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CHM 2971 H2006

1
Exercices
supplmentaires en
spectroscopie
CHM 2971 H2006
2
Exercices supplmentaires
Question 1
Vous voulez faire une analyse multicomposants des trois produits suivants.
1- Sure le graphique qui suit, tracez de manire qualitative le spectre dun mlange des trois produits
2- Lesquels de ces 3 produits auront la plus grande et la plus petite incertitude lors de la quantification
multicomposants et pourquoi ?
3- Quel effet a la substitution des hydrognes par des iodes sur le spectre UV-Vis de cette structure?
4- Dterminez les concentrations utilises pour effectuer le spectre de chacun des trois produits (l = 9 mm).
1.2
1.4
CHM 2971 H2006
3
Voici trois spectres (A, B et C) dabsorption UV-Vis de la 1,2,4,5-ttrazine
dans trois diffrents milieu. Identifiez quel spectre est acquis dans quel
milieu et expliquez pourquoi.
- Dans leau
- Dans lhexane
- ltat vapeur
A
B
C
Exercices supplmentaires
Question 2
CHM 2971 H2006
4
Structure du
mdicament
anti-inflammatoire
benzydamine et spectre
UV-Vis dans un tampon
phosphate
pH = 7,5 ;
[Bz] = 1 x 10-4 M ;
l = 11 mm
1- Pourquoi lanalyse de la benzidamine doit-elle seffectuer dans un tampon basique?
2- Quelle est la longueur donde optimale (
MAX
) pour une analyse quantitative?
3- Calculez le coefficient dabsorptivit molaire de cette drogue
MAX
.
4- Sachant que lerreur sur la transmittance est minimale entre 20% et 70%, calculez les concentrations
limites utiles pour une analyse quantitative
MAX
.
5- Tracez de manire qualitative sur un mme graphique les courbes dtalonnage dune analyse
MAX
,
= 235 nm, = 295 nm, = 275 nm et = 190 nm
Exercices supplmentaires
Question 3
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5
Exercices supplmentaires
Question 4
1- Pourquoi le dicyanoanthracene (DCA) est-il fluorescent?
2- Lorsque le DCA est analys par fluorescence dans diffrents
solvants ses
EX
et
M
varient. Pour quelles raisons ?
3- Expliquez la variation pour les trois premiers solvants dans la liste.
4- Lajout progressif diodobenzene au DCA donne la rponse dcrite
dans le graphique ci-dessous. Expliquez cet leffet?
5- Quel type de graphique est reprsent ci-desous?
Constante
dilectrique
1- 2,015
2- 3,6
3- 4,806
4- 2,228
5- 2,274
6- 2,379
7- 2,568
8- 2,374
9- 2,270
10- 2,279
11- 5,621
12- 5,40
13- 2,44
I
0
: intensit de la radiation excitatrice
I : intensit dmission
DCA
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Exercices supplmentaires
Question 5
1- Voici le spectre dmission de deux lampes. Identifiez ces lampes.
2- Vrai ou faux. Expliquez.
a) Plus lintensit dune lampe est grande, plus lanalyse par absorption molculaire est sensible.
b) Moins de 10 % des molcules organiques absorbent < 200 nm.
c) La lampe dont le trac est en bleu est utile dans lIR
3- Quel type de lampe est la plus utilise en fluorimtrie?
4- Quels types de matriaux sont utiliss dans les lampes en IR?
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Exercices supplmentaires
Question 6
1- Parmi les trois premiers produits, lequel (lesquels) peuvent
tre analyss dans lactone.
2- Pour quelle raison ce solvant est si limitant. Donnez deux
solvant qui ne le serait pas pour effectuer une analyse
quantitative.
3- Quelle concentration de chacun de ces produits donnerait
une absorbance maximale de 0,5 (assumer l = 1 cm)?
4- Lesquels de ces produits doivent tre analyss dans un
tampon et pourquoi?
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Exercices supplmentaires
Question 7
1- Identifiez le spectre dmission, le spectre dexcitation, les axes et leurs units
2- Dterminez a) la longueur donde dmission
b) la longueur donde dexcitation
c) le shift de Stokes
3- Calculez le rendement quantique de fluorescence ()
4- Calculez la transmittance, labsorptivit molaire et drivez une quation qui les relie
5- Le rendement quantique est 3X plus important dans un solvant polaire aprotique tel le DMSO.
Discutez de deux autres manires daugmenter le rendement quantique de fluorescence.
Analyse fluorimtrique dun
carbostiryl dans leau:
- Concentration = 1X10
-6
M
- Chemin optique =10 mm
- Intensit de la radiation
excitatrice = 2476
- Absorbance de la solution = 0,15
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1
2
3
1
2
3
1- Lenregistrement de ces spectres sest
effectu 5 nm/s. Quelles seront les effets
dune augmentation de la vitesse 100
nm/s ?
2- Quelles seront les effets de
llargissement de la fente la source ?
3- Une analyse multicomposants dun
mlange inconnu de ces trois produits
donne les absorbances suivantes (l = 1cm):

322
; 0,24
358
; 0,62
370
; 0,12
Calculez le nombre de moles prsentes dans
250 ml de solution.
Exercices supplmentaires
Question 8
Produit (nm) (M
-1
cm
-1
)
1 322 5004
358 15632
370 39
2 322 2961
358 8305
370 13409
3 322 9178
358 7
370 0
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Exercices supplmentaires
Question 9
1- Voici la partie amide I du spectre infrarouge de la protine citratsynthase suite un chauffage de la
solution pour 50 minutes. Dterminez la composition structurale?
2- Sachant que la composition structurale dtermine suite une analyse par rayon X de la protine est
celle donne dans le tableau suivant ; quelle a t leffet du chauffage?
Composition; rayon X
-helix 64
-sheet 1
-turn 23
dsordonn 1
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Exercices supplmentaires
Question 10
Tracez un graphique qualitatif montrant la 2
me
drive du spectre
dabsorption dun mlange de ces trois produits. Identifiez les axes.
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1
2
3
1- Est-il possible de quantifier ces
trois benzofuroquinolines par analyse
multicomposants?
2- Quelles longueurs dondes
utiliseriez-vous pour effectuer une
analyse multicomposants des
produits 1 et 2; 1 et 3; 2 et 3 ?
3- Quelle mthode permettrait une
analyse dun mlange de ces trois
produits et sur quelle rgion du
spectre serait-elle la mieux
applicable?
Exercices supplmentaires
Question 11
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Exercices supplmentaires
Question 12
Voici le spectre dabsorption UV-Vis dun mlange de trois
produits et le spectre dune drive.
1- Quelle drive a t applique pour obtenir le spectre du
bas?
2- Nommez toutes les axes
3- Dterminez le signal maximal de chacun des produits
dans le spectre drive.
4- Ltalonnage externe du produit C par la mthode
diffrentielle donne lquation suivante:
y = mx+b ; y= 4000[C en mol/L]-0,003
a) que reprsentent x, y et m?
b) comment sont obtenus x, y et m?
c) calculer la concentration du produit C
330 340 350 360 370 380 390 400 410 420 430
-0,5
-0,4
-0,3
-0,2
-0,1
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
330 340 350 360 370 380 390 400 410 420 430
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
550
600
A
B
C
m
A
.
U
.
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Question 15
Vous cherchez doser la phenylalaline et la tyrosine dans un chantillon alimentaire par spectroscopie
infrarouge. Comment vous sera-t-il possible de distinguer entre les patrons spectroscopique de ces deux
acides amins? Spcifiez deux signaux caractristiques. Les spectres des deux a.a. sont les suivants.
Exercices supplmentaires
Question 13
1- Dessinez le diagramme dnergie reprsentant le principe de la spectroscopie dabsorption en UV-Vis.
Expliquez ce qui est quantifi exprimentalement ; o seffectue la lecture exprimentale sur ce diagramme?
2- Dessinez le diagramme dnergie reprsentant la fluorescence. Comment sappelle ce diagramme? O
seffectue la lecture exprimentale sur ce diagramme?
3- Dessinez le diagramme dnergie reprsentant linfrarouge. Quelle types dexcitations sont analyses en
spectroscopie IR?
Question 14
Reliez les lments apparents
Poudre
Complexes inorganiques
Films
Granuliomtrie
Analyse quantitative
IR moyen
IR lointain
IR proche
Rflexion totale
Rflexion totale attnue
Rflexion diffuse
Photoacoustique
12 800 4000 cm
-1
4000 200 cm
-1
200 10 cm
-1
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Corrig des exercices
supplmentaires en
spectroscopie
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Solution Q. 1
1-
2- Le produit bleu possdera la plus grande
incertitude de quantification puisque les deux
autres produits absorbent aussi son
MAX
. Par
contraste, le produit rouge possdera la plus
petite incertitude de quantification puisque
aucun des deux autres produits nabsorbe
son
MAX
. Effectuer une lecture l o il y a une
superposition de signaux implique non
seulement laddition de labsorbance, mais
aussi laddition des incertitudes sur cette
absorbances cette .
3- En substituant les H par des I, les nergies
des orbitales du noyau aromatique sont
modifies menant un shift bathochromique.
Ainsi, les nergies sont diminues
[ ]
l
A
x
x l A


=
=
] [
) ( ) (
4- Il suffit dappliquer la loi de B-L
Avec l = 9 mm = 0,9 cm
A (u.a)
1,025
1,05
1,025
[x] molL
-1
3,77x10
-5
1,28x10
-5
1,42x10
-5
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Voici trois spectres (A, B et C) dabsorption UV-Vis de la 1,2,4,5-ttrazine
dans trois diffrents milieu. Identifiez quel spectre est acquis dans quel
milieu et expliquez pourquoi.
B- Dans leau
C- Dans lhexane
A - ltat vapeur
A
B
C
Solution Q. 2
Ltat dans lequel se trouve lanalyte lors de
lanalyse UV-Vis affecte son spectre dabsorption.
ltat vapeur, les molcules sont trs espaces
et interagissent peu entre elles et avec le milieu.
Elles possdent un grand nombre de degr de
libert menant des transitions spcifiques
permettant de reconnatre la structure fine
complexe des niveaux associs aux divers tats
lectroniques excits. ltat condens,la libert
rotationnelle est attnu. De plus,la solvatation et
le type de solvant peut restreindre le nombre de
degr de libert dune molcule et largies
(tendre) les nergies des diffrents tats
vibrationnels. Contrairement lhexane, leau
participe des ponts hydrognes avec la
ttrazine ce qui diminue le nombre de degrs de
libert de lanalyte; il en rsulte un largissement
de la raie dabsorption.
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1- Il faut travailler dans un milieu basique pour viter la
protonation de lamine tertiaire. De plus, en tamponnant
la solution, on sassure denregistrer le spectre UV-Vis
dune seule forme de la drogue.
2-
MAX
= 306 nm
3-
4-
Solution Q. 3
A = 0,57
= 306 nm
[ ]
1 1
4
) ( ) (
5182
10 1 1 , 1
57 , 0
] [

=

=
= =
cm M
M cm
x l
A
x l A



) log(T A =
T = 0,2 A = 0,70
[x] = 1,23x10
-4
M
T = 0,7 A = 0,15
[x] = 2,63x10
-5
M
[ ]
l
A
x =
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Solution Q. 3
5- Il existe plusieurs facteurs pouvant affecter la linarit de la relation B-L :
a) Les dviations dans les coefficients dabsorptivit molaire aux hautes concentrations (>0.01M)
- en raison des interactions lectrostatiques entre les molcules
- changement de lindice de rfraction
b) Dispersion lumineuse par des particules
c) Fluorescence / phosphorescence de lchantillon
d) Participation des quilibres chimiques qui sont fonction de la concentration
e) Rayonnement polychromatique; les dviations peuvent tre minimises en utilisant une partie
relativement plate de la gamme d'absorption telle que le maximumde la bande d'absorption.
Les facteurs qui jouent ici sont (a) et
(e). Plus labsorbance est grande, plus
la sensibilit de ltalonnage est grande
(grande pente). Cependant, si nest
pas un maximum ou un minimum, la
gamme linaire est rduite d surtout
(e) et les limitations instrumentales.
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Solution Q. 4
1- La structure aromatique et rigide du DCA promeuvent la fluorescence
2- Les interactions solvant / analyte modulent les nergies des orbitales des analytes ce qui
affecte directement leur spectre dabsorption et dmission.
3- Il y a une augmentation de la constante dilectrique (2,015 < 3,06 < 4,806) qui mne un shift
bathochromique de
M
et
EX
. Plus la constante dilectrique dun solvant est haute, plus les
molcule de ce solvant sont aptes transporter lnergie de manire efficace. Ceci dit, les
molcules ncessitent un rayonnement moins nergtique (

) pour promouvoir leurs lectrons


aux tats excits. Une manire analogue dexpliquer leffet de la constante dilectrique et de
concevoir que son augmentation diminue la vitesse de propagation du rayonnement dans le
milieu menant une compression de londe, une augmentation de la frquence et un diminution
de la longueur d'ondes. Le rayonnement peru par les analytes en solution est donc plus
nergtique.
4- Liodobenzene contient un atome halogne (iode) qui est reconnu comme un dsactivant actif.
Liode est un dsactivant par collision trs efficace. Plus la concentration en iodobenzene
augmente, plus la frquence des collisions augmentent et plus lintensit de fluorescence
diminue (I I
0
/I augmente)
5- Ce graphique est du type Stern-Volmer.
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Solution Q. 5
1-
2- a) FAUX. En absorption UV-Vis, la mesure de la transmittance est relative (T = I/I
0
). Une
augmentation de lintensit noffre aucun avantage immdiat puisquen augmentant I
0
, I
augmente de manire proportionnelle et T reste inchang. Cependant, il existe une limite
infrieure dintensit utiliser pour effectuer des analyses sensibles. Il existe aussi une limite
suprieure pour ne pas dcomposer lchantillon.
b) FAUX. La grande majorit des molcules organiques et inorganiques absorbent < 200 nm.
ces , lnergie porte aux lectrons dans la molcule est assez grande pour exciter les
lectrons des liens chimiques les plus simples et les moins photosensibles.
c) VRAI. Une lampe au tungstne peut tre utilis en IR si elle est adapte pour mettre des
longueurs dondes plus grandes (IR 2500 nm - 25 000 nm). Il suffit de chauffer le filament de
plus hautes temprature (effet de corps noir) dans un gaz inerte pour quelle ne soxyde pas en
prsence dO
2
.
3- Lampe au xnon
4- Cramique de haute puret ou dopes.
Deutrium D
2
Tungstne
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Solution Q. 6
1- Le seuil de coupure de lactone est trs haut, soit prs de 350 nm. Donc, il serait
seulement possible danalyser la b-carotne qui possde un lmax vers 450 nm .
2- Les solvants tant des molcules organiques, ils possdent un spectre dabsorption qui leur
est propre. Ce spectre peut interfrer avec celui de lanalyte dintrt en solution. Il faut choisir
le solvant danalyse en consquence des produits analyss. Le seuil de coupure est une
proprits qui aide faire ce choix. (T > 90%)
Comme les maximums dabsorption de laspirine et de la cafine se situent vers 270 nm, les
solvants adquats pour lanalyse seraient : leau, lactonitrile, lhexane, le mthanol, lthanol
3- Assumer l = 1cm Produit: (M
-1
cm
-1
) [x] (M)
A = 0,5 b-carotne 89 000 5,62x10
-6
cafine 1120 4,46x10
-4
aspirine 425 1,18x10
-3
actone 12 4,16x10
-2
4- Les produits contenant une fonction acide ou basique: cafine et aspirine
[ ]
l
A
x =
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25
I
n
t
e
n
s
i
t

d
e

f
l
u
o
r
e
s
c
e
n
c
e

(
u
.
a
.
)
Solution Q. 7
1 et 2-
Excitation mission

EX
= 410 nm
M
= 540 nm
Shift
130 nm
Longueur donde (nm)
3-
128 , 0
71 , 0 1
2476 / 92
/ /
/
0 0 0
0
0
=

=
I I I I
I I
I I
I
F
F
F
F
?
2476
92
0
=
=
=
I
I
I
f
71 , 0 / 10
) / log( ) log(
15 , 0
0
0
= = =
= =
=

I I T
I I T A
A
A
4- T = 0,71 (calcul en 3)
[ ]
] [
) log(
) log(
) (
150000
10 1 1
15 , 0
] [
1 1
6
x l
T
T A
T f
cm M
M cm
x l
A
x l A

=
=
=
=

=
= =


5- Pour augmenter le rendement
quantique de la fluorescence, il
suffit de diminuer la frquence
des dsactivations non-radiatives.
Ceci est possible en minimisant
les collisions par un abaissement
de la temprature ou une
augmentation de la viscosit du
solvant de lanalyse.
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Solution Q. 8
1 et 2- Rfrez-vous vos notes de cours
3- Le graphique du mlange des trois produits donne les absorbances maximales suivantes:

322
; 0,24
358
; 0,69
370
; 0,11
Soit: [produit 1] = x [produit 2] = y [produit 3] = z
Nous avons 3 inconnus, il nous faut 3 quations pour rsoudre le problme:

322
0,24 = 5004x +2961y +9178z

358
0,62 = 15 632x + 8305y + 7z

370
0,12 = 39x + 13409y + 0z
Solution:
x = 3,5x10
-5
mol/L 8,8x10
-6
mol / 250 mL
y = 8,8x10
-6
2,2x10
-6
z = 4,2x10
-6
1,05x10
-6
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Solution Q. 9
Pic Aire Structure
1625 2208 feuil-
1646 6532 dsord.
1652 598 helix-
1665 2640 tour-
1681 2552 tour-
1695 832 dsord.
1709 293 dsord.
tot.= 15655
Composition; rayon X I R
-helix 64 4
-sheet 1 14
-turn 23 33
dsordonn 1 49
A
B
A
1/2
Assignations
rgion dsordonne 1600-1614 cm
-1
feuillet 1615-1640
rgion dsordonne 1637-1646
hlice 1645-1662
tours 1663-1682
feuillet 1682-1695
rgion dsordonne 1696-1710
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Solution Q. 10
Il faut se rappeler que lors dune 2
me
drive, le maximum dabsorbance est un pic ngatif
et les points dinflexions de chaque pis dabsorption donnent des pics positifs.

Absorbance
ou
absorptivit molaire
2
2
2
2

d
d
ou
d
A d
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Solution Q. 11
1- Il est impossible danalyser ces trois produits en mme temps car, leurs spectres
dabsorptions ne montrent pas trois pics distincts et suffisamment bien spars.
2- Il faut des o la diffrences dabsorption est maximale (plus prcisment la diffrence
dabsorptivit molaire) et se situer des maximum dabsorption pour tous les analytes.
(1 et 2) Encore l, le problme se pose, les spectres sont trop semblables
(1 et 3) 1- 230 ou 255 nm 3- 315 ou 380nm optimal pour 255 /380
(2 et 3) 2- 230 ou 260 nm 3- 315 ou 380nm optimal pour 260 / 380
1
2
3
255
260
315
365
380
320
230
3- Il serait possible danalyser ces trois produits simultanment par spectroscopie
diffrentielle. La rgion la plus plausible serait celle entre 230-280 nm puisque les pics y
sont les moins larges. Rappelez-vous quil y a discrimination des pics larges en
spectroscopie diffrentielle ce qui diminuerait le rapport S/N.
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Solution Q. 12
1- Il sagit de la quatrime drive puisque les
maximums dabsorption donnent des pics positifs
dans le spectre diffrentiel. Les
MAX
de A et C ne
concordent pas exactement avec les maximum de
la 4
me
drive; cest un inconvnient de la
spectroscopie diffrentielle.
3- A; 0,24 B; 0,4 C;0,19
4-
a) x; la longueur donde, y; la quatrime drives
de labsorbance, m; la sensibilit (la pente) de
ltalonnage par la mthode diffrentielle.
b) x; ce sont les longueurs dondes balayes lors de
lacquisitions du spectre, y; la valeur de la drives
telle que calcule par lalgorithme Savitsky-Golay,
m; obtenue suite une rgression linaire sur les
points danalyses de solution talons.
c) [C]=(y-b)/m=4,8x10
-5
M
330 340 350 360 370 380 390 400 410 420 430
-0,5
-0,4
-0,3
-0,2
-0,1
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
330 340 350 360 370 380 390 400 410 420 430
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
550
600
A
B
C
m
A
.
U
.

4
4
d
A d

A
B
C
[ ] b C l
d
A d
b C m
d
A d
b mx y + = + = + = ] [
4
4
4
4


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Solution Q. 13
UV-Vis Fluorescence Infrarouge
- UV-Vis et IR. La mesure effectu est celle de la quantit dnergie absorbe par rapport
celle qui a t fournie.
- Florescence. La mesure effectu est celle de lintensit de la radiation mise: la quantit
dnergie rmise suite labsorption de la radiation excitatrice.
- IR. Majoritairement, cest lexcitation vibrationnelle (mais aussi lexcitation rotationnelle) des
liens chimiques qui est observ en spectroscopie infrarouge. Ces excitations proviennent des
lectrons de ltat fondamental qui se dplacent dans leurs tats vibrationnels et rotationnels
permis.
h
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Poudre
Complexes inorganiques
Films
Granuliomtrie
Analyse quantitative
IR moyen
IR lointain
IR proche
Rflexion totale
Rflexion totale attnue
Rflexion diffuse
Photoacoustique
12 800 4000 cm
-1
4000 200 cm
-1
200 10 cm
-1
Solution Q. 14
CHM 2971 H2006
33
Solution Q. 15
Vous cherchez doser la phnylalanine et la tyrosine dans un chantillon alimentaire par spectroscopie
infrarouge. Comment vous sera-t-il possible de distinguer entre les patrons spectroscopique de ces deux
acides amins? Spcifiez deux signaux caractristiques (en bleu). Les spectres des deux a.a. sont les
suivants.
CHM 2971 H2006
34
3203 cm
-1
O-H stretching alcool
746 cm
-1
et 699 cm
-1
balancement C-H
aromatique monosubstitu
803 cm
-1
torsion C-H
aromatique disubstitu (para)
1609 cm
-1
longation N-H
1562 cm
-1
longation N-H ou C-H
3300-2500 cm
-1
O-H stretching acide
3300-2500 cm
-1
O-H stretching acide
~3400 cm
-1
N-H longation 1250-1360 cm
-1
C-N longation
1250-1360 cm
-1
C-N longation
1591 cm
-1
longation N-H ou CH
1495 cm
-1
vibration aromatique
1513 cm
-1
vibration aromatique