EXTRACCIN DE ADN EN VEGETALES

INTRODUCCIN

El ADN se localiza en los cromosomas y constituye el material gentico de los organismos,
es una doble cadena de polinucletidos, se va enrollando hasta formar una estructura super
espiralizada.

Para extraer el ADN se tienen que romper las membranas celulares por medio de un
proceso de lisis mediante un detergente, vaciando contenido molecular en una disolucin
tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo
una mezcla de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en
menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn
fraccionado en cadenas ms pequeas de pptidos; para separar el ADN de esa mezcla
tampn y detergente, se utiliza alcohol etlico.
La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos
son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior
extraccin de la clula.
OBJETIVO:

Extraer el ADN de diferentes muestras vegetales.


FUNDAMENTO:

1- La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas: rompimiento de la pared
celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula.
2- Romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados
como lavavajillas emulsionan los lpidos de las membranas celulares y las rompen.
3- La sal evita la unin de las protenas al ADN.
4- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua,
pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el
alcohol y el agua.
Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes
celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa.

MATERIAL:
1- Muestra vegetal: pltano u otro vegetal
2- Agua destilada o mineral
3- Sal de mesa
4- Detergente
6. Enzimas (ablandacarne) o solucin limpia lentillas)
7- Alcohol de 96 muy fro
8- Varilla de vidrio
9-. Tubo de ensayo
10- Batidora o licuadora y un cuchillo.
11- Vaso de precipitado
12-Probeta o pipeta
13- papel filtro

PROCEDIMIENTO

1.-Vaciar en el vaso de precipitado pequeo 3 cucharaditas de detergente lavavajillas.
2.- Aadir una cucharada de sal.
3.- Aadir 200 ml de agua destilada o mineral
4.- Mantener en un bao de hielo esta disolucin (Fig. 1).
5.- Cortar la fruta o verdura en trozos (zona central del pltano)
6.- Triturar (a mxima velocidad) los trozos del vegetal con una batidora o licuadora con un
poco de agua accionando 2 veces las cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern
muchas clulas. (puedes agregar una pizca de ablandador o .5 mL de solucin de
limpialentes).
7.- Mezclar en el recipiente grande el triturado celular con la disolucin inicial del vaso.
8.- Agitar vigorosamente la mezcla durante al menos 5 minutos, sin formar espuma.
9.- Filtrar el lquido obtenido
10.- Retirar 5 ml. de la mezcla a un tubo de ensayo y aade con la pipeta 5 mililitros de
alcohol enfriado a 0 C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del
tubo de ensayo, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre la mezcla.
11.- Dejar reposar durante 5 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las 2 capas
(Fig. 2).
12.- Introducir una varilla justo debajo del alcohol (la zona turbia que queda entre las 2
capas). Gira la varilla hacia delante y hacia atrs y lentamente se irn enrollando los
fragmentos de mayor tamao de ADN.
13.- Pasado un minuto, retira la varilla atravesando la capa de alcohol, con lo cual el ADN
quedar adherido a su extremo, con el aspecto de un copo de algodn mojado (Fig. 3).

RESULTADOS

- ADN que se obtuvo no es puro, ya que, entremezclado con l, hay fragmentos de
ARN.

- Una extraccin fina se lleva a cabo adicionando enzimas que fragmentan las
molculas de ARN y que impiden que se unan al ADN.

Cuestionario

1. Qu finalidad tiene el exponer las clulas a un detergente fuerte?
2. Para qu utilizaste el alcohol etlico? Y Por qu debe estar frio?
3. Cmo se llaman las protenas que mantienen la estructura del ADN?
4. Para qu usaste las enzimas?

Figura 1 Figura 2 Figura 3
Mesografa
www.espanol.answers.yahoo.com/question/index?qid
www.bios.biologia.umich.mx/files/Analisis%20de%20acidos%20...
http://bibmed.ucla.edu.ve/DB/bmucla/edocs/materialdidactico/micro/biocelular/practica/extraccion_a
dn.pdf