UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE

GROHMANN

FACULTAD DE INGENIERA

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE
INGENIERIA QUIMICA

Bioqumica
Practica de laboratorio N: 05
Protenas-I

PROFESORA: Ing. Elia Cabrera Navarrete

ALUMNO: Jhonatan Walter Flores Mamani

CODIGO: 2012-36029

GRUPO: B

FECHA DE REALIZACION: 7 de octubre del 2013

FECHA DE ENTREGA: 15 de octubre del 2013

TACNA-PERU

2013



A. OBJETIVOS:
- Identificar experimentalmente algunas propiedades fsicas y qumicas
de las protenas.
- Efectuar algunas reacciones de reconocimiento de protenas empleando
reactivos especficos
B. FUNDAMENTO TEORICO:
Las protenas son biomolculas formadas bsicamente por carbono,
hidrgeno, oxgeno y nitrgeno. Pueden adems contener azufre y en
algunos tipos de protenas, fsforo, hierro, magnesio y cobre entre otros
elementos.
Pueden considerarse polmeros de unas pequeas molculas que reciben el
nombre de aminocidos y seran, por tanto, los monmeros unidad. Los
aminocidos estn unidos mediante enlaces peptdicos. La unin de un
bajo nmero de aminocidos da lugar a un pptido; si el nmero de
aminocidos que forma la molcula no es mayor de 10, se denomina
oligopptido, si es superior a 10 se llama polipptido y si el nmero es
superior a 50 aminocidos se habla ya de protena.
Por tanto, las protenas son cadenas de aminocidos que se pliegan
adquiriendo una estructura tridimensional que les permite llevar a cabo
miles de funciones. Las protenas estn codificadas en el material gentico
de cada organismo, donde se especifica su secuencia de aminocidos, y
luego son sintetizadas por los ribosomas.
Las protenas desempean un papel fundamental en los seres vivos y son
las biomolculas ms verstiles y ms diversas. Realizan una enorme
cantidad de funciones diferentes, entre ellas funciones estructurales,
enzimticas, transportadora.

C. MATERIALES Y REACTIVOS:
MATERIALES:
- 8 tubos de ensayo
- 1 probeta de 10 ml
- Goteros
- Pinzas para tubo de ensayo
- Gradilla
- Cocina elctrica malla de
asbesto
- Vaso de precipitado
- Pipetas
- Piseta
- Termmetro
- Frasco gotero
-

REACTIVOS:
- Clara de huevo
- Cloruro de mercurio al 5%
- Acetato de plomo al 10 %
- Etanol
- cido ntrico concentrado
- Hidrxido de sodio al 10%
- Reactivo de milln
- Casena
- Ninhidrina
- Hidrxido de sodio al 40%
- Sulfato de cobre (II) al 1%
- Alfa- naftol al 1%
- cido sulfrico
- Agua destilada


D. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
1. Precipitacin y desnaturalizacin de protenas:
a) Codificamos 2 tubos de ensayo y agregamos a cada uno 1 ml de
clara de huevo (albumina); luego aadimos al primer tubo 4
gotas de cloruro de mercurio al 5% y al segundo agregamos
acetato de plomo al 10%.

















b) Medimos en un tubo de ensayo 1 ml de nuestra muestra proteica
y luego aadimos 0.5 ml de etanol, agitamos y anotamos las
observaciones.






2. Efecto del calor:
a) En un tubo de ensayo medimos 2 ml de nuestra muestra
proteica y lo llevamos a bao Mara. Colocamos un termmetro
dentro del tubo de ensayo y comenzamos a calentar. Observamos
cuando la protena se coagulo y registramos su temperatura.


A B

2
















3. Reaccin xantoproteica:
a) En un tubo de ensayo colocamos aproximadamente 2 ml de
nuestra solucin proteica, enseguida aadimos 0.5ml de cido
ntrico concentrado. Calentamos en bao mara por 3 minutos.
Dejamos enfriar y observamos el cambio de color; luego
agregamos al tubo de ensayo una solucin de hidrxido de sodio
al 10% hasta que esta solucin cambio de color y anotamos sus
cambios.










4. Reaccin de Milln:
a) Medimos en un tubo de ensayo 2 ml de albumina y enseguida
agregamos 5 gotas del reactivo de milln; calentamos el tubo en
bao Mara hasta observar cambio de coloracin. Anotamos sus
observaciones mientras el tubo enfri.
b)








74C

.


5. Reaccin con Ninhidrina:
a) Colocamos una pequesima cantidad de casena en un tubo y
disolvimos con 1 ml de agua destilada.
b) Luego agregamos 5 gotas de Ninhidrina y calentamos
suavemente en bao Mara hasta observar el cambio de
coloracin.











6. Reaccin de Biuret:
a) En un tubo de ensayo medimos 2 ml de albumina, agregamos 1
ml de NaOH al 40% y homogenizamos bien ambas soluciones.
b) Agregamos gota a gota una solucin de sulfato de cobre (II) al 1
% hasta observar cambio de coloracin.










7. Reaccin de Molish:
a) Medimos 2 ml de albumina en un tubo de ensayo y agregamos 4
gotas de una solucin alcohlica de -naftol al 1%. Agitamos
bien hasta k la homogenizacin sea correcta.
b) Inclinamos el tubo de ensayo y agregamos con precaucin cido
sulfrico hasta completar 1 ml.

4



E. RESULTADOS EXPERIMENTALES:

1. Precipitacin y desnaturalizacin de protenas:
- Al agregar cloruro de mercurio ala albumina pudimos observar un
precipitado de color blanco y en las paredes de este tubo partculas de
color blanco que rodeaban las paredes del tubo, de igual manera al
aadir acetato de plomo a la albumina del segundo tubo observamos
tambin un precipitado de color blanco pero con menos intensidad que
el primer tubo.
- En el tercer tubo al agregar etanol a la albumina pudimos observar que
el etanol disolvi a la albumina teniendo una solucin de color blanco
tenue.

2. Efecto del calor:
- En este ensayo pudimos observar que la albumina a los 74c se coagulo
completamente a la accin del calor.
REACCION:







Anlisis:
La desnaturalizacin de la protena ocurre cuando las atracciones
intermoleculares dbiles conservan con delicadeza la estructura
terciaria de una protena globular. Con frecuencia un ligero cambio en
la temperatura o en el pH altera su estructura terciaria la que es
causante de que la protena se desnaturalice. La desnaturalizacin se
efecta en condiciones tan suaves que la estructura primaria
permanece intacta, pero la estructura terciaria se desdobla de una
forma globular especfica a una cadena enrollada al azar.

3. Reaccin Xantoproteica:
- En este ensayo al agregar cido ntrico a la solucin esta se volvi de
color blanco que al llevarlo a bao Mara se torn de color amarillo,
luego que se enfriara y agregar hidrxido de sodio form un precipitado
de color amarillo con zonas de color naranjas, formando el picrato de
sodio.
REACCION:

+

Anlisis:
La reaccin de xantoproteica reconoce grupos aromticos, o sea
aquellas protenas que contengan tanto tirosina como fenilalanina, con
el cual el cido ntrico forma compuestos nitrados amarillos.

4. Reaccin de Milln:
En este ensayo al agregar el reactivo de Milln y llevarlo a bao Mara
resulto un precipitado de color amarillo intenso.
REACCION:














Anlisis:
El reactivo de Milln reconoce residuos fenlicos, o sea aquellas
protenas que contengan tirosina. Las protenas se precipitan por
accin de los cidos inorgnicos fuertes del reactivo, dando un
precipitado blanco que se vuelve gradualmente rojo al calentar.

5. Reaccin de Ninhidrina:
En este ensayo la solucin final que se obtuvo en el tubo de ensayo fue
de color azul pero en la superficie de esta solucin haba espuma pero
en poca cantidad.
REACCION:








Albumina Milln










Anlisis:
Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y
uno carboxilo libre, reaccionaran con la Ninhidrina. La positividad se
manifiesta por la aparicin de un color violceo o amarillo. Debido a
que las protenas y los aminocidos, poseen esta caracterstica, la
reaccin sirve para identificarlos. Algunas soluciones de amonio y
aminas, dan la coloracin caracterstica, aparentemente debido a una
oxidacin y reduccin intramolecular de la Ninhidrina en presencia de
amonaco. Los aminocidos porina e hidroxiprolina, que no poseen
grupo amino sino imino (-NH-), dan un color rojo que pasa rpidamente
a amarillo.

6. Reaccin de Biuret:
- Al agregar hidrxido de sodio a la albumina vimos una solucin de
color blanco luego agregamos sulfato cprico y observamos un color lila
tenue, dando a conocer que rompi los enlaces peptdicos.
REACCION:




















Anlisis:
El reactivo de Biuret est formado por una solucin de sulfato de cobre
en medio alcalino, este reconoce el enlace peptdico de las protenas
mediante la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones
Cu
2+
y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma
parte de los enlaces peptdicos, lo que produce una coloracin rojo-
violeta.


7. Reaccin de Molish:
- Al agregar la solucin alcohlica de alfa-naftol ala albumina la solucin
fue de dos fases la que estaba en la parte inferior era transparente y la
superior amarilla despus de llevarla a bao Mara la solucin formo un
precipitado de color rosado.
REACCION:












Anlisis:
















F. CUESTIONARIO:
1. Que parmetros afectan la desnaturalizacin de protenas.
Fundamente su respuesta.
























2. Defina Ud. Punto isoelctrico.

El punto isoelctrico es el pH al que una sustancia anftera tiene carga
neta cero. El concepto es particularmente interesante en los
aminocidos y tambin en las protenas. A este valor de pH la
solubilidad de la sustancia es casi nula. Para calcularlo se deben
utilizar los pKa.

3. Que elementos se encuentran siempre en las protenas y que otros
elementos se encuentran a veces.

- Los elementos que se encuentran con frecuencia en las protenas son:
C, O, N, H y los que se encuentran a veces son: S, P.

4. Escriba la escritura qumica de la casena, cules son sus
propiedades y nombre sus aplicaciones en la industria.





















Los principales usos de la casena se desarrollan en reas como el
pegamento, pinturas acuosas, fabricacin de papel, textiles,
recubrimientos para cuero, packaging, cosmticos y como
complementos para la fabricacin de cemento y concreto. No obstante,
su uso nunca ha sido predominante, sino que siempre es un agregado
a una serie de compuestos qumicos, por lo que no obtiene valor como
producto.
La frmula para potenciar la casena como un subproducto importante
de la industria lechera, es analizar sus capacidades principales y
generar un producto en el que la predominancia de la casena como
compuesto principal sea suficiente para poder motivar a los pequeos
productores a independizarse de los mercados tradicionales e
incursionar en la produccin de casena.

a) Casena como pegamento:

El pegamento de casena fue fabricado por primera vez a principios del
siglo diecinueve y fue utilizada sobre todo en la carpintera. Hasta el da
de hoy se siguen patentando distintas formulaciones de pegamentos en
base a casena, en la mayora de los casos, este pegamento est
disponible como polvo que contiene dos componentes principales,
casena y un lcali (xidos, hidrxidos y carbonatos de los metales
alcalinos.


Hoy en da, el pegamento de casena es suplantado por el pegamento
sinttico en la carpintera, pero an se utiliza en pegamentos de
etiquetado, en la industria de embotellamiento y en la carpintera
interior (el chapeado, paneles de puertas, lamina
Formica, etc.) En esta rea la casena encuentra una competencia muy
dispar por parte de la industria qumica. Por otra parte se
desaprovechan las cualidades alimentarias de esta protena.



b) Industria papelera:

La casena tiene una gran afinidad para los pigmentos, gracias a sus
caractersticas de adherencia de la tinta y a varios substratos. En la
industria de papel, la casena se utiliza como cubrimiento para los
papeles esmaltados de alta calidad. La resistencia al agua se logra por
exposicin a vapores de formaldehdo. El papel pintado se convierte en
lavable en agua agregando una capa de solucin de la casena con una
solucin del formaldehdo.
La casena todava se utiliza en el acabado de papel de la alta calidad.

La casena destaca dentro de esta industria por sus capacidades de
transportador de sustratos y pigmentos, pudiendo ser utilizados en la
industria alimentaria para aumentar la percepcin en cuanto a color y
sabor de algn producto en especial.

c) Industria del cuero:

El plastificado de casena se utiliza en el proceso de acabado en la
industria del cuero, combinada con componentes adicionales como los
cidos acrlicos derivados del fenol, pigmentos para los productos
coloreados o cubrimientos tales como gelatina. La solucin es revestida
en el cuero antes de que la superficie se procese mecnicamente
(cepillado, planchado, esmaltado, etc.). Se puede observar el uso de la
casena como protector y recubrimiento. Ms adelante se analizarn
estas propiedades dentro de la industria alimentaria.

d) Industria textil:

En un comienzo, la casena fue empleada de manera anloga a la
industria del papel: las telas se impregnaban con una solucin de
casena y vulcanizaban con vapores de formaldehdo.


Las capas de casena junto al pigmento permiten que el textil sea
impermeable. Debido a sus capacidades de cubrimiento (film) y
adhesivas, las casenas se convierten en una capa protectora contra
envejecimiento del algodn.
Estas capacidades de recubrimiento pueden ser utilizadas en la
industria alimentaria para proteger alimentos que tengan una corta
vida til y que por lo tanto encuentren dificultades durante el
transporte al mercado de destino.



e) Plsticos rgidos de casena:

El plstico rgido derivado del cuajo de casena es uno de los ejemplos
ms conocidos para el uso no alimenticio de la protena de leche. El
cuajo de casena se mezclan con agua en una relacin del 20-35%
antes de ser procesado mecnicamente por alta presin, luego se curan
durante varios das en una solucin diluida del formaldehdo, en ese
momento se pueden agregar pigmentos para dotarlos de color.
No obstante, la importancia de los plsticos de la casena ahora ha
declinado debido a la competencia que ofrecen los plsticos sintticos
con mejores caractersticas, por lo que esta rea queda descartada por
las pocas ventajas comparativas que presenta.

G. CONCLUSIONES:
- Cualquier cambio de temperatura o pH en una protena desnaturaliza a
esta misma.
- El reactivo de Biuret al identificar a la protena rompe los enlaces
peptdicos que se encuentran en ellos.
- El reactivo de milln precipita a las protenas.
- El cloruro de mercurio precipita con mayor intensidad a la albumina.
- La xantoproteica reconoce compuestos aromticos en una protena.
- El reactivo de milln reconoce residuos fenlicos.
- El etanol disuelve a las protenas.

H. BIBLIOGRAFIA
- Gua de laboratorio, Ing. Elia Cabrera Navarrete.
- Bioqumica, BOHINSKY.
- http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf
- http://umichqfbsec01amipeptprot.blogspot.com/2008/07/reacciones-
de-reconocimiento-de.html
- http://es.scribd.com/doc/68832499/IDENTIFICACION-Y-REACCION-
DE-LOS-AMINOACIDOS-Y-PROTEINAS


- http://es.scribd.com/doc/2309987/Proteinas-y-sus-
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ARCHIVOS-httpquimicofiqblogspotcom
- http://html.rincondelvago.com/propiedades-quimicas-y-valoracion-de-
proteinas.html
- http://www.tesis.uchile.cl/tesis/uchile/2009/aq-
becerra_s/pdfAmont/aq-becerra_s.pdf