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NORMAS DE

LABORATORIO
Pontificia Universidad Catlica de Valparaso
Facultad de Ciencias Bsicas y Matemticas
Instituto de Biologa
Obligaciones
delantal OBLIGATORIO.
80% de asistencia.
entrada al laboratorio en horario fijado.
ingreso al prctico con la gua de
laboratorio pertinente y con los
materiales solicitados.
prohibido el cambio de seccin.
pertenencias guardadas en los lockers.
pelo largo tomado.
prohibido fumar, beber y/o comer.
comportamiento adecuado y
respetuoso con docentes, ayudantes y
compaeros.
dejar los microscopios apagados y
desenchufados.
Obligaciones
todo material debe quedar limpio al
final del prctico.
cuidado con el material utilizado.
cualquier material cortopunzante roto
debe ser debidamente desechado.
celulares apagados o en tono de
silencio.
profundizar los conocimientos previo
a la actividad.
Obligaciones
Evaluaciones
Todas las clases se realizar un control de
entrada. (20% del laboratorio)
Primera prueba de laboratorio, terica-
prctica. (45% del laboratorio)
Segunda prueba de laboratorio, terica. (35%
del laboratorio)
Programa de actividades
Lab 1. Microscopia ptica
Sistemas del microscopio
Poderes del microscopio
Formacin de la imagen
Programa de actividades
Lab 2. Formas y tamaos celulares
Reconocimiento de tipos
celulares en tejidos.
Determinacin de factores
que determinan tipos
celulares.
Tejido epitelial y conjuntivo
Tejido muscular y nervioso
Lab 3. Tipos de microscopia
Programa de actividades
Conocimiento
terico de los tipos
de microscopia
utilizados
comnmente en
biologa celular.
Tipos de tcnicas
en la preparacin de
las muestras.
Lab 3. Frotis de sangre.
Programa de actividades
Obtencin de muestras
histolgicas.
Observacin y
caracterizacin de
clulas sanguneas.
Lab 4. Fagocitosis
Programa de actividades
Obtencin de
hemocitos de
Mytilus edulis.
Observacin de
fagocitosis en
clulas de levadura.
Caracterizacin de
las etapas de la
fagocitosis.
Lab 5.
Citoesqueleto y Mitosis.
Programa de actividades
Lab 6. Conteo y viabilidad celular.
Programa de actividades
Tcnica experimental para
estimar viabilidad de clulas
de Saccharomyces cerevisiae
en diferentes condiciones.
Conteo de clulas en cmara
de neubauer.
Programa de actividades
Lab 7. Extraccin de protenas
Lisis Celular
Extraccin
mecnica
Buffer de lisis
Lab 8. Cuantificacin de protenas.
Mtodo de Bradford.
Programa de actividades
Realizar una curva de
calibrado utilizando BSA
como protena patrn.
Determinar la
concentracin de protena
total en una muestra.
Lab 9. Electroforesis de protenas
Programa de actividades
Conocer la tcnica de
separacin de
protenas en geles de
A/BA.
Calcular el PM
apararente de una
muestra problema.
Laboratorio N 1
Microscopa ptica
Laboratorio Biologa Celular
Microscopia
Una clula animal tpica mide de 10 a 20 m de dimetro, lo que
es unas 5 veces ms pequeo que la partcula ms pequea visible
al ojo humano desnudo. Las clulas animales no-solo son pequeas,
sino que tambin son incoloras y transparentes.
La descripcin de sus detalles internos se debe en gran parte, a
que durante la ltima parte del siglo XIX, se desarrollaron
variadas tinciones que permitieron aumentar el contraste lo
suficiente como para hacer evidentes las diferentes
estructuras intracelulares.
1 metro = 100 centmetros
1 centmetro = 10 milmetros
1 milmetro = 1000 micras
1 micra () =1.000 nanmetros
1 nanmetro = 10
Sistemas que componen un
Microscopio
Sistema Mecnico Sistema de
Iluminacin
Sistema de
Amplificacin
Sistema Mecnico
Pie
Columna
Platina
Tubo o can
Revolver o Tambor
Tornillos de focalizacin
Macromtrico
Micromtrico
Carro de Vernier
Sistema de iluminacin
Fuente luminosa
Espejo
condensador
Diafragma Iris
Anillo porta filtro
Sistema de Amplificacin
Lentes Oculares
Lentes objetivos
A. Oculares
B. Revolver
C. Lentes objetivos
D. Platina
E. Carro de vernier
F. Condensador.
G. Tornillo macromtrico.
H. Tornillo micromtrico
I. Diafragma Iris
J. Tornillo
K. Interruptor
L. Potencimetro
M. Brazo
N. Pie
M
Sistema de iluminacin y formacin
de la imagen
Propiedades del microscopio
Poder de Resolucin
Poder de Penetracin
Poder de Aumento
Poder de Definicin
Poder de Resolucin
Capacidad del instrumento para dar imgenes
distintas de puntos situados muy cerca uno del
otro.
Poder de resolucin = 1______
Lmite de resolucin
RELACIN INVERSAMENTE
PROPORCIONAL
Limite de resolucin (LR)
Distancia mnima a la cual se deben encontrar
dos objetos para verlos por separado.
LR = K _ __
AN
K = 0.61 (para microscopios pticos)
= longitud de onda de la luz blanca (0.5 m).
AN = apertura numerica
Apertura Numrica
Producto (n sen ) que aparece en la expresin
del poder de resolucin
A.N = n sen
n= ndice de refraccin del medio:
Aire = 1
A. inmersin = 1,4
Semiangulo de
apertura
Objetivo
Semingulo de apertura
AN = n sen
Ejercicios:
Calcule el limite de resolucin y
posteriormente el poder de resolucin con los
siguientes datos:
I:
- Lambda 0.5 micrmetros
- ndice de refraccin del aire y aceite
- Semiangulo igual a 14,4
II:
- Lambda 0.4 micrmetros.
- ndie de refraccin del aire y aceite.
- ngulo de apertura de 60
Muestra de Hilos de colores
Con el objetivo de 5x Cuntos colores de
hilos distintos distingue?
Al pasar al objetivo de 10x Qu sucede? y al
de 40x
Qu explicacin le da usted a esto?
Para observar uno de los hilos sobre el otro
con mas precisin que estructura (parte) del
microscopio deber mover? Por qu?
Poder de definicin:
Es la capacidad del microscopio de dar imgenes
ntidas, de contornos precisos
Poder de Penetracin
Cualidad de las lentes que permite averiguar
hasta que lmite podemos reconocer detalles de
estructuras situadas a diferentes niveles de la
preparacin.
Ejercicio:
Con los hilos de colores Cmo varia la penetracin
(profundidad) cuando se cambia de objetivo de 10x al de
40x?
Determinar con cual de los aumentos se obtiene:
Mayor amplitud de campo
Menor distancia de trabajo
Mayor poder de resolucin
Poder de aumento
Razn que existe entre el tamao de la imagen producida
por el microscopio y el tamao del objeto observado.
Ejercicio:
Si tengo el objetivo del microscopio en 40x y el ocular en
10x, en cuanto veo aumentada la imagen.
Aumento total = aumento lente objetiva x aumento lente ocular
Directamente proporcional
Muestra de Papel milimetrado
Observar una muestra de papel milimetrado con una
letra impresa ( 5X)
Con un papel milimetrado medir la distancia entre el
objetivo y la preparacin en el portaobjeto.
Usando las lneas del papel milimetrado determine el
dimetro del campo observado, luego el radio y a
partir de ste calcule el rea del campo.
Usando las lneas del papel milimetrado determine el
tamao de la letra.
Enfocar la letra con el objetivo 10X:
Mida la distancia entre el lente objetivo y la
preparacin con un papel milimetrado.
Describa como se ve la letra (derecha, invertida,
difusa, etc)
Desplace la platina a la derecha y a la izquierda
en que direccin se mueve la letra?
Usando las lneas del papel milimetrado, calcule el
rea del campo observado
Muestra de Papel milimetrado

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