0btener una muestra de sangre

de un paciente es mucho ms
que insertar una aguja en la
vena o extraer una gota de
sangre de un dedo. Es el primer
eslabn de una cadena de
eventos que se completa cuando
el mdico recibe los resultados
de las pruebas de su paciente y
es el principio de control de
calidad en el laboratorio clnico.
TECNICA DE LA PUNCIN VENOSA
1. eri!icar que las etiquetas coincidan con la solicitud de las pruebas.
". #e identi!ica al paciente comprobando su nombre completo. $o se
debe extraer muestra alguna sin identi!icar adecuadamente al
paciente.
%. #i se solicita una muestra en ayunas& debe comprobarse que el
paciente no ha ingerido alimentos. 'ay que dirigirse al paciente e
in!ormarle sobre el procedimiento.
(. #e debe colocar adecuadamente al paciente& seg)n se encuentre
sentado o en dec)bito prono& para tener acceso !cil a la !osa ante*
cubital.
+. #e debe preparar todo el material& incluidos los tubos& las ligaduras&
los objetos para limpiar la piel y las jeringas si son necesarias.
,. #e solicita al paciente que cierre el pu-o para que las venas resulten
ms palpables.
.. #e selecciona la vena adecuada para la puncin.
/. #e limpia la 0ona de puncin con una torunda humedecida con alcohol
isoproplico al .0 1 o yodopovidona al 1 1. #e comien0a en el punto
de la puncin y se prosigue la limpie0a hacia !uera siguiendo un
movimientos espiral.
2. #e aplica un torniquete varios centmetros por encima de la 0ona de
puncin. $o dejarlo ms de un minuto.
10. #e !ija la vena tanto& por encima como por debajo del lugar de
puncin& con ayuda de los dedos pulgar y medio o ndice y pulgar.
11. #e reali0a la venopuncin3 a4 se penetra la piel con la aguja !ormando
un ngulo de 1+5 con el bra0o y con el bisel hacia arriba se sigue la
direccin de la vena& b4 se introduce la aguja con suavidad pero con
rapide0 para reducir las molestias. $o hay que 6enterrar7 la aguja& c4
si se utili0a una aguja& se tira hacia atrs del mbolo& con tensin
lenta y uni!orme a medida que la sangre va !luyendo en su interior& d4
si se utili0a un tubo al vaco& en cuanto la aguja haya penetrado en la
vena se dirigir el tubo todo lo posible haca adelante apoyndose en
el dispositivo de sujecin 8 de la misma !orma en que se introduce el
mbolo de una jeringa4. 9l mismo tiempo mantenga !irmemente la
aguja en su lugar. :na ve0 que se haya llenado el tubo& se retira
cogindolo por su extremo y tirando suavemente de l. #e me0cla la
sangre con el anticoagulante por inversin suave. #i la muestra ha
sido extrada con jeringa se trans!erir la sangre a los tubos
correspondientes despus de retirar la aguja.
1". ;uando la sangre comience a !luir se libera el torniquete. :na ve0
obtenida la muestra& hay que indicar al paciente que relaje el pu-o y
que no 6bombee7 con la mano.
1%. coloque suavemente una torunda de algodn estril sobre el punto de
puncin. #e extrae la aguja 8con un movimiento rpido4 y a
continuacin se ejerce presin sobre la 0ona. $< aplique masaje.
=mportante3 compruebe el estado del paciente& veri!icando si se ha
mareado y si la hemorragia est controlada.
En el procedimiento de la venopuncin debe observarse un 6orden de
extraccin7 con respecto a los tubos. >ara evitar la posibilidad de
contaminacin se introduce la muestra en los tubos sin aditivo antes que
en los que contienen aditivo& y se llenan los dems tubos como sigue3
citrato& heparina& E?@9& A% y oxalatoB!l)or.
MANUAL DE
PROCEDIMIENTOS
PARA LA TOMA,
SEPARACION,
CONSERVACION Y
TRANSPORTACION
DE
MUESTRAS PARA EL
LABORATORIO.
OBTENCION Y MANEJO DE LAS FRACCIONES SANGUINEAS
Coagulaci !" la# $u"#%&a#. Ca sangre coagula normalmente entre "0 y
,0 minutos& ms rpido si el tubo de extraccin contiene un activador&
ms lentamente si se encuentra en hielo. Ca !ormacin del cogulo debe
ser completa antes de la centri!ugacin& si no& la !ormacin de la !ibrina
causar problemas por coagulacin en el instrumental y molestar al
pipeteo.
Cos tubos con sangre durante su transporte al laboratorio& deben
mantenerse en posicin vertical y con los tapones hacia arriba para
!avorecer la coagulacin y reducir la agitacin de la muestra. 9dems&
esta posicin reduce la posibilidad de hemlisis y la posibilidad de
contaminacin de las muestras con sustancias liberadas de los tapones.
FRACCIONAMIENTO DE LAS MUESTRAS
>ara separar la parte lquida de la sangre 8plasma o suero4 de los
componentes celulares& se utili0a la !uer0a centri!uga generada por un
equipo del mismo nombre. Este procedimiento implica las !ases de3
precenti!ugacin& centri!ugacin y poscentri!ugacin
RECOMENDACIN PARA LA OBTENCIN DE SUERO Y PLASMA'
Su"&o#' Cos especimenes deben estar coagulados antes del
centri!ugado. $o es aconsejable desprender el cogulo del tubo con un
aplicador. El uso de una varilla o aplicador de madera o un dispositivo
similar para despegar el cogulo adherido al tapn del tubo o a las
paredes del mismo& no es recomendable. Ca remocin del cogulo es una
!uente potencial de hemlisis. #i esto !uera necesario& se debe tener
gran cuidado al retirar el tapn para evitar salpicaduras. Es importante
volver a tapar el tubo y asegurarse de que el tapn permanece en su
sitio.
>rcticamente se ha eliminado la adhesin del cogulo mediante mejoras
tcnicas en el dise-o de los tubos y tapones.
Ca coagulacin espontnea y completa ocurre normalmente dentro de %0
a ,0 minutos a la temperatura ambiente 8""D; a "+D;4. El tiempo de
coagulacin puede variar si el paciente se encuentra en tratamiento con
anticoagulantes.
Pla#$a#' #e utili0a un tubo de recoleccin que contiene un
anticoagulante cuando se requiere el plasma. Cos especimenes
anticoagulados se pueden someter a centri!ugacin minutos despus de
la recoleccin.
;ualquier dispositivo que contenga ya sea un activador de la coagulacin o
un anticoagulante& debe ser invertido suavemente de + a 10 veces
despus de la recoleccin de la sangre para asegurar la accin que se
pretende del aditivo.
FASES DE PRECENTIFUGACION
P&"c"%&i(ugaci' Es el perodo de tiempo despus de la recoleccin del
espcimen y antes de su centri!ugacin.
S"l"cci !"l ")ui*o !" c"%&i(ugaci' El primer paso es cerrar los
tubos con los tapones. $o debe centri!ugarse tubos abiertos& a causa del
aerosol !ormado por el calor y vibracin de la centr!uga. Cos aerosoles
incrementan el riesgo de in!eccin del personal. Ca centri!ugacin de
tubos con sangre sin tapn puede tambin producir la evaporacin de la
muestra.
El tipo de centr!uga ms com)nmente utili0ado en el laboratorio clnico
es el de portatubos oscilante u hori0ontalE otros tipos de centri!ugas
comprenden las de ngulo !ijo& ultracentr!ugas y centri!ugas para !ines
especiales. En los cabe0ales o rotores oscilantes la muestra se coloca en
portatubos que se encuentran en posicin vertical cuando el rotor est
detenido. 9 medida que el rotor gira& los portatubos oscilan hasta una
posicin hori0ontal con respecto al eje de rotacin. Ca centr!uga con
cabe0al de ngulo !ijo tiene los portatubos en una posicin !ija&
generalmente en un ngulo de +"D respecto al eje vertical alrededor del
cual rota. 9 causa de su construccin& las centri!ugas de cabe0al
hori0ontal pueden alcan0ar velocidades de harta aproximadamente
%&00rpm.& alrededor de 1&.00 g& sin producir un excesivo calor generado
por la !riccin entre el cabe0al y el aire. >or otra parte las centri!ugas
de ngulo !ijo& a causa de su dise-o ms aerodinmico.& producen menos
calor y pueden obtenerse velocidades en el intervalo de las .&000 rpm&
aunque esto no es requerido en el uso clnico de la rutina. Cas muestras
centri!ugadas en un cabe0al hori0ontal hacen que las clulas viajen a lo
largo de toda la longitud de la muestra para alcan0ar el !ondo del tuboE
las clulas pueden volverse a me0clar con el suero o plasma cuando los
tubos caen de la posicin hori0ontal a vertical al disminuir la velocidad
del cabe0al al detenerse. Este problema es mas !recuente cuando se
utili0a el !reno de centri!uga que cuando se la deja detenerse
gradualmente hasta el punto de inmovilidad. El reme0clado no ocurre
cuando se utili0an rotores de ngulo !ijo& y donde las clulas tienen
menos distancia que correr3 la e!iciencia de la separacin es mayor y los
portatubos no cambian de posicin durante la desaceleracin.
En aquellos casos en la que la muestra esta siendo ensayada para
determinar una sustancia inestable coma lactato& el calor generado por
una centri!uga causa el deterioro de la muestra. >ara prevenir que esto
no suceda& se debe utili0ar una centri!uga re!rigerada. Cas muestras que
van a ser anali0adas en busca de sustancias inestables a bajas
temperaturas& no deben centri!ugarse jams en !ro 8 como en el caso de
las isoen0imas de la lactato deshidrogenasa4.
Cas centri!ugas para determinar vol)menes de hemates o centri!ugas de
microhematocrito operan de 11&000 a 1+&000 rpm con una !cr hasta
1(&000 g. Cas ultracentri!ugas son generalmente utili0adas en
investigacinE sin embargo& una peque-a ultracentri!uga de aire
comprimido esta disponible y opera de 20&000 a 100&000 rpm generando
una mxima !cr de 1./&000 g. Este tipo de centri!ugas ha sido utili0ado
para separar quilomicrones del suero& !raccionar lipoprotenas& reali0ar
estudios de !ijacin de drogas y preparar tejidos para pruebas de
receptores de hormonas esteroides.
FASE DE CENTRIFUGACIN
C"%&i(ugaci' Esta !ase comprende el periodo de tiempo cuando el
espcimen esta dentro de la centr!uga.
A*licaci !" la (u"&+a c"%&i(uga &"la%i,a -(u"&+a " g.
Ca !uer0a centri!uga relativa 8!cr4 es un concepto mas signi!icativo que
el de revoluciones por minuto 8rpm4. #e recomienda que los laboratorios
describan los requerimientos de centri!ugacin en trminos de !cr. El
termino rpm es de uso limitado sin ninguna indicacin sobre el modelo de
centri!uga que se emplea y su rotor o cabe0al especi!ico& o su radio
e!ectivo.
Existen nomogramas que gra!ican la !cr& las rpm& y el radio rotacional de
la centri!uga en cm. >ara permitir la conversin de los trminos.
FASE DE POSTCENTRIFUGACIN
Po#%c"%&i(ugaci' Es el tiempo despus de la centri!ugacin del
espcimen y previo a la separacin de una alcuota de suero o plasma en el
anlisis.
R"c"%&i(ugacio' Cos especimenes no deben ser sometidos a
centri!ugacin ms de una ve0& a menos de que la recentri!ugacion se lleve a
cabo muy poco tiempo despus de la separacin original.
El regreso al tubo original despus de haber separado el suero o plasma&
debe evitarse& ya que ha alterado la relacin volumen de aguaFplasma a
eritrocitos y cualquier prdida de analito& causado o no por la
recentri!ugacion puede dar un resultado errneo. :n espcimen 8tubo
original4 que contiene un dispositivo de separacin nunca debe ser sometido
a recintri!ugacion.
/0 REGLAS Y ALGUNAS RECOMENDACIONES PARA
MANTENER 1FRESCAS2 LAS MUESTRAS
1.BEl procedimiento es normado por la estabilidad de la muestra. Cas causas
ms importantes para las alteraciones de loes especimenes son3
Getabolismo de las clulas sanguneas.
EvaporacinFsublimacin.
Heacciones qumicas.
?escomposicin por !actores microbiolgicos.
>rocesos osmticos.
E!ecto de la lu0.
?i!usin de gases.
".B El transporte rpido y los tiempos de almacenamiento cortos mejoran la
!iabilidad de los resultados de laboratorio.
%.B Cos especimenes y muestran se conservan mejor en re!rigeracin& con
las excepciones a la regla.
(.B Cos especimenes siempre deben guardase en contenedores cerrados
para evitar la evaporacin.
+.B El peligro de la evaporacin tambin existe en los re!rigeradores
8condensacin de la humedad en elementos !rescos.
,.B Cos problemas de almacenamiento se reducen si el sistema disponible es
probado.
..B Cos agente de separacin 8ejemplo gel4 mejoran el rendimiento del
sueroFplasma y permiten mantenerlos en los tubos originales sobre la
barrera.
/.B Evite agitar los contenedores de las muestras 8sistema de expedicin de
tubos neumticos43 riesgo de hemlisis.
2.B Cos contenedores de las muestras que contienen sangre deben
mantenerse siempre verticalesE el procedimiento de coagulacin se acelera.
10.B El material in!eccioso debe etiquetarse y manejarse con
particularmente cuidado.
OTRAS REGLAS ESPECIALES Y RECOMENDACIONES
UTILES PARA EL MANEJO DE LAS MUESTRAS
1.B Evite guardar sangre entera o total& revise la in!ormacin sobre los
analitos sensibles.
".B Evite la gluclisis en muestras para determinar glucosa y lactato. Ca
gluclisis puede ser evitada por la adicin de un inhibidor junto con un
anticoagulante.
%.B Evite por otra parte el e!ecto de la lu0E esta a!ectara disminuyendo los
valores de bilirrubina& vitamina ;& por!irinas& cretincinasa 8;A4& y cido
!lico.
(.B Hedu0ca el contacto con el aire hasta donde sea posible. #i esto no se
hace& los e!ectos de evaporacinFsublimacin producirn un claro aumento
en la concertacinFactividad de todos los componentes no voltiles. Esto
aplica particularmente para el caso cuando el volumen de la muestra es
relativamente peque-o y el rea de la super!icie es relativamente grande.
+.B ;on toda seguridad los analitos& los especimenesFmuestras& no deben
someterse a congelacin pro!unda. $o observar esto puede producir
desviaciones en los resultados para algunos analitos.
,.B :na !uente com)n de error es el me0clado inadecuado de muestras
congeladas pro!undamente& despus de descongelarse.