia lactato por alteracin de la regulacin
celular de lactato deshidrogenasa. En las clulas microbianas la produccin de lactato
es ventajosa cuando el sustrato est en exceso, porque a semejantes tiempos de
oxidacin de la reduccin de NAD y la proteccin de la acumulacin del exceso de
cido (iones H
+
) dentro de la clula son particularmente importantes. Los protozoarios
ruminales tienen la capacidad de asimilar almidn y azcares solubles y almacenar esa
energa dentro de la clula como amilopectina. Este proceso tiene un valor de
supervivencia para los microorganismos y adems permite al metabolismo continuar
cuando los substratos han sido reducidos. Este proceso es tambin importante para el
rumiante porque la rpida asimilacin del almacenamiento como amilopectina por los
protozoarios puede ayudar a estabilizar la velocidad de fermentacin de carbohidratos
de los alimentos y puede as ser proteccin contra la formacin masiva de cido con el
cual est asociada la acidosis (Dawson y Allison, 1988; Preston y Leng, 1989).

V. Depresin del pH ruminal.
Cuando el pH disminuye a 5.0 durante la acidosis, la ionizacin de cidos
incrementa ligeramente, pero al aumentar el lactato incrementa la concentracin del ion
hidrgeno. El lactato deprime el pH ms drsticamente que cualquier otra cantidad
similar de cidos ruminales porque su pK (punto de mxima amortiguacin) es
considerablemente ms bajo (3.1) que los AGVs producidos en el rumen (promedio pK
4.8). Con un pH cido la presin osmtica se incrementa por la presencia de glucosa y
la ionizacin de cidos, esta osmolaridad del contenido ruminal reduce la proporcin de
la absorcin de cidos. La acidez aumenta la actividad de la enzima lactato
deshidrogenasa incrementando la conversin de piruvato a lactato y complicando la
recuperacin de la acidosis (Dawson y Allison, 1988; Owens et al. , 1998).

VI. Control del pH ruminal.
Una reduccin en la proporcin de AGVs absorbidos causa una baja en el pH
ruminal por dos razones: la acumulacin ruminal de AGVs y la disminucin en la


entrada de bicarbonato al torrente sanguneo. Aproximadamente la mitad del
bicarbonato que entra al rumen viene de la saliva, durante la comida y la rumia, la otra
mitad entra al rumen por el intercambio de cidos ionizados al ser absorbidos. En
adicin el dixido de carbono produce durante la fermentacin fluidos ruminales
saturados e intercambios con el pool de bicarbonato del rumen (Owens et al. , 1998).

VII. Osmolaridad ruminal.
Con dietas ricas en forraje los rangos de osmolaridad ruminal normalmente van
de 240 a 265 mOsm L
-1
y las dietas ricas en concentrado de 280 a 300 mOsm L
-1
. Los
minerales, AGVs, lactato y glucosa son principalmente los solutos en el fluido ruminal.
En sangre, la protena disuelta contribuye substancialmente a la presin osmtica que
normalmente va de 285 a 310 mOsm. En condiciones de acidosis la osmolalidad
ruminal llega a 515 mOsm. Cuando la osmolalidad ruminal es ms grande que la de
sangre, el agua de la sangre es atrada rpidamente al interior de la pared ruminal. El
dao causado a la pared ruminal o del intestino delgado debida a la alta presin
osmtica es detectado ms tarde como sitios de abscesos. La elevacin de la presin
osmtica en el rumen es percibida por la pared del retculorumen lo que inhibe el
consumo de alimento, adems de inhibir la digestin bacteriana de fibras y almidones
causando que el fluido ruminal se estanque (Owens et al. , 1998).

La acidosis se caracteriza por indigestin, estasis del rumen, rumenitis aguda,
lceras abomasales, deshidratacin, toxemia, falta de coordinacin, movimientos
musculares involuntarios, colapso y, a menudo muerte (Blood y Radostits, 1986; Aslan
et al. , 1995); Por otra parte en recientes estudios indicaron que los cambios clnicos
bioqumicos en borregos con acidosis fueron atribuidos principalmente a lactacidemia,
disfuncin heptica y renal y la gravedad mxima fue entre 12 y 24 horas de haber
ingerido el grano (Wiryawan y Brooker, 1995; Patra et al. , 1996). El pH del rumen
desciende a 5 o menos, lo que destruye los protozoarios, microorganismos celulolticos
y microorganismos utilizadores de lactato y menoscaba la motilidad del rumen. La
reduccin del pH permite que los lactobacilos utilicen carbohidratos y produzcan
cantidades excesivas de cido lctico. La superposicin de cido lctico y su sal lactato,


sobre los solutos existentes en el lquido ruminal, causa una elevacin sustancial en la
presin osmtica, lo que atrae lquido al interior del rumen y causa deshidratacin, por
otra parte cuando el pH ruminal es bajo el dixido de carbono pasa a ser gaseoso y se
elimina por el eructo (Styler, 1976; Preston, 1981).

La cantidad de alimento requerida para causar la muerte por acidosis en
rumiantes vara y est influenciado por varios factores: la especie animal (rumiantes), el
tipo de dieta, la cantidad de alimentos que los animales estn acostumbrados a comer y
la preexistencia de poblacin microbiana intestinal. Las diferencias individuales de los
animales en cuanto a cantidad de salivacin, ingesta, motilidad intestinal, porcentaje de
alimento consumido y la habilidad de excreta o el de usar grandes cantidades de
componentes potencialmente txicos, son factores que contribuyen a esta variabilidad.
Por ejemplo, con base al peso corporal los borregos pueden consumir ms alimento
concentrado sin causar problemas de acidosis que en bovinos (Styler, 1976).

- Amonaco (NH
3
).

La concentracin de amonio en el rumen vara considerablemente con el
alimento y despus de la alimentacin el intervalo est alrededor de 5 hasta 50 mg de
NH
3
N 100 ml
-1
de fluido ruminal. El amonio es rpidamente formado en el rumen por
desaminacin de aminocidos; los productos de desaminacin son dixido de carbono
(CO
2
) y AGVs. La desaminacin es probablemente la principal fuente de las cadenas
ramificadas de AGVs requeridos como factores de crecimiento para algunas bacterias.
Tambin se forma de la urea la cual entra al rumen por la saliva o por difusin a travs
de la pared ruminal, y por otros componentes tales como las purinas las cuales pueden
ser incluidas en el alimento (Churchill, 1971, Preston y Leng, 1989). La cantidad de
nitrgeno (N) alimenticio que abandona el rumen est determinado por el N total de la
dieta, la tasa de fermentacin y el tiempo de residencia en el rumen. El NH
3
ruminal se
pierde del lquido ruminal por la incorporacin en las clulas microbiales que salen del
rumen, la absorcin a travs de la pared ruminal y la salida fuera del rumen en el lquido
ruminal. La cantidad de NH3 que fluye fuera del rumen en el lquido ruminal es


relativamente pequea y, por tanto, el NH
3
producido en el rumen que no se incorpora
en los microorganismos se absorbe principalmente a travs de la pared ruminal
(Preston y Leng, 1989).

Las protenas son degradadas en el rumen por la accin de las proteasas de
origen microbiano. No toda la poblacin microbiana posee exopeptidasa y aunque las
enzimas proteolticas son extracelulares, hay una pequea actividad proteoltica en el
fluido ruminal. Los pptidos liberados por la actividad proteasa son adems
catabolizados para producir aminocidos y NH3 (Buttery, 1977).

- Metano (CH
4
).

Se ha estimado que la poblacin de rumiantes en el mundo produce 77.000.000 t
de metano anualmente, el cual constituye cerca del 15% del total del metano
atmosfrico emitido. Los rumiantes producen cerca del 97% del metano generado por
los animales domsticos y casi 75% de esta cantidad viene de los bovinos. Cuando los
rumiantes son alimentados a libre acceso con dietas ricas en almidn o con una sencilla
dosis de un carbohidrato soluble, como la glucosa, tienden a exhibir un incremento en la
produccin de propionato, baja la produccin de metano y disminuye la proporcin
acetato/propionato adems, el menor pH puede inhibir las bacterias metanognicas
(McAllister et al. , 1996). Entre 6 y 8 % de la energa del alimento de rumiantes es
convertida a metano y no es til para el animal. Se ha argumentado que si la
produccin de metano puede ser inhibida especficamente, la fermentacin del rumen
podra ser cambiada eficientemente. El metano es producto del CO
2
, H
2
metablico y el
formato (otros posibles precursores, de menor importancia, son el metanol formado en
la degradacin de la pectina, y el acetato), y su manipulacin puede ser efectiva, si el
H
2
rescatado de la metanognesis se usa en la formacin de productos que luego
pueden ser usados por el rumiante; tal es el caso de los inhibidores de la produccin
de metano, los cuales son divididos en dos grupos: aceptores alternativos de hidrgeno
e inhibidores especficos sobre algunos productos de la metanognesis (Czerkawski y
Breckenridge, 1975; Dearriba, 1988; McAllister et al. , 1996). La principal va de


excrecin del metano producido en el rumen es el eructo, mientras que el metano
producido en el tubo digestivo inferior es excretado travs de los pulmones y de las
heces (Dearriba, 1988).



e) Manipulacin de la fermentacin ruminal y la produccin en rumiantes.

El rumen es esencialmente una cmara de fermentacin conteniendo cerca de
10
10
bacterias y 10
5
-10
6
de protozoarios ciliados por ml, con un pequeo nmero de
hongos anaerobios. El desarrollo de una poblacin microbiana funcional en el intestino
del rumiante recin nacido facilita no solo la digestin de fibra por el hospedador sino
tambin ayuda a proteger al intestino de infecciones causadas por microorganismos
patgenos. La ingestin de alimento slido por el animal marca el segundo estado para
el establecimiento de una flora en el intestino de rumiantes jvenes, con el desarrollo de
una fermentacin ruminal.

Los productos finales formados durante la fermentacin consisten casi
exclusivamente de AGVs, CH
4
, CO
2
y NH
3
. La energa (ATP) es sintetizada durante la
oxidacin principalmente de substratos vinculados a la fosforilacin, pero tambin
operan sistemas anaerbicos de transporte de protones o electrones. Aparte de la
cintica y la energa osmtica requerida, la energa producida es principalmente usada
en la sntesis de constituyentes celulares (anabolismo), para el mantenimiento de
clulas individuales y poblaciones y para el incremento de biomasa, conocida como
"crecimiento microbiano. Originalmente sta fue la cantidad de energa producida
durante la degradacin del substrato (catabolismo). La manipulacin de la fermentacin
ruminal puede ser considerada como un proceso de optimizacin, por lo que las
condiciones ptimas son buscadas por el aumento y/o disminucin de los procesos de
fermentacin dependiendo de factores como la clase y el nivel de alimentacin y la
produccin animal. Un ejemplo de aumento en los procesos de fermentacin, es la
produccin de protena microbiana ruminal y la degradacin de fibra cruda. La sntesis


de protena microbial puede ser estimulada incrementando la eficiencia de produccin o
incrementando la cantidad de materia orgnica (MO) fermentada en el rumen. Los
procesos que deberan ser disminuidos son la produccin de CH
4
, la degradacin de la
fraccin de protena verdadera, la biohidrogenacin de cidos grasos no saturados y, la
fermentacin de almidn (Van Nevel y Demeyer, 1988).
Los sitios ms importantes para la posible modificacin del metabolismo del
rumen se indican en la figura 2. La primera posibilidad para alterar la fermentacin del
rumen es sobre el carbohidrato estructural (fibra cruda, 1) o por la proteccin de la
protena de la dieta contra la degradacin microbiana en el rumen (2, 3). Tratamientos
qumicos (NaOH, KOH, Ca(OH)
2
, NH
3
y ozono) o fsicos (molido, vapor o alta presin)
pueden incrementar la degradabilidad de fibra cruda en el rumen. Estos tratamientos
tambin pueden alterar la proporcin de AGVs formados en el rumen cuando se
incrementa la tasa de fermentacin (Van Nevel y Demeyer, 1988).

La protena del alimento puede ser protegida contra el ataque microbiano con
tratamientos como aldehdos o taninos o por el uso de inhibidores de la proteasa o
desaminasa. Otra intervencin ms directa es sobre el nivel microbiano (4), donde el
patrn de fermentacin es alterado a travs de la accin de ciertos componentes en los
microbios (Van Nevel y Demeyer, 1988)

El crecimiento neto microbiano (5) puede tambin ser modificado por numerosos
factores como los aditivos (ionforos y cultivos microbianos), el tiempo de residencia de
los microorganismos en el rumen, la eliminacin de protozoarios, la adicin de factores
del crecimiento y la prevencin de una fermentacin tipo lctico (Van Nevel y Demeyer,
1988).

La disminucin del porcentaje de liberacin de NH
3
de fuentes de nitrgeno no
protico (NNP, 6) previene la toxicidad por NH
3
y, al mismo tiempo, una mejor unin
entre la fermentacin de carbohidratos (produccin de ATP) y la utilizacin de NH
3

obtenido de la sntesis de protena microbiana (Van Nevel y Demeyer, 1988).










Figura 2. Principales sitos para la manipulacin de la fermentacin ruminal (Van Nevel y Demeyer, 1988).






6
1 2 Protelisis


Monmeros Aminocidos
3





5


4


4


a: Milimoles por gramo de monmero (AGV).
b: Porcin relativa de cido actico (A), propinico (P), isobutrico (iB), butrico (B), isovalrico (iV) y valrico (V).
c: Acidos excluidos 2-metilbutrico.
d: Gramos de nitrgeno incorporado por kg de MO fermentada en el rumen.
e: 1, 2, 3, 4, 5 y 6 sitios de modificacin.
Carbohidratos,
estructurales
y no estructurales
Protena
Nitrgeno no
protico
(NNP)
NH
3

Microb. NH3 + ATP
Crecimiento
(23gN:/kgMOf)
d

AGV: 6.9
a
A: 0.60
b

P: 0.25
B: 0.15
CO2 + 4H2 CH4: 17
a
AGV: 6.1
a.c
A: 0.40
b

P+ iB: 0.28
B: 0.12
IV: 0.13
V: 0.07
CH4: 1.0
a
NH3 + ATP
Crecimiento
microbiano
(16 g Ni/ kg MOf)
a








III. Los cultivos microbianos en dietas para rumiantes.


a) Antecedentes.

El conocimiento de los efectos benficos de algunas de las bacterias de la flora
intestinal se inicia con los trabajos de Metchnikoff en 1908, quien atribua la longevidad
de un grupo de blgaros a su consumo de productos lcteos fermentados, dando la
importancia del lactobacilo en la flora intestinal. Desde entonces, diversos autores han
investigado las distintas funciones de los microorganismos del tubo digestivo, pero
algunas de sus acciones todava no estn bien precisadas. Por otra parte, una vez
comprobado que algunas bacterias intestinales, adicionadas al pienso o al agua de
bebida, determinaban una respuesta favorable en produccin animal, se intent
enmarcarlas en un grupo especfico; sin embargo, la propia heterogeneidad de los
microorganismos experimentados no facilit este propsito. De igual forma, no se ha
resuelto una denominacin tcnica especfica que permitiera su diferenciacin de otros
aditivos o sustancias no biolgicas, que tienen efectos estimulantes en la produccin
animal. En 1965, Lilley y Stillwel, fueron los primeros en emplear el trmino de
probitico, significando para la vida; quienes lo describan como sustancias
secretadas por un microorganismo el cual estimulaba el crecimiento de otro (Fuller,
1992).

La idea, que en su etimologa pareca adecuada, no era, sin embargo, totalmente
correcta. Probiticos son todas las sustancias de carcter nutritivo, por ejemplo, y no
slo determinados microorganismos. Incluso los antibiticos gozan de esa duplicidad
antagnica de accin probitica y antibitica, segn la especie animal. El concepto de
aditivo biolgico no parece tampoco reflejar con exactitud cuanto de especfico y


diferencial tiene este grupo de microorganismos, cuyos efectos enzimticos son muy
distintos de los que corresponden a su accin antagnica microbiana.

Actualmente la AFIA
1
y la FDA
2
han nombrado a los probiticos como
microorganismos para alimentacin directa (MAD), en ingls Direct-fed microbials
(DFMs), y los definen como una fuente de microorganismos vivos (viables)
naturalmente presentes (Kung, 1999).

La infraestructura, la falta de experiencia de los trabajadores y el manejo
tradicional del ganado obstaculizan la aplicacin correcta de los cultivos microbianos al
adicionarse a una dieta alta en concentrados a rumiantes, cuyo uso no es complicado y
solo requiere de constancia y limpieza (Chauvet et al. , 1992).

Algunos objetivos potenciales en la aplicacin de la biotecnologa en los
microorganismos ruminales son: aumentar la actividad celuloltica, introduccin de la
capacidad para romper los complejos lignina y hemicelulosa, reduccin en la
produccin de CH
4
, reduccin de la actividad proteoltica y desaminasa, incrementar la
actividad de biuretasa, incrementar la produccin microbial de aminocidos especficos
y la introduccin de la capacidad de fijacin por nitrgeno (Armstrong, 1988). La
manipulacin directa de la fermentacin ruminal por medios biotecnolgicos ha sido
muy limitada por unos pocos componentes antimicrobianos y algunos microorganismos
que pueden ser adicionados al alimento, los mtodos presentes para esta manipulacin
incluyen a los ionforos, antibiticos y los MAD en la dieta (Wallace, 1996).

b) Cultivos bacterianos.

- Caractersticas
La bacteria es una fuente potencial de protena y dentro de sus ventajas se
encuentran las siguientes:




________________________________________
1. American Feed Industry Association.
2. Food and Drug Administration.
1. Su crecimiento es muy rpido con temperaturas ptimas y en otras condiciones de
cultivo.
2. El contenido de protena de la bacteria vara de 47 a 87 % de MS en diferentes
especies.
3. Protena bacteriana contiene mas metionina, triptofano y cistina que la protena de
los hongos (Dabbah, 1970).
4. Las membranas de la clula bacteriana son de ms fcil desintegracin.

Muchos tipos de bacterias utilizan hidrocarburos saturados en la produccin
industrial de cidos grasos, ceras y grasas, cido glutmico, cido dipicolnico, cido
saliclico y cultivos microbianos; otras bacterias pueden metabolizar CH
4
. En todos los
casos, la produccin de clulas es alta y pueden ser usadas como una fuente de
protena alimenticia (Dabbah, 1970; Fuller, 1992).

La FDA y la AAFCO (Association of American Feed Control Officials) han
publicado una lista de microorganismos catalogados como GRAS Generalmente
Reconocidos como Seguros, siendo estos los nicos que deben ser utilizados en la
fabricacin de productos microbianos (Cuadro 3). Inicialmente los MAD se
seleccionaban empricamente, sin embargo, en la actualidad son varios los criterios
para su seleccin y produccin como: la especie animal, su estado fisiolgico, el tipo de
dieta, la factibilidad tecnolgica, la naturaleza y aceptacin del producto MAD y de los
productos de origen animal, el tipo de sustrato o medio de cultivo para su produccin, la
presencia de otros aditivos en la dieta que causan modificaciones genticas.

Lactobacillus plantarum (Lp) es una cepa frecuentemente usada en inoculantes y
es de considerable inters la manipulacin gentica de esta bacteria para mejorar el
perfil de fermentacin, con particular inters en la construccin de cepas recombinantes
con la capacidad de secretar una celulasa extracelular y producir lactolina; no es un
anaerobio estricto, por lo que su capacidad para crecer aerbicamente es el elegido


contra la gran mayora de los anaerobios obligados presentes en el rumen (Fox, 1988;
Sharp et al. , 1994). La Inclusin de cultivos de lactobacilos en la dieta puede prolongar
la retencin de protozoarios en el rumen, atenuar la fermentacin y produccin del
lactato ruminal y ayudar a mantener un alto pH ruminal (entre 6 y 7).


Cuadro 3. Microorganismos que se pueden utilizar en alimentos
balanceados para ganado, para crear MAD.
FUENTES MAD.

Aspergillus niger Bifidobacterium infantis
Lactobacillus reuteri
Aspergillus oryzae Bifidobacterium longum
Leuconostoc mesenteroides
Bacillus coagulans Bifidobacterium thermophilum
Pediococcus acidilactici
Bacillus lentus Lactobacillus acidophilus
Pediococcus cerevisiae (damnosus)
Bacillus licheniformis Lactobacillus brevis
Propionibacterium freudenreichii
Bacillus pumilus Lactobacillus bulgaricus
Propionibacterium shermanii
Bacillus subtilis Lactobacillus casei
Saccharomyces cerevisiae
Bacteroides amylophilus Lactobacillus cellobiosus
Streptococcus cremoris
Bacteroides capillosus Lactobacillus curvatus
Streptococcus diacetilactis
Bacteroides ruminicola Lactobacillus delbrueckii
Streptococcus faecium
Bacteroides suis Lactobacillus fermentum
Streptococcus intermedius
Bifidobacterium adolescentis Lactobacillus helvecticus
Streptococcus lactis
Bifidobacterium animalis Lactobacillus lactis
Streptococcus thermophilus
Bifidobacterium bifidum Lactobacillus plantarum
Penicillum roqueforti

Kautz y Arens 1998

Sharp et al. (1994) inocularon cepas recombinantes y nativas de Lp en el rumen
de un borrego y la supervivencia de las bacterias cido lcticas (BAL) fue determinada
por seleccin; los resultados demostraron que tanto las bacterias recombinantes como
las silvestres de las cepas de Lp desaparecieron rpidamente del rumen y 24 h
despus de la inoculacin no se detect BAL. En contraste, el nmero de S.
ruminantium permaneci constante, sugiriendo que la disminucin de BAL no fue una


flexin en la muerte general de microorganismos ruminales. Hay varios mecanismos
potenciales que causan rpida prdida de BAL en el fluido ruminal, los cuales incluyen
la predacin por protozoarios y bacteriocinas las cuales atacan a BAL y bacterifagos.

Al inocular S. ruminantium (concentracin de 10
8
unidades formadoras de
colonias (ufc), de la subespecie lactilytica, cepa JDB201) en borregos alimentados con
dietas altas en concentrados, no hubo presencia de lactato y el pH se estabiliz a 6.3
6.5 a las 24 h postinoculacin (Wiryawan y Brooker, 1995). El Lactobacillus acidophilus
mejora la produccin de leche (Jaquette et al. , 1988; Ware et al. , 1988), y produce
varios tipos de antibiticos como la acidofilina, lactocidina y acidolina (Fox, 1988); sin
embargo, Copelana et al. (1994) no encontraron efectos en el consumo, ganancia
diaria y en la eficiencia alimenticia en borregos en crecimiento cuando se incluy una
dieta con una cepa de L. acidophilus BT1386. La adicin de cultivos de lactobacilos en
la dieta puede prolongar la retencin ruminal de protozoarios, atenuar la fermentacin y
la produccin ruminal de lactato y ayudar a mantener un pH ruminal entre 6.3 a 7.5
(Owens et al. , 1998).

Otra bacteria usada en la fermentacin ruminal in vitro es la Propionibacteria
shermanii (Ps) la cual utiliza lactato y glucosa para producir propionato, acetato y CO
2
.
Kung et al. (1994) utilizaron varias dietas y dosis de Ps y encontraron que en la dieta de
carbohidratos de fcil fermentacin, la dosis de Ps a 1X 10
9

ufc ml
-1
, redujo la
acumulacin de lactato (23 mM) relativo a los cultivos de bacterias ruminales sin tratar
(48 mM) despus de 10 h de fermentacin y se increment la produccin de propionato

Los MAD se han utilizado para desplazar microorganismos enterotoxignicos
como Escherichia coli de la pared intestinal, y para promover una poblacin bacteriana
saludable la cual excluye coliformes del intestino ya que algunas cepas poseen
actividad bactericida, como por ejemplo los lactobacilos, los cuales pueden producir
perxido de hidrgeno in vitro (Reiter et al. , 1980; Fox, 1988; Wallace y Newbold,
1992).Tambin producen cidos orgnicos como el actico y el lctico, los cuales
inhiben el crecimiento de microorganismos patgenos Gram (-) (Fox, 1988).





c) Cultivos fngicos y de levadura.

- Caractersticas
Los hongos son organismos multicelulares, aerobios, capaces de crecer en un
amplio intervalo de pH, presin osmtica, temperatura, y con diferentes substratos
como salvado de trigo, rastrojo de maz, paja de avena, bagazo de caa, yuca, pulpa de
caf, pasta de coco, flor de cempaschil, etctera (Dabbah, 1970; Tapia et al. , 1991;
Flores et al. , 1995; Montiel, 1998); son ricos en vitamina B y el contenido de protena
vara de 30 a 60 %. El modo de accin de los cultivos fngicos en la produccin en
rumiantes se muestra en la figura 3.

Figura 3. Esquema alternativo de investigacin que muestra el modo primario de accin de los aditivos
fngicos, Putman y Schwab (1994).


Mejora productividad

Incrementa consumo alimento

Incrementa el % de celullisis Incrementa el flujo de protena microbiana

Disminuye la produccin de lactato Cambios en proporciones de AGV

Estimulacin de los microorganismos ruminales

Altera metanognesis Mejora la estabilidad del pH

Remueve molculas txicas Secuestro de oligosacridos ?
Produccin metablica de nutrientes
o cofactores in vivo.?


Cultivo de levadura




Las levaduras son hongos unicelulares, que no forman micelio; son clulas
ovoides o elpticas, no mtiles, generalmente crecen en temperaturas de 25 a 40
0
C,
pueden tolerar alta acidez (pH 3.5) y estn adaptadas a nichos con un alto contenido de
azcar. Las especies ms comnmente usadas en la alimentacin son Torulopsis utilis
(levadura de torula), Saccharomyces cerevisiae (SC) y Saccharomyces fragilis; el
contenido promedio de protena es del 50 % (Dabbah, 1970; Wallace, 1996).

- Elaboracin

1. Sustrato.
La fermentacin en sustrato slido (FSS) es un tipo de cultivo en donde se crea
un microorganismo sobre la superficie o en el interior de una partcula porosa slida y
esta partcula puede ser asimilable o inerte. El agua est ligada al interior de la matriz
porosa y no se observan fenmenos macroscpicos de drenaje entre las partculas, sin
embargo el cultivo slido es un sistema complejo en virtud de que la interrelacin
ambiente-sustrato microorganismo tiene diversas limitaciones fsicas y como
consecuencia se presenta gradientes de temperatura, pH, humedad, etc., (Cuadro 4)
que afectan de forma crtica al proceso fermentativo (Mudgett, 1986; Hernndez,
1990). En la FSS el medio de cultivo es relativamente simple y consta del material
seleccionado con el contenido de humedad adecuado y algn otro componente si es
necesario (Mudgett, 1986; Trejo, 1986). Los substratos slidos quizs sean vistos como
una mezcla de gas-lquido-slido en la cual una fase acuosa est inmediatamente
asociada con superficies slidas en varios estados de sorbcin y est en contacto con
una fase de gas continua con el gas externo del medio ambiente; la fase slida provee
una fuente rica y compleja de nutrientes, los cuales quizs sean completos o
incompletos con respecto a los requerimientos nutricionales del organismo que ser
cultivado y tambin provee una mezcla de substratos de alto peso molecular como
componentes de carbono, los cuales quiz impliquen mecanismos de induccin,
inhibicin o represin en el metabolismo microbiano (Mudgett, 1986).



Cuadro 4. Condiciones ptimas de crecimiento de Penicillum
roqueforti y Lactobacillus plantarum.
Condiciones Penicillum roqueforti Lactobacillus plantarum
pH 6 7 6 - 7
% Humedad 70 % 60 80 %
Temperatura 37

C 37

C
Tiempo de incubacin 20 horas 24 horas
Hernndez, 1990

Para entender esta dinmica es necesario saber qu tipo de sustrato se va a
utilizar. Los residuos agroindustriales tienen una funcin importante como fuente de
biomasa para rumiantes en los pases en va de desarrollo, pero su primera limitacin
para una utilizacin eficiente es el desequilibrio de sus nutrientes, donde la baja
digestibilidad es el factor que finalmente fija el tope superior de produccin; por tanto, el
objetivo principal sera aumentar la digestibilidad a travs de tratamientos, o mejorar la
capacidad de los microorganismos del rumen para degradarlo. El mayor componente de
los residuos agroindustriales son los polisacridos de la pared celular, como
hemicelulosa y celulosa . Los polisacridos constituyen entre el 40 y 70 % del peso
seco de los residuos de la planta variando con la madurez cuando sta es cosechada.
Esta fermentacin se realiza utilizando distintos substratos agrcolas poco utilizados
(pulpa de caf, bagazo de caa, pasta de coco, yuca, centeno, flor de cempaschil;
desechos ctricos, entre otros) (Tapia et al. , 1991; Campos et al. , 1995; Flores et al. ,
1995; Montiel, 1998; Cortz y Velzquez, 1999).

2. Proceso.
Se lleva a cabo una FSS del residuo agroindustrial por el hongo. Aunque el
crecimiento del hongo es inicialmente desencadenado por la disponibilidad de sacridos
solubles, el ataque enzimtico a la lignina es la llave para la degradacin parcial del
residuo. Los residuos son colectados slo una o dos veces al ao y pueden ser
acumulados en fermentadores de plstico para ser esterilizados e inoculados como es


deseado; los gneros ms empleados han sido Fusarium, Rhizopus, Aspergillus
oryzae, Aspergillus niger, Trichoderma y algunas especies de Penicillum (Dabbah,
1970; Hrubant, 1985; Tapia y Herrera-Saldaa, 1989; Cortz y Velzquez, 1999; Pera et
al. , 1999).

3. Producto.
El residuo fngico fermentado, mezcla micelio, es el producto. La biomasa
producida puede ser secada para producir polvo o grnulos, o puede ser usada fresca
como suplemento para productos alimenticios. El polvo secado tiene un contenido de
protena del 50% con un valor biolgico de cerca de 75% y un valor neto de protena
utilizable del 70% y la digestibilidad y utilizacin de lisina es tambin alto (Koloman,
1990). Algunas enzimas, como las quitinasas y las gluconasas se han hallado activas
en el crecimiento del micelio (Pera et al. , 1999).

Los cultivos de levadura viva (SC) crecen mejor en extracto agar maltosa y
requieren incubacin bajo condiciones aerobias para optimizar el nmero viable de
clulas. Las levaduras tienen una habilidad limitada para multiplicarse en el fluido
ruminal, pero parecen viables en un periodo prolongado de tiempo. Las clulas de
levadura son metablicamente activas en la presencia de nutrientes adicionados en 48
h de incubacin por la produccin de etanol. Su habilidad para producir cido glutmico
podra beneficiar el sabor de los alimentos a los que se adiciona la levadura (Wallace,
1996; Kung et al. , 1997).

Diferentes tipos de MAD compuestos de levaduras y hongos se han utilizado
para mejorar la productividad animal (rumiantes). El cultivo fngico ms empleado en la
nutricin de rumiantes ha sido Aspergillus oryzae (AO) el cual se ha observado que
tiene un gran efecto durante el primer ciclo lactacional, aumentar la produccin de leche
en vacas lecheras (Gmez-Alarcn et al., 1988; Kellems et al., 1990; Newbold et al. ,
1993), estimula el crecimiento en becerros como resultado en el incremento del CV, y
la degradacin de la MS por digestin de la pared celular de forraje altamente fibroso
como la paja (Wiedmeier et al. , 1987; Wallace y Newbold, 1992; Varel et al. , 1993). En


ganado de engorda criado intensivamente se han obtenido respuestas en ganancias de
peso vivo (GPV) con la adicin de MAD fngicos (Adams et al. , 1981). Aumenta la
actividad de bacterias celulolticas (Frumholtz et al. , 1989; Yoon y Stern, 1996) y
aumenta el nmero de bacterias proteolticas (Yoon y Stern, 1996), es activamente
proteoltico y no afecta la actividad de la peptidasa e incrementa la actividad enzimtica
de la desaminasa, amilasa, lipasa, celulasa y estearasa (Gmez-Alarcn et al. , 1990;
Fondevila et al. , 1990; Newbold et al. , 1993; Varel et al. , 1993; Welch y Calza, 1993;
Higginbotham et al. , 1994). Tapia y Herrera-Saldaa (1989), notaron que especies
fngicas difieren en sus efectos en la desaparicin de MS en rumen, lo que indica que
la respuesta a cultivos fngicos esta influenciado por la composicin de la dieta;
adems, la efectividad de AO en la digestibilidad de la dieta podra estar influenciado
por el tipo de grano usado en la dieta (Windschitl, 1992). Por otro lado, Ayala et al.
(1992), sugirieron que el AO y el tipo de la dieta incrementan la digestibilidad de fibra y
el nmero de protozoarios.

En otros estudios se encontr que AO provee factores del crecimiento como
aminocidos y vitaminas del complejo B que mantienen el crecimiento de Megasphaera
elsdenii en lactato, el cual lo convierte a propionato y acetato por va del acrilato
(Waldrip y Martin, 1993; Higginbotham et al. , 1994). Nisbet y Martin (1990, 1993)
observaron que el producto Amarfem, el cual contiene AO, mejor la utilizacin de
lactato por la bacteria ruminal Selenomonas ruminantium a concentraciones de 0.5 a 50
g L
-1
en una prueba in vitro adicionando adems L-malato, acetato o L-aspartato al
filtrado de Amaferm. Estos autores observaron que el cido orgnico L-malato tiene una
funcin importante en la estimulacin del crecimiento en lactato, as como el consumo
de lactato por S. ruminantium tratada con Amaferm. En otro estudio, Martin y Nisbet
(1990) observaron que una mezcla de microorganismos ruminales incubados con
Amaferm (una concentracin de 1.0 g L
-1
) increment la produccin de H
2
, CH
4
,
acetato, butirato, total AGVs y NH
3
. La adicin de Amaferm a las fermentaciones de
almidn soluble tendi a mejorar la produccin de hidrgeno metablico, CH
4
, acetato y
AGVs totales; la produccin de propionato se incremento y disminuy la proporcin
acetato: propionato. Cuando se adicion pasto bermuda, se detectaron algunos


cambios en los productos de fermentacin, pero con 1.0 g L
-1
de Amaferm disminuy la
digestibilidad de fibra detergente neutro (FDN) y cido (FDA) por 8.1 y 10.4%,
respectivamente. Chao-Ren et al. (1999), encontraron que la inclusin de Amaferm
mejor significativamente la degradacin de FDA de los forrajes utilizados despus de
24 a 48 h de incubacin en rumen, pero el efecto de Amaferm en la digestibilidad vara
dependiendo del tipo alimento utilizado

En las variables fermentativas, AO increment la proporcin de acetato:
propionato, disminuy el nmero de protozoarios y la produccin de CH4, la cual estuvo
relacionada con el incremento en la produccin de productos reducidos como butirato y
valerato (Frumholtz et al. , 1989); sin embargo, en varias investigaciones no se han
observado efectos de AO en la produccin de acetato y de propionato (Wiedmeier et al.
, 1987; Fondevila et al. , 1990; Gmez-Alarcn et al. , 1990) aunque disminuy la
proporcin de acetato/propionato y aument la produccin de propionato relativo al
acetato (Nisbet y Martin, 1990; Martin y Nisbet, 1990), y la concentracin de NH
3
N, se
increment (Chiquette, 1995). La estimulacin de la fermentacin ruminal con la
presencia de AO puede ser benfica para proveer ms energa para el crecimiento
microbiano.

El cultivo de levadura ms utilizado como MAD ha sido el Saccharomyces
cerevisiae (SC) y a continuacin se muestran algunos de los efectos ms importantes
hallados en los ltimos aos:

- Incrementa el CV y la GPV despus del destete en becerros y corderos (Wallace y
Newbold, 1992). En borregos no hubo diferencias en ganancia de peso o en grado
de la canal pero la produccin de canal de los animales que recibieron el cultivo de
levadura fue mejor respecto al grupo testigo (Wells y Mason, 1976). La inclusin de
SC en la dieta no cambi la GPV (El Hassan et al. , 1996), el CV, GPV, CA y peso
en canal al adicionar SC a una dieta de pulpa de remolacha de azcar y cebada
(Rouzbehan et al. ,1994), ni la GPV y el CV en vacas lecheras (Piva et al. , 1993).



- El uso de cerdaza (20 %) en dietas de borregos en engorda y la inclusin de SC
mejoraron significativamente la ganancia diaria de peso (268.7 g d
-1
) y la ganancia
diaria total (22.6 kg) (Lpez et al. , 1997).

- Aumenta la produccin de leche y el CV en vacas alimentadas con dietas altas en
concentrado (60:40) (Williams et al. , 1991; Piva et al. , 1993) e incrementa junto con
una mezcla de enzimas el 3.5% del factor corrector grasa (FCG) en vacas de
segunda lactacin (Kung et al. , 1997). En vacas primalas y multparas hubo una
tendencia a mejorar el rendimiento de leche al usar SC 23 das preparto y 56 das
postparto y aument el CV de MS (Robinson y Garret, 1999). El principal efecto de
la levadura en cabras en lactacin temprana fue inducir la movilizacin de ms
reservas de energa, por los altos niveles de cidos grasos no esterificados (AGNE)
y hubo una alta produccin del FCG en la leche (Giger-Reverdin et al. , 1996). Sin
embargo, Erasmus et al. (1992) observaron que la produccin diaria de leche y su
porcentaje de grasa no fueron afectados al incluir SC en la dieta.

- Los mejores niveles de inclusin de la levadura han sido < 1 % de MS de la dieta
(Williams y Newbold, 1990), elevando la actividad de la fosfatasa alcalina que se
refleja en un mejor metabolismo de minerales (Cole et al. , 1992).

- Hay incrementos en la digestibilidad de MS, FDN y protena cruda (PC) cuando las
levaduras se aaden a forrajes de baja calidad (Roa et al. , 1997). La adicin de
clulas de levaduras a medios deficientes de vitamina estimula la germinacin de
zoosporas fngicas, incrementa la degradacin y produccin de hidrgeno, formato,
lactato y acetato, con lo que las levaduras pueden mejorar la colonizacin de la
pared celular de la planta con Neocallimastix frontalis, por lo que pueden ser una
buena herramienta para optimizar la degradacin microbiana de materiales
lignocelulsicos (Chaucheyras et al. , 1995a).
- En el rumen, el hidrgeno es un intermediario producido particularmente durante el
rompimiento de la pared celular de la planta por microorganismos celulolticos como
Ruminoccocus albus, Ruminoccocus flavefaciens y hongos anaerobios. El hidrgeno


metablico (H
2
) nunca se acumula en el rumen porque es rpidamente utilizado por
bacterias metangenas, sin embargo las bacterias acetognicas hidrogenotrficas
son tambin capaces de utilizar hidrgeno para la produccin de acetato.
Chaucheyras et al. (1995b), hallaron que la adicin de clulas de levadura (SC)
mejoraron el metabolismo hidrogenotrfico de la cepa acetognica y su produccin
de acetato. En la ausencia de levadura, y en un cocultivo de bacterias acetognicas
y metangenas, el hidrgeno fue principalmente usado para la sntesis de CH
4
, pero
la presencia de SC vivo estimul la utilizacin del hidrgeno por la cepa acetognica
y mejor la acetognesis.

- La levadura puede proveer nutrientes como nucletidos, aminocidos y vitaminas
para los microorganismos ruminales, promoviendo el crecimiento de bacterias a
travs de la autlisis en el ecosistema ruminal (Giger-Reverdin et al. , 1996).

- El SC aparentemente tiene un efecto qumico en el rumen y en varias
investigaciones se ha mostrado que la inclusin de cultivo de levadura en la dieta
incrementa la cantidad total de AGVs producidos in vivo, in vitro pero no siempre
han sido significativos (Wiedmeier et al. , 1987; Harrison et al. , 1988; Martn et al.
, 1989; Arambel et al. , 1989; Dawson, 1990; Windschitl, 1992; Mutsvangwa et al.
, 1992; Sommart et al. , 1993). La relacin acetato: propionato as como el pH
ruminal tendieron a incrementarse con la adicin de levadura (Adams et al. , 1981;
Sommart et al. , 1993; Kumar et al. , 1994) en la dieta con una proporcin de grano:
forraje 50:50 (Chademana y Offer, 1990; Roa et al. , 1997).

- Estimulan el crecimiento de bacterias celulolticas en el rumen (Wiedmeier et al. ,
1987; Frumholtz et al. , 1989; Dawson et al. , 1990; Kumar et al. , 1994; El Hassan
et al. , 1996) as como bacterias proteolticas (Yoon y Stern, 1996). Algunas cepas
de SC tienen la habilidad de modificar la poblacin bacteriana en el rumen (+35 %)
donde SC NC4C
1026
estimul el total de bacterias ruminales y SC NC4C
240
estimul
el crecimiento de bacterias celulolticas y bacterias utilizadoras de cido lctico
(Harrison et al. , 1988; Dawson, 1993). La habilidad de las clulas de la levadura al


estimular el nmero de bacterias en la fermentacin del rumen (RUSITEC) parece
estar relacionada a su habilidad para disminuir las concentraciones potencialmente
inhibitorias de oxgeno (Newbold et al. , 1993). En un estudio, Newbold et al. (1996),
mostraron que la levadura puede estimular el nmero de S. ruminantium en un
medio de incubacin con una mezcla de fluido ruminal in vitro (Figura 4).


Figura 4. Funcin central de un incremento en el nmero de bacterias en el rumen con la adicin de SC y
respuestas en la produccin (Newbold, 1996).









- La adicin del 5 % de un filtrado de cultivo de levadura a cultivos de S. ruminantium
HD
4
increment (p<0.05) el acetato y propionato y la concentracin total de AGVs
(Nisbet y Martin, 1991; Callaway y Martin, 1997), hubo un pequeo efecto en la
produccin de acetato y propionato por M. elsdenii, y estimul el crecimiento de
ambas bacterias en lactato durante un periodo de incubacin de 24 h. Por otro lado,
se estimula la tasa inicial de degradacin de celulosa por Fibrobacter succinogenes
S85 y Ruminoccocus flavefaciens FD1 (Nisbet y Martin, 1991); adems al adicionar
2.5 % del filtrado de YEA SACC se increment la produccin de MS microbial de M.
elsdenii y aument la utilizacin de lactato para la sntesis microbiana (Rossi et al. ,
1994).
- Se ha demostrado que la estimulacin de la degradacin de la celulosa por esta
levadura est asociada con una disminucin en el tiempo lag, el cual resulta en un
incremento inicial en la tasa de digestin pero no en el incremento en la extensin
de digestin por microorganismos ruminales (Chademana y Offer, 1990; Williams et
Incremento en
la viabilidad
bacteriana
Incrementa la
tasa de
celullisis
Incrementa el
flujo de
protena
microbial
Mejora la
productividad


al. , 1991; Erasmus et al. , 1992; Kumar et al. , 1994; Zelenk et al. , 1994; Callaway
y Martin, 1997). Pero otros estudios no hallaron diferencias significativas en la
degradacin ruminal (Carro et al. , 1992; Enjalbert et al. , 1999) o en la digestibilidad
de la MS o fibra en el tubo digestivo (Harrison et al. , 1988; Mutsvangwa et al. ,
1992; Enjalbert et al. , 1999).

- Increment el flujo de MS y de NH
3
N en el duodeno (Williams y Newbold, 1990) y el
NH
3
N en rumen (Roa et al. , 1997); en otros estudios, sin embargo, disminuy la
concentracin de amonaco (El Hassan et al. , 1996; Enjalbert et al. , 1999).
Incrementa la sntesis de protena microbial en el rumen (Dawson, 1993) as como
su flujo y mejora el suplemento de aminocidos que entran al intestino delgado
(Erasmus, 1991).

- En estudios in vitro con la tcnica RUSITEC se redujo la produccin de CH
4
con un
nivel de concentrado: forraje del 50:50 (Williams et al. , 1989; Frumholtz et al. , 1989;
Carro et al. , 1992; Mutsvangwa et al. , 1992) y se disminuy la produccin de
protozoarios, principalmente los entodinomrfidos, y la concentracin de acetato
(Mutsvangwa et al. , 1992; Corona et al. , 1999). Sin embargo, en un estudio in situ
(Plata et al. , 1994) se increment la poblacin ruminal de protozoarios en becerros
alimentados con una dieta basada en paja de avena al adicionar SC. En dietas altas
en concentrado (70%) la inclusin de SC increment la degradabilidad de MS y FDN
(Carro et al. , 1992), y aument la produccin de AGVs (Carro et al. , 1992; Rossi
et al. , 1994), pero en otro estudio (Newbold et al. , 1995) SC no cambi la
produccin de L-lactato y amonaco.

- En estudios in situ (Williams et al. , 1989; Erasmus et al. , 1992) la adicin del SC
baj significativamente la concentracin media del cido lctico en el lquido ruminal
y previno el pico de concentracin de cido lctico dos horas despus de una
comida con cebada. La concentracin de oligosacridos fue reducida y aunque las
clulas de la levadura no pueden metabolizar el cido lctico, s pueden utilizar


azcares simples, los cuales son precursores del cido lctico en el rumen (Williams
et al. , 1989).

- Al igual que AO, el SC produce enzimas como la amilasa, proteasa y celulasa, las
cuales pueden ayudar a la digestin de nutrientes (Higginbotham et al. , 1994).

- Con la actividad metablica deficientes-respiracin y las diferentes cepas (mutantes)
se remueve algo del O
2
en el fluido ruminal mejorando la anaerobiosis en el rumen
(Newbold et al. , 1993; Corona et al. , 1999), mientras que el consumo de oxgeno
por SC va de 200 a 300 mmol min
-1
g
-1
(Newbold, 1996). Newbold et al. (1993),
hallaron que la viabilidad de la levadura y esta actividad metablica pueden ser
consideradas en la evaluacin de productos comerciales para identificar dosis o
condiciones que resulten en efectos benficos para el rumiante.


VI. Pasta de coco


a) Generalidades

Mxico ocupa el quinto lugar de la produccin mundial de coco,
aproximadamente 60 000 t en 1992. Los principales usos del coco son la produccin
de aceite, confitera y el consumo del agua. Del proceso de manufactura de aceite se
obtiene una torta de coco hmeda que seca se transforma en harina denominada pasta
de coco, que es el alumen del fruto de la palma de coco. Mil frutos de coco producen
un promedio de 180 kg de copra, aproximadamente 110 kg de aceite y 55 kg de pasta
de coco.

El uso de la pasta de coco en alimentacin animal est limitado por el elevado
costo y el efecto purgante que puede causar en ganado. ltimamente se utiliza con
xito como sustrato en fermentaciones slidas para cultivos microbianos, en la
produccin de levadura Rhodotorula pilimaniae, protena unicelular (aminocidos),


vitaminas, pigmentos, como un ingrediente extensor de semen en inseminacin
artificial, y en la produccin de probiticos fngicos.

Su uso depende del tiempo y condiciones de almacenamiento y por la rancidez que se
produce puede causar diarreas. Su inclusin en dietas para vacas incrementa el contenido de
grasa de la leche (se recomienda utilizar entre 1.5 y 2.0 kg d
-1
) y cantidades elevadas pueden
producir mantequillas con mucho sebo. No existe un efecto negativo en la calidad de canal de
reses. Su digestibilidad es aproximada a 65 % (FAO 1992). La composicin qumica de la pasta
de coco se muestra en el cuadro 5.


Cuadro 5. Composicin qumica de la pasta de coco
Humedad 7.01 % Arginina 11.0 Leucina 6.0
Cenizas 9.63 % Histidina 2.1 Tirosina 2.2
Protena 20.0 % Lisina 2.5 Treonina 3.0
Grasa 5.48 % Fenilalanina 4.1
Carbohidratos 16.5 % Metionina 1.0
Fibra cruda 4.10 % Cistena 0.9
Glucosa 9.16 % Glicina 4.2
FAO, 1992.




OBJETIVOS




Objetivo general



1. Obtener dos cultivos microbianos, uno a partir de Penicillum roqueforti (Pr) y el otro
de Lactobacillus plantarum (Lp), utilizando pasta de coco como sustrato, asimismo
evaluar su efecto sobre la respuesta productiva de borregos en engorda.






Objetivos especficos



a) Reactivar y producir los cultivos de Lp y Pr mediante fermentacin en sustrato slido
(FSS) sobre pasta de coco.

b) Medir la desaparicin in situ de la materia seca (MS) mediante la tcnica de bolsas
de nylon.

c) Evaluar el consumo voluntario, ganancia diaria de peso, conversin y eficiencia
alimenticia de borregos alimentados con dietas altas en concentrados.








HIPTESIS





- La pasta de coco es una buena fuente de sustrato para la produccin de cultivos
microbianos en fermentacin slida



- La adicin de cultivos microbianos en dietas altas en concentrados mejora las
variables productivas (consumo voluntario, ganancia diaria de peso, conversin y
eficiencia alimenticia) de borregos en engorda.


















MATERIAL Y METODOS


El presente trabajo se realiz en dos etapas. La primera se hizo en las
instalaciones del Departamento de Biotecnologa de la Universidad Autnoma
Metropolitana Ixtapalapa (UAM-I) y en el Departamento de Nutricin Animal del
Instituto Nacional de la Nutricin Salvador Zubirn (INNSZ), en ella se desarroll lo
siguiente:

a) Reactivacin de las cepas de la bacteria Lp y del hongo Pr para FSS a partir de
pasta de coco (UAM-I).

b) Produccin de cultivos microbianos en FSS (INNSZ).

c) Evaluacin de los cultivos microbianos mediante la desaparicin in situ de MS
(INNSZ).

La segunda etapa se efectu en la Unidad Ovina de San Juan Tlacotenco,
Estado de Morelos, donde se evaluaron los cultivos microbianos en el comportamiento
productivo de borregos en engorda y alimentados a base de concentrado y alfalfa.


ETAPA I. Reactivacin de las cepas, produccin de los cultivos y su
evaluacin mediante la tcnica de desaparicin in situ de la MS.

La cepa de Lp utilizada era de la Coleccin Americana de Cultivos Tipo 8014
(ATCC). Para su conservacin se utiliz un medio lquido a partir de pasta de coco y
40% de glicerol. La obtencin de la cepa de Pr fue del Laboratorio de Microbiologa del
Departamento de Biotecnologa (planta piloto de fermentaciones) de la UAM-I, aislada
del queso roqueforti por Pineda y Prez (1996).
a) Reactivacin de las cepas



Preparacin de los medios de cultivo.

Se elaboraron dos medios de cultivos a partir de pasta de coco, uno slido para
Lp y otro lquido para Pr, adems de una solucin de sales minerales que fue
adicionada a los mismos (CaCl
2
0.02g; MgSO
4
7H
2
O 0.02g; K
2
HPO
4
0.01g; NaHCO
3
1.0
g; NaCl 0.2g; H
2
O cbp 100ml). En el cultivo slido se midi humedad (%) empleando
un mtodo gavimtrico, azcares totales por el mtodo fenol-sulfrico por
espectrofotometra, y pH por potenciometra ajustando el medio a valores de 6.5 a 7.

Produccin del inculo para Lp.

Para la reactivacin de la bacteria Lp se llenaron frascos serolgicos de 100 ml
con el medio de cultivo slido previamente elaborado adicionando CO
2
/N
2
en una
relacin 20/80 con el fin de mantener la anaerobiosis y solucin de resarzurina a 0.1%
como indicador de anaerobiosis, los frascos fueron sellados y esterilizados a 121
o
C
durante 15 min a 15 libras de presin (psi). Posteriormente se inocul Lp en 15 frascos
conteniendo medio slido con el objeto de obtener el i nculo suficiente para la FSS.

Produccin del inculo para Pr.

En el caso de la reactivacin de las esporas de Pr se utiliz un medio elaborado
con agar dextrosa-papa PDA (Qumica SIGMA-Aldrich) y el medio de cultivo lquido
previamente elaborado con pasta de coco, el cual fue vaciado en matraces erlenmeyer
de 750 mL los cuales fueron sellados y esterilizados a 121
o
C durante 15 min a 15 psi y
conservados a temperatura de refrigeracin (4
o
C). El medio slido (PDA+ pasta de
coco) fue inoculado con esporas del Pr incubando de 15 a 20 h a 37
o
C hasta obtener
esporas en cantidad suficiente para inocular la pasta de coco en FSS (Trejo, 1986;
Hernndez, 1990; Campos et al. ,1995).

b) Produccin de cultivos microbianos



De acuerdo a las condiciones de fermentacin recomendadas por Carmona et al.
(comunicacin personal, enero de 1999) para cada microorganismo, se procedi a su
produccin en sustrato slido con pasta de coco. Para este fin se utilizaron 60 bolsas
esterilizables de polipapel (25x35 cm) en las que se les colocaron 5 kg del sustrato con
una humedad del 60%, se esterilizaron a 121
o
C durante 15 min a 15 psi y se ajust el
pH a 6.6.

Produccin de Lp.

Para la produccin de Lp las bolsas fueron inoculadas bajo condiciones de
anaerobiosis conseguidas por compactacin con 25 (V/P) del contenido de las bolsas,
las cuales fueron incubadas en una cmara de temperatura controlada a 37
o
C
durante 24 h.

Produccin de Pr.

En el caso de Pr las condiciones aerobias se consiguieron con inyeccin de aire
estril directamente en las bolsas y se inocularon con solucin de esporas.
Posteriormente fueron incubadas a 37
o
C en una cmara de temperatura controlada
durante 20 h. En este caso se evit la formacin de esporas para facilitar la
manipulacin de Pr en la elaboracin de la dieta; durante las 20 h de cultivo el micelio
invadi el sustrato totalmente.

Tratamiento de cultivos microbianos.

Despus de fermentados los substratos con Lp y Pr, se obtuvieron 15 kg de
cada uno y fueron secados a temperatura ambiente durante 24 h en forma granulada
para su conservacin y utilizacin posterior.




c) Evaluacin de los cultivos microbianos mediante la cintica de
desaparicin in situ de la MS

Elaboracin de las dietas.

Para medir la desaparicin in situ de la MS, se utiliz una dieta que fue elaborada
con base de concentrados (alimento balanceado comercial), la fuente de forraje fue
alfalfa achicalada en una relacin de 59.5%: 39.5%, y el 1% del cultivo microbiano y
un suplemento (10 g) de sales minerales (Ca 4 g, P 107.5 g, S 17.5 g, Co 2.63 mg, Cu
0.1 g, Fe 0.1 g, I 36.75 mg, Mg 0.1 g, Mn 0.3 g, K 101.5 g, Se 4.38 mg, Zn 1.9 g, NaCl
300 g kg
-1
de mezcla).

Anlisis qumicos de los ingredientes y la dieta.

Se realiz la evaluacin qumica de las raciones y de los ingredientes mediante
el anlisis qumico proximal (AQP), de acuerdo a la A. O. A. C. (1995) y energa bruta
por bomba calorimtrica, adems de fracciones de fibra (Goering y Van Soest, 1975).
Los cultivos microbianos elaborados en pasta de coco fueron evaluados mediante la
tcnica de desaparicin in situ de la MS y se usaron tres tratamientos (Cuadro 6).

Cuadro 6. Proporcin de los ingredientes utilizados en los
tratamientos.
Item Tratamiento 1 Tratamiento 2 Testigo
Concentrado 59.5 % 59.5 % 59.5 %
Alfalfa achicalada 39.5 % 39.5 % 39.5 %
Cultivo Pr. 1 % - -
Cultivo Lp. - 1 % -


Cintica de la desaparicin in situ de la M. S.



Para la cintica de la desaparicin in situ de la MS se utilizaron cuatro borregos
criollos machos, con peso promedio de 35 kg, fistulados ruminalmente con cnulas fijas
(Bar-Diamond) mediante la tcnica propuesta por Hecker (1974) y desparasitados con
clorhidrato de Levamisol al 12%
3
. Los animales se alojaron al azar en jaulas
individuales y fueron adaptados gradualmente a la dieta durante 15 das.

Para medir la desaparicin in situ de la MS se utilizaron bolsas de nylon con
tamao de 12 X 8 cm, bordes redondeados y porosidad promedio de 1200 a 1600
orificios por cm
2
. Cada tratamiento (T1, T2 y Testigo) fue colocado en bolsas por
duplicado y la dieta fue molida hasta obtener un tamao de partcula entre 2 y 3 mm;
cada bolsa contena aproximadamente 3 g de la racin correspondiente a cada
tratamiento.

Para la cintica de desaparicin se asignaron los siguientes tiempos de
incubacin 0, 3, 6, 9, 12, 24, 30, 36, 48 h post pandrium, tomando bolsas al azar por
duplicado. Las bolsas removidas del rumen fueron lavadas hasta obtener un lquido
claro y transparente y posteriormente fueron secadas a 60 C hasta peso constante.

Se utiliz un modelo de cintica de primer orden propuesto por Waldo (1972) y se
calcul siguiendo las recomendaciones de Singh et al. (1992). El tiempo medio de
desaparicin se calcul de acuerdo a la frmula de Faichney (1975):
t
1/2
(h)= In 2/ k.
Donde:
t
1/2
: es el tiempo medio.
k : es la constante de desaparicin (pendiente de la recta).

__________________________________________________________________
3. Solucin inyectable dosis 1 ml por cada 20 kg de PV.

Anlisis estadstico.



Los resultados obtenidos se analizaron empleando el procedimiento GLM de SAS
(1985), para un anlisis de varianza completamente al azar. La diferencia entre medias se
analiz a travs de la prueba de Tuckey con un nivel de significancia de 0.05.
El modelo para el anlisis referido fue el siguiente:

Y
ij
= ? + ?
i
+ E
ij

Donde:
Y
ij
es igual a las diferentes variables de respuesta: tiempo medio, 24 h, 48 h,
fraccin potencialmente digestible, fraccin soluble, fraccin insoluble, tasa de digestin,
tasa de pasaje y digestibilidad.
? es el efecto de la media general.
?
i
es el efecto del i-simo tratamiento
E
ij
error aleatorio experimental.


ETAPA II. Evaluacin de los cultivos microbianos sobre el comportamiento
productivo de borregos en proceso de engorda alimentados a base de
concentrados y alfalfa.

a) Comportamiento productivo en borregos

Esta prueba se realiz en el paraje Descansadero (Unidad Ovina), localizado
al noreste del poblado de San Juan Tlacotenco, municipio de Tepoztln (Morelos)
ubicado a 3 kilmetros aproximadamente sobre la nica brecha de acceso, entre las
coordenadas 19

0235 y 19

0251 de latitud norte y entre los 99

0451 y 99

0506 de
longitud oeste del meridiano de Greenwich. Dicho paraje se localiza en terrenos
ondulados y lomerios suaves entre 2900 y 2950 ms con pendientes del 4 al 10%. El
clima es templado subhmedo con lluvias en verano (Cw), la temperatura media anual
vara de 12 a 15
0
C y la precipitacin pluvial de 800 a 1250 mm al ao, con poca seca
de seis meses, la mayor aportacin de lluvia (ms del 85% del total) ocurre de mayo a
octubre.



Se emplearon 30 corderos machos cruza Suffolk con criollo, de 60 das de edad
con un peso promedio inicial de 22.60 3.73 kg, desparasitados internamente con
Clorhidrato de Levamisol al 12% y externamente con Triclorfn al 10%
4
. Los borregos
fueron adaptados a las dietas de los tratamientos de la prueba de desaparicin in situ
de la MS, durante un periodo de 15 das; se les proporcion agua ad libitum. Al finalizar
el periodo de adaptacin, los animales se distribuyeron en tres tratamientos al azar con
10 repeticiones (Cuadro 7).


Cuadro 7. Distribucin de los tratamientos (n= 10)
Tratamientos Cultivo
1 Penicillumroqueforti
2 Lactobacillus plantarum
Testigo Racin base sin cultivo



En el experimento los borregos se mantuvieron en corrales individuales durante
el tiempo de alimentacin que se ofreci a las 08:00 y 15:00 horas cada da. Se llev el
registro del consumo y del rechazo. Para evitar el estrs, los borregos fueron liberados
en corrales colectivos despus de asegurarse de que consuman la racin.

Para medir la ganancia diaria de peso, conversin y eficiencia alimenticia los
borregos se pesaron al inicio y al final del experimento, con ayuno previo de 16 h; el
pesaje se llev acabo entre las 09:00 y 11:00 horas, en un periodo de 60 das hasta que
obtuvieran un peso entre los 35 y 40 kg
______________________________________________
4. Bao con solucin acuosa al 10 %
Debido a la alta incidencia de Oestrus ovis y Melophagus ovinus en la zona, fue
necesario repetir la desparasitacin con Ivermectina al 1%
5
inyectable a una dosis de
0.5 ml por cada 20 kg de peso, un mes despus de iniciado el experimento.



Anlisis estadstico.

En este estudio los resultados se analizaron con el procedimiento GLM de SAS
(1985), para un anlisis de covarianza, con el objeto de eliminar sesgos debidos a las
diferencias entre peso inicial de los animales. La diferencia entre medias se analiz a
travs de la prueba de Tuckey con un nivel de significancia de 0.05.

El modelo para el anlisis referido fue el siguiente:

Y
ij
= ? + ?
i
+ ? (xij

x) + E
ij


Donde:
Y
ij
es igual a las diferentes variables de respuesta: ganancia diaria de peso, conversin y
eficiencia alimenticia y consumo voluntario.

? es el efecto de la media general.

?
i
es el efecto del i-simo tratamiento.

?
j
es la pendiente de regresin de y sobre x

E
ij
error aleatorio experimental.



_______________________________________________________________
5. 200mcg por kg de pv
METODOLOGA:

El siguiente diagrama muestra la metodologa empleada.































Donacin de
las cepas
Propagacin
de la cepa
Produccin de
los cultivos m.
por FSS
Conservacin
de las cepas
Elaboracin de
dietas
experimentales
Prueba de
comportamiento
(borregos en
engorda)
Tratamiento 1
Tratamiento 2
Testigo
Evaluacin de consumo voluntario, ganancia
diaria de peso, conversin y eficiencia
alimenticia de borregos en engorda.
Prueba de
desaparicin de
MS in situ
(borregos
fistulados)
Reactivacin
de las cepas


RESULTADOS Y DISCUSIN


ETAPA I. Reactivacin de las cepas, produccin de los cultivos
microbianos y evaluacin de los cultivos mediante la tcnica de desaparicin in
situ de la MS.

Reactivacin de las cepas y produccin de los cultivos
microbianos

Con el objeto de adaptar a los microorganismos a la pasta de coco, la
reactivacin de las cepas fue realizada en medios lquido y slido para Lp y Pr,
respectivamente, elaborados a partir de una infusin de pasta de coco. Durante el
periodo de reactivacin Lp y Pr tuvieron un crecimiento rpido en los medios
correspondientes, ya que los anlisis qumicos realizados en la pasta de coco (Cuadro
8) indicaron un contenido importante de nutrimentos fcilmente metabolizables por Lp y
Pr.

Cuadro 8. Propiedades del sustrato (Pasta de coco).
Determinacin Valor Referencia
% Humedad
2.49 ? 0.02
AOAC 95
% Fibra cruda (FC)
23.70 ? 0.01
AOAC 95
% Protena cruda (PC)
21. 57 ? 0.03
AOAC 95
% Extracto etreo (EE)
8.22 ? 0.01
AOAC 95
% Cenizas (C )
7.24 ? 0.01
AOAC 95
ELN 36.78 POR DIFERENCIA
Azcares totales 131.65 mg L
-1
FENOL SULFRICO
PH 5.6 POTENCIOMETRIA


Para la produccin de Lp y Pr que fueron usados en las dietas, las condiciones
utilizadas en las bolsas de plstico fueron adecuadas. Para confirmar el crecimiento de
ambos microorganismos, Carmona et al. (comunicacin personal, 1999), midieron las
siguientes variables: consumo de azcares, pH y produccin de biomasa, para Lp;
consumo de azcares, pH, produccin de CO
2
y produccin de biomasa, para Pr. Estas
variables indicadoras de crecimiento fueron cuantificadas en tiempos predeterminados
durante las primeras 24 h del cultivo. Los resultados de dichas variables se indican en
las grficas 1, 2, 3 y 4 para Lp, y 5, 6 7 y 8 para Pr respectivamente.

En la grfica 1, se observa que el sustrato a la hora cero contena un total de
131.65 mg L
-1
de azcares totales, despus de las primeras 6 h de fermentacin se
present un rpido consumo de sustrato por Lp. De la hora 8 hasta las 24 h de
fermentacin el consumo fue disminuyendo gradualmente y en forma lenta.

El pH decreci en aproximadamente dos unidades conforme transcurre la
fermentacin hasta llegar a un pH de 4.6 a las 24 h. Este comportamiento es debido a
la produccin de cido lctico (Grfica 2).

La grfica 3, muestra la produccin de biomasa, donde se observa que esta
crece muy lentamente y por lo tanto, no fue posible observar todas las fases del
crecimiento de Lp, pero se identifica la fase de crecimiento lag (fase de adaptacin)
indicando que siempre hay produccin de biomasa.





Grfica 1. Consumo de sustrato (azcares totales) con respecto al
tiempo de incubacin de Lp.




Grfica 2. Variacin del pH respecto al tiempo de incubacin de
Lp.





0
50
100
150
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Tiempo (h)
A
.

T
.

(
m
g

L
)
4
4.5
5
5.5
6
6.5
7
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Tiempo (h)
p
H


Grfica 3. Produccin de biomasa de Lp en el sobrenadante de FSS
con respecto al tiempo de incubacin.



Con los datos de consumo de sustrato y produccin de biomasa (Grficas 1 y 3)
se pudo obtener de manera grfica (Grfica 4) el rendimiento de biomasa con respecto
al sustrato (Y
x/s
), que es representado por la pendiente de la ecuacin de la recta
generada por regresin lineal:

X = (So S) Y
x/s
Xo.

Donde:

X = Biomasa al tiempo
So = sustrato inicial.
S = sustrato al tiempo
Y
x/s
= rendimiento de X con respecto a S
Xo = Biomasa inicial.

0
1
2
3
4
5
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Tiempo (h)
B
i
o
m
a
s
a

(
m
g

m
l
)


Grfica 4. Representacin grfica de la ecuacin para obtener la
produccin de biomasa de Lp.



En la grfica 4, se puede observar que la pendiente de la recta (rendimiento de
biomasa con respecto al sustrato) fue de Y
x/s
= 0.345 (kg x/ kg s), que indica un valor
relativamente bueno y Lp se adapt. El rendimiento total de biomasa (x) con respecto a
la pasta de coco fue de Y x/pc = 9.09 x 10
-4
. Sin embargo, los datos anteriores slo
muestran el crecimiento en las clulas lavadas que se obtienen en el sobrenadante de
una muestra de FSS y las clulas fijas al sustrato slido no fueron cuantificadas.

En la grfica 5, se puede observar que a partir de la hora 0 (131.65 mg L
-1
de
azcares contenidos en la pasta de coco) hasta la hora 6, existi un consumo de
sustrato muy rpido, posteriormente a la hora 9 el consumo lleg a un pico de 92.35 mg
ml
-1
, con un uso rpido hasta la hora 12 (79.99 mg ml
-1
), donde el consumo fue
disminuyendo gradualmente hasta llegar a un valor de 68.38 mg ml
-1
a la hora 20.



y = 0.3455x - 0.0392
R
2
= 0.9822
0
1
2
3
4
5
6
3 20 60 68 71 75 85 86 92 97 98 111
So-S (mg L)
B
i
o
m
a
s
a

(
m
g

m
l
)


Grfica 5. Consumo de sustrato (azcares totales) con respecto al
tiempo de incubacin de Pr.



En la grfica 6, se puede observar que el valor de pH decreci conforme
transcurri el tiempo, hasta que disminuy a 4.95.

Grfica 6. Variacin de pH con respecto al tiempo de incubacin
de Pr.



4
5
6
7
3 6 9 12 14 16 18 20
Tiempo (h)
p
H
50
70
90
110
130
3 6 9 12 14 16 18 20
Tiempo (h)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i

n

d
e

a
z

c
a
r

(
m
g

m
l
)


En la grfica 7, se observa que la produccin del CO
2
a partir de la hora 3 y 6 es
la misma, es decir, no hubo un aumento relativo (0.037 g). Sin embargo a partir de la
hora 9 la produccin aument drsticamente (0.11 g), mantenindose constante hasta
la hora 14 donde aument ligeramente (0.12 g) hasta un valor de 0.16 g a la hora 20.


Grfica 7. Produccin de CO
2
con respecto al tiempo de incubacin
de Pr.





En la grfica 8, se sealan las diferentes etapas de crecimiento del Pr, donde la
fase exponencial fue de aproximadamente 5 h mientras que la estacionaria, a partir de
la hora 9 (11.7 mg ml
-1
), se mantuvo constante durante el resto de la fermentacin (16
mg ml
-1
)







0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0.14
0.16
0.18
3 6 9 12 14 16 18 20
Tiempo (h)
C
O
2


Grfica 8. Produccin de Biomasa con respecto al tiempo de
incubacin de Pr.




Los datos observados en la produccin de Lp y Pr indicaron que la pasta de
coco tiene los suficientes nutrimentos para el crecimiento y desarrollo de los
microorganismos, dada las condiciones de la FSS propuesta por Mudgett (1986) quien
mencion que este tipo de fermentaciones provee una mezcla de substratos de alto
peso molecular como componentes de carbono los cuales quiz impliquen mecanismos
de induccin, inhibicin o represin en el metabolismo microbiano. En este caso la
pasta de coco tiene una alta fuente de hidratos de carbono, y en las grficas 1 para Lp y
6 para Pr se observan las curvas de consumo total de azcares, donde se muestra que
conforme pasa el tiempo de fermentacin el consumo disminuye debido al metabolismo
de estos microorganismos. La particularidad de este tipo de fermentaciones es que
permiten aprovechar los subproductos agroindustriales con un microorganismo vivo
mediante un ataque enzimtico a los elementos que no son fcilmente disponibles para
la degradacin microbiana en el rumen. No existen datos bibliogrficos relacionados a
la produccin de cultivos microbianos probablemente por razones comerciales, por lo
que a este trabajo se refiere las variables de produccin son asociadas al metabolismo
microbiano.
-5
0
5
10
15
20
0 3 6 9 12 14 16 18 20
Tiempo(h)
B
i
o
m
a
s
a

(
m
g

m
l
)


Evaluacin de los cultivos microbianos mediante la tcnica de
desaparicin in situ de la MS

Anlisis qumicos de las dietas.

En los cuadros 9 y 10 se muestran los resultados obtenidos de los anlisis
qumicos de los ingredientes y las dietas. Se puede observar que la dieta base de
concentrado y alfalfa (59.5%:39.5%), cubre los requerimientos para la engorda de
borregos, como lo recomienda el NRC (1985), en borregos destetados tempranamente
(6 a 8 semanas) y con un potencial de crecimiento moderado.

En el cuadro 9 se muestran los ingredientes utilizados para la dieta base, y se
puede observar que la cantidad de protena proporcionada por el cultivo microbiano es
alta (26%) y la pasta de coco por si sola aporta 21.5% de PC, lo que sugiere que los
microorganismos mejoraron 5.5 % de protena durante el proceso de fermentacin.

El cuadro 10 muestra que la cantidad de energa bruta aportada por la dieta fue
3.26 kcal para el tratamiento 1, 3.58 kcal para el tratamiento 2, y 3.21 kcal para el
testigo, con lo cual se cubrieron las necesidades energticas de los borregos con un
peso promedio de 22.6 kg. El contenido de protena que aportaron de las dietas fue
16.46 % para el tratamiento 1, 17.89% para el tratamiento 2, y 16.10 % para el testigo,
lo que es mayor al valor proporcionado por el NRC en una dieta base de 60%
concentrado y 40% forraje (14.7%).









Cuadro 9. Composicin proximal de los ingredientes utilizados en
la racin (g g
-1
MS).
g/ 100 g de
muestra
Concentrado Alfalfa a. Cultivo Pr Cultivo Lp
Humedad 5.50 0.02 5.65 0.02 5.99 0.01 4.89 0.02
PC 16.47 0.04 16.51 0.02 26.42 0.01 26.09 0.04
Cenizas 13.47 0.02 7.13 0.01 8.12 0.01 7.86 0.04
EE 2.55 0.004 1.53 0.04 6.19 0.003 7.41 0.04
FC 7.13 0.01 13.47 0.002 8.12 0.01 7.86 0.01
ELN 58.43 38.55 34.30 35.98


Cuadro 10. Composicin qumica de las dietas utilizadas en base
seca.
g g
-1
de muestra Tratamiento 1 Tratamiento 2 Testigo
Humedad 10.450.01 10.420.01 3.420.003
P. C 16.460.04 17.890.03 16.100.04
Cenizas 16.580.01 15.560.02 11.560.01
E. E. 2.900.01 3.190.07 2.210.001
F. C. 13.620.02 13.830.004 15.390.01
ELN 50.35 49.50 54.69
E. bruta (Kcal/G) 3.26 ? 0.028 3.48 ? 0.118 3.21 ? 0.026
FDN 78.91 ? 0.083 64.94 ? 0.091 67.41 ? 0.063
FDA 19.26 ? 0.073 28.39 ? 0.101 24.05 ? 0.066
Lignina 3.05 ? 0.083 3.81 ? 0.064 5.88 ? 0.041
Celulosa 15.17 ? 0.091 19.72 ? 0.046 15.22 ? 0.03
Slice 2.82 ? 0.002 2.54 ? 0.035 3.68 ? 0.023





Desaparicin in situ de la MS.

Como se puede observar en el cuadro 11, en el tratamiento testigo (81.39 %) la
desaparicin in situ a las 48 h fue mayor respecto al tratamiento 1 (78.21 %) y
tratamiento 2 (75.36 %); sin embargo, en el anlisis estadstico no hubo diferencias
entre tratamientos (P> 0.05), por lo que se puede considerar que la desaparicin in situ
fue, aproximadamente, 62.96 % en el tratamiento testigo a las 24 h. Por otro lado, el
tiempo medio de retencin fue mayor en el tratamiento 1 en comparacin con el
tratamiento 2 y el testigo (32.69 contra 29.30 y 29.05 h, respectivamente); sin embargo,
no hubo diferencia significativa entre tratamientos

Cuadro 11. Tiempo medio de retencin (h), 24 y 48 h en la
desaparicin in situ de la MS.
Variables Tratamiento 1 Tratamiento 2 Testigo prob.
24 h 61.74 ? 4.73 58.70 ? 5.86 62.96 ? 5.87
0.55
48 h 75.36 ? 8.16 78.21 ? 4.80 81.39 ? 6.21
0.45
Tiempo medio de
retencin (h)
32.69 ? 4.96 29.30 ? 5.17 29.05 ? 9.08
0.70


Estos hallazgos son similares a los de varios autores quienes no encontraron
diferencias significativas en la degradacin ruminal con la adicin de cultivo de levadura
(Carro et al. , 1992; Enjalbert et al. , 1999), ni en la digestibilidad de MS o fibra en el
tubo digestivo (Harrison et al. , 1988; Arambel y Kent, 1990; Mutsvangwa et al. , 1992;
Corona et al. , 1999; Garca, 1999). Chademana y Offer (1991) no hallaron efectos en la
digestibilidad de la MS a las 48 horas de incubacin en el rumen, en una serie de
mediciones con borregos alimentados con dietas de concentrado y forraje (10:90,
35:65 y 60:40) con y sin suplementos de SC, sugiriendo que tal vez el cultivo de
levadura est incrementando la tasa inicial de la digestin en el rumen, sin afectar la


extensin de digestin; sin embargo, a las 24 h de incubacin la adicin del cultivo, s
tuvo efectos significativos incrementando la desaparicin del heno en las bolsas
incubadas en rumen. Williams et al. (1991) tambin notaron un aumento en la tasa
inicial de digestin de paja con el cultivo de levadura. En un estudio realizado por
Hadjipanayiotou et al. (1997), tampoco hallaron diferencias para la degradabilidad de la
MS y PC de los diferentes alimentos incubados en rumen (cebada, harina de soya, paja
de cebada, heno de cebada y heno de pasto). Newbold et al. (1995), hallaron que la
degradabilidad de la paja en el rumen tendi a incrementar con la adicin de levadura
(P<.05) a las 72 y 96 h de incubacin, pero no a las 24 y 48 (0.1>P>.05); sin embargo,
la degradabilidad del heno de pasto no fue afectada con la adicin de SC en ninguno de
los tiempos medidos (P>.05).

En el cuadro 12, se observa que la fraccin soluble fue mayor para el grupo
testigo (24.90 %) y relativamente baja para el tratamiento 1 (18.32 %) y el tratamiento 2
tuvo una fraccin soluble del 22.65 %, sin presentar diferencias (P>.05) entre
tratamientos. La digestibilidad en los tres tratamientos fue de 80% aproximadamente,
con un pequeo incremento en el tratamiento 2 (74.61 %). Los coeficientes de
digestibilidad de MS de dietas completas que recibieron vacas con o sin SC fueron 0.64
y 0.63 respectivamente, mientras que en borregos fueron de 0.77 y 0.76 confirmando
que puede existir un pequeo efecto sobre la digestibilidad de la dieta (Williams y
Newbold, 1990). Tapia et al. (1991), notaron que especies fngicas producen diferentes
efectos en la desaparicin de MS y observaron que la adicin de 150 g de Pr en dietas
para vacas de baja produccin increment la digestibilidad en 4.8%.

Sin embargo, Newbold et al. (1995), hallaron que SC tuvo un pequeo efecto en
la degradabilidad total de la paja (a + b) incrementando significativamente la tasa de
degradacin; una tendencia similar fue observada en el heno pero sin diferencias
significativas, lo que sugiere que los cultivos estimulan la tasa mas no la extensin de la
degradacin del forraje en el rumen.
Cuadro 12. Cintica de la desaparicin in situ de MS.


Variables Tratamiento 1 Tratamiento 2 Testigo Prob.
% Fracc.
Potencialmente
digestible (b)
62.70 ? 6.05 55.54 ? 5.95 56.72 ? 8.29
0.33
% Fraccin soluble
(a)
18.32 ? 4.86 22.65 ? 6.28 24.90 ? 3.24 0.21
% Fraccin
Indigestible
(100-?a+b?)
19.11 ? 8.80 21.78 ? 4.79 18.35 ? 5.77
0.75
Tasa de digestin
kd (h
-1
)
0.049 ? 0.019 0.065 ? 0.028 0.047 ? 0.013
0.45
Tasa de pasaje kp
(h
-1
)
0.019 ? 0.008 0.021 ? 0.004 0.017 ? 0.005
0.76
% Digestibilidad
(kd/?kd+kp?)
72.80 ? 2.68 74.61 ? 4.47 72.12 ? 8.66 0.82



ETAPA II. Evaluacin de los cultivos microbianos en el comportamiento
productivo de los borregos alimentados con concentrados.

En relacin a la prueba de comportamiento los resultados obtenidos se muestran
en los cuadros 13 y 14.

En el cuadro 13, no se observaron diferencias (P ? 0.05) en la ganancia de peso
de los animales entre los tres tratamientos lo cual es similar a lo reportado por
Rouzbehan et al. (1994), en donde la adicin con el cultivo de levadura a una dieta
elaborada de melaza-pulpa con remolacha peletizado y cebada rolada (949 g/kg base
hmeda) y a diferentes proporciones, no afect la GDP de los borregos.


Cuadro 13. Promedios de la ganancia diaria de peso, peso inicial
y peso final.
Variables Tratamiento 1 Tratamiento 2 Testigo
GDP (g d
-1
) 220.30 ? 54.50 201.10 ? 35.37 224.30 ? 42.62
Pi (kg pv
.75
) 10.13 ? 1.19 10.23 ? 1.20 10.36 ? 1.50
Pf (kg) 34.60 ? 4.97 34.70 ? 4.14 35.35 ? 5.93
No hubo diferencia significativa entre tratamientos (p> 0.05).


Por otra parte, Bobadilla et al. (1996) evaluaron el efecto de tres cultivos de
levadura (SC) adicionados a una dieta de rastrojo de maz (58.5 %), grano de sorgo
molido (21%), melaza (11%) pasta de soya (8.5%) y urea (1%), y aunque fueron
diferentes dosis del cultivo (0.5g d
-1
, 3g d
-1
y 5 g d
-1
) no hubo efecto en la GDP de
borregos; hallazgos similares fueron reportados por Wells y Mason (1976). Adams et al.
(1981), al proporcionar una dieta de 50:50 concentrado/forraje y con 1.85 % de SC a
novillos, encontraron un aumento no significativo en tasa de crecimiento y la CA.

En algunos estudios se han mostrado respuestas positivas a la adicin de
cultivos fngicos en dietas para rumiantes relacionadas a los efectos en el crecimiento y
la eficiencia en la conversin alimenticia en borregos de rpido crecimiento. As, Lpez
et al. (1997), hallaron un incremento significativo en la GDP (262.3 g d
-1
) con la adicin
de 0.25% de cultivo de levadura y 20 % de cerdaza con diferentes proporciones de
sorgo, rastrojo de maz, salvado de trigo, pasta de soya y harina de pescado; sin
embargo, con 40 % de cerdaza deshidratada ms 0.25 % de cultivo de levadura no se
observaron diferencias significativas (159 g d
-1
). Los resultados sugieren que el tipo de
dieta as como la adicin de un cultivo microbiano tiene diferentes respuestas en cuanto
a las variables estudiadas.




En el cuadro 14, se muestra que la inclusin de Pr tuvo un aumento no
significativo (P> .05) en el consumo con 1.24 kg de alimento en comparacin con el Lp
(1.22 kg) y el tratamiento testigo (1.17 kg). Sin embargo; al ajustar el consumo al peso
metablico (PV
75
) si hubo diferencias (P<.05), indicando que el tratamiento testigo
consumi menos con relacin a los tratamientos 1 y 2 (115.11 contra 121.85 y 122.15 g
PV
.75
, respectivamente) pero entre los tratamientos 1 y 2 no se hallaron diferencias
significativas (P>.05).

Cuadro 14. Promedios de Consumo de MS, CA y EA.
Variables Tratamiento 1 Tratamiento 2 Testigo
CMS (kg d
-1
) 1.22 ? 27.47 1.24 ? 22.71 1.17 ? 24.82
CMS (g pv
.75
) 121.85 ? 12.87
a
122 ? 12.93
a
115 ? 15.28
b

CA 6.92 ? 0.96 7.53 ? 1.19 6.78 ? 1.65
EA 14.64 ? 2.17 13.69 ? 1.76 15.29 ? 3.06
Medias con distinta literal indican diferencia estadsticamente significativa P< .05

El grupo testigo present una disminucin no significativa (P>.05) en el consumo
de alimento, pero se favoreci la eficiencia 15.29 reflejado sobre la GDP (224.30 g d
-1
)
posteriormente el tratamiento 1 (Pr) (220.30 g d
-1
) y por ltimo el tratamiento 2 Lp
(201.01 g d
-1
). La mejor conversin la obtuvo el grupo testigo con 6.78, le sigui el
tratamiento 1 Pr con 6.92 y por ltimo el tratamiento 2 Lp con 7.53, aunque estos
hallazgos no fueron significativos se observ una ligera tendencia de mejor conversin
entre el grupo testigo y el tratamiento 1 Pr.

En un estudio realizado por Mutsvangwa et al. (1992), no hallaron mejoras en la
GDP, en la CA y EA (P>.05) al adicionar SC en toros, sin embargo el consumo de MS
fue significati vamente ms grande para toros que recibieron SC (P<.05). Similares
resultados fueron reportados por Copelana et al. (1994) al incluir L. acidophilus BT 1386


en dietas para borregos en crecimiento, donde el cultivo no tuvo efecto en el consumo
total (P=.85), en la GDP (P=.60) o en la EA (P=.60).
Independientemente de la adicin de los cultivos microbianos, los borregos se
adaptaron a la dieta alta en concentrados sin presentar cuadros de acidosis en los tres
tratamientos; sin embargo, en el grupo testigo varios animales presentaron cuadros de
timpanismo al adicionar la alfalfa durante el tiempo de alimentacin, lo que pudo estar
relacionado con la disminucin en el consumo de alimento. Los borregos que
recibieron los cultivos de Pr y Lp (15 g) se lo consumieron totalmente sin rechazo,
posiblemente por el sabor a la pasta de coco, que le proporciona una mayor gustocidad
al producto.

En el presente estudio los borregos consumieron el concentrado en alrededor de
los 40 min y la alfalfa achicalada en un periodo que vari de 2 a 4 h; hubo diferencias
significativas (P<.05) entre el consumo de alfalfa y concentrado en los diferentes
tratamientos (Cuadro 15). Los borregos del tratamiento 2 (536.01 g d
-1
) tendieron a
consumir ms alfalfa con relacin al tratamiento 1 (462.73 g d
-1
) y al testigo (432.20 g d
-
1
); sin embargo, los animales del tratamiento 1 (760.44 g d
-1
) consumieron ms
concentrado con relacin al tratamiento 2 (729.89 g d
-1
) y testigo (736.98 g d
-1
).

Cuadro 15. Relacin entre el consumo de alfalfa achicalada y
concentrado (g d
-1
).
Tratamientos Alfalfa achicalada (g d
-1
) Concentrado (g d
-1
)
1 462. 73 ? 8.14
b
760.44 ? 18.33

2 536.01 ? 9.41

729.89 ? 33.15
b
Testigo 432.20 ? 27.25
b
736.98 ? 39.26
ab
Medias con distinta literal indican diferencia significativa ( P< .05)


Las curvas de crecimiento para los diferentes tratamientos y entre tratamientos
se muestran en el Anexo de este trabajo.



CONCLUSIONES.


- La pasta de coco es una fuente rica en carbohidratos que sirve como sustrato para
el crecimiento de Penicillum roqueforti y Lactobacillus plantarum en fermentacin
slida, lo que permite elaborar cultivos microbianos.



- La inclusin de cultivos de Penicillum roqueforti y Lactobacillus plantarum en dietas
altas en concentrados sobre la desaparicin in situ de la MS no afecta su
degradabilidad en rumen.



- La adicin de cultivos de Penicillum roqueforti y Lactobacillus plantarum en dietas
altas en concentrado para borregos en engorda no afecta la ganancia diaria de
peso, la conversin y eficiencia alimenticia; sin embargo, afecta de manera positiva
el consumo de MS.


LITERATURA CITADA


? Adams, D. C.; Galyean, M. L.; Kiesling, H. E.; Wallace, J. D. and Finkner, M. N.
(1981). Influence of viable Yeast Culture, sodium bicarbonate and Monensin on
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? A. O. A. C. (1995). Official Methods of Analysis. Association of Official Agricultural
Chemist. 16
th
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? Arambel, M. J. and Kent, B. A. (1990). Effect of Yeast Culture on Nutrient
Digestibility and Milk Yield Response in early to mid lactationdairy cows. Journal of
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