PRACTICA N 6

FACTORES FISICOS Y QUIMICOS QUE INFLUYEN EN EL CRECIMIENTO MICROBIANO

OBJETIVOS
Determinar cmo influyen algunos factores fsicos y qumicos del medio ambiente en
la velocidad de crecimiento de los microorganismos.

FUNDAMENTO
Las razones principales para controlar los microorganismos son: prevenir la transmisin de
enfermedades, evitar el deterioro de los alimentos y evitar la contaminacin tanto en procesos
industriales que requieran cultivos puros, como en laboratorios de diagnstico o investigacin.

DETERMINACIN DEL HALOFILISMO
La mayora de organismos comunes crecen en medios de cultivo con baja concentracin de
cloruro de sodio, pero existen algunos microorganismos que necesitan altas concentraciones
de esta sal. La determinacin de las necesidades de cloruro de sodio de una especie particular
recibe el nombre de prueba de halofilismo. La prueba se puede hacer en placas con medios de
cultivo a concentraciones variables de sal, en donde se siembra el microorganismo y se deja
crecer en condiciones favorables. La concentracin mxima a la que crece el microorganismo
determina su grado de halofilismo.
El procedimiento a seguir es el siguiente:
Preparar placas con medio de cultivo favorable a diferentes concentraciones de
cloruro de sodio. Por ejemplo a 0 %, 5 %, 10 %,..., 25 %
Sembrar por- estras una cepa microbiana a partir de un cultivo joven (en una placa se
puede sembrar 4 ms cepas diferentes).
Incubar a temperatura ptima por un tiempo suficientemente largo. Por ejemplo, a 35
C durante 5 a 8 das.
Leer el crecimiento microbiano en la huella de las estras.
Considerar como microorganismo haifobo al que slo crece a concentraciones de cloruro de
sodio inferiores al 1 %, como ligeramente halfilo si crece hasta 5 % de cloruro de sodio, como
moderadamente halfilo si crece hasta concentraciones del 12 %; y como extremadamente
halfilo o simplemente halfilo si crece a concentraciones mayores de cloruro de sodio. Los
microorganismos halfilos estrictos necesitan obligatoriamente el cloruro de sodio en el
medio de cultivo y slo crecen bien cuando las concentraciones son superiores al 10 %.
Tambin se reconoce el grupo de halotolerantes que se caracteriza por crecer en un amplio
rango de concentraciones salinas, que va desde 0 % al 20 % de cloruro de sodio.

DETERMINACION DE LA OSMOFILIA
La osmofilia es una prueba para determinar la tolerancia de solutos de un microorganismo,
especialmente las concentraciones mximas. Generalmente se asocia a las necesidades
mximas de azcares, pero tambin puede realizarse con sales. El procedimiento que se sigue
con la glucosa es el siguiente.
Sembrar una estra de una cepa microbiana en la superficie de placas con medio de cultivo
favorable, preparado con diferentes concentraciones de glucosa. Por ejemplo, con 0 %, 10
%,..., 50 % y 60 % (en una placa se puede sembrar 4 ms cepas diferentes).
Incubar a temperatura ptima por un tiempo suficientemente-largo, para permitir su
crecimiento. Por ejemplo, a 35 C durante 5 a 8 das.
Leer la abundancia relativa de crecimiento en la superficie del agar; y
Considerar como microorganismos osmfilos si solamente crecen en altas concentraciones de
glucosa. La concentracin sugerida como mnima para lograr esta denominacin es de 30 % de
glucosa, aunque no existe un consenso en la delimitacin. La mayora de microorganismos
comunes no necesitan altas concentraciones de glucosa o de ningn otro azcar. Los
osmotolerantes crecen en un amplio rango de solutos.
Las tolerancias a las concentraciones de solutos en el crecimiento microbiano,
independientemente de qu tipo sean, se estudian mejor como necesidades de agua y se
expresa en trminos de a
w
, cuyos valores ptimos y mximos se acercan a 1,00 y la diferencia
radica en su valor mnimo. En forma general, las bacterias tienen necesidades ms altas de
humedad, le siguen las levaduras y luego los mohos. Por otro lado, las bacterias toleran mejor
el cloruro de sodio, las levaduras prefieren las altas concentraciones de azcares y los mohos
los ambientes secos.

DETERMINACION DE LA ACCIN GERMICIDA DE ALGUNOS AGENTES QUMICOS
La accin germicida de un compuesto qumico se determina poniendo en contacto al
microorganismo con el agente qumico preparado en una solucin de concentracin conocida
y, despus de un perodo de tiempo variable, se controla su viabilidad, sembrndolo en un
medio de cultivo adecuado.
Los factores que influyen en esta prueba son: la concentracin del compuesto qumico, la
temperatura y el tiempo de contacto. Cada compuesto qumico tiene una accin diferente
frente a los microorganismos o, dicho de otro modo, cada microorganismo responde de forma
diferente frente a diversos compuestos qumicos. Las sustancias qumicas que tienen efectos
germicidas reciben el nombre de desinfectantes. Algunos desinfectantes comunes que se usan
para matar microorganismos son: el fenol, el yodo, el alcohol, el formol, el hipoclorito de
sodio-, etc.
Para determinar la accin desinfectante del fenol diluido, en tiempos variables, con un mtodo
simple, se puede hacer de la siguiente manera:
Colocar en un tubo de prueba 5 cm
3
de solucin de fenol al 0,5 %.
Agregar 0,5 cm
3
de inoculo de un cultivo joven de una cepa en caldo.
Agitar y dejar actuar durante 1 minuto.
Tomar una asada de la mezcla y sembrar en caldo nutritivo, marcado convenientemente.
A los 2,5 minutos, repicar nuevamente a otro tubo con caldo nutritivo, marcado
convenientemente.
A los 5 minutos, proceder igual que el paso anterior; y a los 10 minutos, volver a
sembrar de modo semejante una ltima vez.
Incubar todos los tubos a la temperatura ptima de crecimiento, por ejemplo, 37 C /
24h - 48 h.
Leer la turbidez de los tubos e interpretar como crecimiento microbiano.
Considerar como resistentes al desinfectante (fenol al 0,5 %) si presenta crecimiento en los
tubos y como sensibles si no presenta crecimiento.
Se pueden hacer pruebas similares con otros desinfectantes como: alcohol etlico de 70 %,
yodo del lugol, formol al 5 % u otros productos que se encuentran en el mercado. La
comparacin del efecto antimicrobiano conlleva a opinar que es buen desinfectante el
compuesto qumico que a bajas, concentraciones produce la muerte microbiana en el menor
tiempo de contacto.

DETERMINACIN DE LA ACCION DE LOS ANTIBITICOS
La prueba de sensibilidad de un microorganismo frente a los antibiticos recibe el nombre de
antibiograma. Esta prueba se puede llevar a cabo por el mtodo de Kirby - Bauer, que consiste
en realizar una siembra microbiana en la superficie de un medio de cultivo en placa, colocarle
varios discos de papel impregnados con antibiticos de concentracin conocida e incubar a
temperatura favorable para el crecimiento. La ausencia de crecimiento en una zona alrededor
del disco significa que el antibitico tiene efecto letal o inhibidor contra el microorganismo.
Para llevar a cabo un antibiograma, como el esbozado en el prrafo anterior, es necesario
controlar varios factores, como: el tipo de medio de cultivo, la profundidad de la pelcula en la
placa, la uniformidad de la extensin del inculo, la aplicacin de los discos de antibiticos y el
perodo de incubacin.
El procedimiento que puede ser seguido como rutina es el siguiente:
Distribuir el agar de Muller Hinton en placas petri y secarlo convenientemente.
Sembrar, por extensin en superficie, una alcuota de 0,1 ml de un cultivo joven en caldo y
distribuirlo uniformemente con esptula sin dejar marcas en el agar.
Poner los discos con antibiticos a una distancia entre uno y otro.
Incubar a la temperatura ptima del microorganismo, por ejemplo, a 37 C / 24horas - 48
horas.
Leer la ausencia de crecimiento en la zona que rodea al disco, midiendo el dimetro del halo
de inhibicin y expresando su valor en milmetros.
Comparar las lecturas en una tabla de interpretacin en donde se califican los resultados segn
el efecto.
SE TRABAJ :
1. E.COLI
2. B.SUBTILIS
Resultados
Tabla - Accin de los antibiticos
Medio de cultivo: MUELLER-HINTON (MH) ANTIBIOTICO: CEFOPEZONA

PRUEBA ACCIN
INCUBAR A 37 C / 24 HORAS A 48 HORAS
RESULTADO
1 E.COLI -
2. B.SUBTILIS +


Accin germicida con agentes qumicos
Tabla - agentes desinfectantes
Tiempo 1 min 2.5 min 5 min 10 min
Incubar los 4 tubos a una temperatura de 37 C / 24horas a 48 horas
Lectura
Resultado

- - - -
















Concentracin de solutos
Tabla - DETERMINACIN DEL OSMOFILO

Tipo cepa Osmfilos (Sacarosa)
Porcentaje Agar Virgen 10% 20% 30%
Incubar a 37 C por 5 das a 8 das
Lectura del resultado
Resultado 1 1 E.COLI ++ + -
Resultado 2
2. B.SUBTILIS +++ ++ +




Concentracin de solutos
Tabla - DETERMINACIN DEL HALOFILISMO

Tipo Cepa Halfilos (ClNa)
Porcentaje Agar Virgen 5% 10% 15%
Incubar a 37 C por 5 das a 8 das
Lectura
Resultado 1 E.COLI + - -
Resultado 2. B.SUBTILIS + - -





CONCLUSIONES
Con el resultado en la accin de los antibiticos podemos concluir que el antibitico
actu de manera efectiva para inhibir a la bacteria B.SUBTILIS
Con el resultado en la accin germicida fue sensible en el desarrollo donde podemos
concluir que el desinfectante actu negativamente a medida que pasaron los minutos
y luego de la incubacin
Como resultado de la prueba del halfilo el microorganismo se dio el crecimiento al 5
% en la E.COLI Y B.SUBTILIS ya que requera del ion sodio para su desarrollo. Es un
halfilo discreto (1-6%)

















BIBLIOGRAFIA
- http://bc.inter.edu/facultad/yserrano/factoresfisicosqui.htm
- Geneser, F. 1986. Histologa. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires.






UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE OCEONOGRAFA, PESQUERA Y CIENCIAS
ALIMENTARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE
INGENIERA ALIMENTARIA



CURSO: MICROIOLOGIA GENERAL Y EN ALIMENTOS

TEMA: FACTORES FISICOS Y QUIMICOS QUE INFLUYEN EN EL CRECIMIENTO
MICROBIANO

DOCENTE: DRA. MARIA TERESA FLORES

ALUMNO: CALDERON ESPINOZA WALTER

TURNO: 14:40PM 16:20PM

AO Y SECCIN: 3 A