FUNCIONES INDEPENDIENTES DE PROTENA VIRAL NUCLEICO

CIDO EN EL CRECIMIENTO DE BACTERIFAGO *

By A.D. Hershey y Martha Chase
(Desde el Departamento de Gentica de la Institucin Carnegie de Washington, Cold Sprig
Harbor, Long Island)
(Recibido para su publicacin el 9 de abril de 1952)

El trabajo de Doermaml (1948), Doermann y Dissosway (1949), y Anderson y Doermann (1952) ha
demostrado que los bacterifagos T2, T3, y Multiplican T4 en la clula bacteriana en una forma no
infecciosa. Lo mismo es cierto de los del fago transportado por ciertas bacterias lisognicas (Lwoff
y Gutmann, 1950). Poco ms se sabe acerca de la fase vegetativa de estos virus. Los experimentos
reportados en este trabajo muestran que uno de los primeros pasos en el crecimiento de T2 es la
liberacin de su capa de protena del cido nucleico de la partcula de virus, despus de lo cual la
mayor parte de la protena que contiene azufre no tiene an ms la funcin.
Materiales y Mtodos - fagos. T2 significa en este trabajo la variedad llamada T2H (Hershey,
1945); T2h significa uno de los mutantes de espectro de hospedadores de T2; medios UV-fago
irradia con luz ultravioleta de una lmpara germicida (General Electric Co.) a una supervivencia
fraccional de 10
-5
.
Bacterias sensibles significa una cepa (H) de Escherichia colisensible a T2 y su h mutante; bacterias
resistentes a B / 2 significa una cepa resistente a T2, pero sensible a su h mutante; bacterias
resistentes B/2h significa una cepa resistente a ambos. Estas bacterias no adsorber los fagos en los
que son resistentes.
"Caldo de sal de los pobres 'contiene por litro 10 gr. Bacto-peptona, 1 gr. Glucosa y 1 gr. NaC1.
"Caldo" contiene, adems, 3 gr. extracto bacto-beef y 4 gr. NaCl.
Medio Glicerol-lactato contiene por litro 70 mm lactato de sodio, 4 gr .glicerol, 5 gr. NaC1, 2 gr.
KCI, 1 gr. NH4Cl, 1 mm MgC12, 0,1 mm CaC12, 0,01 gr. gelatina, 10 mgr. P (como ortofosfato), y
10 mg. S (como MgSO4), a pH 7,0.
Medio de adsorcin contiene por litro 4 gr. NaC1, 5 gr. KSO4, 1.5 gr. KH2PO4, 3.0 gm.Na2HPO4,
1 mM MgSO4, 0,1 mm CaCl2 y 0,01 gr. gelatina, a pH 7,0.
Tampn veronal contiene 1 gr por litro. Diethylbarbiturate sodio, 3 mm MgS04, 1 de gr. gelatina, a
pH 8,0.
El HCN se refiere el presente trabajo consiste en una solucin de cianuro de sodio molar
neutralizado cuando sea necesario con cido fosfrico.
* Esta investigacin fue financiada en parte por una beca de investigacin de la National Instituto
Microbiolgico de los Institutos Nacionales de Salud, Servicio de Salud Pblica.
Los istopos radiactivos han sido facilitadas por el Laboratorio Nacional de Oak Ridge en la
asignacin de la Divisin de Istopos, Estados Unidos Comisin de Energa Atmica.
La adsorcin de istopos a las bacterias se mide generalmente mediante la mezcla de la muestra en
medio de adsorcin con bacterias de 18 cultivos de caldo horas previamente calentadas a 70 C.
durante 10 minutos y se lavaron con medio de adsorcin. Las mezclas fueron se calent durante 5
minutos a 37 C, se diluy con agua, y se centrifug. Los ensayos se de hecho, tanto los sedimentos
y fracciones de sobrenadante.
La precipitacin de istopo con antisuero se midi mediante la mezcla de la muestra en 0,5 por
ciento de solucin salina con aproximadamente 1011 por ml.de fago no radiactivo y ligeramente
ms de la menor cantidad de suero antiphage (dilucin final 1:160) que causar precipitacin visible.
La mezcla se centrifug despus de 2 horas a 37 C. Las pruebas con DNasa (desoxirribonucleasa)
fueron realizados por muestras del calentamiento diluido en tampn veronal durante 15 minutos a
37 C.con 0,1 trapo. por ml. del cristalino enzima (Worthington Laboratorio de Bioqumica).
Istopo soluble en cido se midi despus de la muestra refrigerada haba sido precipitada con
cido tricloroactico al 5 por ciento en presencia de 1 mg. / ml, albmina de suero, y se centrifug.
En todos los fraccionamientos que implican la centrifugacin, los sedimentos no se lavaron, y
contena aproximadamente 5 por ciento del sobrenadante. Ambas fracciones se ensayaron. La
radiactividad se midi por medio de un extremo-ventana contador Geiger, utilizando muestras secas
lo suficientemente pequeas para evitar prdidas por el ensimismamiento. Por me-absolutos
mensiones, soluciones de referencia de P obtenidos de la Oficina Nacional de Normalizacin, as
como un estndar simulada permanente, se utilizaron. Para las mediciones absolutas de S
s5
nos
basamos en los ensayos (4-20 por ciento) proporcionados por el proveedor del istopo (Laboratorio
Nacional de Oak Ridge).
Medio Glicerol-lactato se eligi para permitir el crecimiento de las bacterias sin un-cambios de pH
deseables a bajas concentraciones de fsforo y de azufre, y probadas til tambin para ciertos
experimentos descritos en este documento.Cultivos de 18 horas de sensibilidad bacterias que crecen
en este medio contienen aproximadamente 2 109 clulas por ml., que crecen exponencialmente y
sin retraso o cambio en la dispersin de la luz por celular cuando se subcultivan en el mismo medio
de grandes o pequeos cabezas de serie. El tiempo de generacin es de 1,5 horas a 37 C. Las
clulas son ms pequeos que las cultivadas en caldo.T2 muestra un perodo de latencia de 22 a 25
minutos en este medio. El rendimiento fago obtenido por lisis con cianuro y UV-fago (descrito en el
contexto) es uno por bacteria a los 15 minutos y 16 por bacteria en 25 minutos. El tamao de la
rfaga final en culturas diluidas es de 30 a 40 por bacteria, lleg a los 50 minutos. En 2 10
8

clulas por ml., la cultura lisa lentamente, y produce 140 fagos por bacteria. El crecimiento tanto de
bacterias y fagos en este medio es tan reproducibles como que en caldo.
Para la preparacin de fago radiactivo, P
32
de actividad especfica de 0,5 mc. / Mg, o S
35
de la
actividad especfica 8,0 mc. / Mg, se incorpor en el medio de glicerol-lactato, en el que se permite
la proliferacin bacteriana al menos 4 horas antes de la siembra con el fago. Despus de la infeccin
con el fago, el cultivo se aire durante la noche, y el radiactivo fago se aisl mediante tres ciclos de
alternativa lento (2,000 G) y rpido (12.000 G) centrifugacin en medio de adsorcin. Las
suspensiones se almacenan a una concentracin no superior a 4 i.tc. / ml.
Preparaciones de este tipo contienen 1,0 a 3,0 10
-12
ug. S y 2,5 a 3,5 10
-11
ug. P por partcula de
fago viable. Preparaciones ocasionales que contienen cantidades excesivas de azufre se puede
mejorar la absorcin de bacterias muertas por calor, que no se adsorben el fago. La pureza
radioqumica de las preparaciones es algo incierto, poseer la posible presencia de partculas de fago
inactivos y membranas fagos vacas.
La presencia en nuestras preparaciones de azufre (alrededor de 20 por ciento) que se precipita por
antiphage suero (Tabla I) y, o bien adsorbido por las bacterias resistentes a los fagos, o no adsorbido
por bacterias sensibles a los fagos (Tabla VII), indica contaminacin por el material de la
membrana.Los contaminantes de origen bacteriano son probablemente insignificante para
propsitos actuales, a juzgar por los datos que figuran en la Tabla I. Para la prueba de que nuestro
principales hallazgos reflejan propiedades genuinas de partculas de fagos viables, contamos con
algunos experimentos con fagos inactivados citados al final de este documento.

La Morfologa Qumica de Partides fagos reposo -. Anderson (1949) encontr que el bacterifago
T2 podra ser inactivado mediante la suspensin de las partculas en altas concentraciones de
cloruro de sodio, y rpidamente diluyendo la suspensin con agua. Los fagos inactivados era visible
en micrografas electrnicas en forma de renacuajo "fantasmas". Dado que ninguna inactivacin se
produjo cuando la dilucin fu lenta, atribuy la inactivacin de choque osmtico, y dedujo que las
partculas posea una membrana osmtica.Herriott (1951) encontr que el choque osmtico liberado
en la solucin de ADN (cido nucleico desoxypentose) del fago partculas, y que los fantasmas
pueden adsorber a las bacterias y lisar ellos. Seal que se trataba de un comienzo hacia la
identificacin de las funciones virales con sustancias virales.

Hemos plasmolyzed T2 marcado isotpicamente mediante la suspensin del fago (10
11
por ml.) En
cloruro de sodio 3 M durante 5 minutos a temperatura ambiente, y rpidamente vertiendo en la
suspensin de 40 volmenes de agua destilada.Los plas- fago molyzed, que no contenga ms de un
2 por ciento de los sobrevivientes, era entonces un- alyzed para el fsforo y el azufre en las varias
maneras que se muestran en la Tabla I. La resultados confirman y extienden los resultados
anteriores de la siguiente manera:
1. Plasmlisis separa fago T2 en fantasmas que contienen casi toda la azufre y una solucin que
contiene casi todo el ADN de las partculas intactas.
2. Los fantasmas contienen los principales antgenos de la partcula del fago detectar- capaz por
nuestro antisuero.El ADN se libera en forma de cido libre, o posiblemente vinculado que, al
parecer, las sustancias no antignicos sin azufre.
3. Los fantasmas se adsorben especficamente a las bacterias susceptibles fago-; la ADN no lo es.
4. Los fantasmas representan capas de protenas que rodean el ADN de la intacta partculas,
reaccionan con antisuero, proteger el ADN de DNasa (desoxyribo- nucleasa), y llevar el rgano
de unin a las bacterias.
5. Los efectos observados se deben a choque osmtico, porque fago suspendido en sal y diluida
lentamente no se inactiva, y su ADN no est expuesta a DNasa.
Sensibilizacin del ADN del fago a la ADNasa por adsorcin de bacterias
P
32
S
35
P
32
S
35
soluble en acido - - 1 -
soluble en acido despues del tratamiento con Dnasa 1 1 80 1
adsorbido a las bacterias sensibles 85 90 2 90
precipitada por antifago 90 99 5 97
porcentaje de isotopos
Total del fago marcado con Plasmolysed fago marcado con
TABLA I
Composicin de los fantasmas y la solucin de Plasmolysed Fago

Fago adsorbido a las bacterias durante 5 minutos a 37 C. en medio de adsorcin, seguido de lavar.
Las bacterias calentaron durante 10 minutos a 800C.en medio de adsorcin (antes de la infeccin) o
en tampn veronal (despus de la infeccin). Fago no adsorbido calienta en tampn veronal, se trat
con DNasa, y se precipit con cido tricloroactico. Todas las muestras fraccionadas mediante la
centrifugacin de 10 minutos a 1.300 G. Sensibilizacin del ADN del fago a la ADNasa por
adsorcin de bacterias. La estructura de la partcula del fago reposo descrito anteriormente sugiere a
la vez la posibilidad que la multiplicacin del virus es precedida por la alteracin o eliminacin de
la capas protectoras de las partculas. Se podra esperar que este cambio manifestarse como una
sensibilizacin del fago ADN de DNasa.Los experimentos descritos
En la Tabla II muestran que esto ocurre.Los resultados se pueden resumir de la siguiente manera:
1. El DNA del fago se convierte en gran medida sensible a ADNasa despus de la adsorcin a
bacterias muertas por calor.
2. Lo mismo es cierto del ADN de fago adsorbido a bacterias y, a continuacin, calentado a 80 C.
durante 10 minutos, a cuya temperatura es des absorbida fago no sensibilizado a DNasa.
3. El ADN de fago adsorbido a las bacterias sin calefaccin es resistente a la DNasa,
presumiblemente debido a que est protegido por las estructuras celulares impermeables a la
linea de enzima.
Graham y colaboradores (comunicacin personal) fueron los primeros en descubrir la
sensibilizacin de ADN del fago a DNasa por adsorcin a-muertos por calor bacterias.
Despues de Dnase No Dnase
Las bacterias vivas S
35
2 1
Las bacterias vivas P
32
8 7
Las bacterias calentadas antes de la infeccion S
35
15 11
Las bacterias calentadas antes de la infeccion P
32
76 13
Las bacterias calentadas despues de la infeccion S
35
12 14
Las bacterias calentadas despues de la infeccion P
32
66 23
P
32
5
P
32
13
P
32
81
P
32
88
TABLA II
Sensibilizacin de los fagos de ADN para DNasa por adsorcin de bacterias
el fago absorbido a
Fago etiquetado
con
Isitopo no cedimentable (porcentaje)
Climatizada fago absorbida
El ADN en las clulas infectadas tambin se pone a disposicin de DNasa alternativo congelacin y
descongelacin (seguido de la fijacin de formaldehdo para inactivar Cellular enzimas), y en cierta
medida por la fijacin de formaldehdo solo, como ilustrado por el siguiente experimento.
Las bacterias se cultivaron en caldo a 5 10 clulas por ml., Se centrifugaron, se resuspendieron en
medio de adsorcin, y se infectaron con aproximadamente dos P = fago marcado por bacteria.
Despus de 5 minutos para la adsorcin, la suspensin se diluy con agua que contiene por 1,0
litros MXS MgSO4, 0,1 m CaCl y 10 de trapo.gelatina, y centrifugar. Las clulas se resuspendieron
en el fluido mencionada en ltimo lugar a una concentracin de 5 x 108 por ml.
Esta suspensin se congel a -15 C.y descongelado con un mnimo de calentamiento, tres veces
seguidas. Inmediatamente despus de la tercera descongelacin, las clulas se fijaron por la adicin
de 0,5 por ciento(V / v) de formalina (35 por ciento HCHO).Despus de 30 minutos a temperatura
ambiente, la suspensin se dializ libre de formaldehdo y centrifugado a 2200 g durante 15
minutos.Las muestras de P-etiquetados fago, fija congelada thawedl, y se dializa, y de las clulas
infectadas fijado slo y se dializ, se llevaron a lo largo de como controles.
El anlisis de estos materiales, dada en la Tabla III, que muestra el efecto de congelacin y
descongelacin es hacer que el ADN intracelular lbil a DNasa, sin, sin embargo, que causa gran
parte de ella a lixiviarse de las ceils.Congelacin y descongelacin y la fijacin de formaldehdo
tienen un efecto insignificante en adsorbido fago, y el formaldehdo fijacin, tiene slo un efecto
leve sobre las clulas infectadas.
Tanto la sensibilizacin de la intracelular p3-a DNasa, y su falta de lixiviacin fuera de las clulas,
son caractersticas constantes de los experimentos de este tipo, con independencia de lisis visible.
En el experimento se acaba de describir, la suspensin congelada se aclar durante el perodo de
dilisis. Microscopa de contraste de fases mostr que las celulas consisti en gran parte de las
membranas vacas, muchos aparentemente roto. En otro experimento, las muestras de bacterias
infectadas de un cultivo en caldo de sal de los pobres fueron congelados y descongelados en varias
ocasiones varias veces durante el perodo de latencia de crecimiento de fago, se fijaron con
formaldehdo, y luego se lav en la centrfuga.
Compensacin y lisis microscpico ocurrieron solamente en suspensiones congeladas durante el
segunda mitad del perodo de latencia, y ocurri durante el primer o segundo deshielo. En este caso
las clulas lisadas consistan enteramente de las membranas celulares intactas, aparece vaco,
excepto por algunos pequeos cuerpos refringentes, ms caractersticos aparentemente unido a las
paredes de las clulas.El comportamiento de p32 intracelular hacia DNasa, en cualquiera de las
clulas lisadas o no lisadas, no fue significativamente diferente de que se muestra en la Tabla III, y
el contenido de PA fue slo ligeramente inferior despus de lisis. El fago liberado durante la
congelacin y descongelacin tambin fue filtrado este experimento. La lisis se produjo sin la
liberacin apreciable de fago en las suspensiones congeladas hasta e incluyendo los 16 minutos, y el
20 min- muestra ute produjo slo el cinco por bacteria.Otra muestra de la cultura formalinizados a
los 30 minutos, y se centrifug sin congelacin, contenida66 por ciento de la PA en forma no
sedimentable.El rendimiento de fago extracelular a los 30 minutos fue 108 por bacteria, y el
material sedimentado consista gran parte de los desechos sin forma, pero tambin muchos
contenida celular aparentemente intacta membranas.
TABLA III
Sensibilizacin de los fagos Intracdlular de DNasa por congelacin, descongelacin, y Fijacin con
formaldehdo

Las cifras expresan por ciento de P
32
en el fago original, o su fraccin adsorbida.
Llamamos a las siguientes conclusiones a partir de los experimentos en los que las clulas
infectados con PS! fago marcado se someten a congelacin y descongelacin.
1.El DNA del fago se vuelve sensible a ADNasa despus de la adsorcin de bacterias en tampn
bajo condiciones en las que se produce al proceso de crecimiento conocida (Benzer, 1952;
Dulbecco, 1952).
fago no absorbido
congelado
descongelado, fijo
clulas infectadas
congelados,
descongelados, se
fijaron
celulas solo
infectadas
- 71 86
- 0 0.5
- 59 28
- 29 14
1 0.8 0.4
11 21 5.5
TABLA III
Sensibilizacin de Intracdlular Fago a DNasa por congelacin, descongelacin, y Fijacin con
formaldehido
total P
32
soluble en acido
acido soluble despues Dnase
total P
32
soluble en acido
acido soluble despues Dnase
fraccion de sedimentos de baja velocidad
fraccion sobrenadante de baja velocidad
2.La membrana celular se puede hacer permeable al DNasa en condiciones que no permitir el
escape de cualquiera de los P = intracelular o la mayor parte de la contenido de la celda.
3.Incluso si las clulas se lisan como resultado de la congelacin y descongelacin, lo que permite
escapar de otros constituyentes celulares, la mayor parte de la p3 derivado de fago permanece en el
interior las membranas de las clulas, al igual que la progenie del fago maduro.
4.El p3 intracelular derivado de fago se libera en gran parte durante espon- lisis espontnea
acompaada de la liberacin del fago Interpretamos estos hechos en el sentido de que el ADN
intracelular derivado del fago no es ms que el ADN en solucin, sino que es parte de una
estructura organizada en todo momento durante el perodo de latencia.
Liberacin de ADN a partir de partculas de fago por adsorcin bacteriana Fragmenttos. La
sensibilizacin de ADN del fago a despolimerasa especfica por adsorcin a las bacterias podra
significar que la adsorcin es seguido por la expulsin de el ADN del fago a partir de su capa
protectora. El siguiente experimento muestra que este es, de hecho, lo que sucede cuando el fago se
une a bacterias fragmentada las clulas.
TABLA IV
Liberacin de ADN de fagos adsorbidos en los restos de bacterias

S 35 - y la etiqueta P-T2 se mezclaron con muestras idnticas de los restos de bacterias en la
adsorcin medio y se calent durante 30 minutos a 37 C. Despus las mezclas se centrifugaron
S
35
P
32
16 22
87 55
0 2
2 29
5 5
13 45
0.8 0.5
0.8 39
TABLA IV
Liberacion de ADN de fago absorbido a los residuosbacterianos
fago etiquetado con
isotopo soluble en acido
fraccion de sedimentos
sobrevivir fago
Isotopo total
soluble en acido despues de Dnase
soluble en acido despues de Dnase
fraccion sobrenadante
sobrevivir fago
Isotopo total
isotopo soluble en acido
durante 15 minutos a 2200 g, y las fracciones de sedimento y sobrenadante se analizaron por
separado. Los resultados AX expresaron como tanto por ciento de fago de entrada o de istopos.
Los restos de bacterias se prepar por las clulas que infectan en el medio de adsorcin con cuatro
partculas de T2 por bacteria, y la transferencia de las clulas a la sal de los pobres caldo a 37 C.
El cultivo se aire durante 60 minutos, se aadi r/50 HCN, y la incubacin continu durante 30
minutos ms.En este momento el rendimiento de ex-fago intracelular fue de 400 partculas por
bacteria, que se mantuvo sin adsorber debido a la baja concentracin de electrolitos. Los escombros
de la lisada las clulas se lavaron por centrifugacin a 1700 g, y se resuspendieron en adsorcin
medio a una concentracin equivalente a 3 X 10 clulas lisadas por ml. Consista en gran parte de
las membranas celulares colapsadas y fragmentada. La adsorcin de la radio-fago activa a este
material se describe en la Tabla IV. Los siguientes hechos debe tenerse en cuenta.
1. La fraccin no adsorbida contena slo el 5 por ciento del fago original, partculas en forma
infecciosa, y slo el 13 por ciento del total de azufre.(Mucho de este azufre debe ser el material
que no es adsorbible a bacterias enteras).
2. Alrededor del 80 por ciento del fago fue inactivada. La mayor parte del azufre de los este fago,
as como la mayora de los fagos sobrevivir, se encontr en el sedimento fraccin.
3. La fraccin sobrenadante contena 40 por ciento del total de fagos DQA (En una forma lbil
para ADNasa), adems del ADN de los sobrevivientes no adsorbido fagos. El ADN lbil
ascendi a aproximadamente la mitad de, el ADN de la inactivado partculas de fago, cuya
azufre sedimentado con la restos de bacterias.
4. La mayor parte del ADN sedimentable podra explicarse ya sea como superviviente fago, o
como ADN lbiles a la DNasa, este ltimo que asciende a aproximadamente la mitad del ADN
de las partculas inactivadas.
Experimentos de este tipo no son satisfactorios en un aspecto: no se puede decir si el ADN liberado
representa todo el ADN de algunos de las inactivadas partculas, o slo parte de ella.
Se obtuvieron resultados similares cuando las bacterias (cepa B) se zadas por grandes cantidades de
muertos por UV fago T2 o T4 y despus se prueba con la etiqueta P-T2 y T4.El principal punto de
inters en este experimento es que los restos de bacterias saturado con T2 muertos por UV adsorbe
T4 mejor que T2, y los residuos saturado con adsorbe T4 T2 mejor que T4.Al igual que en el
experimento anterior, algunos del fago adsorbido no se inactiv y algunos de los ADN de la inac-
fago vada no fue liberado de los escombros.
Estos experimentos muestran que algunos de los receptores de las clulas para T2 son diferentes de
algunos de los receptores de las clulas para T4, y que fago inherentes a las especficos receptores
especficos se inactiva por el mismo mecanismo que la fijacin de fago a receptores no
seleccionados. Este mecanismo es, evidentemente, uno activo, y no simplemente el bloqueo de los
sitios de unin a las bacterias.
La eliminacin de las capas de fagos de Bavteria Infected -. Anderson (1951), fue obtenido
micrografa electrnica s lo que indica que el fago T2 se une a las bacterias por la cola. Si se
conserva este accesorio precaria durante el progreso de la infeccin, y si las conclusiones anteriores
son correctas, debera ser una simple cuestin de romper las membranas de fagos vacos de los
infectados bacterias, dejando el ADN del fago dentro de las clulas.
Los siguientes experimentos muestran que este se lleva a cabo fcilmente por una fuerte las fuerzas
de cizallamiento aplicadas a las suspensiones de clulas infectadas, y, adems, que en- las clulas
infectadas de la que ha sido 80 por ciento del azufre del virus parental eliminado permanezca capaz
de producir progenie de fagos.
Bacterias Hermanos cultivadas fueron infectadas con S-3s o P3 * fago marcado en adsorcin medio,
el material no adsorbido se elimin por centrifugacin, y las clulas se resuspendieron en agua que
contiene por litro 1 m sobre sulfato de magnesio,, 0.1 rn de CaCl, y 0,1 gr. gelatina. Esta suspensin
se centrifug en un mezclador warning (tamao semimicro) a 10.000 R.P.M. La suspensin se
enfri brevemente en agua con hielo al final de cada perodo de 60 segundos en funcionamiento.
Las muestras se retiraron a intervalos, tituladas (a travs de suero antiphage) para medir el nmero
de bacterias capaces de fago rendimiento, y se centrifugaron para medir la proporcin de istopo
liberado de las clulas.
Los resultados de un experimento con cada istopo se muestran en la figura.1. La datos para S
como y la supervivencia de las bacterias infectadas proceden de la misma experimento, en el que la
relacin de fago aadido a las bacterias era 0,28, y las concentraciones de las bacterias eran 2,5 X
10
8
por mh infectados, y 9,7 x 10
8
por ml. total, en valoracin directa. El experimento con el fago
P
32
-marcado era muy similar.
En relacin con estos resultados, se debe recordar que Anderson (1949) encontr que la adsorcin
del fago a la bacteria podra evitarse por la rpida agitacin de la suspensin.

Figura 1. La eliminacin de $ A5 y 1 a partir de bacterias infectadas con el fago radiactivo, y la
supervivencia de las bacterias infectadas, durante la agitacin en un mezclador Waring.
Con relaciones ms altas de infeccin, cantidades considerables de azufre eluyen fagos a partir de
las clulas de forma espontnea en las condiciones de estos experimentos, aunque la elucin de P y
la supervivencia de las clulas infectadas no se ven afectados por mltiples complicidad de la
infeccin (Tabla V). Esto demuestra que hay una accin cooperativa entre las partculas de fago en
la produccin de las alteraciones de la membrana bacteriana que debilitan la unin del fago.Los
cambios celulares detectados en de esta manera se puede relacionar con los responsables de la
liberacin de bacterias componentes de las bacterias infectadas (Prater, 1951; Price, 1952).
Una variante de los experimentos anteriores fue diseado para probar las bacterias en un una etapa
posterior en el crecimiento del fago. Para este propsito las clulas infectadas se airearon en caldo
para 5 o 15 minutos, fijados por la adicin de 0,5 por ciento(v / v) comercial formalina, se
centrifugaron, se resuspendieron en formalina al 0,1 por ciento en agua, y posteriormente se
manipula como se ha descrito anteriormente. Los resultados fueron muy similares a las ya
presentadas, excepto que la liberacin de PS de las clulas era ligeramente menos, y titulaciones de
las clulas infectadas no podan hacerse.
El material S
86
-etiquetado separado de las clulas infectadas en la forma de- descrito posee las
siguientes propiedades. Se sediment a 12.000 G, aunque menos completamente de partculas de
fago intactas.Se precipit completamente por antiphage suero en presencia de fago portador
conjunto.40 a 50 por ciento de los
que readsorbs a las bacterias sensibles, casi independientemente de la concentracin bacteriana-
tracin entre 2) <108 y 109 clulas por ml., en 5 minutos a 37 C.La ad-
absorcin no es muy especfica: del 10 al 25 por ciento adsorbe al fago resistentes bac-
rios en las mismas condiciones.La adsorcin requiere sal, y para este
razn la eliminacin eficaz de S a partir de bacterias infectadas se puede lograr
slo en un fluido pobres en electrolitos.

Los resultados de estos experimentos se pueden resumir de la siguiente manera:
1. 75 a 80 por ciento del azufre fago puede ser despojado de las clulas infectadas por agitacin
violenta de la suspensin. A alta multiplicidad de infeccin, casi 50 por ciento elude
espontneamente. Las propiedades del material marcado con S3S muestran que se compone de
ms o menos intacta membranas de fagos, la mayora de los cuales han perdido la capacidad de
unir especficamente a las bacterias.
2. La liberacin de azufre est acompaada por la liberacin de slo el 21 al 35 por ciento del
fsforo fago, la mitad del cual se abandona sin ningna agitacin mecnica. El tratamiento no
causa ninguna inactivacin apreciable de intracelular fago.
Efecto de la multiplicidad de infeccin en la elucin de las membranas de fagos de bacterias infectadas
isotopo eluido
Bacterias
infectadas
isotopo eluido
Bacterias
infectadas
minutos porcentaje porcentaje porcentaje porcentaje
0 0.6 10 120 16 101
2.5 0.6 21 82 81 78
0 6.0 13 89 46 90
2.5 6.0 24 86 82 85
TABLA V
tiempo de
funcionamient
o en el
P32 fago marcado S35 fago marcado
multiplicidad
de infeccion
3. Estos hechos demuestran que la mayor parte del azufre fago se mantiene en la clula superficie
durante la infeccin, y no participa en la multiplicacin de intracelular fago. El 0f el ADN del
fago a granel, por otro lado, entra en la clula pronto despus de la adsorcin del fago a las
bacterias.
Transferencia de azufre y fsforo de los padres a la progenie de fagos. Nosotros han llegado a la
conclusin de que por encima de la mayor parte de la protena que contiene azufre de la partcula de
fago en reposo no toma parte en la multiplicacin de fagos, y en hecho de no entrar en la clula. De
ello se desprende que poco o nada de azufre debe ser trans- preferente de los padres a la progenie de
fagos. Los experimentos descritos a continuacin muestran que esta expectativa es correcta, y que la
transferencia mxima es del orden 1 por ciento
Las bacterias se cultivaron en un medio de glicerol-lactato durante la noche y se subcultivaron en el
mismo medio durante 2 horas a 37C. con aireacin, el tamao de la siembra est ajustado
nefelometra para producir 210
8
clulas por ml. en el sub- cultura. Estas bacterias se sedimentaron,
se resuspendieron en medio de adsorcin a una concentracin de 109 clulas por ml., e infectadas
con el fago S
35
-1abeled T2.Despus de 5 minutos a 37 C, la suspensin se diluy con 2 volmenes
de agua y resedimentado para eliminar los fagos no adsorbido (5 a 10 por ciento en ttulo) y S A5
(15 por ciento).Las clulas se suspendieron en glicerol al lado medio de lactato a una concentracin
de 2 X 1 @ por ml.y se aire a 37 C.
Crecimiento del fago se termin en el momento deseado mediante la adicin de un rpido xito-
cesin 0.02 mt HCN y 2 X 1011 fago UV-kflled por ml. de la cultura. La cianuro se detiene la
maduracin del fago intracelular (Doermann, 1948), y y el fago UV - matado minimiza las prdidas
de la progenie del fago mediante la adsorcin a los residuos bacterianos , y promueve la lisis de
bacterias ( Maal ~ e y Watson , 1951 ) . Como se mencion en otra conexin , y tambin se seala
en estos experimentos , la lisis de fago debe estar estrechamente relacionada con la multiplicacin
de fagos de someterse a ( por ejemplo , T2H , su h mutante , o T2L , pero no de T4 o T6 , en este
caso ) con el fin de prevenir la inactivacin de la progenie por adsorcin a los residuos bacterianos.
Para obtener lo que llamaremos el mximo rendimiento de los fagos , se aadi el fago lisado de
25 minutos despus de la colocacin de los ceils infectados en el medio de cultivo, y el cianuro se
aadi al final de la segunda hora . En estas condiciones , la lisis de las ceils infectados se produce
con bastante lentitud .
La aireacin se interrumpe cuando se aadi el cianuro, y los cultivos se dej durante la noche a
37 C. Los lisados se fraccionaron mediante centrifugacin en un sedimento de baja velocidad
inicial ( 2.500 g durante 20 minutos ) , un sobrenadante de alta velocidad ( 12.000 g durante 30
minutos ) , una segunda sedimentos de baja velocidad obtenido por medio de adsorcin
recentrffuging en el sedimento de alta velocidad se resuspendieron , y el sedimento de alta
velocidad aclarado .
La distribucin de S ~ 8 y el fago entre fracciones obtenidas a partir de tres cultivos de este tipo se
muestra en la Tabla VI. Los resultados son tpicos (a excepcin de las excesivamente buenas
recuperaciones de fago y S A6) de lisados en caldo as como lisados en medio de glicerol-lactato.
El resultado sorprendente de este experimento es que la distribucin de S 35 entre las fracciones
es la misma para los primeros lisados que no contienen la progenie de fagos, y los posteriores que
lo hacen. Esto sugiere que poco o nada de S 36 est contenido en la progenie del fago maduro. El
fraccionamiento adicional por adsorcin a las bacterias confirma esta sugerencia.
Mezclas de adsorcin preparadas al efecto contenan aproximadamente 5 X 10 ~ bacterias
muertas por calor (70 C durante 10 minutos) a partir de cultivos de caldo de 18 horas, y

La infeccin con T2 marcado con S3S , 0,8 partculas por bacteria . Lisis del fago UV - matado K
mutante de T2 . Los rendimientos de fagos por bacteria infectada : < 0,1 despus de la lisis en t - ~
0 ; 0.12 en t = 10 ; . mximo rendimiento 29 Recuperacin de los medios S s5 por ciento de la
entrada adsorbido se recuper en las cuatro fracciones ; recuperacin del fago significa por ciento
del rendimiento total de fagos ( por nmero de placa antes del fraccionamiento ) se recuper
mediante una valoracin de las fracciones.
aproximadamente 1011 fagos (UV- muertos lisis de fagos ms fago prueba) , por ml . de medio de
adsorcin . Despus de calentar a 37 C. durante 5 minutos , las mezclas se diluyeron con 2
volmenes de agua , y se centrifugaron . Los ensayos se hicieron a partir de sobrenadantes y de
lavar se resuspendieron los sedimentos.
Los resultados de las pruebas de adsorcin de S 35 y los fagos a bacterias (H) adsorber tanto la
progenie T2 y K - fago mutante de lisis , a las bacterias ( B / 2 ) adsorber lisis de fagos slo , y para
bacterias ( B/2h ) adsorber ni , se muestran en la Tabla VII , junto con pruebas paralelas de
autntica fago marcado con SAS.
S
35
fago
1ro sedimentos de baja velocidad 79 81 82 19
2do sedimentos de baja velocidad 2.4 2.1 2.8 14
Sedimentos de alta velocidad 8.6 6.9 7.1 61
Sobrenadante de alta velocidad 10 10 7.5 7.0
Recuperacion 100 100 96 100
TABLA VI
Distribucin porcentual de los fagos y S
35
entre fracciones separado por centrifugacin de
Lysales despus de la infeccin con el T2 S
35
Etiquetada
Fraccion
Maximo rendimiento Lisis en t = 0
S
35
Lisis en t = 10
S
35
Los ensayos de adsorcin muestran que el S 85 presente en el fago de semillas se adsorbe con la
especificidad de los fagos , pero que S 85 presente en lisados de bacterias infectadas con este fago
muestra un comportamiento ms complicado . Se absorbe fuertemente a las bacterias
adsorbentes tanto progenie y de lisis de fagos . Es dbilmente se adsorbe a las bacterias
adsorbentes tampoco. Se adsorbe moderadamente bien a bacterias de adsorcin del fago de lisis
pero no la progenie de fagos. Esta ltima prueba muestra que el a5 S no est contenida en la
progenie de fagos, y se explica el hecho de que el S aB en los primeros lisados no contiene
progenie se comporta de la misma manera.
La especificidad de la adsorcin de material marcado con SSS contaminacin de la progenie del
fago es evidentemente debido a la lisis de fagos, que tambin se adsorbe mucho ms fuertemente
a la cepa H de a B / 2, como se muestra tanto por la reduccin visible en Tyndall de dispersin
(debido al fago de lisis) en los sobrenadantes de las mezclas de ensayo, y por mediciones
independientes. Esta conclusin es confirmado adems por los siguientes hechos.

El fago marcado de manera uniforme y los productos de su crecimiento son, respectivamente, el
fago de semillas y las fracciones de sedimento de alta velocidad desde el experimento mostrado
en la Tabla VI .
El fago marcado de manera uniforme se analiza a una baja relacin de fago a las bacterias : + UV -
k significa con aadido de UV - matado h mutante en igual concentracin a la presente en los otros
materiales de ensayo .
La adsorcin de los fagos se mide por recuento de placa de los sobrenadantes , y tambin
sedimentos en el caso de las bacterias resistentes , en la forma habitual .
1 . Si las bacterias estn infectadas con S 35 del fago , y a continuacin se lisaron cerca del punto
medio del perodo de latencia con cianuro solo ( en brothi pobre en sal para evitar la readsorcin
de S 35 a los residuos bacterianos ) , la fraccin de sedimento de alta velocidad contiene S 35 que
se adsorbe dbilmente y de forma no especfica a las bacterias .
+ UV -k No UV -k
S
35
S
35
S
35
S
35
Fago
sensible (H) 84 86 79 78 96
Resistente (B/2) 15 11 46 49 10
Resistente (B/2h) 13 12 29 28 8
TABLA VII
Etiquetados de manera
unifirme S
35
fago
Productos
de lisis en
t=10
Descendencia de fagos
(maximo rendimiento)
bacterias absorbentes
Las pruebas de adsorcin con uniforme S
35
del fago etiquetados y con productos de su
crecimiento en un medio no radiactivo
porcentaje absorbido
2 . Si el fago de lisis y el fago infectar 1abeled - S35 son los mismos ( T2 ) , o si se permite que el
cultivo en caldo pobre en sal para lisar de forma espontnea (de modo que el rendimiento de la
progenie es grande ) , el S 85 en el fraccin de sedimento de alta velocidad se adsorbe con la
especificidad de la progenie del fago ( excepto por un dbil adsorcin no especfica ) . Esto se
ilustra en la Tabla VII por la adsorcin de H y B/2h .
Cabe sealar que una progenie de fagos crecido de fago 1abeled - S35 y que contiene una cantidad
mayor o menor de radiactividad contaminantes no poda distinguirse por cualquier mtodo
conocido de autntica fago 1abeled - S85 , la excepcin de que una pequea cantidad del
contaminante puede ser eliminado por adsorcin a las bacterias resistentes a los fagos . Adems
de las propiedades ya mencionadas , los 8s S contaminantes se precipitan por completo con el
fago por antisuero , y no se pueden separar de forma apreciable a partir del fago por ms de
sedimentacin fraccionada , en cualquiera de las concentraciones altas o bajas de electrolito .
Por otro lado , la contaminacin qumica de esta fuente sera muy pequeo en circunstancias
favorables , porque la progenie de una sola partcula de fago son numerosos y el contaminante se
deriva evidentemente de los padres .
Las propiedades del contaminante marcado con SSS muestran que consiste en los restos de las
capas de las partculas de fago parental , presumiblemente idnticos con el material que se puede
quitar a partir de clulas no lisadas en la Blendor Waring . El hecho de que se somete a poco
cambio qumico no es sorprendente ya que probablemente nunca entra en la clula infectada .
Las propiedades descritas explican un informe preliminar errnea ( Hershey et al. , 1951 ) de la
transferencia de S 35 de los padres a la progenie de fagos.
Hay que aadir que los experimentos idnticos a los mostrados en las Tablas VI y VII , pero a partir
de fago marcado con P3 ~ , muestran que el fsforo se transfiere de los padres a la progenie del
fago en la medida de 30 por ciento en rendimientos de aproximadamente 30 por fagos infectados
bacteria , y que la P3 ~ en cultivos prematuramente lisadas es casi en su totalidad no sedimentable
, convirtindose , de hecho , soluble en cido en el envejecimiento .
Medidas similares de la transferencia de P ~ han sido publicados por Putnam y Kozloff ( 1950 ) y
otros. Watson y Maal ~ e ( 1952 ) resumen este trabajo, e informar igual de transferencia ( casi el
50 por ciento) de fsforo y adenina.
A la progenie de S85 marcado con Pkage prcticamente libre de tke Parental Labd - . El siguiente
experimento demuestra un alto precio que la transferencia obligatoria de azufre de los padres
para los hijos de fagos es inferior al 1 por ciento , y probablemente mucho menos . En este
experimento , el rendimiento del fago a partir de bacterias infectadas a partir del cual las capas de
fagos marcados con S3S haban sido despojados en el Blendor Waring era ensayada directamente
para S s ~ .
Bacterias sensibles cultivadas en caldo se infectaron con cinco partculas de marcado con SaS
fagos por bacteria, la alta proporcin de la infeccin que sea necesaria a los efectos de ensayo. Las
bacterias infectadas fueron liberados de fago no adsorbido y se suspendieron en agua que
contiene por litro 1 na MgSO4, 0,1 mr CaC12 y 0,1 gr. gelatina. Una muestra del esta suspensin
se agit durante 2,5 minutos en el Blendor Waring, y se centrifug para eliminar el extraceUular
S% Una segunda muestra se ejecuta en el Blendor fue centrifugado al mismo tiempo. Las clulas
de ambas muestras se resuspendieron en caliente sal-pobres caldo a una concentracin de
bacterias l0 s por ml., y se aire durante 80 minutos. Los cultivos despus se lisaron por la adicin
de 0,02 mM de HCN, 2 10 U UV T2 muerto, y 6 de trapo. NaCl por ml. de la cultura. La adicin de
sal en este punto provoca S como que de otro modo seran eludible (Hershey et al., 1951) para
permanecer unido a la residuos bacterianos, los lisados se fraccionaron y se ensayaron como
se describe anteriormente, con los resultados mostrados en la Tabla VIII.
Los datos muestran que el despojo reduce ms o menos proporcionalmente el S AS
contenido de todas las fracciones. En particular, el SSS-contenido de la fraccin contiene
mayor parte de la progenie del fago se redujo de casi el 10 por ciento a menos del 1 por
ciento del istopo inicialmente adsorbida. Este experimento muestra que la mayor parte de
la S 36 que aparece en todas las fracciones de lisado se deriva de los restos de las capas de
las partculas de fago parental.

Propiedades de Fago inactivada por formaldehdo -. Fago T2 calentado para 1 hora a 37
C. en un medio de adsorcin que contiene 0,1 por ciento (v / v) comercial formalina (35 por
ciento HCHO), y luego se dializa libre de formaldehido


Todas las bacterias de entrada se recuperaron en ensayos de clulas infectadas realizadas
durante el latente perodo de dos culturas. Los rendimientos de fago fueron 270 (clulas
despojadas) y 200 por bacteria, ensayada antes del fraccionamiento. Las cifras entre
parntesis se obtuvieron de las tasas de conteo cerca del fondo.
Hyde, muestra una reduccin en el ttulo de la placa por un factor de 1,000 o ms.
Inactivada fago de esta especie posee las siguientes propiedades:

1. Se adsorbe a las bacterias sensibles (tal como se mide por cualquiera de S 36 o PS
etiquetas), a la extensin de aproximadamente 70 por ciento.
2. El fago adsorbido mata a las bacterias con una eficiencia de alrededor del 35 por ciento
en comparacin con el fago poblacin original.
S
35
Fago
S
35
Fago
Eluido en el mezclador de fluido 86 - 39 -
1 ro sedimentacion de baja velocidad 3.8 9.3 31 13
2 do sedimentacion de baja velocidad 0.2 11 2.7 11
Alta velocidad de sedimentacion 0.7 58 9.4 89
Alta velocidad de supernatant 2.0 1.1 1.7 1.6
Recuperacion 93 79 84 115
TABLA VIII
Lysales de bacterias infectadas con S
35
etiquetada T2 y despojado en el mezclador Waring
Porcentaje de absorcion S
35
o el
rendimiento del fago
Celulas no despojadas Celulas despojadas
3. El ADN de las partculas inactivas es resistente a la DNasa, pero se hace sensible por
choque osmtico.
4. El ADN de las partculas inactivas no est sensibilizado a DNasa por adsorcin a las
bacterias con calor mat, ni es liberado en solucin por adsorcin a residuos
bacterianos.
5. 70 por ciento del ADN del fago adsorbido se puede extraer de infectados clulas
hiladas en la Blendor Waring. El ADN separado se vuelve a casi en su totalidad
resistentes a DNasa

Estas propiedades muestran que T2 inactivado por formaldehdo es en gran parte en-
capaz de inyectar su ADN en las clulas a las que se atribuye. Su comportamiento en
los experimentos descritos da un fuerte apoyo a nuestra interpretacin de la cor-
responder experimentos con el fago activo.
DISCUSIN " Hemos demostrado que cuando una partcula de bacterifago T2 se conecta
a una clula bacteriana , la mayor parte del ADN del fago entra en la clula , y un residuo
que contiene al menos 80 por ciento de la protena que contiene azufre del fago se mantiene
en la superficie celular . Este residuo consiste en la formacin de la membrana de
proteccin de la partcula de fago de descanso de material , y no juega ningn papel
adicional en la infeccin despus de la unin del fago a la bacteria . Estos hechos dejan en
cuestin de la posible funcin de la 20 por ciento de protena que contienen azufre que
pueden o no pueden entrar en la clula . Nos encontramos con que poco o nada de esto se
incorpora en la progenie de la partcula infectante, y que por lo menos parte de ella consiste
en el material adicional que se asemeja el residuo que se puede mostrar a permanecer
extracelular. El fsforo y adenina ( Watson y Maal ~ e , 1952 ) derivado a partir del ADN
de la partcula de infectar , por otro lado , se transfieren a la progenie de fagos en una
medida considerable e igual . Inferimos que la protena que contiene azufre, no tiene
ninguna funcin en la multiplicacin de fagos , y que el ADN tiene alguna funcin . Hay
que recordar que las siguientes preguntas siguen sin respuesta . ( 1 ) Hay algn material de
fago libre de azufre que no sea el ADN entre en la clula ? ( 2 ) En caso afirmativo , es
transferida a la progenie del fago ? ( 3 ) es la transferencia de fsforo ( o hipottico otra
sustancia ) a la progenie directa - es decir, no se mantenga en todo momento de una forma
especficamente identificables como sustancia fago o indirecta ?
Nuestros experimentos muestran claramente que una separacin fsica del fago T2 en partes
genticos y no genticos es posible . Una separacin funcional correspondiente se ve en la
independencia parcial del fenotipo y el genotipo en el mismo fago ( Novick y Szilard , 1951
; Hershey et a / , 1951 . ) . El producto qumico
identificacin de la parte gentica tiene que esperar , sin embargo , hasta que alguna de las
preguntas han sido respondidas . Dos hechos de importancia para el mtodo inmunolgico
de ataque a los problemas
de crecimiento viral debe destacarse aqu . En primer lugar, el antgeno principal de las
partculas infecciosas del fago T2 persiste sin cambios en las clulas infectadas . En
segundo lugar, permanece unido a los restos bacteriana resultante de la lisis de las clulas .
Estas posibilidades parecen haber sido pasado por alto en un estudio de Rountree (1951 ) de
los antgenos virales durante el crecimiento del fago T5 .
RESUMEN
1 . Choque osmtico interrumpe partculas de fago T2 en el material que contiene casi todo
el azufre del fago en una forma precipitable por antiphage suero , y capaz de adsorcin
especfica a las bacterias . Se libera en la solucin casi todos el ADN del fago en una forma
no precipitable por antisuero y no adsorbible a las bacterias . La protena que contiene
azufre de la partcula de fago evidentemente constituye una membrana que protege el ADN
del fago a partir de DNasa , comprende el material antignico nico o principal , y es
responsable de la unin del virus a las bacterias .
2 . Adsorcin de T2 a las bacterias , y de calefaccin o de congelacin y descongelacin
alternativa de las clulas infectadas calentar - matado , sensibilizar al ADN del fago
adsorbido a DNasa . Estos tratamientos tienen poco o ningn efecto sensibilizador en fago
no adsorbido . Ni calefaccin ni de congelacin y descongelacin libera el ADN de fago a
partir de clulas infectadas , aunque otros constituyentes celulares pueden ser extrados por
estos mtodos. Estos hechos sugieren que el ADN de fago forma parte de una estructura
intracelular organizan durante todo el perodo de crecimiento del fago .
3 . Adsorcin del fago T2 a los residuos bacterianos hace que parte del ADN del fago a
aparecer en solucin , dejando el azufre fago unido a los escombros . Otra parte del ADN
del fago , que corresponde aproximadamente a la mitad restante de la ADN del fago
inactivado , permanece unido a los restos pero puede ser separado de ella por DNasa . El
fago T4 comporta de manera similar , aunque los dos fagos pueden ser mostrados para
unirse a diferentes sitios de combinacin . La inactivacin del fago por los residuos
bacterianos evidentemente est acompaada por la ruptura de la membrana viral .
4 . Las suspensiones de clulas infectadas agit en un mezclador Waring liberar 75 por
ciento del azufre del fago y slo el 15 por ciento del fsforo a la solucin de fago como
resultado de la fuerza de cizallamiento aplicada . Las clulas siguen siendo capaces de
producir progenie de fagos .
5 . Los hechos expuestos muestran que la mayora del azufre del fago se mantiene en la
superficie celular y la mayor parte del ADN del fago entra en la clula sobre la infeccin .
Si el material libre de azufre que no sea ADN entra en la clula no se ha determinado . Las
propiedades del residuo que contiene azufre - identifican como membranas esencialmente
sin cambios de las partculas de fago . Todos los tipos de pruebas muestran que el paso del
ADN del fago en la clula se produce en medio no nutriente bajo condiciones en las que
otros pasos conocidos en el crecimiento viral no se producen .
6 . La progenie del fago producido por las bacterias infectadas con el fago etiquetados con
azufre radiactivo contiene menos de 1 por ciento de la radiactividad de los padres. La
progenie de partculas de fago marcado con fsforo radiactivo contiene 30 por ciento o ms
del fsforo de los padres.
7 . Fago diluido inactivado por formaldehdo es capaz de adsorber a las bacterias , pero no
libera su ADN a la clula . Esto demuestra que la interaccin entre el fago y bacteria resulta
en la liberacin del ADN del fago a partir de su membrana protectora depende de los
componentes lbiles de la partcula del fago . Por el contrario , los componentes de la
bacteria esencial para esta interaccin son notablemente estable . La naturaleza de la
interaccin es por lo dems desconocido .
8 . La protena que contiene azufre de partculas de fago de reposo se limita a una capa
protectora que es responsable de la adsorcin a las bacterias, y funciona como un
instrumento para la inyeccin del ADN del fago en la clula. Esta protena probablemente
no tiene ninguna funcin en el crecimiento de intracelIular fago. El ADN tiene alguna
funcin. Otras inferencias qumicos no deben ser extrados de los experimentos
presentados.