1

Interacciones entre microorganismos: neutralismo,

sinergismo, antagonismo. La rizsfera. Interacciones
microorganismos-planta. Asociaciones sin carcter
simbitico. Simbiosis.
Fijacin biolgica de nitrgeno (FBN) como
ejemplo de interaccin bacteria-planta
2
NITRGENO
Importancia
Ciclo biogeoqumico en el suelo
Formas en el suelo
RECICLAJE POR MINERALIZACIN (DEYECCIONES)
FERTILIZANTES QUMICOS NITROGENADOS
FIJACIN BIOLGICA
Fuentes de N en el suelo
3
Fijacin de nitrgeno (N
2
) N N
Proceso Haber-Bosch
N
2
+ 3H
2
2 NH
3
+ CO
2
UREA
requerimientos: 500-1000C
200-300 atm
H
2
(petrleo, gas natural, metano)
catalizadores
A. Industrial: fertilizantes qumicos nitrogenados
B. Microorganismos: fijacin biolgica de N
2
(FBN)
N
2
+8e
-
+16 ATP+8H
+
2NH
3
+H
2
+16ADP+16Pi
aminocidos
4
Polucin por N - Problemas ambientales
Balance
20% con la cosecha
20-25% permanece en el suelo
55% es lixiviado
Empleo indiscriminado de fertilizantes nitrogenados (cantidad, tipo y
etapa del cultivo)
Eutrofizacin de aguas superficiales
Contaminacin de aguas subterrneas
Acidificacin del suelo y solubilizacin de metales pesados txicos
Formacin de N
2
O: efecto invernadero,destruccin de la capa de ozono
5
millones ton./ao
Industrial 49
fenmenos atmosfricos 10
procesos qumicos 35
FBN 175
terrestre 139
leguminosas 35
arroz 4
pasturas 45
otros cultivos 5
bosques 40
otros sistemas 10
ocanos 36
Fijacin de N
2
Fijacin biolgica de N
2
vs. fertilizantes nitrogenados
6
Bacterias promotoras del crecimiento vegetal
Mecanismos
a. directos: produccin de hormonas, solubilizacin de minerales,
sntesis de enzimas u otros compuestos,
FBN
b. indirectos: control de fitopatgenos por siderforos, antibibiticos,
enzimas
Gneros
Rhizobium Azoarcus
Enterobacter Acetobacter
Klebsiella Pseudomonas
Serratia Azospirillum,
Herbaspirillum Azotobacter
7
FBN Es la habilidad de convertir el nitrgeno atmosfrico a
amonio y est limitada a algunos procariotas
N
2
+8e
-
+16 ATP+ 8H
+
2NH
3
+H
2
+16ADP+16P
i
Nitrogenasa
aminocidos
8
Nitrogenasa o dinitrogenasa
2 protenas: dinitrogenasa (Mo-Fe protena)
dinitrogenasa reductasa (Fe-protena)
caractersticas
muy similar en su estructura y funcionamiento en los diferentes
diazotrofos
inhibida por el O
2
inhibida por alto contenido de N combinado en el medio
utiliza sustratos con triple enlace
N
2
2NH
3
C
2
H
2
C
2
H
4
N
2
O N
2
+H
2
O
9
Requerimientos para la FBN
N
2
+ 8e
-
+ 16ATP + 8H
+
2 NH
3
+ H
2
+ 16ADP + 16P
i
expresin de la nitrogenasa
donadores de e
-
20-25 Mg - ATP/mol N
2
minerales: Fe, Mo
proteccin frente al O
2
esqueletos de C
aminocidos
10
Microorganismos fijadores de N
2
A. Diaztrofos auttrofos
vida libre simbiosis
Cianobacterias Azolla anabaenae
aerobias: Anabaena, Nostoc
microaeroflicas
Bacterias fotosintticas
Rhodispirillum
Chlorobium
Quimioauttrofos
Thiobacillum ferroxidans
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B. Diaztrofos hetertrofos
vida libre asociacin
Aerobios en la rizsfera
Azotobacter en la filsfera
Anaerobios facultativos con ndulos (simbiosis)
Klebsiella
Bacillus Frankia - no leguminosa
Enterobacter
Rhizobio - leguminosa
Microaeroflicos
Azospirillum, Herbaspirillum
Acetobacter
Anaerobios estrictos
Clostridium, Desulfovibrio
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Microorganismos de vida libre
abundante C (nitrogenasa ATP)
N en el medio inhibe sntesis de nitrogenasa
O
2
produce inhibicin irreversible de la nitrogenasa
N disponible luego de la muerte de los microorganismos
Aporte: media = 1- 5 Kg N/ha/ao
ej. Azospirillum
PGPR (Promoting Growth Plant Rhizobacteria) es fijador de N
2
y produce
hormonas vegetales (auxinas, citoquininas)
13
clorofila a, ficocianina (azul) y ficoeritrina (rojo)
Fijan CO
2
y fijan N
2
,liberan compuestos nitrogenados al medio
mayora de los ecosistemas naturales
unicelulares, no heterocsticas y
*filamentosas heterocsticas
Cianobacterias
Nostoc
14
Caractersticas de los heterocistos
Clulas de mayor tamao que las vegetativas
fijan N
2
y no CO
2
vacos al microscopio
unidades reproductivas, y de fijacin del
filamento al sustrato
paredes gruesas, poros de comunicacin con otras clulas
Inhibicin por alto N combinado en el medio
15
Microorganismos endfitos de plantas
Gramneas y caa de azcar
en caa obtuvieron ms de un 50% de sus necesidades de N y en
variedades de arroz entre 20 y 30% (1 x 10
6
microorganismos g
-1
tallo)
en campo
La micropropagacin de caa de azcar elimina endofitos fijadores
de N
2
y fitopatgenos
mecanismos de infeccin y transmisin no se conocen en detalle,
heridas en races, celulasas, micorrizas VA.
Gneros estudiados: Acetobacter diazotrophicus, Herbaspirillum,
Azoarcus, etc
16
Mecanismos de proteccin de la nitrogenasa frente al O
2
enzima hidrogenasa (reciclado de energa)
condiciones de microaerofilia
respiracin eficiente
proteccin conformacional
barreras de difusin de O
2
: ndulo y corteza interna del ndulo
leghemoglobina
polmeros extracelulares
clulas especializadas: heterocistos en cianobacterias,
vesculas en Frankia
17
Hetertrofos con formacin de ndulos
Ej.: Rhizobium-leguminosas
Ej.: Frankia-no leguminosas
18
SIMBIOSIS FRANKIA - NO LEGUMINOSA
Familia: Frankiaceae Subfamilia: Streptomices, Gnero: Frankia
Actinomicete
fija N
2
en forma libre y forma ndulos perennes
nodula importantes gneros de rboles, Alder 100 kg N/h/ao,
Casuarina
los ndulos fijan aprox. 100- 200 kg N/h/ao
baja especificidad por el hospedero
el N
2
es fijado en vesculas
el fertilizante nitrogenado inhibe la nodulacin y fijacin de N
2
algunos pases producen inoculante
19
Simbiosis Rhizobium-leguminosa
20
Alfa-proteobacterias
Familia Rhizobiaceae
Bacilo aerobio, Gram negativo, mviles
Fuentes de C
Hbitat natural:suelo
No fija nitrgeno en vida libre (bacilo)
Fija N
2
como bacteroide
Leguminosa (macrosimbionte)
Familia Fabaceae (Leguminosae), 20.000
especies. Usos
Rizobio (microsimbionte)
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EJEMPLOS DE ASOCIACIONES RHIZOBIO-PLANTA
PLANTA HOSPEDERA SIMBIONTE (rizobio)
Trifolium spp (trboles) Rhizobium leguminosarum bv. trifolii
Lotus sp (Lotus) Mesorhizobium loti
Medicago spp (alfalfa) Sinorhizobium meliloti
Sinorhizobium medicae
Phaseolus spp (porotos) Rhizobium leguminosarum bv. phaseoli
Rhizobium tropici
Rhizobium etli
Glycine spp (soja) Sinorhizobium fredii
Bradyrhizobium japonicum
Pisum spp (arveja) Rhizobium leguminosarum bv. viciae
Sesbania spp Azorhizobium spp
Neptunia Allorhizobium undicola
22
Proceso de formacin del ndulo
quimiotaxis
adhesin
reconocimiento
progreso de canal de
infeccin
liberacin de simbiosomas
cambio a bacteroides
fijacin de nitrgeno
senescencia
23
Especificidad Rhizobium-leguminosa, base
molecular
N-acetil-D-glucosamina
24
25
Clulas vegetales del ndulo con su citoplasma lleno de simbiosomas
Bacteroide
tamao y morfologa distinta
a bacilos en vida libre
Ms DNA y alta respiracin
viables, sin divisin celular
Alta permeabilidad de sus
membranas
26
hemoprotena monomrica (PM 17000)
fraccin globina codificada por la planta, nodulina tarda
fraccin hemo codificada por el bacteroide
ubicacin: prxima a la membrana peribacteroidal
LEGHEMOGLOBINA
27
Eficiencia de fijacin de N
2
en diaztrofos
vida libre asociaciones asociaciones
rizosfricas nodulares
Causas
aporte constante de nutrientes
concentracin de O
2
bajas
suministro directo del N
2
fijado
28
Promedios estimados de FBN por microorganismos
libres y con algn tipo de asociacin
Fijacin por Kg N/ha/ao
Cianobacterias (libre) 25
Azotobacter 0.3
Bacterias asociadas a gramneas 5-25
Azolla 300
Soja 50-90
Trboles 100-150
Alfalfa 120-500
Vigna, Phaseolus 80
Frankia - Alnus 40-300
29
Inoculantes para leguminosas
A. Formulaciones
Lquidos
Slidos:
soporte (turba)
cepa de rizobio
B. Seleccin de la cepa
Criterios
Pruebas en: laboratorio,
invernculo y campo
C. Inoculacin de semilla
30
1. Suministra el N parcial o total para un cultivo
2. Es una tecnologa ms econmica que el empleo de fertilizantes
nitrogenados, (energa metablica (fotosntesis) vs. energa fsil no
renovable
3. Produce ms altos rendimientos y mayor contenido de protenas en
las semillas
4. Suministra N a gramneas en cultivos asociados o en rotacin
5. Tiene efecto positivo sobre el balance de N en el suelo y sus
caractersticas fsicas
6. No produce daos ecolgicos, no es contaminante
FBN por la simbiosis rizobio-leguminosa