Mt.

Espectroscpicos
TEMA 11. MTODOS ESPECTROSCPICOS APLICADOS AL
ANLISIS AGRCOLA

1. Introduccin

2. Propiedades de la radiacin electromagntica. Espectro electromagntico

3. Interaccin materia-radiacin electromagntica. Espectros de absorcin y
emisin.

4. Clasificacin de los mtodos espectroscpicos.

5. Parmetros para la medida de la absorcin. Ley de Beer. Desviaciones.

6. Espectroscopa de absorcin molecular. Especies absorbentes.
Transiciones electrnicas

7. Instrumentacin

8. Aplicaciones de la EAM.

9. Espectroscopa de absorcin atmica.

10. Espectroscopa de emisin atmica.

11. Problemas de introduccin a los mtodos espectroscpicos aplicados al
anlisis agrcola.
Mt. Espectroscpicos
Mtodos espectroscpicos:
Aquellos que implican la medida de la radiacin electromagntica
emitida por la materia o que interacciona con sta.
Mtodos en los que existe un intercambio de energa entre la
radiacin electromagntica y la materia.
Espectrofotometra como al conjunto de procedimientos que

utilizan la luz para medir concentraciones qumicas.
Mt. Espectroscpicos
Propiedades de la radiacin electromagntica

La radiacin electromagntica es una forma de energa que
se transmite a travs del espacio a gran velocidad
(concretamente, a la velocidad c, conocida como velocidad
de la luz en el vaco que vale 3108 ms-1), con una longitud
de onda

y una frecuencia .

La radiacin electromagntica presenta una doble
naturaleza:
-

Ondulatoria
-

Corpuscular
Mt. Espectroscpicos
Los parmetros que permiten caracterizar la radiacin
electromagntica desde un punto de vista ondulatorio son:

Longitud de onda (). Es la distancia entre dos puntos mximos o
mnimos consecutivos de la onda. Se mide en unidades de
longitud. Las unidades ms frecuentes son:

(10-10 m), nm

(10-9
m)

Frecuencia (). Es el nmero de ciclos por unidad de tiempo, es
decir, es el nmero de oscilaciones completas de una onda en un
segundo.

Nmero de onda. Es el inverso de la longitud de onda. La unidad
de medida ms utilizada es el cm
-1
.

Periodo (T). Es el tiempo necesario para que dos mximos
sucesivos de una onda pasen por un punto fijo. Se mide en
segundos (s)
v

c
=
c
1 v

v = =
v + |
Mt. Espectroscpicos
La radiacin electromagntica desde un punto de vista
corpuscular:

la radiacin electromagntica

es un flujo de partculas o
corpsculos, llamados fotones.

Cuando la radiacin electromagntica interacciona con tomos y
molculas, tiene naturaleza de partculas de energa, fotones.

Por lo tanto, la frecuencia () de la radiacin electromagntica y la
energa del fotn (E) son proporcionales, siendo la constante de
Planck

(h = 6,62

10-34 J/fotns)

La de proporcionalidad entre ambas

es:

v
c
- = - = h E h E
Mt. Espectroscpicos
ESPECTRO ELECTROMAGNTICO
Energia Longitud de onda
Microondas: Rotacin de enlaces
I f j Vib i d l
E = h ( h = 6.6210
-34
Js ) E = hc/ ( c = 310
8
m/s )
Mt. Espectroscpicos
Colores del espectro visible
absorbida (nm) Color absorbido Color observado (complementario)
380-420 violeta amarillo-verdoso
420-440 azul-violeta amarillo
440-470 azul anaranjado
470-500 verde-azulado rojo
500-520 verde prpura
520-550 amarillo-verdoso violeta
550-580 amarillo azul-violeta
580-620 anaranjado azul
620-680 rojo verde-azulado
680-780 prpura verde
Mt. Espectroscpicos

Clasificacin de los mtodos espectroscpicos:
Espectroscopia en el Infrarrojo
Absorcin
Espectroscopia de absorcin molecular
Ultravioleta-Visible

Fluorescencia
Moleculares
Emisin
Fosforescencia


Espectroscopia absorcin atmica (EAA)
Absorcin Espectroscopia de absorcin electrotrmica
( Horno de grafito)

Espectroscopia de emisin atmica (EEA)
Fotometra de llama
Plasma acoplado por induccin (ICP)
Fluorescencia atmica de Rayos X
Atmicos
Emisin
Fluorescencia atmica

Mt. Espectroscpicos
MTODOS ESPECTROSCPICOS
MOLECULARES

ATMICOS
ABSORCIN EMISIN ABSORCIN EMISIN
Espectroscopia de Absorcin Molecular Espectroscopia Absorcin Espectroscopia de Emisin
Ultravioleta-Visible Atmica (EAA) Atmica (EEA)
Espectro de Bandas Espectros de lneas
Mt. Espectroscpicos
Espectros de absorcin

El espectro de absorcin es la representacin grfica de la
radiacin electromagntica absorbida por una especie en
funcin de su .

Si la especie absorbente es:
-

Una molcula Espectroscopia de absorcin molecular
-

Un tomo

Espectroscopia de absorcin atmica

Cuando una especie absorbe radiacin electromagntica, pasa
de un estado fundamental a otro excitado de mayor contenido
energtico.
) (
*
) (
excitado estado
l fundamenta estado
X h X + v
Mt. Espectroscpicos
Transiciones electrnicas-vibracionales-rotacionales

Son transiciones que se producen desde cada nivel rotacional de cualquier
nivel vibracional del nivel electrnico fundamental hacia diferentes niveles
rotacionales de niveles vibracionales

de niveles electrnicos excitados.
Estas transiciones se producen cuando la radiacin incidente es del tipo
ultravioleta-visible. El hecho de que las molculas roten, los enlaces de
stas vibren y adems, se produzcan transiciones electrnicas externas, da
lugar a un mayor nmero de transiciones y por lo tanto, el espectro
resultante no ser

de lneas ni de picos sino que ser

de bandas, ms o
menos anchas. Estos espectros son muy tiles para anlisis cuantitativo.
Absorcin molecular
Mt. Espectroscpicos
Absorcin atmica

Como su propio nombre indica, la especie absorbente es un tomo, con lo
que al no existir enlaces no pueden darse movimientos rotacionales ni
vibracionales. Por lo tanto, si no existen transiciones rotacionales ni

vibracionales, slo existirn transiciones electrnicas externas. Estas
transiciones se producirn cuando la radiacin incidente es del tipo
ultravioleta-visible y el espectro resultante ser

siempre de lneas.

Una
radiacin tipo microondas o infrarroja no produce ningn tipo de transicin
Mt. Espectroscpicos
Espectros de Emisin

Es la representacin grfica de la radiacin electromagntica
emitida por una especie en funcin de su longitud de onda
cuando la especie una vez excitada con mayor nivel energtico
pasa de un estado excitado menos energtico.
v h X X
l fundamenta estado
excitado estado
+
) (
) (
*
En funcin de cual sea la especie que emita radiacin podemos realizar la
siguiente clasificacin:
Espectoscopa

de Emisin Molecular
Espectoscopa

de Emisin Atmica
Mt. Espectroscpicos
Ley de Beer

Relaciona absorbancia y concentracin ley general de absorcin.

La cantidad de radiacin electromagntica absorbida por un analito
(molcula o tomo) se relaciona cuantitativamente con la
concentracin de dicho analito en disolucin.

Siempre se cumple que:
Siendo:
A, la absorbancia adimensional
, la constante de absortividad molar (L

cm-1

mol-1)
b, el camino ptico (cm), constante para cada aparato.
C, la concentracin del analito (mol

L-1)
C A - - = b c
Mt. Espectroscpicos
Transiciones Electrnicas
Mt. Espectroscpicos
Componentes bsicos de un equipo de medida de absorcin
molecular en UltraVioleta-Visible
Fuente Selector de Muestra Detector Registro
A = Fuente de radiacin B = Monocromador
C = Rendija D = Cubeta

de muestra
F = Detector G = Medidor
Mt. Espectroscpicos
Mt. Espectroscpicos
Espectrofotmetro de haz sencillo
Mt. Espectroscpicos
Espectrofotmetro de doble haz
Mt. Espectroscpicos
Aplicaciones de la EAM

Qu se puede medir?

Todas aquellas molculas que absorban radiacin en la zona
del espectro correspondiente al UV-Visible, como son las
molculas orgnicas con cromforos, los complejos de metales
de transicin y otras disoluciones moleculares con color (por
mtodos indirectos se pueden medir otras especies con
electrones en orbitales t).

Cul es el procedimiento?
Mt. Espectroscpicos
Aplicaciones de la EAM
Cul es el procedimiento?

1- Establecer las condiciones de trabajo
- Eleccin de la longitud de onda ptima.
- Eleccin de la fuente de radiacin. Depender de que midamos
en la zona del Ultravioleta o en el Visible.
- Eleccin de la cubeta adecuada.
- Preparacin de la muestra para el anlisis:
- Disolucin de la muestra si sta es slida.
- Eliminacin de las interferencias, si se puede, a la longitud de
onda elegida (frecuentemente por enmascaramiento).
- A veces, la especie absorbente slo es capaz de absorber en un
determinado estado de oxidacin en forma de complejo, con
lo que habra que conseguir ese estado.

2- Preparar la recta de calibrado.
Mt. Espectroscpicos
Espectroscopa de absorcin atmica

La espectroscopa atmica comprende un conjunto de mtodos de
anlisis que permiten la determinacin de ms de 70 elementos. Los
mtodos atmicos se caracterizan por ser rpidos, cmodos,
selectivos, sensibles (se determinan ppm y ppb), se requiere muy poca
cantidad de muestra y sta sufre poca manipulacin.

Estos mtodos se basan en la medida de la radiacin
electromagntica absorbida (absorcin) o emitida (emisin) por los
tomos en estado de vapor, siendo este estado necesario puesto que
es el que permite la mayor separacin entre tomos condicin
imprescindible para la correcta cuantificacin mediante cualquier
mtodo espectroscpico atmico. Por lo tanto, el primer paso de todos
los mtodos de espectroscopa atmica es la atomizacin de la
muestra
Mt. Espectroscpicos
Clasificacin de los mtodos de espectroscopa atmica ms utilizados
Mtodo de
atomizacin
T tpica de
atomizacin (C)
Fundamento Denominacin
Absorcin
Espectroscopa de absorcin
atmica
Emisin Espectroscopa de emisin atmica Llama 1700-3150
Fluorescencia
Espectroscopa de fluorescencia
atmica
Absorcin
Espectroscopa de absorcin
electrotrmica
Electrotrmica 1200-3000
Fluorescencia
Espectroscopa de fluorescencia
electrotrmica
Emisin
Espectroscopa de plasma acoplado
por induccin (ICP)
Plasma de argn
acoplado por
induccin
6000-8000
Fluorescencia
Espectroscopa de fluorescencia de
plasma acoplado por induccin
Plasma de argn de
corriente continua
6000-10000 Emisin
Espectroscopa de plasma de
corriente continua

Mt. Espectroscpicos
Espectrofotmetro de absorcin atmica
Mt. Espectroscpicos
Fuentes de radiacin
Mt. Espectroscpicos
Sistema de atomizacin
Ionizacin M
+
+ e
-
Gas
Excitacin M* Gas
Atomizacin Mo + Ao Gas
Vaporizacin MA Gas
Fusin MA Lquido
Desolvatacin MA Slido
Nebulizacin M
+
+ A
-
M
+
+ A
-
Aerosol
Disoluci
n
Mt. Espectroscpicos
Aplicaciones
La espectroscopa de absorcin atmica se utiliza para la determinacin de elementos metlicos a
nivel de traza, aunque de forma indirecta tambin se pueden determinar otras especies.
Las medidas en absorcin atmica tambin se basan en la ley de Beer, si bien, hay que comprobar
experimentalmente la linealidad entre absorbancia y concentracin, por ello hay que realizar el
calibrado.
Cul es el procedimiento?
1-

Establecer las condiciones particulares de trabajo
a)

Colocar la lmpara correspondiente al elemento a medir y ajustar su linealidad.
b)

Dentro de las lneas de resonancia del elemento a determinar, hay que elegir una

longitud de onda
ptima que permita la mxima absorbancia libre de interferencias.
c) Se regular

la relacin de flujos de los gases (oxidante / combustible)
d) Se ajustar

la alineacin y la altura del mechero.
e) Se fijar

el caudal de aspiracin de la muestra.
f) Preparacin de la muestra para el anlisis:
-

Disolucin de la muestra si sta es slida, con o sin la utilizacin de cidos minerales, con o sin
calcinacin, con o sin digestin cida, etc.
-

Eliminacin de las interferencias, si se puede, a la longitud de onda elegida.
A veces, la especie absorbente slo es capaz de absorber en un determinado estado de oxidacin

en
forma de complejo, con lo que habra que conseguir ese estado.
2-

Calibrado.
Mt. Espectroscpicos
ANLISIS CUANTITATIVO MEDIANTE E.A.A
Eleccin de lmpara
Fijar intensidad
Ajuste de longitud de onda
Ajuste de rendija
Ajuste de flujos de gases
Ajuste de altura de mechero
Ajuste de caudal de aspiracin
Blanco

Agua desionizada
Medida de concentraciones
Patrones
Calibrado:
- Recta de calibrado
- Adicin estndar
Mt. Espectroscpicos
Espectroscopa de Emisin Atmica
FUENTE DE ENERGA TCNICA
Llama Fotometra de llama
Radiacin
electromagntica
Fluorescencia atmica
Elctrica Espectroscopa de emisin
Plasma I.C.P.
Rayos X Fluorescencia de Rayos X
X + E (trmica, elctrica o radiante) X* X* X + h
Mt. Espectroscpicos
Instrumentacin EEA
Atomizador -

Llama (Muestra)
Selector de Detector Registro
Mt. Espectroscpicos
Aplicaciones
La espectroscopa de emisin atmica se utiliza, fundamentalmente, para la

determinacin de elementos alcalinos a nivel de traza. En todo caso, se cumple
que la intensidad de radiacin emitida es una funcin de la concentracin de
analito.
Cul es el procedimiento?
1-

Establecer las condiciones particulares de trabajo
a) Se ajustar

la ganancia de energa, a la vez que es aspirado el patrn ms
concentrado de analito.
b) Dentro de las lneas de resonancia del elemento a determinar, hay que elegir
una longitud de onda ptima que permita la mxima absorbancia libre de
interferencias.
c) Se regular

la relacin de flujos de los gases (oxidante / combustible)
d) Se ajustar

la alineacin y la altura del mechero.
e) Se fijar

el caudal de aspiracin de la muestra.
f) Preparacin de la muestra para el anlisis:
2-

Calibracin.
Se puede realizar una recta de calibrado con disoluciones patrn, o bien si hay
problemas de efecto matriz, se puede utilizar el mtodo de adiciones estndar.
Mt. Espectroscpicos
Espectroscopa de plasma acoplado
La principal caracterstica de este mtodo es el empleo de plasma como
sistema de atomizacin de la muestra.
Que es el plasma?
Gas ionizado, es decir, un gas que contiene una concentracin
relativamente alta de cationes y electrones. Si el gas fuese Argn, se
tendra el siguiente equilibrio:
+
+ e Ar Ar 1
El plasma alcanza temperaturas mucho ms altas (6000-8000 C) que las
alcanzadas por las llamas habituales de combustin. La elevada
temperatura, estabilidad y entorno qumico inerte del Argn elimina gran
parte de las interferencias que se encuentran habitualmente en las llamas
de combustin
Mt. Espectroscpicos
Instrumentacin (ICP ptico).
En un espectrmetro ptico de emisin con plasma acoplado por induccin, la muestra
es transportada en forma lquida por medio de una bomba. La muestra lquida ser

convertida en aerosol mediante el proceso de nebulizacin.
Posteriormente, la muestra nebulizada es transportada hacia el plasma, lugar dnde es
desolvatada, vaporizada, atomizada y excitada por el plasma. Los tomos e iones
excitados emiten su radiacin caracterstica que es recogida y ordenada por su longitud
de onda. Esta radiacin es detectada y convertida en una seal elctrica que es
convertida en concentracin de analito.
Mt. Espectroscpicos
Ventajas e inconvenientes del ICP ptico
Ventajas:
-

Elimina muchas interferencias habituales en la atomizacin mediante llama.
-

La temperatura que se alcanza con el plasma es de 2 a 3 veces mayor que en la
llama y el tiempo de residencia de los tomos es unas 2 veces mayor, por lo que
la atomizacin es ms completa y la seal es considerablemente mayor.
-

El plasma presenta menor radiacin de fondo.
-

Tiene una temperatura ms uniforme que la llama.
-La autoabsorcin

es menos importante que en la llama.
Inconvenientes:
-

Alto precio del equipo
-

Alto coste de mantenimiento y puesta a punto.