01 Manual Tecnicas para Coleta de Secrecoes

Ministrio da Sade
Secretaria de Vigilncia em Sade

Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais
Tcnicas para Coleta de Secrees
Braslia
2011
MINISTRIO DA SADE
Secretaria de Vigilncia em Sade
Coordenadora do TELELAB:
Nbia Gonalves Dias
Autores:
Cludia Renata Fernandes Martins
Jos Antonio Pinto de S Ferreira
Luiz Fernando de Goes Siqueira
Luiz Alberto Peregrino Ferreira
Maria Luisa Bazzo
Mirian Franchini
Oscar Jorge Berro
Silvio Valle
Assessoria Pedaggica:
Maria Lcia Ricciotti Ribinik
Maristela Arantes Marteleto
Tcnicas para Coleta de Secrees. Braslia: Ministrio da Sade, Departamento de
DST, Aids e Hepatites Virais, 2011.
72 p.: il. (Srie TELELAB).
1. Coleta de secrees. I. Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais (Brasil).
II. Srie TELELAB
Os responsveis pela implantao do TELELAB empenharam
toda sua capacidade profssional para tornar este projeto digno da qua-
lidade tcnica e cientfca e da efcincia que nossa coordenadora geral
sempre imprimiu s realizaes do Departamento de DST, Aids e He-
patites Virais do Ministrio da Sade.
Dra. Lair Guerra de Macedo Rodrigues, exemplo de coragem e
liderana, dedicamos este trabalho.
Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais/Ministrio da Sade Tcnicas para coleta de secrees
Sumrio
APRESENTAO.............................................................................. 7
INTRODUO.................................................................................. 9
O Profssional de Sade e o Paciente....................................................... 11
A Amostra................................................................................................. 12
tipos de amostra e testes de escolha.................................................. 13
materiais para coleta de secrees..................................................... 13
SECREO MASCULINA............................................................... 17
seqncia da coleta no homem......................................................... 19
coleta no homem para exame a fresco.............................................. 20
coleta no homem para diagnstico do gonococo............................ 21
coleta no homem para diagnstico da clamdia............................... 21
SECREO FEMININA................................................................... 23
seqncia da coleta na mulher.......................................................... 25
coleta de secreo uretral feminina................................................... 26
coleta de secreo vaginal.................................................................. 26
coleta de secreo endocervical......................................................... 27
COLETA DE SECREO ANAL, OCULAR E DE OROFARINGE..29
PREPARO DA AMOSTRA............................................................... 33
lminas e esfregao............................................................................ 35
SEMEADURA E ARMAZENAMENTO........................................... 37
meio de Amies.................................................................................... 39
meio de Tayer-Martin modifcado................................................. 39
atmosfera de CO
2
............................................................................... 41
meio de tioglicolato, gar-sangue, gar-MC Conkey
e meio de Stuart................................................................................. 42
TRANSPORTE DE AMOSTRAS..................................................... 43
BIOSSEGURANA.......................................................................... 47
CONSIDERAES FINAIS............................................................. 63
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS................................................ 69
AGRADECIMENTOS....................................................................... 71
Agora voc faz parte do Sistema de Educao a Distncia para pro-
fssionais da sade, envolvidos com o diagnstico laboratorial das Doenas
Sexualmente Transmissveis e Aids - DST/AIDS - TELELAB.
O TELELAB foi criado para levar at voc cursos com informaes
indispensveis para que seu trabalho seja realizado dentro dos padres de
qualidade estabelecidos pelo Departamento de DST, Aids e Hepatites Vi-
rais do Ministrio da Sade.
Assistindo ao programa de vdeo e estudando este manual, voc ter
a oportunidade de verifcar o que pode ser mudado no seu dia-a-dia e o que
pode ser mantido.
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avaliao. Suas informaes so fundamentais
para a melhoria do TELELAB.
Certificado
Para obter o certificado, voc dever acertar no
minmo 80% do ps-teste.
Depois da correo do seu teste pelo Depar-
tamento de DST, Aids e Hepatites Virais, voc
receber o certificado.
Ao fnal deste curso voc ser capaz de:
identificar os procedimentos e tc-
nicas recomendados pelo Depar-
tamento de DST, Aids e Hepatites
Virais para a identificao, a cole-
ta, o preparo, o armazenamento e
o transporte de amostras de secre-
es; e
executar a identificao, a cole-
ta, o preparo, o armazenamento
e o transporte de amostras de se-
crees, obedecendo aos critrios
tcnicos, critrios de controle de
qualidade e cuidados de biossegu-
rana recomendados.
11
Introduo
A necessidade crescente de combater e controlar as Doenas Sexu-
almente Transmissveis (DST) tem estimulado especialistas a desenvolver
estratgias e metodologias capazes de atender, em nvel local, grandes mas-
sas populacionais.
Dentro desse contexto, o laboratrio oferece contribuio indispen-
svel para a agilizao das rotinas de diagnstico.
Alm disso, frente a quadros com variaes de caractersticas clni-
cas e a casos com multietiologia, cada vez mais freqentes, o laboratrio se
apresenta como nica alternativa de diagnstico.
O correto diagnstico laboratorial depende da coleta adequada de
amostras para os testes.
Este manual apresenta, passo a passo, os procedimentos e tcnicas
recomendados pelo Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais do Mi-
nistrio da Sade, para coleta, identifcao, semeadura, armazenamento
e transporte de amostras de secreo uretral, vaginal, endocervical, anal e
ocular. Ao mesmo tempo, alerta voc para os critrios de controle de qua-
lidade e os cuidados de biossegurana indispensveis para o desempenho
seguro de suas tarefas. Para saber mais sobre o diagnstico laboratorial das
DST/aids, faa os outros cursos da srie TELELAB.
Lembre-se:
tudo comea com a coleta adequada das amostras.
O Profissional de Sade e o Paciente
Como receber o paciente e que informaes fornecer?
Receba o paciente com simpatia e cordialidade. A cada etapa, expli-
que os procedimentos a que ele vai ser submetido, de modo a transmitir-
lhe tranqilidade.
12
Em que casos se deve aconselhar o paciente a fazer tambm os testes de Sfilis e
HIV?
Todo paciente atendido nas clnicas de DST/aids deve ser estimula-
do a fazer os testes de Sflis e HIV.
A Amostra
Quais as amostras colhidas no homem para o diagnstico laboratorial da DST?
Em pacientes do sexo masculino, a secreo uretral o material de
escolha para o diagnstico da uretrite gonoccica e da clamdia, alm do
exame a fresco para diagnstico de Trichomonas sp., Gardnerella vaginalis
e Candida sp. Novos testes utilizando a urina como amostra esto sendo
desenvolvidos, porm, ainda no apresentam a efcincia desejada.
Quais as amostras colhidas na mulher para o diagnstico laboratorial das DST?
A secreo endocervical e a uretral so as mais indicadas. A coleta
da secreo vaginal indicada apenas para criana, para mulheres histerec-
tomizadas e para o diagnstico de Trichomonas sp., Gardnerella vaginalis e
Candida sp. A secreo uretral utilizada em casos de uretrite, ou quando,
por indicao e combinao com a coleta endocervical, aumentar a possibili-
dade de um diagnstico conclusivo para Neisseria gonorrhoeae ou Clamdia.
Que outras amostras podem ser utilizadas para o diagnstico da DST?
A secreo ocular, em casos de ofalmia gonoccica ou por clamdia em
recm-nascidos; a secreo anal, em casos suspeitos de infeco gonoccica
anal e a secreo orofarngea em pacientes que apresentam sintomas clnicos.
Qual o teste de escolha para o diagnstico da uretrite gonoccica masculina?
A bacterioscopia pela tcnica de colorao de Gram a mais indi-
cada. Em pacientes masculinos esta tcnica tem sensibilidade em torno de
95% para caracterizao de uma amostra positiva, alm de ser muito rpida
e econmica.
A cultura do gonococo, em homens, est reservada aos casos de sus-
13
peita de resistncia desta bactria aos antimicrobianos. A cultura reco-
mendada tambm quando a bacterioscopia for negativa e permanecer a
suspeita clnica, e para amostras de secreo anal, orofarngea e ocular.
Qual o teste de escolha para o diagnstico da infeco gonoccica na mulher?
A cultura do gonococo o teste de escolha para diagnstico dessa
infeco na mulher.
A bacterioscopia no deve ser utilizada pois apresenta baixa sensibi-
lidade em amostras femininas.
Quais os testes de escolha para o diagnstico das infeces por clamdia?
Tanto para pacientes do sexo masculino quanto feminino o mtodo
Padro Ouro para o diagnstico da clamdia a cultura celular. Entre-
tanto, esse mtodo de difcil execuo e est disponvel em poucos labo-
ratrios do Pas.
O Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais do Ministrio da
Sade recomenda o teste de Imunofuorescncia Direta (IFD) para servi-
os com pequeno nmero de amostras. Para servios com grande rotina
so recomendados os testes imunoenzimticos do tipo ELISA seguidos, no
caso de amostras reagentes, de um teste confrmatrio do tipo Blocking
(reao de bloqueio) ou de IFD.
Para saber mais sobre os testes de clamdia faa o curso Diagnstico
Laboratorial da Clamdia da Srie TELELAB.
Quais os materiais necessrios para fazer a coleta de secrees?
Sala
Pia
Mesa ginecolgica
Foco de luz
Espculo vaginal
14
Swab ou zaragatoa de haste de alumnio com algodo tratado e
no-tratado
Swab ou zaragatoa de haste de plstico ou madeira com algodo
tratado e no-tratado
Metanol
Lminas
Lamnulas
Gaze estril
Soluo salina estril
Meios de cultura
Meios de transporte
Etiqueta para identifcao de amostra
Lpis
Recipiente com boca larga, paredes rgidas e tampa contendo hi-
poclorito de sdio a 2%
Luvas descartveis
Touca, mscara e culos
Que tipo de swab deve ser utilizado para a coleta de secrees?
Depende da fnalidade da coleta.
Para bacterioscopia, exame a fresco e algumas culturas bacteriolgi-
cas de rotina, utilize swab com haste plstica, alumnio ou madeira e algo-
do no tratado.
Para cultura de gonococo, utilize swab com algodo alginatado ou
com carvo. O swab comum de algodo contra-indicado, pois os cidos
graxos presentes no algodo inativam os gonococos, impedindo o seu cres-
cimento em meios de cultura.
15
Para Imunofuorescncia Direta IFD, Ensaio Imunoenzimtico
Elisa ou cultura de clamdia, utilize swab com haste plstica ou de alumnio.
O swab de haste de alumnio tem o dimetro mais adequado para
coleta de secreo uretral.
Jamais utilize swab tratado com carvo na coleta de amostras
para clamdia, pois o carvo deixa resduos que interferem na
qualidade da amostra.
Se voc utilizar swab tratado com carvo na coleta de amostra para a
cultura do gonococo, colha antes a amostra para clamdia.
Figura 1: Swabs diversos
19
Qual a seqncia para coletas de amostras no homem?
Para defnir a seqncia, utilizamos como exemplo um paciente que
teve solicitao de exames para pesquisa dos principais agentes etiolgicos
causadores das DST.
Observe a seqncia:
Secreo Uretral
Exame a Fresco
Bacterioscopia
Mtodo de Gram
Cultura Gonocoo
Clamdia IFD/Elisa
Salina
Essa seqncia deve ser adaptada segundo a solicitao do mdico,
desconsiderando as etapas que incluem exames que no foram solicitados.
Colha primeiro a amostra para clamdia se voc utilizar Swab
com algodo tratado com carvo na coleta de amostra para
cultura de gonococo.
20
Como fazer a coleta da secreo uretral masculina para exame a fresco?
1) Coloque uma gota de salina sobre uma lmina previamente
identifcada;
2) Solicite ao paciente para retrair o prepcio;
3) Limpe a secreo emergente com gaze estril;
4) Certifque-se de que a uretra esteja reta;
5) Introduza o swab cerca de 2 centmetros no canal uretral atraves-
sando a fossa navicular;
6) Gire o swab delicadamente de 8 a 10 vezes para absorver a secreo;
7) Retire o swab, coloque a secreo sobre a salina na lmina e ho-
mogeneze;
8) Cubra com uma lamnula e examine o esfregao sob microscopia
em aumento de 40x.
Lembre-se:
A fossa navicular uma poro da uretra anterior, distante cerca
de 2 cm do meato uretral externo. Devido a sua anatomia, concen-
tra microorganismos viveis para pesquisa sem a contaminao de
agentes externos ou da ao de enzimas contidas na secreo.
Figura 1: Uretra anterior, fossa navicular e meato uretral externo.
21
Qual o procedimento na coleta da secreo uretral masculina para o diagnstico
do gonococo?
3) Introduza o swab alginatado ou com carvo cerca de 2 centme-
tros no canal uretral, atravessando a fossa navicular;
4) Gire o swab delicadamente de 8 a 10 vezes para absorver a secreo;
5) Retire o swab, faa um esfregao fno e homogneo em lmina
identifcada previamente com nome do paciente, e tambm ino-
cule o swab com a amostra em meio de cultura apropriado (por
exemplo o meio Amies).
Qual o procedimento de coleta da secreo uretral masculina para o diagnstico
da clamdia?
3) Introduza o swab, com haste de alumnio, cerca de 4 centmetros
no canal uretral;
4) Gire delicadamente de 8 a 10 vezes para obter o maior nmero de
clulas epiteliais possveis. Lembre-se que a Chlamydia tracho-
matis uma bactria intracelular e o seu diagnstico laboratorial
depende do nmero de clulas contidas na amostra. So necess-
rias pelo menos 50 clulas epiteliais;
5) Faa um esfregao fno e homogneo em lmina previamente
identifcada com nome e/ou nmero do paciente e coloque o
swab em meio de conservao para Elisa.
22
Ateno
A coleta de amostra de secreo uretral para o diagnstico laborato-
rial do gonococo e da clamdia deve ser feita de preferncia pela
manh, antes do paciente urinar. Caso isso no seja possvel, espere
pelo menos trs horas aps a ltima mico.
Assegure-se de que o paciente no esteja sob o efeito de tratamento
com antibitico. A coleta s dever ser realizada 7 dias aps o
trmino do tratamento.
Jamais colete a secreo emergente. Pois a ao das enzimas
presentes inativam ou destrem os microorganismos, impedindo
sua observao ou cultivo.
25
Qual a seqncia para coleta de amostras na mulher?
Para defnio da seqncia, tomamos como exemplo uma paciente
que teve solicitao de exames para a pesquisa dos principais agentes etio-
lgicos causadores das DST.
Observe a seqncia:
Secreo Uretral
Exame a Fresco Salina Secreo Vaginal
Secreo
Endocervical
Clamdia IFD/Elisa
Clamdia IFD/Elisa
Bacterioscopia
Mtodo de Gram
Cultura Gonocoo
Essa seqncia deve ser adaptada segundo a solicitao do mdico,
desconsiderando as etapas que incluem exames que no foram solicitados.
Caso o swab utilizado na coleta da amostra para cultura de
gonococo seja tratado com carvo, colha primeiro a amostra
para os testes de clamdia.
26
Qual o procedimento de coleta da secreo uretral feminina para o diagnstico da
clamdia?
1) Faa a expresso da secreo das glndulas parauretrais pressio-
nando a parece vaginal com o dedo mdio;
2) Introduza o swab cerca de 2 centmetros na uretra;
3) Colete a secreo girando delicadamente o swab de 8 a 10 vezes
Figura 3: Coleta de secreo uretral feminina.
Ateno:
Faa a coleta aps trs horas da ltima mico.
Como fazer a coleta da secreo vaginal para o exame a fresco?
Em mulheres, a secreo do fundo do saco vaginal pode ser utilizada
para o exame a fresco. Este exame permite a pesquisa de Candida sp, Tri-
chomona sp e Gardnerella vaginalis.
1) Coloque uma gota de salina sobre uma lmina limpa, previamen-
te identifcada;
2) Introduza o especulo (no pode conter nenhum tipo de lubrifcante);
3) Colete a amostra do saco vaginal com o auxlio de um swab;
27
4) Retire o swab, coloque a secreo sobre a sallina na lmina e ho-
mogeneze;
5) Cubra com lamnula e examine imediatamente o esfregao sob
microscopia em aumento de 40x.
Em crianas e em mulheres histerectomizadas, a secreo do fundo
do saco vaginal utilizada para exame a fresco, cultura de gonococo e diag-
nstico da clamdia.
Qual o procedimento de coleta da secreo endocervical para o diagnstico do
gonococo?
1) Introduza o espculo;
2) Limpe com gaze estril a secreo do fundo do saco vaginal e a
que recobre o colo do tero;
3) Introduza o swab alginatado ou com carvo cerca de 1 centme-
tro no canal endocervical, girando-o delicadamente de 8 a 10 ve-
zes, para absorver a secreo. Cuidado para no tocar as paredes
vaginais;
4) Retire o swab, sem tocar as paredes vaginais.
Figura 4: Localizao do canal endocervical.
Assegure-se de que a paciente no esteja sob o efeito de
tratamento com antibitico.
28
Neste caso, a coleta s dever ser realizada 7 dias aps o
trmino do tratamento.
No utilize espculo lubrificado. O lubrificante atua sobre o
gonococo, inativando. Se for necessrio, utilize gua morna
para facilitar a introduo do espculo.
Jamais utilize ala bacteriolgica para fazer a coleta, por causa do
risco de traumatismo na endocrvice.
Inocule a amostra em meio de Thayer-Martin ou em meio de
transporte de Amies, imediatamente aps a coleta.
Bacterioscopia pela colorao de Gram no deve ser utilizada para o
diagnstico de infeco gonoccica na mulher. Sua utilidade reserva-
se ao diagnstico de outros agentes, pois essa tcnica apresenta sen-
sibilidade inferior a 60% na mulher.
Qual o procedimento de coleta da amostra endocervical para o diagnstico da cla-
mdia na mulher?
o mesmo procedimento descrito na resposta anterior. Observe
apenas o tipo de swab disponvel. Se voc utilizar swab com carvo para a
coleta da amostra destinada cultura de gonococo, colha a amostra para a
clamdia primeiro. Lembre-se que a sensibilidade do diagnstico laborato-
rial da clamdia aumenta quando se colhe amostra uretral e endocervical.
Aps a coleta, faa um esfregao fno e homogneo para o teste IFD
ou coloque o swab em meio de conservao para Elisa.
Figura 5: Coleta de secreo endocervical.
31
Qual o procedimento de coleta da secreo anal para cultura do gonococo?
1) Introduza o swab alginatado ou com carvo no reto, cerca de 2
centmetros;
2) faa movimentos circulares junto parede retal raspando o ma-
terial das criptas por 30 segundos, para absorver a secreo;
3) repita o procedimento com novo swab, caso o swab toque as fezes.
Quais os procedimentos de coleta da secreo ocular para cultura do gonococo e
diagnstico da clamdia?
1) Limpe a secreo externa ao olho com gaze estril;
2) Afaste a plpebra e limpe a secreo acumulada nos cantos do
olho;
3) Colete material dentro da conjuntiva ocular, com auxlio do
swab.
Jamais colete secreo acumulada no canto do olho.
Figura 6: Coleta de secreo anal.
Figura 7: Coleta de secreo ocular
32
Quais os procedimentos necessrios para a coleta de secreo de orofaringe:
Observao:
A contaminao com saliva pode dificultar o isolamento do agente
infeccioso por causa da microbiota oral.
1- Solicitar ao paciente que abra bem a boca.
2- Usar abaixador de lngua e com o uso de Swab estril colher se-
creo das amigdalas e faringe posterior evitando tocar a lngua
ou a mucosa oral.
3- Procurar colher o material nas reas ruborizadas (hiperemia).
No recomendado colher a secreo purulenta, esta deve ser
removida e colhido o material de mucosa.
4- Coletar apenas o stio infamatrio
5- Colher dois swabs e introduzir em meio Amies.
6- A amostra deve ser encaminhada ao laboratrio para o setor de
bacteriologia.
35
Como preparar e identificar as lminas para bacterioscopia?
1) Identifque corretamente as lminas;
2) Prepare sempre duas lminas para cada teste, sendo uma de reser-
va para o caso de acidente ou resultado insatisfatrio da colorao.
Utilize lminas limpas e desengorduradas.
Sempre que possvel, utilize lminas novas.
Como preparar esfregaos com qualidade?
Voc pode fazer um esfregao fno e homogneo do seguinte modo:
1) Gire o swab delicadamente sobre a superfcie central da lmina.
2) Deixe o esfregao secar em temperatura ambiente.
Figura 8: Preparao de esfregao
para colorao de Gram
No esfregue o swab sobre a lmina, pois isto destri as
estruturas celulares impedindo a diferenciao das estruturas
celulares e bacterianas.
36
Como fixar o esfregao para colorao de Gram?
No mtodo de Gram modifcado, recomendado pelo Departamento
de DST, Aids e Hepatites Virais, o cristal de violeta utilizado j contm f-
xador. Para conhecer melhor esse mtodo, consulte o curso TCNICA DE
COLORAO DE GRAM da Srie TELELAB.
Jamais fixe o esfregao em chama. Tal procedimento destri as
estruturas celulares, devido a rpida desidratao da amostra.
Como preparar a amostra para o teste de Imunofluorescncia Direta IFD para
clamdia?
1) Identifque uma lmina prpria para IFD;
2) Prepare um esfregao fno e homogneo;
3) Deixe secar em temperatura ambiente;
4) Fixe, pingando sobre o esfregao, 3 a 4 gotas de metanol;
5) Deixe evaporar em temperatura ambiente;
6) Embale em papel alumnio;
7) dentifque externamente a amostra.
Figura 9: Procedimento de
embalagem da lmina
Essa amostra pode ser conservada em geladeira por at
72 horas antes do envio para o laboratrio, ou pode ser
congelada a 20C por 6 meses.
39
Como semear e armazenar a amostra para cultura de Neisseria gonorrhoeae utili-
zando o meio de Amies?
1) Assegure-se de que o meio est em condies de uso e tempe-
ratura ambiente, antes do uso;
2) Introduza o swab completamente no meio;
3) Feche bem a tampa do tubo;
4) Deixe em temperatura ambiente at o envio para o laboratrio.
O meio de Amies, utilizado para transportar amostras para cultura
de Neisseria gonorrhoeae, uma mistura de sais balanceados e carvo, que
preservam o gonococo vivel por 8 horas, no mximo. A semeadura em
meio de Tayer-Martin modifcado deve ocorrer dentro deste perodo.
Figura 10: Semeadura no meio de Amies
Como semear e incubar amostras para cultura de Neisseria gonorrhoeae em meio
de Thayer-Martin modificado?
1) Assegure-se de que o meio est em condies adequadas de uso e
temperatura ambiente;
2) Faa no meio uma estria em forma de Z, gire o swab delicada-
mente sobre o meio at completar a estria;
40
3) Reestrie no sentido inverso do Z com uma ala bacteriolgica
estril e resfriada;
4) Coloque as placas em posio de cultura (com o meio para bai-
xo), dentro de uma lata;
5) Coloque, no fundo da lata, um chumao grande de algodo em-
bebido em muita gua para garantir a umidade;
6) Utilize o sistema da vela ou do comprimido eferverscente para
obter uma atmosfera entre 3 e 7% de CO
2
.
7) Feche hermeticamente a lata, vedando-a com fta crepe ou espa-
radrapo;
8) Incube em estufa a 35C entre 24 e 48 horas e envie para o labo-
ratrio.
Figuras 11 e 12: Semeadura em meio de Tayer-Martin.
Thayer-Martin modificado o meio de cultura especfico para o
crescimento e isolamento da Neisseria gonorrhoeae. Compe-se prin-
cipalmente de um meio base para a gonococo, acrescido de
hemoglobina, suplementos vitamnicos e soluo de antibiticos
para impedir o crescimento de contaminantes.
41
Como criar uma atmosfera de CO
2
utilizando o mtodo da vela?
1) Prenda uma vela na parede interna da lata onde foi colocado o
meio. Voc tambm pode prender a vela sobre a tampa de uma
placa de Petri e coloc-la dentro da lata com o meio;
2) Acenda a vela;
3) Tampe bem a lata e vede-a com fta adesiva ou esparadrapo.
Como criar uma atmosfera de CO
2
utilizando o mtodo do comprimido efervescente?
1) Embeba um algodo em gua e coloque-o sobre a tampa de uma
placa de Petri;
2) Coloque sobre o algodo um comprimido efervescente;
3) Coloque a tampa da placa com o algodo e o comprimido dentro
da lata que contm o meio;
4) Tampe bem a lata e vede-a com fta adesiva ou esparadrapo.
Como semear as amostras para isolar outros agentes infecciosos em uretrites, va-
ginites e cervicites?
A Neisseria gonorrhoeae, a Chlamydia trachomatis, o Trichomonas
vaginalis, a Candida sp e a Gardnerella vaginalis so responsveis por mais
de 95% das uretrites, vaginites e cervicites.
Aps a excluso desses agentes como causadores do quadro infec-
cioso diagnosticado, a cultura de outras bactrias pode ser til.
Vrios meios de cultura podem ser utilizados, incluindo o meio de
tioglicolato, gar-sangue e o gar-Mc-Conkey.
Para a semeadura em meio de tioglicolato, proceda da seguinte forma:
1) Introduza o swab no tubo, agitando-o vigorosamente no meio de
cultura;
2) Retire cuidadosamente o swab, pressionando-o contra as paredes
do tubo para tirar o excesso do lquido.
42
Nos meios slidos de gar-sangue e gar-Mc-Conkey, proceda como
na semeadura no meio de Thayer-Martin modificado.
No caso de uretrites, vaginites e cervicites no-gonoccicas, que meio de transpor-
te utilizar?
Utilize o meio de Stuart.
1) Introduza o swab com a amostra completamente no meio;
2) Deixe em temperatura ambiente at o envio ao laboratrio.
O meio de Stuart utilizado para transportar amostras para cultura
de cocos Gram-positivos e bastonetes Gram-negativos, mantendo as bac-
trias viveis por 24 horas (tempo de segurana) at serem semeadas em
meio especfco para crescimento.
Como conservar as placas de Thayer-Martin nos servios de DST/AIDS?
As placas de Tayer-Martin devem ser guardadas em sacos plsticos
bem vedados e conservadas sob refrigerao. Devem ser utilizadas, em m-
dia, at 10 dias aps o seu preparo. Depois desse perodo, a atividade dos
antibiticos comea a diminuir. Alm disso, o meio sofre um processo de
desidratao, tornando-se inadequado para uso.
Como conservar os meios de Amies e Stuart nos servios de DST/AIDS?
Esses meios devem ser conservados no refrigerador no mximo por
1 ms aps a sua preparao. Caso os meios tenham sido adquiridos j
prontos, siga as instrues do fabricante.
45
As amostras para exame a fresco podem ser transportadas?
O exame a fresco deve ser realizado imediatamente no prprio lo-
cal de coleta porque o transporte e a demora alteram a sensibilidade deste
mtodo.
Como transportar as amostras para exame bacterioscpico pela tcnica de Gram?
As lminas para bacterioscopia pela tcnica de Gram devem ser
transportadas em temperatura ambiente.
Certifque-se de que as duas lminas esto corretamente identifca-
das e embaladas em papel alumnio.
Como transportar as amostras para testes de clamdia?
As lminas de IFD para clamdia e os tubos para teste de Elisa, de-
vem ser transportados devidamente identifcados e embalados, em caixa
trmica com gelo.
Como transportar o material colhido para cultura da Neisseria gonorrhoeae?
As amostras conservadas em meio de transporte de Amies devem
ser transportadas devidamente identifcadas, em caixa trmica, tempera-
tura ambiente, devidamente identifcadas.
As placas de Tayer-Martin devem ser enviadas ao laboratrio den-
tro de lata vedada, com tenso de CO
2
e umidade, aps 24 a 48 horas de
incubao, ou seja, aps o crescimento primrio da cultura.
Ateno:
Jamais refrigere a amostra para a cultura de gonococos, pois eles
so inativados sob baixas temperaturas.
49
Para cuidar de sua segurana, da segurana de seus colegas de
trabalho e do meio ambiente, obedea aos procedimentos bsicos
de biossegurana em laboratrios:
Figura 1. Smbolo de risco biolgico
50
Todo cuidado pouco na manipulao de materiais biolgicos, tais
como soro, sangue ou secrees, fluidos orgnicos, tecidos etc. Redo-
bre suas precaues, pois esses materiais so potencialmente infec-
tantes e muitas vezes esto contaminados com agentes etiolgicos
diferentes dos que se esto pesquisando, ou ainda desconhecidos.
Nunca pipete com a boca e jamais cheire placas de cultura.
A inativao do soro em banho-maria a 56C por 30 minutos no
elimina o potencial infectante da amostra.
Lembre-se de que, com a automao, aumentou muito o nmero
de amostras processadas em laboratrio e, conseqentemente, aumentou
tambm o risco de contaminao. Como voc sabe, difcil afrmar que
um profssional se contaminou, de fato, em servio. Isso faz com que as
doenas infecto-contagiosas causadas por acidentes de trabalho no sejam
devidamente notifcadas; em conseqncia, as medidas de segurana en-
volvendo o biorrisco acabam no sendo implementadas.
51
Use sempre equipamento de proteo individual (EPI): avental ou ja-
leco longo de mangas compridas e punho retrtil, luvas descartveis,
culos de proteo, pipetadores manuais ou automticos e, quando
for o caso, protetor facial e mscara de proteo contra agentes
infecciosos ou agentes qumicos.
Os EPI so regulamentados pelo Ministrio do Trabalho e seu uso visa a
minimizar a exposio do tcnico aos riscos e evitar possveis acidentes
nos laboratrios. Note que, s vezes, os profssionais de laboratrio preci-
sam de um tempo para se adaptar ao uso dos equipamentos na sua rotina.
O importante que voc se adapte e incorpore a utilizao dos EPI sua
prtica profssional. O uso indevido dos EPI, ao invs de proteger, poder
ocasionar acidentes.
Figura 2. Ilustrao dos principais Equipamentos de Proteo Individual (EPI)
Obs.:
O ideal no conter bolsos, para
no colocar objetos contaminados,
canetas, etc. pela proximidade com
as mucosas da boca e nariz.
52
Evite a formao e disperso de aerossis.
Aerossis so micropartculas slidas e lquidas com dimenses
aproximadas entre 0,1 e 50 micra que podem, caso contenham
microorganismos, permanecer em suspenso e plenamente viveis
por vrias horas.
A pipetagem, flambagem de alas, abertura de frascos e ampolas,
manipulao de seringas, agulhas, lancetas, lminas e outros asse-
melhados podem gerar e propagar aerossis.
A abertura de frascos, ampolas, tubos e garrafas de cultura requer
cuidados especiais. Envolva a parte a ser aberta com um pedao de gaze.
Utilize um pedao de gaze para cada material, prevenindo assim a conta-
minao cruzada. Descarte-a imediatamente em hipoclorito de sdio a 2 %.
Centrfugas, agitadores e maceradores, quando manipulados sem as
precaues e abertos antes da total parada ou trmino da operao, igual-
mente podem contaminar o ambiente laboratorial.
53
Jamais recoloque capas em agulhas. Esse procedimento uma das
principais causas da contaminao de profissionais de sade por mi-
croorganismos, existentes no sangue e em outros fluidos orgnicos,
como por exemplo, o vrus da hepatite B, hepatite C e o HIV.
Aps a coleta, voc deve descartar esse material diretamente em
recipiente de paredes rgidas com tampa.
Lembre-se:
Cada mililitro de sangue contaminado com o vrus da hepatite B
contm 100.000.000 de partculas virais, que podem permanecer
viveis por at uma semana. Basta uma dessas partculas para conta-
minar a pessoa, no entanto todo profissional de sade
deve ser vacinado contra o vrus da hepatite B.
Figura 3. Ilustrao do descarte de agulha em recipiente apropriado.
54
Reduza ao mximo o manuseio de resduos, em especial os prfuro
cortantes. Descarte o rejeito prfuro cortante diretamente em
recipiente de paredes rgidas, prprios para descarte deste material.
Trata-se de caixas rgidas revestidas internamente com plstico e
devidamente identificada com instrues de descarte (caixa padro-
nizada em cor amarela), que no devem ser preenchidos acima do
limite de 2/3 de sua capacidade e devem ser colocados prximos do
local que sero utilizados.
Esta uma regra bsica para diminuir os riscos de acidente nos labo-
ratrios. fundamental que os materiais perfuro cortantes como agulhas,
seringas, lancetas sejam descartados em recipientes rgidos com tampa e
que estejam identifcados com smbolo e expresso de resduo infectante.
As agulhas no devem ser entortadas, quebradas, recapeadas ou removidas
da seringa aps o uso. Deve-se descontaminar em autoclave 35 min a 125
C e ento encaminhar ao lixo hospitalar. O acondicionamento dos resdu-
os de laboratrio deve seguir a Norma Brasileira (NBR) 9190 da Associa-
o Brasileira de Normas Tcnicas - ABNT, que recomenda sacos brancos
leitosos para os resduos potencialmente infectantes e hospitalares e escu-
ros para o lixo comum.
Os profssionais responsveis pela limpeza e conservao devem ser
bem orientados e usar equipamentos de proteo. Todos os recipientes pa-
ra descarte devem estar identifcados.
Lembre-se de que, pela legislao brasileira, quem gera o resduo o
responsvel pela sua eliminao e controle.
No caso dos materiais reutilizveis, como vidraria e utenslios, de-
posite-os em recipiente contendo o desinfetante prprio, pelo tempo de
contato recomendado e, em seguida, faa a autoclavao. Depois, lave nor-
malmente esses materiais e guarde-os para uso posterior.
55
Identifique e sinalize os principais riscos presentes em seu laborat-
rio. Produtos e reas que oferecem risco devem ser marcados com os
devidos smbolos internacionais em etiquetas auto-adesivas padro.
Veja, a seguir, os principais smbolos associados aos riscos em
laboratrios.
Figura 4: Smbolo de risco biolgico para entrada de laboratrio.
PERIGO BIOLGICO
Entrada permitida somente para pessoas autorizadas
Natureza do risco:
Funcionrio responsvel:
Em caso de emergncia, chame por:
Telefone diurno: Telefone residencial:
56
Figura 5: Principais smbolos internacionais associados aos riscos em laboratrios.
57
Verifique sempre as condies de funcionamento dos equipamentos
de Proteo Coletiva (EPC): extintores de incndio, chuveiros de
segurana, lava-olhos, pia para lavagem de mos, caixa de areia e
cabine de segurana biolgica.
Existem trs tipos de cabines de segurana biolgica de fuxo vertical
disponveis no mercado: as de classe I, classe II e classe III. So recomenda-
das para o uso em laboratrios clnicos as de classe II. As cabines de fuxo
horizontal no protegem o trabalhador. Veja a fgura, na pgina seguinte.
Procedimentos que devem ser observados na cabine de segurana
biolgica:
Descontamine a superfcie interior e aguarde 15 minutos antes de
manipular materiais e depois do uso repita a descontaminao com gaze
estril embebida em lcool 70 %;
Ligue a cabine e a luz ultravioleta 20 minutos antes e deixe tudo liga-
do pelo mesmo tempo ao fnal de sua utilizao;
Use avental de mangas longas, luvas descartveis e mscara;
No efetue movimentos rpidos ou bruscos dentro da cabine e evite
operaes que causem turbulncia;
No trabalhe com portas e janelas abertas e no permita a abertura
de portas ou circulao de pessoas atrs do trabalhador quando este se en-
contrar manipulando amostras na cabine de segurana biolgica.
No use bico de Bunsen, pois pode acarretar danos ao fltro HEPA e
causar desequilbrio do fuxo de ar. Se necessrio, use incinerador eltrico
ou microqueimador automtico; e
Mantenha as grelhas anteriores e posteriores da cabine desobstru-
das. A cabine no um depsito. Evite guardar equipamentos ou quais-
quer outros objetos no seu interior.
58
As cabines de classe I e II so consideradas como barreira de prote-
o parcial e a de classe III uma barreira de proteo total.
Para descontaminao pessoal, de equipamentos e superfcies fixas,
utilize desinfetantes eficientes e adequados padronizados pela CCIH
(Central de Controle de Infeces Hospitalares). Use sempre
produtos registrados no Ministrio da Sade.
No existe um desinfetante nico que atenda a todas as necessida-
des. fundamental conhecer os diversos agentes qumicos e sua compati-
bilidade de uso para evitar custos excessivos e utilizao inadequada.
Para a descontaminao de amostras biolgicas na rotina dos labora-
trios clnicos, recomendamos os compostos liberadores de cloro. O mais co-
mumente utilizado o hipoclorito de sdio a 2 %. Sua forma mais ativa o
cido hipocloroso (HOCI), que formado em solues com pH entre 5 e 8. A
Figura 6: Ilustrao das cabines de segurana biolgica - classes I, II e III.
59
efccia do cloro decresce com o aumento do pH e vice-versa. Cabe lembrar
que a atividade desse cido diminuda na presena de matria orgnica, fato
que deve ser considerado quando aplicado em superfcies contendo sangue e
outros lquidos corpreos. Os hipocloritos tm sua estabilidade dependente de
fatores como concentrao, temperatura, pH, luz, metais e prazo de validade.
Os hipocloritos so corrosivos para metais. Objetos de prata, alum-
nio e at mesmo de ao inoxidvel so atingidos, quando imersos em so-
lues rotineiramente utilizadas em laboratrio. O hipoclorito de sdio
txico e causa irritao na pele e olhos. Se ingerido, provoca corroso das
membranas e mucosas e sua inalao causa irritao severa no trato respira-
trio. Jamais misture os hipocloritos com outras substncias qumicas, tais
como desinfetante, lcool, solues germicidas, solues de amnia, etc.
Aps o tratamento por 24 horas com hipoclorito de sdio a 2%, os
materiais devem ser autoclavados. A autoclavao recomendada tendo
em vista a possibilidade de o hipoclorito no atingir as partes do material
a ser esterilizado. Caso isso no seja possvel, a alternativa o mtodo de
fervura por perodo no inferior a 30 minutos.
Observe, na tabela abaixo, a indicao de alguns agentes qumicos e
seu espectro de ao antimicrobiana.
Eficincia antimicrobiana de alguns agentes qumicos desinfetantes frente
a agentes microbianos.
Bactrias
vrus
lipoflicos
vrus
hidroflicos
micobacterias fungos
Esporros
bacterianos
Etanol + + - + V -
Formaldeido + + + + + +
Glutaraldedo + + + + + +
Comp. Cloro + + + + + +
Fenis + + - + + -
Quaternrios
de amnia
+ + + - + -
Lodforos + + + - + -
(+) Atividade
(-) Ausncia de atividade
(V) Varivel de acordo com o microorganismo
60
Tenha muito cuidado com a manipulao e estocagem de substncias
qumicas. Leia com ateno as informaes contidas nos rtulos.
A estocagem de matria-prima deve ser feita em armrios apropria-
dos, bem ventilados, ao abrigo da luz solar e calor. importante observar a
incompatibilidade entre as diferentes substncias.
Sempre que recomendado pelo fabricante, os agentes qumicos de-
vem ser manipulados em capelas de exausto qumica devidamente insta-
ladas. Ateno: No confunda capela de exausto qumica com cabine de
segurana biolgica.
Veja a seguir os riscos relacionados a cada categoria qumica:
Categoria qumica e riscos relacionados
GRUPO QUMICO RISCO
cidos Corroso
Bases Corroso
Cianetos e Sulfetos Envenenamento
Lquidos inflamveis Incndio
Slido Inflamvel Incndio
Seja sempre consciente da importncia de suas aes na preservao
da biossegurana em seu local de trabalho:
Lave as mos antes e depois de qualquer procedimento laboratorial;
Nunca pipete com a boca;
Jamais cheire placas de cultura ou qualquer material biolgico ou
qumico;
Dentro do laboratrio, no fume, no coma, no beba, no pre-
pare refeies, no aplique cosmticos;
61
Quando estiver usando luvas, no manuseie objetos de uso comum,
como telefones, maanetas de portas e janelas, jornais, revistas; Deve
ser proibido a presena de jornais no ambiente de laboratrio;
Deve-se tomar cuidado com a utilizao de canetas, lpis e mar-
cadores de textos e a contaminao destes objetos com material
biolgico;
No guarde alimentos ou bebidas em geladeiras e congeladores
para armazenagem de material biolgico; e
Vacine-se contra a hepatite B e faa o controle de ttulo de Anti-
Hbs rotineiramente.
Seguindo essas recomendaes, voc vai estar contribuindo para a
diminuio de acidentes.
Caso acontea um acidente de trabalho em seu laboratrio, notifique
imediatamente a sua chefia e certifique-se de que o mesmo tenha
sido formalmente notificado
62
Consideraes Finais
Muitas das atividades aqui descritas j fazem parte do seu cotidia-
no. Faa uma refexo sobre o que acabou de ler e verifque o que pode
ser mantido, modifcado e incorporado a seu trabalho e ao seu labora-
trio para que a sua prtica profssional se desenvolva de acordo com os
procedimentos tcnicos e cuidados de biossegurana recomendados pelo
Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais do Ministrio da Sade. As
questes colocadas a seguir facilitaro essa refexo.
63
Condies gerais do laboratrio
As reas de circulao esto desobstrudas?
Qual a situao geral quanto ao aspecto de limpeza?
Qual o estado de conservao e manuteno de pisos, escadas,
paredes e tetos?
O local de trabalho est adequado para atividades envolvendo o
risco biolgico?
As bancadas e demais mobilirios do laboratrio esto em condi-
es de uso?
Existem bancadas apropriadas para trabalhos com solventes e
demais substncias qumicas corrosivas?
Existe pia diferenciada para lavagem das mos no laboratrio?
Existem mecanismos de conteno que previnam a entrada de
insetos e roedores?
Existem programas de manuteno preventiva de equipamentos?
Estocagem
Os produtos armazenados e a rea de estocagem esto organiza-
dos com os devidos cuidados de segurana?
Existe o cuidado de se estocar materiais e/ou substncia incom-
patveis separadamente?
Local de higiene pessoal e de alimentao
O local mantido limpo e em condies de higiene?
Existe gua potvel disponvel?
Existem sabo e toalha em condies de uso?
Existe local para troca de roupa e guarda de objetos pessoais?
Existe rea para alimentao separada da rea de laboratrio?
64
Existe adequada organizao para coleta de lixo e demais rejeitos
(no-infecciosos)?
Refrigerao e Ventilao
A temperatura de trabalho est entre 20 e 260C?
As janelas esto protegidas contra o excesso de luz solar?
Existe ventilao adequada, especialmente nas salas com cabines
de fuxo laminar?
Iluminao
A iluminao geral adequada?
Existe iluminao dirigida nas bancadas de trabalho?
Servios
O laboratrio tem sufciente abastecimento de gua, energia el-
trica e gs?
Existe adequada manuteno de fusveis, lmpadas e cabos eltricos?
A limpeza e higienizao das caixas dgua so realizadas com
periodicidade recomendada?
Segurana geral
O laboratrio devidamente fechado e seguro quando no est
ocupado?
As portas e janelas so mantidas devidamente fechadas?
Os materiais txicos e equipamentos de risco so estocados em
rea segura?
Preveno de incndio
Existe sistema de alarme?
65
As passagens pelas portas de emergncia esto desobstrudas?
O sistema de deteco de incndio est em bom funcionamento
e regularmente testado?
Existe sinalizao de emergncia?
Existem extintores de incndio para os diversos tipos de mate-
riais e em quantidade sufciente?
Os extintores esto dentro do prazo de validade?
Existe sinal de no fumar na rea de laboratrio?
A equipe est treinada em combate a incndio?
Estocagem de lquidos inflamveis
O local est separado do prdio principal?
Existe ventilao sufciente para retirar vapores?
O local est devidamente sinalizado?
Existem lmpadas seladas para proteo contra ignio nos vapores?
Existe advertncia de no fumar?
Risco com eletricidade
As instalaes esto de acordo com os padres estabelecidos pela
ABNT?
Existe fo de terra? Os equipamentos esto devidamente aterrados?
Os equipamentos com potencial de risco de desligamento esto
devidamente ligados a um circuito de emergncia para os casos
de queda ou interrupo de energia?
Os cabos de conexo aos diversos equipamentos esto em perfei-
to estado de manuteno?
Cada equipamento est ligado em uma tomada; evita-se o uso de
benjamim?
66
Todas as tomadas tm sua voltagem identifcada?
Voc sabe onde fca o quadro-geral de fora da sua unidade?
Gases e lquidos comprimidos
Os diversos tipos de gases esto devidamente identifcados?
Os cilindros possuem vlvulas de segurana?
Existe advertncia de no-utilizao de leo nas vlvulas?
Os cilindros esto devidamente seguros contra quedas?
Existe ventilao sufciente para evitar a formao de bolses de
gases e exploses?
Proteo pessoal
Existem em quantidade sufciente:
Lava-olhos?
Chuveiros de emergncia?
Protees contra radiaes, incluindo os dozmetros?
Mscara contra partculas?
Luvas descartveis?
Pipetadores manuais e/ou automticos?
culos de proteo e outros?
Segurana e sade ocupacional
Existe servio de sade ocupacional?
Existe caixa com materiais para primeiros-socorros?
Existem profssionais treinados em primeiros-socorros?
Existem informaes sobre como agir em caso de emergncia,
tais como: telefone de hospitais, pronto-socorros e bombeiros?
67
Existe um programa de vacinao atualizado?
Existe sinalizao educativa para prevenir o risco?
Equipamento de laboratrio
Os equipamentos esto validados e certifcados quanto a seu uso?
Existe procedimento de desinfeco de equipamentos antes de
envi-los manuteno?
As cabines de segurana biolgica e qumica so regularmente
testadas?
As autoclaves esto validadas?
As centrfugas, rotores e frascos tm seus tempos de utilizao
devidamente anotados?
Vidrarias quebradas e trincadas so descartadas?
Existem recipientes adequados para descartar frascos quebrados
e material perfurocortante?
As capelas de exausto para manipulao esto devidamente si-
nalizadas?
Suas balanas esto certifcadas pelo Inmetro?
Seus congeladores, geladeira, fornos, estufas ou equipamentos termo-
regulavis possuem sinais de controle e registro de temperatura?
Material infeccioso, qumico e radioativo
Os materiais biolgicos so recebidos em condies de segurana?
Utilizam-se luvas descartveis, quando se est manipulando ma-
terial biolgico?
As bancadas so desinfetadas com a devida freqncia?
Existe protocolo de descarte de material contaminado?
68
Os desinfetantes so apropriados e devidamente validados?
As substncias esto devidamente etiquetadas?
Existe cartaz com os riscos e categorias toxicolgicas das diversas
substncias?
O estoque de radioistopos devidamente controlado?
Existe procedimento de descarte de substncias qumicas e ra-
dioistopos?
Existem procedimentos que visam a evitar contato entre subs-
tncias qumicas incompatveis?
Utilize este manual, junto com o vdeo, como fonte permanente
de consulta. Mantenha este manual sempre ao seu alcance e faa
dele um instrumento a mais de trabalho.
Voc tem comunicao direta e gratuita com:
TELELAB - Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais
Telefone gratuito: 0800 - 61 2436
e-mail: telelab@aids.gov.br
69
Referncias Bibliogrficas
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VALLE, S., Regulamentao da biossegurana em biotecnologia, Edio
Curso de Biossegurana da FIOCRUZ, Rio de Janeiro, 80 p., 1996.
71
Agradecimentos
Nlia Maria Medeiros de Souza da Clnia Me e Filha;
Consultor da Maio Propaganda Maurcio Rolo Filho;
Centro de Sade n 8 de Braslia;
Instituto de Sade do Distrito Federal.
Agradecimentos especiais aos pacientes que permitiram as filma-
gens, em demonstrao exemplar de cidadania.
Projeto Grfco, diagramao, arte-fnalizao e capa:
Lcia Helena Saldanha Gomes - Departamento de DST,
Aids e Hepatites Virais

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