Aplicação de Biopilha Na Biorremediação de Solos Argilosos Contaminados Com Petróleo

APLICAO DE BIOPILHA NA BIORREMEDIAO DE SOLOS ARGILOSOS
CONTAMINADOS COM PETRLEO

Paulo Negrais Carneiro Seabra

TESE SUBMETIDA AO CORPO DOCENTE DA COORDENAO DOS
PROGRAMAS DE PS-GRADUAO DE ENGENHARIA DA UNIVERSIDADE
FEDERAL DO RIO DE JANEIRO COMO PARTE DOS REQUISITOS
NECESSRIOS PARA A OBTENO DO GRAU DE DOUTOR EM CINCIAS EM
ENGENHARIA QUMICA.

Aprovada por:
________________________________________
Prof. Geraldo Lippel SantAnna Jr., Dr.Ing.

________________________________________
Prof. Denize Dias de Carvalho, D.Sc.

________________________________________
Prof. Henry Xavier Corseuil, Ph. D.

________________________________________
Prof. Mrcia Walquria de Carvalho Dezotti, D.Sc.

________________________________________
Prof. Maria Cludia Barbosa, D.Sc.

________________________________________
Prof. Selma Gomes Ferreira Leite, D.Sc.

RIO DE JANEIRO, RJ BRASIL

OUTUBRO DE 2005
ii

SEABRA, PAULO NEGRAIS CARNEIRO
Aplicao de Biopilha na
Biorremediao de Solos Argilosos
Contaminados com Petrleo [Rio de
Janeiro] 2005
XIV, 169 p., 29,7 cm, (COPPE/UFRJ,
D.Sc., Engenharia Qumica, 2005)
Tese Universidade Federal do Rio de
Janeiro, COPPE
1.Biorremediao; 2. Biopilha; 3. Petrleo
I. COPPE/UFRJ) II. Ttulo (srie)

iii

Aos meus filhos, Isabela, Rafael e Victor
Luisa
iv
AGRADECIMENTOS

Meus agradecimentos a todos aqueles que de alguma forma contriburam para a
realizao deste trabalho e, em especial:

ao Professor Geraldo Lippel SantAnna Jr e Professora Denize Dias de Carvalho
pela orientao, incentivo, confiana e amizade.
ao Professor Rainer Stegmann, chefe do Departamento de Gerenciamento de
Resduos da Universidade Tcnica de Hamburgo-Harburgo (TUHH), por sua
orientao, amizade e pela acolhida em seus laboratrios para a realizao de parte
deste trabalho.
ao engenheiro Jrn Heerenklage por sua grande amizade, disponibilidade, confiana
e orientao tcnica que possibilitaram o bom desenvolvimento dos experimentos na
TUHH.
Anja Scholz, Kim Kleeberg, Anjun Naveed e, em especial, Gergana Gery
Ivanova, pelo apoio analtico na TUHH.
a todos do TUHH que colaboraram com o meu trabalho e me propiciaram um timo
convvio.
ao Frederico de Landa, Renata Casella, Eliane Ventura, Ronalt Vital, Adriana
Ururahy Soriano, Eduardo Platte, Alexandre Amigo e a todos no Centro de Pesquisas
e Desenvolvimento da Petrobras CENPES, sem os quais no seria possvel a
realizao deste trabalho.
ao CENPES que forneceu os recursos logsticos e financeiros necessrios para o
desenvolvimento deste trabalho, principalmente, nas pessoas de Gina Vasquez
Sebastien, Ricardo Castello Branco e Thais Murce da Silva.
Unidade de Negcios de Explorao e Produo Sergipe Alagoas (UN-SEAL) pela
confiana e apoio depositado neste trabalho.
Andrea Rizzo, Ronaldo Santos e Renata dos Santos Raimundo, do Centro de
Tecnologia Mineral (CETEM), pelo apoio fundamental na realizao dos ensaios de
biopilha.
ao Professor Everaldo Zonta da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro pela
discusso fundamental sobre os resultados das anlises fsicas e qumicas do solo.
v
aos funcionrios da ECT, Innolab, Embrapa Solos, UFRRJ e PUC, que realizaram
anlises fsicas, qumicas e ecotoxicolgicas para este trabalho.
aos meus filhos, Rafael, Victor e Isabela, pela pacincia e apoio.
por ltimo, mas no menos importante, Luisa pelo incentivo fundamental e
participao neste trabalho.

vi
Resumo da Tese apresentada COPPE/UFRJ como parte dos requisitos necessrios
para a obteno do grau de Doutor em Cincias (D.Sc.)

APLICAO DE BIOPILHA NA BIORREMEDIAO DE SOLOS ARGILOSOS
CONTAMINADOS COM PETRLEO


Outubro/2005

Orientadores: Geraldo Lippel SantAnna Jr.
Denize Dias de Carvalho

Programa: Engenharia Qumica

Este trabalho consiste no estudo do efeito de parmetros que influenciam a
biodegradao de petrleo em solos com altos teores de argila e silte, para sistema de
biopilha. Foram realizados experimentos em microcosmo (respirometria) e com
biopilhas de 20L, todos com contaminao artificial. Observou-se que a porcentagem de
leo biodegradado foi inversamente proporcional sua concentrao inicial. Serragem e
composto maduro de lixo urbano foram os melhores materiais estruturantes testados.
Nas biopilhas, os valores de coeficiente de remoo de leo encontrados ficaram na
faixa de 0,0061 a 0,0109 dia-1, acima dos encontrados em literatura. O tratamento em
biopilha, tambm contribuiu para recuperar a qualidade dos solos em termos de
ecotoxicidade. A formao de resduos de ligao foi observada em balano de carbono
da biodegradao do leo, realizado em biorreatores de coluna. A porcentagem de
carbono sorvido na matria orgnica do solo aumentou com o aumento da mineralizao
do leo. Em resumo, a aplicao da biopilha no tratamento de solos argilosos
contaminados com petrleo vivel, podendo eliminar os risco do leo residual ao meio
ambiente a curto e mdio prazo, por meio de sua biodegradao e humificao.
vii
Abstract of Thesis presented to COPPE/UFRJ as a partial fulfillment of the
requirements for the degree of Doctor of Science (D.Sc.)

APPLICABILITY OF BIOREMEDIATION OF CRUDE OIL-CONTAMINATED
CLAYEY SOIL BY BIOPILE


October/2005

Advisors:: Geraldo Lippel SantAnna Jr.
Denize Dias de Carvalho

Department: Chemical Engineering

This work presents applicability study of biopile to treat crude oil-contaminated
clayey soils. One of its goals was to identify the most relevant parameters to the process.
Tests were carried out in microcosm (respirometria) and 20-liter biopiles, all with
artificially contaminated soils. The oil biodegradation rate decreased with the initial oil
concentration increase. Sawdust and compost presented the best oil biodegradation
results between the bulking materials tested. In 20-liter biopiles tests the oil removal
coefficient obtained were between 0.0061 to 0.0109 day
-1
, values above the average
reported in literature. Potential residual ecotoxicity was eliminated in most of biopile
treated soils. Using column bioreactors bound residues were quantified during carbon
balance of crude oil biodegradation. Bound residues attached to the soil organic matter
enhanced with the crude oil mineralization. These results demonstrated that high clay
content soils can be remediated to acceptable levels by biopile systems within a
reasonable time. The environmental contamination risks can be eliminated due to oil
mineralization and the humidification.
viii

Parte do estudo desenvolvido na presente tese gerou os seguintes trabalhos:

SEABRA, P.N.C., SANTANNA JR., G.L., FREIRE, D.D.C., 2003, Biorremediao
de Solos Argilosos Contaminados com Petrleo. Colquio Anual de Engenharia
Qumica 2003, Programa de Engenharia Quimica/COPPE/UFRJ.
SEABRA, P.N.C, SORIANO, A.U., DE LANDA, F.G., CASELLA, R.C.,
SANTANNA JR., G.L., FREIRE, D.D.C., 2005, Bulking Materials to Improve
the Biodegradation Rate in Clayey Soil, 8th International In Situ On-Site
Bioremediation Symposium, Baltimore, EUA, 6-9 Junho.

ix
ndice de Figuras

FIGURA 2.1 - FLUXOGRAMA COM O RESUMO DAS ATIVIDADES EXPERIMENTAIS. 7
FIGURA 3.1 ESTRUTURAS QUMICAS DE ALGUNS COMPOSTOS ENCONTRADOS NO
PETRLEO. 10
FIGURA 3.2 - HORIZONTES TPICOS DE SOLO (MONTGOMERY, 1995). 14
FIGURA 3.3 COMPOSIO ELEMENTAR DE UM SOLO INTENSAMENTE INTEMPERIZADO
(OXISOL) E UM MENOS INTEMPRICO, EXPRESSO EM PERCENTAGEM NA FORMA DE
XIDO EM MASSA (MCBRIDE, 1994). 15
FIGURA 3.4 - TRINGULO DAS CLASSES BSICAS DE TEXTURA DO SOLO (VIEIRA, 1975). 17
FIGURA 3.5 - CLASSIFICAO DAS TECNOLOGIAS DE REMEDIAO EM FUNO DO TIPO
DE ESTRATGIA (DOD ENVIRONMENTAL TECHNOLOGY TRANSFER COMMITTEE,
1994). 24
FIGURA 3.6 - DISTRIBUIO DOS CONTAMINANTES ORGNICOS NAS DIVERSAS FASES NA
ZONA NO-SATURADA DO SOLO. 38
FIGURA 3.8 SISTEMA DE BIOPILHA DINMICA NA CIDADE DE CARMPOLIS, BRASIL
(SEABRA ET AL., 2005). 45
FIGURA 4.1 SOLO DE ENTRE RIOS SOLO A. 59
FIGURA 4.2 SOLO DE ALTO DE JERIC SOLO B. 59
FIGURA 4.3 RESPIRMETRO SAPROMAT (ADAPTADO DA VOITH). 63
FIGURA 4.4 - BRITADOR DE MANDBULA GRANDE. 70
FIGURA 4.5 FLUXOGRAMA REPRESENTATIVO DO PROCESSO DE PREPARAO DAS
AMOSTRAS DE SOLO. 71
FIGURA 4.6 BANDEJAS COM SOLO DESAGREGADO E CONTAMINADO. 71
FIGURA 4.7 BANDEJAS COM SOLO SUPRIDO DE NUTRIENTES COLOCADAS NO
LABORATRIO DO CETEM. 72
FIGURA 4.8 - ESQUEMA DE REVOLVIMENTO DO SOLO NAS PILHAS 73
FIGURA 4.9 DIAGRAMA DO SISTEMA DE BIORREATORES. 83
FIGURA 4.10 SISTEMA DE BIORREATORES EM SALA CLIMATIZADA A 30 C. 84
FIGURA 4.11 DETALHE DO CONJUNTO DE BIORREATORES. 85
FIGURA 4.12 DETALHE DO BIORREATOR. 86
FIGURA 4.13 - SISTEMA DE CONTROLE DE VAZO DE AR E MEDIO EM LINHA. 86
FIGURA 4.14 - APRESENTAO GRFICA DO APLICATIVO WORKBENCH. 86
FIGURA 5.1 EVOLUO DOS TEORES DE HPT NOS ENSAIOS COM BIOPILHAS SRIE 1.
100
FIGURA 5.2 TAXAS MDIAS DE DESAPARECIMENTO DE HPT NOS ENSAIOS COM
BIOPILHAS SRIE 1. 101
FIGURA 5.4 EVOLUO DOS CROMATOGRAMAS NA BIOPILHA P-1. 102
FIGURA 5.8 - EVOLUO DOS CROMATOGRAMAS NA BIOPILHA P-5. 106
FIGURA 5.10 - CONTAGEM DE MICRORGANISMOS HETEROTRFICOS TOTAIS SRIE 1. 109
FIGURA 5.11 - CONTAGEM DE MICRORGANISMOS DEGRADADORES DE LEO SRIE 1. 109
FIGURA 5.12 EVOLUO DO DECRSCIMO DE HPT NA SRIE 2. 112
FIGURA 5.19 - CONTAGEM DE MICRORGANISMOS HETEROTRFICOS TOTAIS SRIE 2. 119
FIGURA 5.20 - CONTAGEM DE MICRORGANISMOS DEGRADADORES DE LEO SRIE 2. 120
FIGURA 5.21 - CRESCIMENTO DO BROTO E RAIZ DE HORDEUM VULGARE (CEVADA), EM
x
PERCENTAGEM DO VALOR DO CONTROLE, SRIE 1. 124
FIGURA 5.22 - GERMINAO DA AVENA SATIVA (AVEIA), EM PERCENTAGEM DO VALOR DO
CONTROLE, SRIE 1. 125
FIGURA 5.23 - GERMINAO DE BRASSICA NAPUS (NABO), EM PERCENTAGEM DO VALOR
DO CONTROLE, SRIE 1. 126
FIGURA 5.26 - CRESCIMENTO DA RAIZ DA HORDEUM VULGARE (CEVADA), EM
PERCENTAGEM DO VALOR DO CONTROLE, SOLO A - SRIE 2. 128
FIGURA 5.27 - CRESCIMENTO DA RAIZ DA HORDEUM VULGARE (CEVADA), EM
PERCENTAGEM DO VALOR DO CONTROLE, SOLO B - SRIE 2. 128
FIGURA 5.29 - GERMINAO DA BRASSICA NAPUS (NABO), EM PERCENTAGEM DO
COMPRIMENTO DO CONTROLE, SOLO A - SRIE 2. 130
FIGURA 5.30 - GERMINAO DA BRASSICA NAPUS (NABO), EM PERCENTAGEM DO
COMPRIMENTO DO CONTROLE, SOLO B - SRIE 2. 130
FIGURA 5.31 - DESAPARECIMENTO ACUMULATIVO DE CARBONO NOS BIORREATORES
BR1-3 E BR1-4. 132
FIGURA 5.32 - DESAPARECIMENTO ACUMULADO DE CARBONO NOS BIORREATORES BR1-
5 E BR1-6. 133
FIGURA 5.33 EVOLUO DOS TEORES DE CO
2
NO ACUMULATIVOS NO EFLUENTE
GASOSO DOS REATORES DA SRIE BR1. 134
FIGURA 5.34 - EVOLUO DOS TEORES DE COT NO ACUMULATIVOS NO EFLUENTE
FIGURA 5.35 DESAPARECIMENTO ACUMULATIVO DO CARBONO DO PETRLEO NOS
BIORREATORES DA SRIE BR1. 137
FIGURA 5.36 - DESAPARECIMENTO ACUMULATIVO DE CARBONO NOS BIORREATORES
BR2-3 E BR2-4. 138
FIGURA 5.37 - DESAPARECIMENTO DE CARBONO NOS BIORREATORES BR2-5 E BR2-6. 139
FIGURA 5.38 EVOLUO DOS TEORES DE CO
2
NO ACUMULATIVOS NO EFLUENTE
FIGURA 5.39 - DESAPARECIMENTO DE CARBONO DOS BIORREATORES DA SRIE BR2, EM
TERMOS DE BIODEGRADAO. 141
FIGURA 5.40 FLUXO DE BALANO DE CARBONO NA BIODEGRADAO DE
SUBSTNCIAS ORGNICAS (KRTER E RICHNOW, 2001) 144
FIGURA 5.41 BALANO DE CARBONO COM O TEMPO DO REATOR BR2-3. 146
FIGURA 5.42 - BALANO DE CARBONO COM O TEMPO DO REATOR BR2-4. 147
FIGURA 5.43 - BALANO DE CARBONO COM O TEMPO DO REATOR BR2-6. 148

xi
ndice de Tabelas
TABELA 3.1 PRINCIPAIS TIPOS DE RESDUOS ASSOCIADOS PRODUO DE PETRLEO
E GS. 11
TABELA 3.2 - FAIXAS DE TAMANHO DE PARTCULAS DO SOLO DE ACORDO COM OS
DIVERSOS SISTEMAS DE CLASSIFICAO (ADAPTADO DE GEE E BAUDER, 1986). 16
TABELA 3.3 - POROSIDADE E CONDUTIVIDADE HIDRULICA DE ALGUNS MATERIAIS
(DUNNE E LEOPOLD, 1978). 18
TABELA 3.4 GRAUS DE INTEMPERISMO (STRAHLER E STRAHLER, 1973). 21
TABELA 3.5 DISTRIBUIO DO USO DE TECNOLOGIAS DE TRATAMENTO DE SOLOS EM
STIOS DENTRO DO PROGRAMA SUPERFUNDO (U.S. ENVIRONMENTAL PROTECTION
AGENCY, 2001). 25
TABELA 3.6 FATORES QUE INFLUENCIAM A BIODEGRADAO DE UM CONTAMINANTE
NO SOLO (VON FAHNESTOCK ET AL., 1998; DOD, 2002). 28
TABELA 3.7 ESTRUTURA QUMICA E BIODEGRADABILIDADE (U.S. ENVIRONMENTAL
PROTECTION AGENCY, 1995). 31
TABELA 3.8 - PROPRIEDADES FSICAS DE ALGUNS HIDROCARBONETOS ALIFTICOS E
AROMTICOS (EASTCOTT, 1988; HOWARD, 1990). 32
TABELA 3.9 SELEO DOS ORGANISMOS PARA TESTES EM SOLOS E SEDIMENTOS. 37
TABELA 3.10 BALANO DE MASSA PARA O CARBONO (HUPE ET AL., 1998). 40
TABELA 3.11 VANTAGENS E DESVANTAGENS DO SISTEMA DE BIOPILHA PARA
TRATAMENTO SOLOS CONTAMINADOS. 46
TABELA 3.12 CASOS DE CAMPO DE TRATAMENTO POR BIOPILHA DE SOLOS
CONTAMINADOS COM PETRLEO OU DERIVADOS. 48
TABELA 3.13 ESTUDOS PUBLICADOS MOSTRANDO A INIBIO INDUZIDA PELA ADIO
DE NITROGNIO NA BIORREMEDIAO. 54
TABELA 4.1 CARACTERSTICAS DOS SOLOS A, B E C. 59
TABELA 4.2 - CONDIES DOS TESTES REALIZADOS NO CENPES. 65
TABELA 4.3 - CONDIES DOS TESTES REALIZADOS NO TUHH. 66
TABELA 4.4 CONDIES DOS TESTES DE BIOPILHA EM ESCALA DE BANCADA. 69
TABELA 4.5 - CONDIES DO TESTE DE TOXICIDADE COM VIBRIO FISCHERI. 78
TABELA 4.6 PROPRIEDADES DOS SOLOS PADRES USADAS COMO CONTROLES
ADICIONAIS AO TESTE. 79
TABELA 4.7 CONDIES DOS TESTES. 81
TABELA 5.1 CONSUMO MDIO DE OXIGNIO NOS TESTES DE RESPIROMETRIA
REALIZADOS NO CENPES. 91
TABELA 5.2 - CONSUMO MDIO DE OXIGNIO NOS TESTES DE RESPIROMETRIA
REALIZADOS NA TUHH. 95
TABELA 5.3 TEORES DE HPT E CONSTANTE DE REMOO DE CONTAMINANTE. 98
TABELA 5.4 CONTAGEM DE MICRORGANISMOS HETEROTRFICOS TOTAIS. 108
TABELA 5.6 - TEORES DE HPT E CONSTANTE DE DEGRADAO DE CONTAMINANTE. 111
TABELA 5.7 RESULTADOS DA AVALIAO DA ECOTOXICIDADE POR MICROTOX PARA A
SRIE 1. 122
TABELA 5.8 - RESULTADOS DOS TESTES ECOTOXICOLGICOS USANDO VEGETAIS, EM
PORCENTAGEM EM RELAO AO CONTROLE - SRIE 1. 123
TABELA 5.9 - RESULTADOS DOS TESTES ECOTOXICOLGICOS USANDO VEGETAIS, EM
PORCENTAGEM EM RELAO AOS RESPECTIVOS CONTROLES - SRIE 2. 127
TABELA 5.10 QUANTIDADE DE CARBONO RELACIONADA BIOMASSA. 140
TABELA 5.11 EVOLUO COM O TEMPO DO HPT EXTRAVEIS NOS BIORREATORES. 142
TABELA 5.12 BALANO DE CARBONO EM TERMOS DO ENCONTRADO NO LEO CRU
ORIGINAL. 142

xii
SUMRIO
CAPTULO 1 - INTRODUO 1
CAPTULO 2 - OBJETIVOS 5
CAPTULO 3 - REVISO BIBLIOGRFICA 8
3.1. PETRLEO 9
3.2. RESDUOS SLIDOS DE PRODUO DE PETRLEO E GS 11
3.3. SOLO 13
3.3.1. COMPOSIO DO SOLO 15
3.3.2. TEXTURA DO SOLO 16
3.3.3. POROSIDADE E PERMEABILIDADE DO SOLO 17
3.3.4. DENSIDADE ABSOLUTA OU MASSA ESPECFICA DO SOLO 18
3.3.5. MINERAIS DE ARGILA 19
3.3.6. MATRIA ORGNICA 22
3.4. ESTRATGIAS DE TRATAMENTO DE SOLO CONTAMINADO 24
3.5. BIORREMEDIAO 27
3.5.1. COMPOSIO QUMICA 28
3.5.2. SOLUBILIDADE EM GUA 31
3.5.3. CONCENTRAO DO CONTAMINANTE 33
3.5.4. TEMPERATURA DO SOLO 33
3.5.5. UMIDADE DO SOLO 34
3.5.6. PH 34
3.5.7. ECOTOXICIDADE EM SOLO 34
3.5.8. BIODISPONIBILIDADE DE COMPOSTOS ORGNICOS NO SOLO 37
3.5.9. RESDUOS DE LIGAO 39
3.6. BIOPILHA 42
3.6.1. DESCRIO GERAL DO PROCESSO 42
3.6.2. VANTAGENS E DESVANTAGENS 45
3.6.3. APLICAO 46
3.6.3.1. Experincias com Hidrocarbonetos de Petrleo 47
3.6.3.2. Cintica de Biodegradao 49
3.6.3.3. Influncia do Oxignio 49
3.6.3.4. Materiais Estruturantes (Bulking Materials) 50
3.6.3.5. Bioaumentao 51
3.6.3.6. Teor de Argila 52
3.6.3.7. Teor de metais 53
3.6.3.8. Influncia da concentrao de nitrognio 53
3.6.3.9. Estudos no Brasil 54
3.6.3.10. Parmetro e valores alvos 55
CAPTULO 4 - MATERIAIS E MTODOS 57
4.1. SOLOS 58
xiii
4.2. PETRLEO 62
4.3. PRIMEIRA FASE DOS EXPERIMENTOS - RESPIROMETRIA 63
4.3.1. PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS 63
4.3.1.1. Procedimentos Experimentais no CENPES 64
4.3.1.2. Procedimentos Experimentais no TUHH 65
4.3.2. MTODOS ANALTICOS 66
4.3.2.1. pH 66
4.3.2.2. Umidade 67
4.3.2.3. Granulometria e textura do solo 67
4.3.2.4. Nitrognio total no solo 68
4.3.2.5. Fsforo assimilvel no solo 68
4.3.2.6. Cromatografia do Petrleo Total (Whole Oil) 68
4.3.2.7. Anlise Elementar do Petrleo 68
4.4. SEGUNDA FASE DOS EXPERIMENTOS - BIOPILHAS EM BANCADA 69
4.4.1.1. Srie 1 70
4.4.1.2. Srie 2 74
4.4.2.1. pH 74
4.4.2.2. Umidade 74
4.4.2.3. leos e Graxas 75
4.4.2.4. Hidrocarbonetos de Petrleo Totais 75
4.4.2.5. Determinao de Famlias Qumicas 75
4.4.2.6. Microrganismos Heterotrficos Totais 75
4.4.2.7. Microrganismos Degradadores de Hidrocarbonetos 76
4.4.2.8. Granulometria e Textura do solo 77
4.4.2.9. Nitrognio total no solo 77
4.4.2.10. Fsforo assimilvel no solo 77
4.4.2.11. Mtodo de Avaliao de Toxicidade por Microtox 77
4.4.2.12. Mtodo de Avaliao de Toxicidade pela Inibio no Crescimento de Razes 79
4.4.2.13. Mtodo de Avaliao de Toxicidade pela Germinao 80
4.5. TERCEIRA FASE DOS EXPERIMENTOS REATORES EM COLUNA 81
4.5.2.1. Extrao de leo 87
4.5.2.3. Umidade 88
4.5.2.4. pH 89
4.5.2.5. Massa do Carbono Microbiano (Mtodo SRI) 89
CAPTULO 5 - RESULTADOS E DISCUSSO 90
5.1. RESPIROMETRIA 91
5.2. BIOPILHAS EM BANCADA 98
5.2.1. SRIE 1 98
5.1.1.2. Contagem Microbiana 108
5.2.2. SRIE 2 111
5.2.2.2. Contagem Microbiana 119
5.2.3. ECOTOXICIDADE 121
5.2.3.1. Testes com Microtox 121
xiv
5.2.3.2. Testes com Vegetais 122
5.3. REATORES EM COLUNA 132
5.3.1. SRIE BR1 132
5.3.2. SRIE BR2 138
CAPTULO 6 - CONCLUSES 149
CAPTULO 7 - SUGESTES 153
CAPTULO 8 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 155
ANEXOS 166
ANEXO A (CARACTERIZAO DO PETRLEO) 167

CAPTULO 1
INTRODUO
2
O solo tem uma importncia primordial para o homem e a natureza. Ele uma base para
a vida e um habitat para as pessoas, animais, plantas e outros organismos. Grande parte
dos nossos alimentos provm do solo, que como parte integrante dos sistemas naturais,
cumpre papel importante nos ciclos da gua e dos nutrientes. O solo um espao com
intensa atividade microbiolgica, meio para a decomposio, equilbrio e renovao
qumica, fruto de suas propriedades filtrante, de tamponamento e de converso de
substratos, que o torna na mais importante proteo aos recursos hdricos, em especial
s guas subterrneas.
A contaminao de solos iniciou-se com o surgimento das primeiras sociedades
humanas. Existem registros sobre solos poludos por rejeitos de minerao e de fundio
de metais j no sculo I a.C. Com o advento da Revoluo Industrial, a contaminao de
solos por rejeitos aumentou consideravelmente.
Contudo, a conscientizao em grande escala das conseqncias da poluio dos solos
s se iniciou nos anos 70. Um dos primeiros casos a chamar ateno dos meios de
comunicao foi o de Love Canal, prximo Nova Iorque, onde um condomnio de
2.500 casas foi construdo sobre um antigo aterro de rejeitos perigosos contendo
solventes qumicos. Desde ento, a contaminao de solos e seu tratamento tm
despertado um crescente interesse nos EUA, Canad e Europa.
Em 1980, o Congresso americano estabeleceu o CERCLA (Comprehensive
Environmental Response, Compensation and Liability Act) tambm conhecido como
Superfundo lei que estabelece o uso de recursos do contribuinte americano para
localizar, investigar e remediar cerca de 1.300 reas terrestres prioritrias nos EUA,
todas contaminadas com resduos perigosos (U.S. ENVIRONMENTAL PROTECTION
AGENCY/SUPERFUND, 2001).
A Holanda, em 1983, foi o primeiro pas a desenvolver um critrio de qualidade para
solos e guas subterrneas, a chamada Lista ABC. Neste sistema, levaram-se em
considerao trs fatores importantes para a avaliao da magnitude da contaminao:
natureza e concentrao dos contaminantes; condies especficas do stio que afetam o
transporte e o destino dos contaminantes; uso e funo do solo, grau de exposio e
risco (CASARINI, 2000). No Brasil, a partir dos anos 90, o estado de So Paulo foi o
primeiro da Unio a editar padres de referncia de qualidade e valores de interveno
3
para solos e guas subterrneas (CETESB, 2001a).
A indstria de petrleo gera quantidades significativas de resduos slidos nas suas
diversas atividades - explorao, produo, transporte, refino e comercializao. No
caso da rea de produo de petrleo e gs, os principais resduos slidos gerados so
borras oleosas de fundo de tanques de armazenamento, borras oleosas de limpeza de
caixas de separao gua e leo, solos escavados contaminados por vazamentos de
petrleo e gua de produo, ampla gama de resduos contaminados por petrleo
(estopas, pigs etc.), gua produzida, embalagens e resduos domsticos.
Solos contaminados por vazamentos de petrleo e gua produzida podem ser tratados
por diversos processos biolgicos, fsicos, qumicos, fsico-qumicos ou trmicos
(DEUEL e HOLLIDAY, 1997).
A aplicao de processos biolgicos ao tratamento de solos contaminados por
hidrocarbonetos de petrleo tem despertado um grande interesse das comunidades
cientfica e industrial, nas duas ltimas dcadas. So processos de tratamento que
utilizam organismos (bactrias, fungos e/ou vegetais) para reduzir ou eliminar
compostos orgnicos perigosos ao meio ambiente e sade humana, que se acumularam
no ambiente. Entre as principais vantagens do emprego dos processos biolgicos est o
seu baixo custo, comparando-se com os processos convencionais (DAVIS et al., 1995).
Alm disso, so processos naturais, com baixo consumo de energia e que causam
poucas mudanas nas caractersticas fsicas, qumicas e biolgicas do meio.
Entre as tcnicas biolgicas de tratamento de solos contaminados, encontra-se o sistema
de biopilha. Para solos contaminados por hidrocarbonetos de petrleo, existe um grande
nmero de casos prticos de aplicao de biopilha (DOD ENVIRONMENTAL
TECHNOLOGY TRANSFER COMMITTEE, 2001; U.S. ENVIRONMENTAL
PROTECTION AGENCY, 2001). Nesse sistema, o solo escavado contaminado
colocado em pilhas de at 3 metros de altura, cujo teor do contaminante orgnico
reduzido pela atividade degradativa dos microrganismos presentes no solo. Umidade,
nutrientes, oxignio, temperatura e pH podem ser controlados para estimular a
biodegradao dos poluentes.
O bom desempenho de um sistema de biopilha est relacionado boa transferncia de
massa (ar, gua e nutrientes) no seu interior. Como a permeabilidade do solo diminui
4
com o aumento dos teores de argila e silte, a aerao adequada e uniforme da pilha,
durante o tratamento, dificultada, produzindo efeitos adversos no processo de
biodegradao dos contaminantes. A permeabilidade do solo pode ser aumentada com a
adio de materiais estruturantes (areia, palha, cavaco de madeira, serragem, esterco
seco etc.) e pela moagem do solo.
No Brasil, h uma grande quantidade de solos contaminados por hidrocarbonetos que
precisam de tratamento de baixo custo e ambientalmente correto. A biopilha um
processo que atende a esses quesitos. Contudo, o emprego desta tcnica apresenta um
desafio tecnolgico devido aos elevados teores de argila e silte encontrados em muitos
dos solos brasileiros. Deste modo, necessrio avaliar a aplicabilidade da biopilha para
essas condies.
Para tanto, importante conhecer a influncia das argilas presentes nos solos brasileiros
nos processos biodegradativos dos contaminantes. Este assunto praticamente
inexplorado na literatura tcnica, tendo em vista que boa parte desta tem sido
desenvolvida em pases com clima temperado, com uma proporo menor de solos
argilosos que a encontrada em regies de clima tropical.
O presente trabalho consiste no estudo da aplicabilidade da biopilha na biorremediao
de solos com elevados teores de argila e silte contaminados com petrleo. Visa
identificar os parmetros de maior influncia no processo, e estabelecer condies
timas de operao de biopilhas com solos deste tipo.
O captulo 2 apresenta os objetivos da presente tese e a estratgia empregada para
alcan-los. O captulo 3 mostra a reviso bibliogrfica sobre biorremediao de solos
contaminados por hidrocarbonetos de petrleo e biopilha. Alm disso, so fornecidos
conceitos e aspectos bsicos sobre petrleo, resduos slidos gerados na produo de
petrleo e gs e estratgias de tratamento de solos contaminados.
Os materiais e metodologias usados para o desenvolvimento da tese esto descritos no
captulo 4. Os resultados e sua discusso esto no captulo 5, enquanto as concluses
so apresentadas no captulo 6. Por fim, as sugestes esto descritas no captulo 7.
5

CAPTULO 2
OBJETIVOS
6
O presente trabalho tem como objetivo geral:
Estudar o efeito de diversos parmetros que influenciam a biodegradao do leo
cru presente em solos com elevados teores de argila e silte, visando estabelecer
condies timas de operao para sistema de biopilha.
Os objetivos especficos so:
Avaliar o efeito do teor inicial de leo cru no solo, do ajuste de pH e do aporte
de nutrientes (NPK) no processo de biodegradao do leo;
Avaliar a incorporao ao solo de alguns tipos de materiais estruturantes em
diferentes teores;
Definir a freqncia tima de revolvimento da biopilha;
Obter os parmetros biocinticos de degradao dos hidrocarbonetos;
Obter o balano de massa de carbono da biodegradao do leo cru para os solos
estudados;
Estudar o impacto ambiental do contaminante residual aps o tratamento,
avaliado por meio de testes de ecotoxicidade.

Para tanto, os experimentos foram divididos em trs estgios: (a) respirometria; (b)
biopilhas em escala de bancada; (c) biorreatores tipo coluna.
No primeiro estgio, foram estimados parmetros de biodegradao do leo cru e de
consumo de oxignio, em funo da concentrao inicial de leo, da temperatura, da
correo de pH, do tipo e quantidade de material estruturante, entre outras condies.
Para tanto, foi empregado um respirmetro (escala microcosmo) para medir o consumo
de oxignio relacionado com a atividade microbiana de biodegradao dos
hidrocarbonetos de petrleo.
Na segunda fase dos experimentos, foram usadas biopilhas em escala de bancada (20
litros) para estudar a influncia do revolvimento das pilhas e do material estruturante na
biodegradao dos hidrocarbonetos. A qualidade dos solos tratados foi avaliada por
testes ecotoxicolgicos.
7
Por fim, na terceira fase dos experimentos efetuou-se o balano de massa de carbono da
biodegradao do leo cru em solo tropical, porm no argiloso. Os experimentos foram
realizados em biorreatores de vidro, tipo coluna.
A Figura 2.1 mostra um fluxograma com o resumo das atividades experimentais
realizadas.

Figura 2.1 - Fluxograma com o resumo das atividades experimentais.
Amostragem e caracterizao do
leo e dos solos
Estudo de respirometria
Projeto do sistema de biopilhas em
escala de bancada
Estabelecimento das melhores
condies (nutrientes, material
estruturante, concentraes etc.)
Primeira srie de biopilhas
Segunda srie de biopilhas
Implantao dos Testes de
Toxicicidade
PRIMEIRA
FASE
SEGUNDA
FASE
TERCEIRA
FASE
Montagem do sistema de
biorreatores tipo coluna
Primeira srie de biorreatores
Segunda srie de biorreatores
8

CAPTULO 3
REVISO BIBLIOGRFICA
9
3.1. Petrleo
O petrleo constitudo de vrias centenas de compostos orgnicos (Figura 3.1). Esses
podem ser divididos em: hidrocarbonetos alifticos (alcanos, alcenos e cclicos);
hidrocarbonetos aromticos (mono e poli aromticos); asfaltenos (fenois, cidos graxos,
cetanos, steres etc.); e compostos polares (piridina, quinolinas, carbazleo, amidas,
tiofeno etc.).
Entre os hidrocarbonetos alifticos, os alcanos (normal e iso, conhecidos como
parafinas) so encontrados no petrleo na faixa de 5 at 40 tomos de carbono. O gs
natural associado ao petrleo contm os alcanos mais volteis, isto , aqueles com
baixas massas molares - metano em sua maioria e quantidades progressivamente
menores de etano, propano e butano. Os clicloalcanos presentes so conhecidos tambm
por naftnicos. Os alcenos (tambm chamados de olefinas) so raros no petrleo.
Os hidrocarbonetos aromticos compreendem o benzeno, os alquilbenzenos (tolueno,
xilenos, etilbenzeno etc.) e os policclicos (naftaleno, antraceno, fenantreno etc.).
As resinas e os alfaltenos compreendem a frao pesada do petrleo, com estruturas
qumicas complexas e com alta condensao de anis aromticos. Normalmente, contm
tomos de nitrognio, enxofre e oxignio.
A composio de seiscentos e trinta e seis petrleos de diversas regies do mundo foi
avaliada, mostrando que as propores de hidrocarbonetos alifticos, hidrocarbonetos
aromticos, resinas e asfaltenos variavam muito (TISSOT e WELTE, 1978). A
composio desses petrleos variou dentro das seguintes faixas:
- 40 a 80% de hidrocarbonetos alifticos;
- 15 a 40% de hidrocarbonetos aromticos;
- 0 a 20% de resinas e asfaltenos.
Estudando 60 petrleos diferentes, avaliou-se a variao da composio dos 16
hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA) prioritrios da EPA (KERR et al., 1999).
As concentraes encontradas de seis dos sete HPA carcinognicos foram bem baixas,
na mdia de 0,06 mg/kg de leo para o indeno(1,2,3-cd)pireno a 5,5 mg/kg de leo para
o benzo(a)antraceno. A mdia de concentrao do criseno foi de 28,5 mg/kg de leo.
10
Outro estudo avaliou a variao da concentrao de 18 metais pesados em 26 amostras
de petrleo (MAGAW et al., 1999). A concentrao mdia dos metais foi inferior a 1,5
mg/kg de leo, excetuando nquel, vandio e zinco, cujas concentraes mdias foram
de 20, 63 e 3 mg/kg de leo, respectivamente.

Figura 3.1 Estruturas qumicas de alguns compostos encontrados no petrleo.
11
3.2. Resduos Slidos de Produo de Petrleo e Gs
Nas atividades de produo de petrleo e gs, gerada uma grande variedade de
resduos slidos. Uma listagem extensiva desses resduos foi publicada no
Environmental Guidance Document: Waste Management in Exploration and Production
Operations, (AMERICAN PETROLEUM INSTITUTE, 1997). Em termos de volume,
as guas produzidas e os resduos de perfurao so os mais gerados. Os EUA geraram
em 1995 cerca de 149 milhes de barris de resduos de perfurao, 17,9 bilhes de barris
de gua produzida e 20,6 milhes de barris de resduos associados produo de
petrleo e gs (U.S. ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY, 2002).
A maior parte dos resduos gerados nas operaes de produo de petrleo e gs so
atualmente excludos da regulamentao americana para resduos perigosos RCRA
Resource Conservation and Recovery Act (U.S. ENVIRONMENTAL PROTECTION
AGENCY, 2002). Contudo, estes resduos seguem regulamentaes estaduais
especficas. A Tabela 3.1 mostra os principais tipos de resduos associados produo
de petrleo e gs e os seus volumes relativos, com base em estudo realizado pela API
em 1985 (USDOE & IOGCC, 1993).

Tabela 3.1 Principais tipos de resduos associados produo de petrleo e gs.
MATERIAL % EM VOLUME
Resduos de workover (lamas e outros fluidos de completao, leo
cru, produtos qumicos, filtros usados, borras, cimento, materiais
radioativos de ocorrncia natural NORM, areias, guas cidas)
34
Areia produzida, borras de separadores gua-leo 21
Outros resduos fluidos de produo 14
Entulhos oleosos, filtros e solos contaminados 12
gua de resfriamento e outros resduos lquidos 8
Resduos de desidratao e adoamento de gases 4
Emulses no tratadas 2
Solventes e desengraxantes usados 2
Fluidos hidrulicos e lubrificantes usados 1
Outros resduos slidos de produo 1

12
Os solos contaminados correspondem maior parte dos 12% do total de resduos
gerados associados produo de petrleo e gs, que incluem tambm entulhos e filtros
contaminados.
No Brasil, cada unidade de negcios de produo de petrleo e gs tem uma gerao de
resduos diferente, tanto em termos de tipo como de quantidade. Essa variao funo
do tipo de petrleo produzido, dos sistemas de processamento do petrleo e do nvel de
gesto ambiental da unidade produtora.
13
3.3. Solo
A palavra solo originria do latim solum, que significa cho, piso ou terra. A sua
definio varia de acordo com o interesse de quem o analisa. Para um agricultor, o solo
onde sua plantao cresce. O engenheiro, por outro lado, pode ver o solo como o meio
material que suporta edificaes e estradas. Para os gelogos, o solo visto como o
produto do intemperismo da crosta terrestre.
Podemos considerar a seguinte definio de solo: a superfcie inconsolidada que
recobre as rochas e mantm a vida animal e vegetal da Terra. constitudo de
camadas que se diferem por suas caractersticas fsicas, qumicas, mineralgicas e
biolgicas, que se desenvolvem com o tempo sob a influncia do clima e da prpria
atividade biolgica (VIERA, 1975).
A pedologia ou cincia do solo lida com a origem do solo, suas caractersticas,
descrio, classificao, no envolvendo a relao solo-planta, tema da edafologia.
O solo a resultante da ao conjunta dos agentes intempricos sobre restos minerais
depositados (sedimentos) e enriquecidos de detritos orgnicos. A formao do solo se
processa em duas fases: (a) gnese ou geognese, ramo da geologia, que estuda a
destruio das rochas, o transporte e a deposio dos materiais alterados; (b)
pedognese, ramo da pedologia, que engloba os conhecimentos referentes aos fatores
(clima, biosfera, rocha matriz, relevo e tempo) e s reaes que contribuem para a
transformao da matria mineral, resultante dos processos genticos, em solo e sua
posterior evoluo.
Segundo VIEIRA (1975), o perfil do solo a seo vertical que, partindo da superfcie
aprofunda-se at a regio onde a ao do intemperismo alcana, mostrando, na maioria
das vezes, uma srie de camadas dispostas horizontalmente denominadas horizontes.
Assim, o perfil representa o resultado de vrios fatores que influenciam na formao do
solo, refletindo o histrico de sua evoluo.
Algumas caractersticas fsicas e biolgicas do solo, tais como textura, cor, consistncia,
estrutura e atividade biolgica, entre outras, so consideradas para a identificao e
diferenciao das camadas que compem os horizontes. Anlises qumicas, fsicas e
mineralgicas tambm so empregadas nesta avaliao. A natureza e o nmero de
14
horizontes variam grandemente nas diferentes unidades de solo. Na caracterizao
morfolgica de um perfil usada nomenclatura internacional, onde as letras maisculas
servem para caracterizar os horizontes tpicos e as mesmas letras com ndices numricos
para as subdivises de cada um. Na Figura 3.2 so apresentados os principais horizontes
com sua descrio sucinta.

Figura 3.2 - Horizontes
tpicos de solo
(MONTGOMERY, 1995).
O1 folhas e resduos orgnicos no decompostos
(serrapilheira).
O2 material orgnico decomposto.
A1 horizonte rico em matria orgnica fina,
conseqentemente de cor escura, pobre em argila e em ons
de ferro e de alumnio, onde ocorre a mxima atividade
biolgica.
A2 horizonte mais claro com a mxima eluviao
(movimento descendente de solues vrias ou suspenses
coloidais).
A3 transio entre o horizonte A e o horizonte B.

B1 transio similar ao B2.

B2 horizonte enriquecido pela iluviao (concentrao)
de argilas, compostos de ferro e alumnio, e hmus.

B3 transio entre o horizonte B e o horizonte C.

C material original que formou os horizontes A e B, com
pouca influncia de organismos vivos. Tambm chamado
de material parental.

R horizonte que representa a rocha inalterada que pode
ser ou no a rocha matriz do solo acima desenvolvido.

15
3.3.1. Composio do Solo
Os componentes do solo se apresentam em trs fases: (a) slida (partculas minerais e
matria orgnica); (b) lquida (gua); (c) gasosa (nitrognio, oxignio, dixido de
carbono, metano etc.). O solo formado, alm dos constituintes acima mencionados,
pelos seres vivos, constitudos basicamente de pequenos animais e microrganismos
(ALEXANDER, 1997).
A composio elementar qumica, a distribuio do tamanho das partculas, a
mineralogia e o perfil de um solo esto relacionados natureza da rocha matriz e ao
grau de alterao sofrido pelo material. A Figura 3.3 mostra a comparao da
composio elementar mdia de uma rocha grantica da crosta terrestre com dois tipos
de solo, estes de diferentes idade e origem. Um solo relativamente novo, de origem
glacial (franco siltoso de Iowa), e o outro altamente intemperizado de regio tropical
oxisol de Cuba (MCBRIDE, 1994). Este ltimo, solo do tipo latertico, se desenvolveu
com a perda de muita slica e de muitos de seus elementos bsicos (Ca
++
, Mg
++
, K
+
,
Na
+
) estes quatro elementos formam hidrxidos alcalinos relativamente fortes que se
encontravam presentes na rocha matriz. Assim, este solo muito distinto da sua rocha
matriz, diferentemente de solos mais jovens. Este o caso de muitos dos solos
brasileiros. Contudo, mesmo os solos jovens desenvolveram propriedades fsicas e
mineralgicas que so fundamentalmente diferentes daquela do material matriz.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Si Al Fe (III) Fe (II) Mg Ca Na K Ti P
Elemento
C
o
m
p
o
s
i
o

(
%

c
o
m
o

x
i
d
o
)
Crosta Continental
Franco Siltoso de Iowa
Oxisol (Cuba)

Figura 3.3 Composio elementar de um solo intensamente intemperizado
(oxisol) e um menos intemprico, expresso em percentagem na forma de xido em
massa (MCBRIDE, 1994).
16
3.3.2. Textura do Solo
Com o objetivo de descrever fisicamente o solo, foram estabelecidas classes bsicas de
textura. A textura determinada com base no teor de areia, silte e argila no solo. A
frao argila de um solo qualquer mineral cujo tamanho de partcula inferior a 2m
de dimetro, na maioria dos sistemas de classificao. Essa frao no deve ser
confundida com as argilas minerais, que sero abordadas em item posterior.
A diviso em faixas de tamanho de partculas independe de sua composio qumica,
cor, ou quaisquer outras propriedades. Existem diversos sistemas de classificao (GEE
e BAUDER, 1986). Para tanto, importante identificar qual deles que ser usado para
classificar um determinado solo, para que se possam comparar corretamente os dados de
interesse. Na Tabela 3.2, os diferentes sistemas classificao de tamanho de partculas
podem ser comparados.

Tabela 3.2 - Faixas de tamanho de partculas do solo de acordo com os diversos
sistemas de classificao (adaptado de GEE e BAUDER, 1986).

USDA : U.S. Department of Agriculture; CSSC : Canada Soil Survey Committee;
ISSS : International Soil Science Society; ASTM : American Society for Testing & Materials
(1) tamanho da partcula, mm; (2) nmero ASTM de peneira (aberturas/in) ou tamanho.
17

A reteno de gua e as propriedades de transporte de massa no solo so determinadas
por sua textura. As areias drenam gua rapidamente, enquanto nos solos argilosos, os
espaos porosos tm baixa interconexo para uma drenagem adequada. As razes tm
dificuldades de penetrao em solos com alta proporo de argila e silte. Para a
agricultura, as texturas do tipo franca so melhores para o crescimento das plantas. A
classificao da textura de um dado solo pode ser obtida pelo diagrama ilustrado na
Figura 3.4. As vrias classes de solo so separadas uma das outras por linhas definidas,
sem que suas propriedades mudem abruptamente nestas fronteiras.

Figura 3.4 - Tringulo das classes bsicas de textura do solo (VIEIRA, 1975).

3.3.3. Porosidade e Permeabilidade do Solo
A porosidade do solo a relao entre o volume dos espaos vazios e o seu volume
total. A permeabilidade (k) a medida da facilidade de um fluido (gua, vapor etc.) se
mover atravs do meio poroso. Ela independe das propriedades fsicas do fluido,
18
dependendo apenas do meio poroso. J a condutividade hidrulica (K), que est
diretamente relacionada com a permeabilidade, funo do meio e do fluido, neste caso
a gua. Na Tabela 3.3, esto alguns exemplos de materiais com as respectivas faixas de
valores de porosidade e condutividade hidrulica.

Tabela 3.3 - Porosidade e condutividade hidrulica de alguns materiais (DUNNE e
LEOPOLD, 1978).
MATERIAL POROSIDADE (%) CONDUTIVIDADE
HIDRULICA (cm/s)
No Consolidado
Argila 45 55 menor que 10
-5

Areia fina 30 52 10
-5
10
-2

Cascalho 25 40 1 10
Argila depositada por
geleiras
25 45 10
-6
10
-2

Consolidado (Rocha)
Arenito e conglomerado 5 30 3,5 x10
-4
3,5 x10
-3

Calcrio (cristalino, no
fraturado)
1 10 3,5 x10
-8
10
-3

Granito (no intemperizado) inferior a 1 5 3,5 x10
-7
3,5 x10
-6

Rocha vulcnica 1 30 (na maioria
dos casos menor que
10)
3,5 x10
-6
3,5 x10
-3
(depende
da presena ou no de
fraturas ou bolhas de gs
interconectadas)

3.3.4. Densidade Absoluta ou Massa Especfica do Solo
A densidade absoluta aparente (bulk density) do solo a razo entre a sua massa seca e o
seu volume, de acordo com a expresso abaixo:
Densidade absoluta aparente = Massa do solo seco/Volume do solo (Eq. 1)

exemplos: solo argiloso granulado de superfcie = 1,0 a 1,3 g/cm
3

solo arenoso com partculas grandes = 1,3 a 1,8 g/cm
3
19
J a densidade absoluta das partculas do solo a razo entre a sua massa e o seu
volume ocupado. Assim, a densidade das partculas de qualquer solo constante e
independe de sua porosidade. A densidade das partculas no varia muito, a no ser que
haja uma grande variao no contedo da matria orgnica ou na composio
mineralgica. Para muitos solos minerais esta densidade de cerca de 2,6 g/cm
3
.

3.3.5. Minerais de Argila
Na evoluo de um solo, os processos qumicos de intemperismo produzem mudanas
bem profundas nas partculas minerais do solo, dissolvendo ou alterando os minerais
oriundos da rocha me (chamados de minerais primrios) produzindo silicatos laminares
e xidos. Esses produtos minerais de intemperismo so chamados coletivamente de
minerais secundrios, tendo tamanhos tpicos da frao de argila do solo (< 2m de
dimetro). Como eles possuem uma rea superficial muito alta, eles contribuem, junto
com o hmus, para a reatividade qumica do solo (MCBRIDE, 1994).
Qualquer partcula mineral com tamanho inferior a 2m de dimetro, por definio,
parte da frao de argila do solo (ver Tabela 3.2). Contudo, o termo mineral de argila se
refere aos silicatos laminares secundrios, que so os constituintes inorgnicos
preponderantes da frao fina mineral dos solos das regies temperadas. So
essencialmente silicatos de alumnio hidratados, com magnsio ou ferro substituindo
parcialmente o alumnio em alguns minerais e que, em alguns casos, incluem elementos
alcalinos ou alcalino-terrosos como constituintes essenciais, todos pertencentes aos
filossilicatos.
Os silicatos mais freqentemente encontrados nos solos so principalmente minerais dos
grupos da caolinita, da montmorilonita e da ilita.
No reticulado de ons de muitos minerais de argila figuram as duas unidades seguintes
(COSTA, 1999): (a) unidade octadrica: constitudo por um on central de alumnio,
ferro ou magnsio e com ons O
2-
ou OH
-
nos vrtices, formando um octaedro; (b)
unidade tetradrica: formada por um on de silcio que ocupa o centro de um tetraedro
cujos vrtices so ocupados por ons O
2-
ou, em certos casos, OH
-
.
Estas duas unidades estruturais unem-se entre si por ligaes covalentes formando
20
camadas. Unidades octadricas repetidas constituem camadas octadricas; unidades
tetradricas repetidas constituem camadas tetradricas (COSTA, 1999).
As unidades estruturais dos minerais de argila so em geral formadas pela ligao de 2
ou 3 camadas (1 ou 2 tetradricas e 1 octadrica) em lminas. As ligaes entre as
unidades de cada camada e entre as camadas de cada lmina so ligaes com forte
carter covalente, o que se traduz em unidades estruturais mais fixas.
Em vrios minerais de argila, a estrutura est eletrostaticamente desequilibrada, como
resultado da substituio de ons durante a formao dos minerais, sem alterao das
dimenses das unidades estruturais, sendo por isso denominadas substituies
isomrficas. o caso da substituio de Si
4+
por Al
3+
ou de Al
3+
por Fe
2+
ou Mg
2+
por
Li
+
, originando excesso de cargas negativas. As cargas negativas resultantes deste
processo denominam-se intrnsecas ou permanentes (COSTA, 1999). Os minerais de
argila so, por isso, eletronegativos, se bem que, em certas condies, possam apresentar
zonas de carga positiva.
Alguns autores englobam os xidos e hidrxidos de ferro e alumnio entre os minerais
de argila, tambm produtos de origem secundria (MCBRIDE, 1994). Eles so
componentes comumente encontrados na frao da argila em solos tropicais midos e
subtropicais.
Os colides de ferro e alumnio tm comportamento fsico e qumico muito diferente
dos silicatos: tm menor poder de reteno para a gua; tm muito menor adesividade,
plasticidade e tenacidade. Possuem baixa capacidade de troca catinica, mas as
superfcies desenvolvem pequenas mudanas (negativa ou positiva) como resposta ao
pH da soluo do ambiente do entorno.
Os silicatos laminares so a parte dominante da frao de argila em solos que no
sofreram um intenso ou prolongado processo intemprico (solos em regies glaciais ou
ridas). Contudo, em grandes extenses da superfcie da Terra so caracterizadas por
solos antigos que se formaram da rocha me h milhes de anos atrs. A frao mineral
encontrada nestes solos composta em grande parte por minerais no silicatos,
principalmente xidos e hidrxidos de ferro e alumnio. Como estes solos so
encontrados principalmente em regies tropicais ou subtropicais e uma grande parte dos
primeiros trabalhos em mineralogia e em qumica do solo foi desenvolvida em climas
21
mais temperados. S mais recentemente os xidos e hidrxidos tm recebido uma maior
ateno da comunidade cientfica.
A Tabela 3.4 apresenta estgios de intemperismo, com minerais representativos e grupos
de solos tpicos.

Tabela 3.4 Graus de intemperismo (STRAHLER e STRAHLER, 1973).
Estgio de
Intemperismo
Minerais Representativos Grupos de Solo Tpicos
Estgios Iniciais de Intemperismo
1 Gipsita (tambm halita, nitrato de
sdio)
Solos dominados por estes
minerais, nas fraes da argila e
2 Calcita (tambm dolomita, apatita) do silte fino, so os solos jovens
3 Olivina-hornblenda (tambm
piroxnios)
de todo o mundo, mas
principalmente os solos das
4 Biotita (tambm glauconita,
nontronita)
regies desrticas, onde a
escassez da gua mantm
5 Albita (tambm arnotita,
microcnio, ortoclsio)
mnimo o intemperismo
qumico.
Estgios Intermedirios de Intemperismo
6 Quartzo Solos dominados por estes
7 Muscovita (tambm ilita) minerais nas fraes da argila e
8 Silicatos do silte fino so principalmente
9 Montmorilonita aqueles de regies temperadas
desenvolvidas sob rvores e
gramneas. Incluem a maioria
dos solos dos cintures de trigo
e milho.
Estgios Avanados de Intemperismo
10 Caolinita Muitos dos solos intensivamente
11 Gibbsita intemperizados das regies
12 Hematita (tambm goetita,
limonita)
midas e quentes dos trpicos
tm frao de argila dominada
13 Anatsio (tambm rutlio, zirco) por estes minerais e so
freqentemente caracterizados
por sua infertilidade.

22
Solos, cuja frao de argila dominada por argilas de silicato, so representativos dos
estgios de intemperismo de 7 a 10, e so amplamente distribudos pelo mundo. Solos,
cuja frao de argila dominada por argilas xidas, so representativos dos estgios de
intemperismo de 11 a 13, e so comuns em trpicos midos.
Assim, como muito dos solos brasileiros tm elevados teores de xidos e hidrxidos de
ferro e alumnio, necessrio compreender melhor a sua influncia no destino e na
biodegradao dos contaminantes.

3.3.6. Matria Orgnica
A matria orgnica do solo constituda por materiais orgnicos frescos (tecidos
vegetais e animais), produtos excretados pelos organismos, produtos de decomposio e
compostos de sntese.
A matria orgnica transformada e alterada pela ao dos microorganismos e outros
organismos do solo definida como hmus. Constitui um conjunto muito complexo de
compostos orgnicos coloidais de cor escura e submetidos a um constante processo de
transformao. Ele pode ser dividido em dois subgrupos: as huminas e as substncias
hmicas (SCHWARZENBACH et al., 1993). As huminas ou substncias querognicas
no so solveis em gua, tanto em condies acidas como bsicas. As substncias
hmicas so divididas em cidos flvicos, solveis em soluo cida, e os cidos
hmicos, no solveis em soluo cida. Outros autores consideram o conjunto da
matria orgnica dos solos como substncias hmicas em geral (EVANGELOU, 1998).
O hmus contm uma grande variedade de grupos orgnicos funcionais, tais como
carboxila (COOH), hidroxila (OH) e carbonila (C=O). As molculas hmicas so
normalmente carregadas negativamente em funo da dissociao do prton desses
grupos funcionais. Estas substncias tm sua estrutura molecular alterada em funo de
mudanas no pH e na concentrao de eletrlitos (EVANGELOU, 1998). A estrutura
das substncias orgnicas contm cerca de 4050% de carbono em massa, mas contm
tambm quantidades significativas de oxignio e algum nitrognio
(SCHWARZENBACH et al., 1993).

23
As sustncias hmicas fornecem nutrientes aos microorganismos e so fontes de
energia. Elas tm poder aglomerante, unindo-se frao mineral, gerando bons flocos
no solo, que do origem a estruturas estveis na forma de grumos, de elevada
porosidade e permeabilidade. Estas substncias tm grande capacidade de reteno de
gua, o que facilita a fixao da vegetao, dificultando a ao dos agentes erosivos. O
hmus tem ainda propriedades coloidais, devido ao seu tamanho e carga (retm gua,
incham, contraem, fixam solues em superfcie etc.). Influi no pH, produzindo
compostos orgnicos que tendem a acidificar o solo.
O conceito de matria orgnica do solo se refere fase morta, mas na prtica incluem-se
tambm os microorganismos, dada a impossibilidade de separ-los da matria orgnica
transformada.
As interaes entre contaminante e a matria orgnica do solo um tema complexo e
aberto a investigaes. Mesmo conduzindo-se processos de biorremediao de modo
extensivo, resta no solo material orgnico residual (resduos de ligao), cujas
caractersticas e possveis efeitos txicos demandam por estudos aprofundados.
24
3.4. Estratgias de Tratamento de Solo Contaminado
Trs estratgias bsicas so usadas, em separado ou em conjunto, para a remediao de
solos contaminados por hidrocarbonetos de petrleo: destruio ou alterao dos
contaminantes; extrao ou separao dos contaminantes do local; imobilizao dos
contaminantes.
As tecnologias capazes de destruir os contaminantes ou alterar sua estrutura qumica so
divididas em mtodos trmicos, biolgicos e qumicos. Esses mtodos podem ser
aplicados in situ ou ex-situ. Nos processos in situ, a remediao feita no prprio meio
contaminado, sem a escavao do solo. No caso de tcnicas ex-situ, o solo escavado,
para ser tratado numa instalao de depurao especfica no local (on-site) ou fora dele
(off-site).
A Figura 3.5 ilustra a classificao das tecnologias de remediao em funo do tipo de
estratgia. Geralmente, uma nica tecnologia no pode remediar totalmente um stio
contaminado, sendo assim necessria a combinao de diversas tcnicas (DOD, 1994).

Figura 3.5 - Classificao das tecnologias de remediao em funo do tipo de
estratgia (DOD ENVIRONMENTAL TECHNOLOGY TRANSFER
COMMITTEE, 1994).
25
As funes naturais do solo so perturbadas em conseqncia da estratgia utilizada no
seu tratamento. No caso do uso de tcnicas in-situ, as funes do solo podem sofrer
mudanas em sua estrutura ou modificaes no balano hdrico. J as tcnicas ex-situ
podem modificar as caractersticas do solo de modo mais intenso. Neste caso, o solo
tratado pode ter diminuio das quantidades de matria orgnica, nutrientes e
capacidade de troca catinica, com conseqente reduo de suas propriedades filtrantes,
de tamponamento e de depurao.
A Tabela 3.5 mostra a distribuio de tecnologias utilizadas nos stios tratados entre
1982 e 1999, no mbito do mencionado programa Superfundo (U.S
ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY, 2001).

Tabela 3.5 Distribuio do uso de tecnologias de tratamento de solos em stios
dentro do programa Superfundo (U.S. ENVIRONMENTAL PROTECTION
AGENCY, 2001).

TECNOLOGIA NMERO DE STIOS %
Solidificao/Estabilizao 137 18.5
Incinerao (off-site) 94 12.7
Dessoro Trmica 61 8.3
Biorremediao 49 6.6
Incinerao (on-site) 42 5.7
Tratamento Qumico 10 1.4
Neutralizao 7 0.9
Lavagem de Solo 6 0.8
Aerao Mecnica do Solo 5 0.7
Extrao do Vapor do Solo 5 0.7
Extrao por Solvente 4 0.5
Queima/Detonao a Cu Aberto 2 0.3
Vitrificao 2 0.3
Separao Fsica 1 0.1
EX SITU TOTAL 425 57.5
Extrao do Vapor do Solo 196 26.5
Solidificao/Estabilizao In Situ 46 6.2
Biorremediao In Situ 35 4.7
Inundao de Solo In Situ 16 2.2
Recuperao Trmica Melhorada 6 0.8
Tratamento Qumico 5 0.7
Fitorremediao 5 0.7
Extrao de Duas Fases 3 0.4
Separao Eltrica 1 0.1
Vitrificao 1 0.1
IN SITU TOTAL 314 42.5
TOTAL 739 100.0
26
Entre as tcnicas ex-situ, h aquelas que usam a capacidade dos microrganismos de
degradar compostos orgnicos presentes no solo contaminado. Essas tcnicas, tambm
conhecidas como biorremediao, vm sendo aplicadas h mais de 20 anos para tratar os
resduos oleosos produzidos pela indstria petrolfera, como o caso da tcnica do
landfarming. No item 3.5, a biorremediao ser abordada em maiores detalhes.
27
3.5. Biorremediao
As tcnicas de biorremediao podem ser executadas tanto in situ como ex-situ. Em
funo do tema deste trabalho, a partir desse ponto s sero discutidos processos ex-situ.
Em linha geral, as tcnicas biolgicas ex-situ de tratamento de solo contaminado podem
ser divididas em trs grupos bsicos: em fase lama (normalmente em biorreatores);
tratamento na camada reativa do solo (landfarming, landtreatment etc.); empilhamento
do solo (compostagem e biopilha).
Nos stios do programa americano Superfundo, a distribuio de tecnologias de
biorremediao ex-situ empregadas, em nmero de casos, foi a seguinte (U.S.
ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY, 2001):
Landtreatment 33
Compostagem 8
Biopilha 3
Fase Lama 2
Outros 3

O emprego das tcnicas de biopilha e compostagem ainda relativamente baixo nos
stios do Superfundo, porm, tm sido empregados mais em locais contaminados por
vazamentos de tanque de estocagem enterrados de petrleo e derivados.
Uma das maiores vantagens das tcnicas de biorremediao a possibilidade de serem
executadas no prprio stio contaminado. Em relao s tcnicas convencionais
(incinerao, aterro etc.), so normalmente mais econmicas, eliminam
permanentemente o risco da contaminao, tm boa aceitao da opinio pblica e h
um encorajamento das agncias reguladoras ambientais com respeito sua utilizao,
podendo ser associadas com outros mtodos qumicos ou fsicos de tratamento.
Contudo, h diversas limitaes para o uso da biorremediao. Diversas substncias no
so susceptveis biodegradao, como os metais pesados, radionucldeos e alguns
compostos organoclorados. Em alguns casos, a biodegradao do contaminante pode
levar formao de metablitos txicos.
A biorremediao pode ser realizada com a adio de nutrientes e a otimizao de
condies ambientais do solo (pH, temperatura, umidade etc.), chamada de
28
bioestimulao, ou pela adio de microrganismos com a capacidade de degradar
rapidamente contaminantes especficos, conhecida como bioaumentao
(bioaugmentation). A bioaumentao normalmente acompanhada de otimizao de
condies ambientais do solo.
Vrios so os fatores que influenciam a taxa de biodegradao dos compostos presentes
no petrleo. Um dos fatores bsicos que os microrganismos com capacidade de utilizar
os poluentes orgnicos como fonte de energia e massa celular tenham contato direto
com os contaminantes.
Uma dada populao microbiana necessita de condies ambientais especficas, que se
no existirem, manter esta populao no estado latente at que as condies ideais
reapaream. Os principais fatores que influenciam a biodegradao de um contaminante
no solo esto listados na Tabela 3.6.

Tabela 3.6 Fatores que influenciam a biodegradao de um contaminante no solo
(VON FAHNESTOCK et al., 1998; DOD, 2002).
Fatores Qumicos e
Fsicos do Contaminante
Fatores Qumicos e
Fsicos do Solo
Fatores Biolgicos
Composio qumica Temperatura Distribuio dos
microrganismos no solo
Estado fsico Potencial redox Tipos de microrganismos
degradadores
Concentrao Umidade Tcnica de inoculao
Toxicidade pH Tcnica de adaptao
Solubilidade em gua Teor de matria orgnica Produo de metablitos
txicos
Nutrientes

3.5.1. Composio Qumica
A capacidade dos microrganismos de degradarem o petrleo e seus produtos, utilizando-
os como fonte de energia e carbono, bem conhecida (ATLAS, 1988; ROSATO, 1997).
Algumas generalizaes podem ser feitas quanto susceptibilidade dos hidrocarbonetos
29
de petrleo ao ataque microbiano (BARTHA e ATLAS, 1987):
a) Os hidrocarbonetos presentes em uma mistura complexa como o petrleo so, em
sua maioria, biodegradados por culturas microbianas mistas, de maneira simultnea,
mas em diferentes velocidades. A velocidade de biodegradao dos hidrocarbonetos
do petrleo varia em funo do desaparecimento de certos componentes e da
mudana da biota presente no sistema;
b) A presena de um dado hidrocarboneto em uma mistura de compostos de petrleo,
como substrato, pode ter uma influncia positiva (pelo processo de
cometabolizao) ou negativa (pela sua toxicidade) na biodegradao desta mistura;
c) A utilizao de alcanos C1-C4 restrita a poucas espcies. Os alcanos na faixa de
C5-C9 so txicos a muitos microrganismos, devido ao seu efeito solvente, isto ,
tendem a romper a estrutura da membrana lipdica dos microrganismos (SIKKEMA
et al., 1995). Os n-alcanos C10-C22, normalmente, so facilmente metabolizados.
Os alcanos com massas molares maiores, do tipo graxa slida, no so facilmente
biodegradados, por serem slidos e hidrfobos temperatura fisiolgica. Contudo,
j foi observada uma lenta biodegradao de n-alcanos com mais de 44 tomos de
carbono;
d) Os iso-alcanos so menos biodegradveis comparando-se com os n-alcanos
correspondentes. O radical metila pode retardar ou bloquear completamente a
biodegradao;
e) Alcenos (olefinas) tendem a ser mais txicos, ao menos em condies aerbias. So
menos degradveis, comparando-se com os n-alcanos anlogos. Contudo, os alcenos
so raros no petrleo bruto;
f) Os hidrocarbonetos monoaromticos podem ser txicos, mas em baixas
concentraes diversos microrganismos podem utiliz-los rapidamente.
Hidrocarbonetos poliaromticos, contendo de 2 a 4 anis, podem ser biodegradados
a taxas que decrescem com o aumento nmero de anis aromticos. Naftalenos,
compostos com dois anis aromticos, tendem a degradar mais lentamente que os
compostos monoaromticos. Contudo, vrios trabalhos mostraram uma degradao
mais rpida do naftaleno e metilnaftaleno, em relao ao benzeno e n-hexadecano,
em sedimentos contaminados com hidrocarbonetos de petrleo (LEE e HOEPPEL,
1991). Em sedimentos contaminados com leo cru, os monoaromticos so
30
degradados mais rapidamente que a frao de alcanos. A variao no processo de
degradao dos hidrocarbonetos aromticos pode ser atribuda ao tipo de
combustvel e a fatores ambientais presentes, j que a biodegradabilidade quase
sempre ligada viabilidade dos microrganismos. Hidrocarbonetos poliaromticos
com cinco ou mais anis so de biodegradao difcil e lenta;
g) Os cicloalcanos de baixo peso molecular raramente servem como substrato, sendo
degradados lentamente e em baixas concentraes. Os cicloalcanos altamente
condensados so refratrios biodegradao;
h) Os compostos heterocclicos que contm nitrognio, enxofre e/ou oxignio, quando
no muito condensados, podem sofrer degradao limitada. Asfaltenos altamente
condensados so muito resistentes biodegradao.
Dois excelentes trabalhos compilaram diversos estudos sobre a biodegradao de
hidrocarbonetos alifticos e aromticos (WATKINSON et al., 1990; SMITH, 1990).
Nesses artigos so apresentados os mecanismos de biodegradao dos hidrocarbonetos
mais estudados.
A Tabela 3.7 apresenta um resumo da relao entre a estrutura qumica de alguns
hidrocarbonetos de petrleo, em que derivados so principalmente encontrados e sua
biodegradabilidade.

31
Tabela 3.7 Estrutura qumica e biodegradabilidade (U.S. ENVIRONMENTAL
PROTECTION AGENCY, 1995).
Biodegradabilidade Exemplo de constituintes Derivados nos quais os
constituintes so usualmente
encontrados
Mais degradvel n-butano, n-pentano, n-octano Gasolina
Nonano leo diesel
Metilbutano, dimetilpentenos,
metiloctanos
Gasolina
Benzeno, tolueno, etilbenzeno,
xilenos
Gasolina
Propilbenzenos leo diesel, querosene
Decanos leo diesel
Dodecanos Querosene
Tridecanos leos combustveis para
aquecimento
Tretadecanos leos lubrificantes
Naftalenos leo diesel
Fluorantenos Querosene
Pirenos leos combustveis para
aquecimento
Menos degradvel Acenaftenos leos lubrificantes

3.5.2. Solubilidade em gua
O comportamento de uma mistura de hidrocarbonetos em gua bem diferente do que
em solo. A grande diferena entre ambientes aquticos e terrestres est relacionada ao
movimento e a distribuio do leo no meio fsico, alm da presena de matria
particulada, que afeta as caractersticas fsicas e qumicas do leo e, conseqentemente,
a sua suscetibilidade biodegradao (BOSSERT e BARTHA, 1984). Os vazamentos
terrestres so caracterizados, principalmente, pelo movimento vertical dos
hidrocarbonetos atravs das camadas do solo. A infiltrao dos hidrocarbonetos pelo
solo reduz a emisso de compostos volteis para a atmosfera. As partculas slidas
podem reduzir, por soro, a toxicidade dos componentes do leo.
32
A baixa solubilidade dos hidrocarbonetos em gua uma barreira ao acesso dos
microrganismos ao leo. Os hidrocarbonetos aromticos so mais solveis em gua que
os alifticos, mas sua solubilidade diminui bastante com a adio de radicais alquil
(YAWS e YANG, 1990). Na Tabela 3.8, pode-se verificar que a solubilidade de alguns
compostos alifticos decresce com o aumento da massa molar. Nesta mesma tabela
esto listadas algumas propriedades fsicas de alguns compostos aromticos.
A formao de emulses pela produo microbiana de biossurfactantes um processo
importante na captura dos hidrocarbonetos pelos fungos e bactrias (SINGER e
FINNERTY, 1984).

Tabela 3.8 - Propriedades fsicas de alguns hidrocarbonetos alifticos e aromticos
(EASTCOTT, 1988; HOWARD, 1990).
Composto N de carbonos
(anis de
benzeno)
Massa
molar
P.F. (C) P.E. (C) Solubilidade
(mg/L)
N-Alcanos
etano 2 30,1 -172,0 -88,6 63,7
n-hexano 6 86,2 -94,3 68,7 12,3
n-decano 10 128,3 -31,0 174,0 0,05
n-hexadecano 16 226,4 19,0 287,0 5,2 x 10
-5

n-eicosano 20 282,6 36,7 343,0 3,1 x 10
-7

n-hexacosano 26 366,7 56,4 412,2 1,3 x 10
-10

Iso-Alcanos
2-metilpentano 6 86,2 154,0 60,3 13,8
2,2,4-trimetilpentano 8 114,2 107,2 127,0 2,4
4-metiloctano 9 128,3 - 142,0 0,12
Alcenos
1-hexeno 6 84,2 -139,8 63,5 50,0
trans-2-hepteno 7 98,2 -109,5 98,0 15,0
1-octeno 8 112,2 -121,0 121,0 2,7
Monoaromticos
benzeno (1) 78,11 5,5 80,1 1791,0
tolueno (1) 92,13 -95,0 110,6 534,8
o- xileno (1) 106,16 -25,0 144,4 175,0
etilbenzeno (1) 106,16 -94,9 136,2 152,0
Poliaromticos
naftaleno (2) 128,16 80,0 218,0 31,7
antraceno (3) 178,22 217,0 354,0 0,045l
fenantreno (4) 178,22 101,0 340,0 1,1
pireno (5) 202,4 150 > 360 0,132
33
3.5.3. Concentrao do Contaminante
A taxa de biodegradao de muitos compostos orgnicos, principalmente em ambientes
aquticos, normalmente proporcional sua concentrao. H compostos, como os
hidrocarbonetos poliaromticos, cujas taxas de biodegradao so limitadas mais por
suas baixas solubilidades aquosas do que pela concentrao presente no meio
(THOMAS et al., 1986). Assim, a forte dependncia da taxa de biodegradao em
relao concentrao , geralmente, observada com hidrocarbonetos de maior
solubilidade em gua.
Altas concentraes de hidrocarbonetos podem causar inibio da biodegradao devido
limitao de nutrientes ou de oxignio, ou ainda, pelo efeito txico exercido pelos
hidrocarbonetos volteis (FUSEY e OUDOT, 1984). Dibble e Bartha (1979)
demonstraram que o aumento da massa de hidrocarboneto em um lodo oleoso aplicado
em solo, na faixa de 1,25 a 5 % de massa de hidrocarboneto por massa de solo seco,
provocou aumento da evoluo de CO
2
. Contudo, para o teor de 10 % em
hidrocarbonetos houve decrscimo em 15 % na evoluo de CO
2
, em relao
respirao do solo.
Linhares e Seabra (1991), usando a mesma tcnica de evoluo de CO
2
, mostraram que
j havia um decrscimo de CO
2
formado para o nvel de 5 % de hidrocarbonetos, usando
uma borra oleosa de refinaria aplicada em solo. O decrscimo da atividade microbiana
com o aumento da concentrao causado pelos componentes txicos do resduo.

3.5.4. Temperatura do Solo
Normalmente, a temperatura do solo um dos fatores mais importantes no controle da
atividade microbiana e das taxas de biodegradao da matria orgnica. As taxas de
degradao enzimtica e o metabolismo microbiano, teoricamente, dobram a cada
aumento de 10 C de temperatura, at atingir temperaturas inibitrias, usualmente, em
torno de 40 C, para a maioria dos microrganismos (ATLAS, 1981; LEAHY e
COLWELL, 1990). A temperatura pode tambm influenciar indiretamente a
biodegradao de um componente ou mistura, pela mudana de suas propriedades
fsicas, composio qumica ou toxicidade microflora. Em baixas temperaturas, a
34
viscosidade do leo aumenta e sua solubilidade em gua diminui, a volatilizao dos
alcanos txicos de baixo peso molecular reduzida, adiando o incio da biodegradao.

3.5.5. Umidade do solo
O solo deve conter umidade suficiente para estimular o crescimento de microrganismos
degradadores de hidrocarbonetos, mas no demais que leve reduo da permeabilidade
do solo. A gua necessria para o crescimento microbiano, a difuso dos nutrientes e a
eliminao dos excretas. O nvel de umidade do solo influencia os tipos de
microrganismos presentes e os processos de volatilizao. Normalmente, os teores de
gua no solo, ideais para atividade microbiana, ficam na faixa de 25 a 85 % da
capacidade de campo, dependendo do tipo de solo e do contaminante (PAUL e CLARK,
1989).
Holman e Tsang (1995) mostraram que a biodegradao de hidrocarbonetos aromticos
foi mais eficiente em teores de umidade entre 50 e 70% da capacidade de campo, para
um solo franco siltoso. Para sistemas de biopilha, Von Fahnestock e colaboradores
(1998) recomendam a faixa tima de umidade de 10% a 20%, em peso, correspondendo
faixa de 70% a 95% da capacidade de campo do solo.

3.5.6. pH
O pH do solo influencia os processos de biorremediao. A maioria das bactrias vive
na faixa de pH de 5 a 9, com um valor timo, em geral, um pouco acima de 7
(DRAGUN, 1988). Uma mudana no pH pode causar alterao na comunidade
microbiana, uma vez que cada espcie possui um pH timo especfico.
De modo geral, poucos so os solos que necessitam de ajuste radical de pH antes da
preparao de uma biopilha. Se o pH muito cido, adiciona-se cal para aument-lo. No
caso de o pH ser muito bsico, pode-se adicionar sulfato de amnia ou sulfato de
alumnio para reduzi-lo (HUESEMANN, 1994).
3.5.7. Ecotoxicidade em Solo
As anlises qumicas podem somente fornecer informaes sobre a presena,
35
concentrao e variabilidade dos contaminantes no solo. Elas no so capazes de prever
de modo seguro os efeitos prejudiciais dos contaminantes ao seres vivos, j que a
disponibilidade biolgica dos poluentes nos solos pode variar consideravelmente em
funo das espcies qumicas e das condies ambientais existentes. Para superar esta
limitao, necessrio empregar-se ensaios ecotoxicolgicos para avaliar os efeitos
adversos causados pelo descarte de substncias qumicas no ambiente, de forma a
integrar os efeitos combinados da mistura de todos os agentes qumicos presentes em
uma amostra (WONG et al., 1999, SATERBAK et al., 2000).
Os teste ecotoxicolgicos tm aplicao em avaliao de risco ambiental de stios
contaminados, no controle da eficincia de processos de remediao de solos e na
avaliao do potencial ecotoxicolgico de solos tratados, como pr-requisito para o seu
uso futuro.
Um fator bsico na escolha dos testes ecotoxicolgicos a serem usados conhecer quais
so as propriedades, tanto dos contaminantes como do meio fsico, que controlam o
transporte e o destino desses contaminantes no ambiente. As propriedades dos
contaminantes importantes so a solubilidade aquosa, a presso de vapor, a constante da
lei de Henry, a partio contaminante/meio coeficiente de partio solo/gua (K
d
), o
coeficiente de partio carbono orgnico/gua (K
OC
) e o coeficiente de partio
octanol/gua (K
OW
) a massa especfica e a viscosidade. J entre as propriedades do
meio poroso (solo) que influenciam o transporte dos contaminantes, destacam-se a
textura do solo e a distribuio de tamanho das partculas, a porosidade, a
permeabilidade, o teor de matria orgnica e a capacidade de troca catinica. Assim,
cada rota de exposio requer a escolha de organismos testes adequados.
Em comparao com os testes de toxicidade em meio aqutico, h poucos protocolos
para avaliar a toxicidade em solos. Contudo, diversas tcnicas esto sendo padronizadas,
aumentando assim o nmero de opes. Alguns investigadores tm tentado superar esta
falta de testes padronizados para ambientes terrestres com o preparo e anlise de
extratos por intermdio de testes de toxicidades aquticos. Porm, esta abordagem no
leva em considerao a toxicidade do contaminante sorvido na matriz do solo. A gua
intersticial pode subestimar os tipos e as concentraes dos contaminantes orgnicos
biodisponveis presentes (LISS e AHLF, 1997). Por outro lado, a anlise dos extratos
com testes de toxicidade aquticos pode ser til para explorar a mobilidade dos
36
contaminantes. Entretanto, componentes naturais do solo podem ser solubilizados nos
extratos em concentraes no toleradas por organismos aquticos, levando a resultados
positivos falsos. Van Gestel et al. (2001) destacam que testes em organismos aquticos
apresentam algumas vantagens como baixos custos e respostas rpidas, mas apresentam
baixa relevncia ecolgica.
Os microrganismos so os principais componentes biticos do solo e tm um papel
chave na degradao da matria orgnica e no ciclo de nutrientes. Assim, as bactrias do
solo podem ser utilizadas como indicadores de contaminao. A indicao de um efeito
txico pode ser evidenciada por mudana na densidade populacional bacteriana, na sua
diversidade e em suas atividades biolgicas.
Alguns testes de toxicidade microbianos so usados para avaliar extratos de solo. O
teste Microtox o mais conhecido e emprega uma bactria marinha bioluminescente
Vibrio fischeri. Alguns contaminantes inibem o metabolismo da bactria, diminuindo a
intensidade de luz emitida. J o teste ATP-TOX mede o efeito de uma amostra no
crescimento bacteriano. Neste caso, as bactrias so suspensas na gua do extrato de
solo. Cada bactria tem um teor relativamente constante de adenosina tri-fosfato (ATP)
no interior de sua clula. Assim, a medida do teor de ATP de uma suspenso de
bactrias dar uma indicao confivel da populao bacteriana. Esses mtodos so
descritos por Britton e colaboradores (1989).
O efeito de um dado composto no ambiente tambm pode ser avaliado por testes de
respirometria. A respirao do solo fortemente dependente de condies fisiolgicas
dos microrganismos e de outros fatores como o teor gua, temperatura, suprimento de
nutrientes e pH. Existem diversos mtodos para quantificar a respirao do solo
(EISENTRAEGER et al., 2000).
Entre os testes que empregam organismos que tm contato direto com os slidos
contaminados, os mais usados so o ensaio de mortandade de minhocas (Eisenia
foetida), o de germinao de alface (Latuca sativa) e o de crescimento de raiz de alface
(Latuca sativa). Estes ensaios esto descritos em detalhe por Greene et al. (1989).
O conjunto de testes para avaliar a qualidade de um solo, quanto possibilidade de seu
reciclo e reuso, deve ao menos conter os grupos listados na Tabela 3.9 (KRDEL e
HUND-RINKE, 2001).
37

Tabela 3.9 Seleo dos organismos para testes em solos e sedimentos.
Organismos Funo Via de exposio importante
microorganismos ciclo de nutrientes,
degradao de
contaminantes orgnicos
gua intersticial
minhocas estrutura do solo,
produtividade
gua intersticial (alimento)
colembola contribuio formao de
substncias hmicas
alimento
vegetais produtores gua intersticial

3.5.8. Biodisponibilidade de Compostos Orgnicos no Solo
Os poluentes presentes em solos e sedimentos, em muitos casos, so oriundos de
contaminaes antigas, ocorridas h mais de dez anos. Vrios estudos mostraram que
pesticidas persistentes (DDT, dieldrin, heptachlor, entre outros) e outros compostos
orgnicos inicialmente desapareciam do solo numa velocidade razovel, mas em seguida
a velocidade diminua de modo considervel. Muitas das vezes, nessa segunda fase a
velocidade de desaparecimento era muito baixa e de difcil deteco. A explicao para
este processo de que esses compostos orgnicos so intemperizados, isto ,
biodegradados pelos microrganismos (assim como perdas por volatilizao e por outros
processos abiticos), levando de forma clara diminuio progressiva de sua
biodisponibilidade aos microrganismos (ALEXANDER, 1995).
A taxa e a extenso da biodegradao de compostos orgnicos no solo, principalmente
para compostos hidrofbicos, so afetadas pelas complexas interaes entre as
molculas dos contaminantes, as partculas do solo, da gua intersticial e dos
microrganismos degradadores dos contaminantes. A Figura 3.6 mostra que os
compostos orgnicos podem estar dissolvidos na fase aquosa que envolve as partculas
do solo, dissolvidos na fase vapor, sorvidos nas partculas slidas ou na matria
orgnica nos poros do solo ou ainda como lquido de fase no aquosa NAPL (Non
Aqueous Phase Liquid).

38

Figura 3.6 - Distribuio dos contaminantes orgnicos nas diversas fases na zona
no-saturada do solo.

Nos casos em que a taxa de biodegradao dos contaminantes prxima a taxa de
dessoro destes contaminantes da fase slida do solo e a de dissoluo do NAPL, a
biorremediao limitada pela sua biodisponibilidade. Quando a taxa de biodegradao
muito menor que a de dessoro, ento, fatores microbianos limitam a biorremediao.
Processos intensivos de mistura de solo, adio de agentes surfactantes e estimulao
eletrocintica so consideradas como solues tecnolgicas para aumentar a
biodisponibilidade dos compostos orgnicos. Mesmo sabendo que muitas bactrias tm
capacidade de degradar compostos hidrofbicos, pouco se conhece das estratgias que
elas usam para melhorar seu acesso a poluentes hidrofbicos no solo (WICK et al.,
2001). A mais conhecida a produo de biossurfactantes. Os glicolipdios e os
fosfolipdios so os dois mais comuns grupos de biossurfactantes encontrados, contudo,
o tipo, a quantidade e a qualidade do surfactante microbiolgico dependem da natureza
do substrato, entre outros fatores (WILLUMSEN e KARLSON, 1997).
Os biossurfactantes so usualmente produzidos por microrganismos crescendo em
substratos pouco solveis em gua (NEU, 1996). O aumento da biodegradao dos
compostos hidrofbicos causado pela solubilizao ou emulsificao dos poluentes
39
sorvidos ou em fase livre, com ajuda dos surfactantes. Os surfactantes no aumentam a
concentrao aquosa de um composto, mas formam uma pseudofase miscelar dentro da
fase aquosa. Esta fase miscelar acumula o contaminante e facilita o seu transporte,
aumentando o seu acesso aos microrganismos (ZHANG et al., 1997).

3.5.9. Resduos de Ligao
Todos os compostos qumicos orgnicos antropognicos formam resduos no
extraveis, em extenso varivel, quando em contato com o solo. Esse fenmeno tem
sido estudado h muitos anos, especialmente no campo da agroqumica do solo (por
exemplo, pesticidas). Processos anlogos tm sido observados durante a biorremediao
de solos contaminados por hidrocarbonetos. A formao de resduos de hidrocarbonetos
policclicos aromticos txicos e carcinognicos de particular interesse.
Os resduos de ligao (bound residues) de pesticidas despertaram o interesse da
comunidade cientfica h mais de trs dcadas quando estudos demonstraram que uma
parte significativa dos pesticidas no era biodegradada, mas sim ligada aos minerais de
argila e matria orgnica do solo (KSTNER e RICHNOW, 2001).
A formao de resduos de ligao no solo atribuda principalmente a interaes
fsicas e qumicas dos compostos xenobiticos com a matria natural orgnica. Os
principais fatores que influenciam a sua formao so:
Reatividade qumica das substncias antropognicas;
Reatividade do substrato ligante (matriz macromolecular);
Processos de transformao microbiana;
Presena de agentes catalisadores como enzimas, minerais de argila, oxignio e
compostos de mangans e ferro.
Os resduos de ligao tm sido considerados como o principal sumidouro de compostos
orgnicos no solo. Eles so usados em estratgias alternativas biorremediao de
contaminantes antropognicos (BOLLAG, 1992).
O processo geral de formao de resduos de ligao freqentemente considerado
como uma transformao de poluentes antropognicos em hmus, j que o carbono
40
xenobitico fica associado com a matria orgnica natural presente no solo. Assim, o
carbono xenobitico seqestrado pelas matrizes orgnicas macromoleculares, de
difcil acesso, com o uso de procedimentos analticos convencionais. Com a ligao, o
composto xenobitico perde a sua identidade estrutural, o que inclui suas caractersticas
fsicas, qumicas e biolgicas.
Hupe e colaboradores (1998) desenvolveram estudo para levantar o balano de carbono
do leo diesel durante a sua biodegradao em solo. Ao final do teste, 59% do carbono
presente no leo diesel inicialmente adicionado ao solo foi convertido de dixido de
carbono, 4% foi volatilizado, 4% foi incorporado biomassa e 8% foi extrado por
processo convencional de extrao, como apresentado na Tabela 3.10. A diferena
obtida no balano de carbono foi de 24%. Provavelmente esta quantidade ficou sorvida
no hmus do solo, como resduo de ligao.

Tabela 3.10 Balano de massa para o carbono (HUPE et al., 1998).
FRAO PERCENTAGEM DO CARBONO
DO LEO DIESEL NA FRAO
Hidrocarbonetos de petrleo totais extraveis 8
Volatilizado 4
Convertido em CO
2
59
No quantificado (sorvido na matriz do solo) 24
Biomassa microbiana 4

A atividade microbiana estimula a formao de resduos de ligao e est associada
biodegradao da respectiva substncia qumica. Quando da sua ligao com o material
residual, a sua biodisponibilidade no solo fica bastante reduzida. Se por um lado a
toxicidade real da substncia diminui, por outro a sua persistncia no ambiente
aumentada. As conseqncias ecolgicas dos resduos de ligao no foram ainda bem
avaliadas. necessrio saber por quanto tempo o material ligado matriz hmica do
solo ficar imobilizado. Como os resduos no extraveis macromoleculares so de
difcil exame por procedimentos analticos convencionais, as conseqncias ecolgicas
desses resduos precisam ser mais bem estudadas, principalmente em termos de sua
41
estabilidade qumica a longo prazo.
Num contexto de avaliao de risco ambiental, o emprego de tcnicas de
biorremediao deve levar em considerao a formao de metablitos no extraveis.

42
3.6. Biopilha
3.6.1. Descrio Geral do Processo
O sistema de biopilha uma variao da tcnica de compostagem de materiais
orgnicos. Na compostagem, o resduo orgnico metabolizado e transformado em
hmus e em subprodutos inertes, tais como dixido de carbono, gua e sais minerais,
tanto em condies aerbias como anaerbias. Esse mtodo de estabilizao de resduos
orgnicos tem sido empregado h vrias dcadas para estercos de animais, bio-slidos
municipais, poda de jardinagem e resduos urbanos orgnicos, entre outros (U.S.
ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY, 1998). As condies termoflicas (50 a
65C) devem ser mantidas durante o processo at se atingir o estgio maduro (ou de
cura), quando as temperaturas decrescem.
Na compostagem, os resduos so colocados em leiras ou pilhas, que so periodicamente
reviradas mecanicamente para que haja incorporao de oxignio. O outro processo de
suprimento de oxignio se d por intermdio de sistemas de distribuio com tubos
perfurados. Nesse caso, a leira mantida esttica at o final do processo.
Nos ltimos anos, a compostagem tambm tem sido empregada no tratamento de solos
contaminados por hidrocarbonetos de petrleo, HPA, pesticidas e explosivos (TNT,
RDX etc.), com bons resultados (DOD, 1994, U.S. ENVIRONMENTAL
PROTECTION AGENCY, 1998). Material estruturante (cavaco de madeira, resduos de
agricultura etc.) misturado ao solo para melhorar a sua textura, visando melhorar a
permeabilidade de gases e lquidos na leira.
O termo biopilha (em ingls biopile, heap pile bioremediation, biocell, bioheap,
biomound ou static-pile composting) comeou a ser empregado no incio dos anos 90,
quando solos contaminados por produtos orgnicos industriais comearam a ser
misturados com materiais estruturantes e nutrientes, visando o estmulo da
biodegradao desses contaminantes de maneira controlada. Atualmente, muitas
publicaes utilizam os termos biopilha e compostagem quase como sinnimos.
Contudo, de modo geral, para sistemas com revolvimento peridico das pilhas tem se
empregado o termo compostagem. Alm disso, a compostagem seria mais bem
caracterizada quando h um grande teor de matria orgnica a ser estabilizado,
43
acarretando temperaturas elevadas (na faixa termoflica), o que no ocorre normalmente
com os solos contaminados.
O sistema de biopilha uma tecnologia j desenvolvida em escala industrial,
basicamente para solos arenosos. O solo escavado contaminado colocado em pilhas ou
clulas, cujo teor do contaminante presente reduzido por biodegradao. Umidade,
nutrientes, oxignio, temperatura e pH podem ser controlados para estimular a atividade
degradativa dos microrganismos presentes no solo (DOD, 1994; OFFICE OF
UNDERGROUND STORAGE TANKS, 1995).
As biopilhas so normalmente dispostas em locais impermeabilizados com mantas para
reduzir os riscos de migrao do lixiviado para regies de subsuperfcie no
contaminados. No processo esttico, o oxignio fornecido por meio de uma rede de
tubos perfurados instalado acima da base, conectada a um soprador ou bomba a vcuo.
Em alguns casos, necessrio construir um sistema de coleta de lixiviado para o seu
tratamento, especialmente quando existe sistema de distribuio de umidade.
Usualmente, as biopilhas so cobertas com mantas impermeveis para minimizar o
escape de poluentes, principalmente volteis, alm de proteger o solo do vento e das
chuvas (VON FAHNESTOCK et al., 1998).
Outra maneira de fornecer o oxignio revolver periodicamente a pilha usando sistema
mecnico, chamado de sistema dinmico. Este sistema mais indicado quando o solo a
ser tratado apresenta tendncia de formao de grumos, normalmente em funo da
presena de teores de argila e silte elevados.
A altura tpica de uma biopilha varia de 2 a 3 metros, largura entre 5 e 10 metros e
comprimento mximo de 30 m. A inclinao deve ter um ngulo inferior a 35,
dependendo da textura do solo.
A biopilha usada em tratamentos de curta durao, de 3 a 6 meses, em condies
otimizadas. O sistema de biopilha de projeto e construo relativamente simples. Na
sua construo, o solo pode ser misturado com: (a) esterco maduro ou composto, para
aumentar a populao microbiana e ser um suprimento adicional de nutrientes; (b)
corretivo de solo (ex. sulfato de clcio hidratado - gesso); (c) material estruturante
(serragem ou palha, por exemplo), para garantir que o meio tenha uma textura mais
permevel; (d) substncia qumica para ajuste do pH do solo, que deve estar dentro da
44
faixa de 6 a 8.
No caso de aerao forada, deve-se periodicamente adicionar gua biopilha devido ao
processo de secagem do solo. O acmulo excessivo de umidade pode ocorrer em reas
com baixa drenagem, o que prejudica a biodegradao do contaminante.
Devido presena de compostos volteis no contaminante, estes tendem a se evaporar
durante a extrao ou injeo de ar, necessitando-se de um sistema de captura e
tratamento dos vapores. Isto pode ser obtido com a colocao de uma cobertura na
biopilha e com a instalao de um sistema de coleta dos vapores. A Figura 3.7 mostra
um sistema tpico de biopilha esttica. Um sistema dinmico apresentado na Figura
3.8

Figura 3.7 Esquema tpico de um sistema de biopilha esttica (LEAHY e
BROWN, 1994).

45

Figura 3.8 Sistema de biopilha dinmica na cidade de Carmpolis, Brasil
(SEABRA et al., 2005).

3.6.2. Vantagens e Desvantagens
Como todos os processo de tratamento de solos contaminados, h vantagens e
desvantagens no emprego de biopilhas, que esto listadas na Tabela 3.11 (DOD, 1994;
OFFICE OF UNDERGROUND STORAGE TANKS, 1995; VON FAHNESTOCK et
al., 1998; DOD, 2002).

46
Tabela 3.11 Vantagens e desvantagens do sistema de biopilha para tratamento
solos contaminados.
VANTAGENS DESVANTAGENS
Projeto e implementao simples Reduo de concentrao de poluente >
95% difcil de ser alcanada.
Perodos de tratamento curtos: de seis
meses a dois anos, em condies
otimizadas.
Pode no ser efetivo para altos teores de
contaminantes > 50 000 mg de
hidrocarbonetos de petrleo totais/kg de
solo seco.
Custos relativamente baixos: US$ 30-
90/t de solo contaminado (OFFICE OF
UNDERGROUND STORAGE
TANKS, 1995). Outros trabalhos
indicam valores um pouco superiores,
de US$ 100-200/t, incluindo a
preparao do local e a colocao de
manta protetora (DOD, 2002).
Presena de concentraes elevadas de
metais pesados (> 2500 ppm) pode
inibir o crescimento microbiano.
Constituintes volteis tendem mais a
evaporar do que serem biodegradados
durante o tratamento.
Pode ser aplicado a solos contaminados
por hidrocarbonetos de petrleo (leo
diesel, borras oleosas, querosene de
aviao, leo cru) e alguns pesticidas.
Os vapores gerados precisam sofrer
tratamento antes de seu descarte para a
atmosfera.
Necessita de superfcie menor do que o
sistema de landfarming.
O projeto pode contemplar um sistema
de coleta de emisses de vapores.
Baixo desempenho em solos com baixa
condutividade hidrulica (K < 10
-4

cm/s) e com teor de silte mais argila
superior a 10%, em peso.

3.6.3. Aplicao
A biopilha j provou ser eficiente na diminuio da concentrao de praticamente todos
os constituintes presentes em produtos de petrleo, para solos arenosos (DOD, 2002).
Os produtos de petrleo mais leves (mais volteis), como a gasolina, tendem a ser
removidos por evaporao durante o processo de aerao e, em menor extenso, pela
degradao microbiana. Os produtos mdios (ex: leo diesel e querosene) contm menor
quantidade de constituintes leves que a gasolina. Neste caso, o processo de
biodegradao mais importante que o de evaporao. Nos produtos de petrleo
pesados (ex.: leos combustveis e lubrificantes) o mecanismo dominante de
47
desaparecimento destes produtos a biodegradao. Contudo, compostos de petrleo
com altas massas molares normalmente requerem um maior tempo de degradao do
que os constituintes de produtos mdios.
Compostos volteis e semivolteis halogenados, alm de pesticidas, tambm podem ser
tratados, mas a eficincia do processo variar e poder ser aplicado a somente alguns
compostos presentes nessas classes de contaminantes.

3.6.3.1. Experincias com Hidrocarbonetos de Petrleo
A tecnologia de biopilha j foi testada no tratamento de solos contaminados por
hidrocarbonetos de petrleo, tanto em escala piloto como em escala de campo
(SAMSON et al., 1994; PUUSTINEN et al., 1995; LUNDGREN et al., 1997;
CHACONAS et al., 1997; CYR et al., 1997; VON FAHNESTOCK et al., 1997;
KONING et al., 1998; JRGENSEN et al., 2000, NAMKOONG et al., 2002).
Na Tabela 3.12 est apresentado um resumo de alguns dos estudos de campo em que se
empregou biopilha no tratamento de solos contaminados com petrleo ou derivados,
com a identificao do stio, tipo de contaminante presente no solo, tempo de tratamento
e eficincia de remoo de contaminante.
Chaconas e colaboradores (1997) mostraram que o tratamento de solo contaminado com
hidrocarbonetos, na faixa do leo diesel, apresentou maior nvel de degradao que o
observado no mesmo solo contaminado por hidrocarbonetos na faixa de leo
lubrificante. McMillen e colaboradores (1996) estudaram o tratamento do solo retirado
de fosso de flare, na realidade uma mistura de borra oleosa com solo, em ambiente frio.
Aps oito semanas de tratamento, de 62 a 86% dos HPT foram degradados, mostrando
que mesmo em baixas temperaturas o processo de biodegradao se mostrou eficiente.

48
Tabela 3.12 Casos de campo de tratamento por biopilha de solos contaminados
com petrleo ou derivados.
Stio Contaminante Tempo de
tratamento
(semanas)
Eficincia
de remoo
(%)
Referncia
Alberta, Canad Lodo de fosso de
flare (leo
intemprico)
8 62 a 86 MCMILLEN et al.,
1996
Nebraska, EUA leo diesel 52 38,9 CYR et al., 1997
Marine Corps,
Hava, EUA
Diesel e QAV 7 57,1 VON FAHNESTOCK
et al., 1997
EUA Hidrocarbonetos
intempricos
45 55 HAYES et al., 1995
SERDP, EUA leo lubrificante
(>C22)
47 70,4 CHACONAS et al.,
1997
SERDP, EUA Faixa do leo
diesel
47 87,6 CHACONAS et al.,
1997
Helsinque,
Finlndia
leo lubrificante 21 70 JRGENSEN et al.,
2000

A variao de eficincia se deve s caractersticas dos contaminantes, ao seu grau de
intemperismo, ao tipo de solo, entre outros fatores. Os produtos mais leves como o leo
diesel foram mais biodegradados do que produtos mais pesados (leo lubrificante). O
nico caso destoante foi o trabalho realizado por Cyr e colaboradores (1997), que
mesmo para um contaminante como leo diesel, obtiveram eficincia de degradao
baixa. A possvel explicao seria o tipo de solo tratado, silte arenoso, que dificultaria o
transporte de oxignio pela pilha.
Quando o contaminante era um leo intemprico, o nvel de degradao alcanado foi
baixo (HAYES et al., 1995, MCMILLEN et al., 1996). Isto se explica pela baixa
biodisponibilidade das fraes residuais (resduos de ligao) em contaminaes
antigas, assunto discutido no item 3.5.9.

49
3.6.3.2. Cintica de Biodegradao
Em sistema de biopilha, a cintica de biodegradao dos contaminantes orgnicos
presentes no solo considerada de 1 ordem, como assumido por diversos autores
(HEUSEMANN, 1997; SONG et al., 1990; FILAURO et al., 1998; PORTA et al.,
1998; TAMBURINI, 1998; JRGENSEN et al., 2000; NAMKOONG et al., 2002).
A cintica de degradao de 1 ordem expressa pela Equao 2:
kC
dt
dC
=
(Eq. 2)
onde:
dC
dt
= taxa de desaparecimento do contaminante;
C = concentrao do contaminante num tempo t [mg/kg de solo]
k = coeficiente de remoo de contaminante [dia
1
].

Integrando-se a equao anterior com a condio inicial (t=0, C=Co), tem-se a
Equao 3:
ln
C
Co
kt
= (Eq. 3)

Onde: Co = concentrao do contaminante no tempo zero [mg/kg de solo].
t = tempo [dia]

Namkoong e colaboradores (2002) estudaram o uso de corretivos (lodo de esgoto e
composto) na biorremediao de solo contaminado com leo diesel. Variando as
relaes solo e corretivo, obtiveram-se coeficientes de remoo (k) para n-alcanos na
faixa de 0,068 a 0,272 dia
-1
. Esta faixa de valores, segundo esses autores, duas vezes
maior que a obtida para os hidrocarbonetos de petrleo total - HPT (0,036 a 0,124
dia
-1
).

3.6.3.3. Influncia do Oxignio
Mesmo que diversas substncias orgnicas presentes em solos contaminados sofram
degradao em ambiente anaerbio, os processos nos quais o oxignio o aceptor de
50
eltrons so mais rpidos e devem ser incentivados nas biopilhas. Para tanto, o oxignio
fornecido por meio de uma rede de tubos perfurados instalado acima da base,
conectada a um soprador ou bomba a vcuo (sistema esttico). Outra maneira de
fornecer o oxignio revolver periodicamente a pilha usando um sistema mecnico
(sistema dinmico).
Hupe e colaboradores (1998) estudaram a influncia da concentrao do oxignio
presente na corrente do gs sinttica insuflado em biopilha usada para tratar solo
contaminado por leo diesel. No foi observada influncia significativa do teor de
oxignio no gs, dentro da faixa de 1 a 80% em volume, no decrscimo dos
contaminantes e na mineralizao total. A explicao para este fato que, durante o
teste, os compostos mais biodegradveis so eliminados mais rapidamente, deixando no
meio os compostos mais refratrios (iso-alcanos etc.), que aps as sete semanas de teste
se tornaram os preponderantes.
Outro trabalho avaliou a distribuio do oxignio em pilhas, sem sistema de aerao, em
funo da altura das pilhas, e sua influncia na biodegradao de contaminantes em
biopilha (KONING et al., 1999). Segundo os autores, sem aerao a transferncia de
oxignio nas biopilhas determinada pela difuso e usualmente limitada a
profundidades de 2 metros. Pilhas com alturas superiores a 3 metros precisam ter
aerao forada ou revolvimento freqente.

3.6.3.4. Materiais Estruturantes (Bulking Materials)
Para solos com teores elevados de finos (silte e argila), a desagregao do solo e/ou a
mistura com agente estruturante normalmente necessria para melhorar a estrutura e a
porosidade do solo.
Os agentes estruturantes mais comuns so serragem, palhas de diversas origens, cavacos
de madeira, areia, entre outros materiais. Em alguns casos emprega-se composto maduro
como material estruturante, que teria tambm o papel de aumentar a populao
microbiana e ser um suprimento adicional de nutrientes (STEGMANN et al., 1991).
A concentrao de corretivo necessria depender do tipo de solo, isto , com o aumento
do teor de argila e silte presentes ser necessrio aumentar a relao de agente
51
estruturante corretivo para melhorar a estrutura do solo. Contudo, o teor do material
estruturante limitado por motivos econmicos e, em muitos casos, por restries de
agncias de controle ambiental.
A razo de material estruturante para solo contaminado deve ser tal que no haja
inibio da atividade microbiana (THOMAS et al., 1992). Para solo artificialmente
contaminado por leo diesel, Stegmann e colaboradores encontraram o melhor nvel de
biodegradao para a razo de solo-composto maduro de 2/1, usando composto com
tempo de maturao de seis meses (STEGMANN et al., 1991).
Park e colaboradores (2001) estudaram o emprego de composto como material
estruturante no tratamento de solo contaminado por leo diesel, nas seguintes razes de
solo solo-composto: 1/0,1; 1/0,3; 1/0,5; 1/1. A maior reduo de HPT foi de 98,4%,
aps 30 dias de tratamento, conseguida com a relao solo-composto de 1/0,5. A adio
de composto acima desta relao no aumentou o nvel de degradao do diesel.

3.6.3.5. Bioaumentao
A adio de microrganismos no sistema de biopilha para estimular a biodegradao dos
contaminantes presentes chamada de bioaumentao (bioaugmentation). A
bioaumentao pode ser realizada com culturas exgenas ou isoladas da prpria
microflora presente no solo a ser tratado.
Diversos trabalhos mostraram que o uso da bioaumentao no incrementou o nvel de
biodegradao dos poluentes se comparada com a simples correo de fatores
ambientais (nutrientes, gua, pH etc.) (HUESEMANN e MOORE, 1993; MARGESIN e
SCHINNER, 1997; WHYTE et al., 1999).
Jrgensen e colaborados avaliaram dois inculos comerciais, em solos contaminados
por leos diesel e lubrificantes (JRGENSEN et al., 2000). Os testes no evidenciaram
benefcio significativo no uso desses produtos na biodegradao dos hidrocarbonetos.
Em alguns casos, a aplicao de culturas microbianas comerciais levou mesmo uma
inibio do processo de biodegradao (MOLLER et al., 1995). Porm, estudo com
pilhas aeradas em escala piloto (volume de cada pilha igual a 535 m
3
) mostrou que a
adio de produto microbiolgico comercial levou a uma reduo da concentrao de
52
HPT em 71%, versus a reduo de 44% na pilha sem a adio desse produto, aps 18
semanas de tratamento (MORRISON et al., 1997). A bioaumentao pode ser benfica
em certos casos em que h compostos recalcitrantes ou que o solo tenha uma baixa
atividade microbiana. No artigo de Morrisson e colaboradores, no h indicao que as
duas situaes estavam presentes.
O uso de composto e de lodo de esgoto domstico como fonte de microrganismos e
nutrientes tem sido investigado por vrios autores (THOMAS et al., 1992; LA GREGA
et al., 1994; NAMKOONG et al., 2002). A eficincia de degradao aumenta com o
aumento da relao composto ou lodo com o solo. Porm, os teores de composto ou
lodo necessrios para obter uma melhoria significativa tm que ser muito elevados, na
faixa de 33% em base mssica (NAMKOONG et al., 2002).
Cunningham e Philip compararam a bioestimulao com a bioaumentao, em solos
contaminados por leo diesel, e o uso de esterco de cavalo (fonte de microrganismos)
no apresentou melhoria na biodegradao dos hidrocarbonetos (CUNNINGHAM e
PHILIP, 2000). Outro estudo avaliou o emprego de solos j tratados com fonte de
inculo, no tratamento de solos contaminados por diesel (HWANG et al., 2001). Os
resultados no foram conclusivos.

3.6.3.6. Teor de Argila
Altos teores de argila no solo causam efeito adverso no processo de biodegradao em
biopilhas, basicamente, de duas maneiras. Na primeira, h a tendncia de formao no
solo de agregados ou grumos, o que reduz a permeabilidade do solo e, assim, dificulta a
aerao adequada e uniforme na pilha. O outro fator negativo a diminuio da
biodisponibilidade dos contaminantes orgnicos e, conseqentemente, a porcentagem de
sua biodegradao, devido ao forte poder de adsoro de contaminantes orgnicos pelas
argilas (HUESEMANN, 1994).
A formao no solo de agregados pode ser minimizada com adio de materiais
estruturantes (areia, palha, cavaco de madeira, serragem, esterco seco etc.) ou pela
moagem do solo.
53
3.6.3.7. Teor de metais
Concentraes traos de alguns metais so essenciais para o crescimento de
microrganismos, porm, quando elevadas podem apresentar efeito deletrio. Altas
concentraes de metais no solo podem retardar ou mesmo interromper o processo de
biorremediao. De maneira geral, o teor de metais pesados e de transio no solo a ser
tratado deve ser inferior a 2.500 mg/kg. Concentraes maiores de metais catinicos
podem ser toleradas se o pH no solo for superior a 6,5 ou quando a capacidade de troca
catinica seja alta (U.S. ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY, 1983).
Lundgren e colaboradores (1997) estudaram solos contaminados por petrleo, com a
presena de altos teores de metais pesados (nquel cobre, zinco e chumbo). A
concentrao mdia desses metais de 17.000 mg/kg de solo seco no teve efeito
negativo no nvel de biodegradao dos hidrocarbonetos. Nos estudos em escala piloto,
a taxa mdia de remoo de hidrocarbonetos totais de petrleo nos 46 primeiros dias foi
de 287 mg/kg dia. Para os primeiros 228 dias, a taxa mdia de remoo foi de 145
mg/kg dia. Quando do estudo em escala de campo, a remoo mdia dos HPT foi de 252
mg/kg dia, num perodo de 138 dias. Uma possvel explicao para a tolerncia a este
alto teor de metais seria a presena de ons de ferro em alta concentrao (69.300
mg/kg). Os ons de ferro teriam um efeito estimulante na atividade biodegradativa no
solo.

3.6.3.8. Influncia da concentrao de nitrognio
O aporte de nitrognio para sistemas de biorremediao normalmente expresso pela
razo C:N. Essa abordagem tem sido empregada em diversos projetos de
biorremediao, mas uma grande variao de relaes tem sido usada. Normalmente,
so aceitas razes na faixa de 20:1 a 10:1, contudo, o uso de razes na faixa de 200:1 a
9:1 tm sido reportadas (HUESEMANN, 1994). A recomendao de quantidade de
nitrognio pode ser tambm baseada em massa de solo (g N/kg de solo), em vez do
nvel de C do substrato. Huesemann recomenda a no adio de nitrognio se o
nitrognio inorgnico do solo exceder a 50 mg N/kg solo e no adicionar mais do que
250 mg de N/kg solo de uma nica vez para evitar a lixiviao e a toxicidade
54
(HUESEMANN, 1994). Alguns trabalhos j mostraram nveis de inibio por adio de
nitrognio, para solos contaminados por hidrocarbonetos de petrleo, na faixa de 100 a
4.000 mg N/kg solo (Tabela 3.13).
Uma concepo diferente para a medio de nitrognio para processos de
biorremediao foi apresentada por Walworth et al. (1997). Ela se baseia no teor de
nitrognio na fase aquosa do solo. A super fertilizao, que deprime a atividade dos
microrganismos que degradam os hidrocarbonetos de petrleo, seria controlada pelo teor
de gua no solo. Solos molhados fornecem um maior volume de gua para diluir o
composto de nitrognio que solos secos. Assim, a resposta adio de nitrognio estaria
intimamente relacionada com a umidade do solo. Nesse estudo, o nvel timo de
nitrognio em gua foi de 2.000 mg N/kg H
2
O, para os solos estudados (WALWORTH
et al., 1997).

Tabela 3.13 Estudos publicados mostrando a inibio induzida pela adio de
nitrognio na biorremediao.
Referncia Textura do Solo Nvel de Inibio por N
(mg N/kg solo)
BROWN et al., 1983 Argilo arenosa 913
DIBBLE e BARTHA, 1979 Franco arenosa 1667
HUNTJENS et al., 1986 Areia 400
GENOUW et al., 1994 Areia franca 4005
MORGAN e WATKINSON, 1992 Areia 1750
ZHOU e CRAWFORD, 1995 Areia 119

3.6.3.9. Estudos no Brasil
Uma das primeiras teses de ps-graduao em que foi estudado o sistema de biopilha foi
defendida por Daniella Pala (2002). Nela foi estudada a influncia de fatores que
influenciam a biodegradao de um tipo de petrleo presente em solo contaminado
acidentalmente. Os primeiros testes foram desenvolvidos em reatores de fase lama e de
leito fixo. A remoo de material oleoso (em termos de leos e graxas) foi de cerca de
55
80%, num perodo de 30 dias nos reatores de fase lama. Contudo, nos testes em biopilha
de bancada, a remoo dos contaminantes foi mnima.
Outro estudo foi desenvolvido no Centro de Pesquisas da Petrobrs CENPES para
avaliar a tratabilidade de um solo contaminado por leo combustvel (SORIANO et al.,
2002). Os resultados mostraram boa biodegradabilidade. Silva et al. (2004) estudaram o
uso de biopilha em solo arenoso do Rio Grande do Norte artificialmente contaminado
com leo diesel (2 e 4% m/m). O teor de nitrognio foi o fator mais relevante no
processo de biodegradao do leo.
Nos ltimos dois anos, a tcnica de biopilha foi aplicada em diversas regies do Brasil
em escala semi-industrial e industrial. Contudo, poucos foram os registros dos
resultados na literatura tcnica. Seabra e colaboradores (2005) desenvolveram o
tratamento de solos argilosos e arenosos contaminados por derramamentos acidentais de
petrleo com biopilhas dinmicas. No caso de solos argilosos, cujo teor mdio de HPT
inicial foi de 5,8% em massa, o melhor desempenho de remoo de HPT alcanado foi
de 86,2%, aps 24 semanas de tratamento. A remoo de HPT (concentrao inicial de
1,7%, em base mssica) obtida para solos arenosos foi de 70%, mas com apenas 12
semanas de tratamento. Em ambos os casos empregaram-se casca de arroz como
material estruturante, com relaes volumtricas de solo-casca de 9:1 a 4:1.

3.6.3.10. Parmetro e valores alvos
No mundo, existem basicamente dois tipos de abordagem usados na proteo da
qualidade de solo e guas subterrneas. A primeira trabalha com valores de referncia de
qualidade e de interveno, como na Holanda, Alemanha, Dinamarca e Canad. Estes
valores so obtidos utilizando avaliao de risco ao homem para casos genricos de
contaminao. Na outra abordagem, os valores de interveno so obtidos tambm com
o emprego de avaliao de risco ao ser humano e ao meio ambiente, porm utilizando os
dados obtidos de cada stio contaminado especfico. Este tem sido o enfoque da Frana e
a da grande maioria dos estados dos EUA (VISSER, 1994; CETESB, 1997).
No Brasil, s o estado de So Paulo, por intermdio da Companhia de Tecnologia de
Saneamento Ambiental CETESB, que estabeleceu valores orientadores de proteo
56
da qualidade de solo e de guas subterrneas (CETESB, 2001a). A CETESB chegou a
esses valores orientadores a partir de modelos de anlise de risco, baseando-se na
definio de cenrios de uso e ocupao do solo, nas diferentes via de exposio e na
quantificao de varveis toxicolgicas (CASARINI, 2000).
Em diversos pases onde se empregam valores de referncia de qualidade e de
interveno para solos, os hidrocarbonetos de petrleo total (HPT), como um todo, so
pouco utilizados. Dependendo dos hidrocarbonetos presentes no petrleo ou no derivado
que tenha contaminado o solo, pode-se ter risco potencial a um dado receptor sensvel.
Como exemplo, podem-se citar os hidrocarbonetos monoaromticos, mais precisamente
benzeno, tolueno, etilbenzeno e xilenos (BTEX). Estes, alm de serem txicos e
carcinognicos, tm solubilidade em gua relativamente alta, apresentando um risco
potencial de contaminao s guas subterrneas. Assim, um teor de 2.000 mg/kg de
gasolina, cujas concentraes de BTEX so normalmente superiores a 40% em peso,
pode apresentar maior risco ao ambiente que, por exemplo, 10.000 mg/kg de um leo
combustvel pesado, que contm baixos teores de BTEX.
Uma das legislaes em vigor que considera um valor para HPT a holandesa e a de
Berlim (Alemanha). A Holanda estabelece um limite de interveno para leos minerais
de 5.000 mg/kg (LECOMTE e MARIOTTI, 1997). Este valor leva em considerao um
solo padro com 25% de argila e 10% de matria orgnica. Na chamada Lista de Berlim,
os valores variam de 300 a 5.000 mg/kg de HPT, dependendo da sensibilidade
ambiental do local.
O que foi dito at ento diz respeito a solos contaminados. So poucos os pases onde se
estabeleceu um padro de qualidade para solos tratados por biopilha, como o existente
na Alemanha. Isto , at que ponto um solo contaminado considerado tratado. Em
diversos casos, principalmente nos EUA, tem se usado como meta teores de HPT na
faixa de 500 a 1000 mg/kg de solo seco (VON FAHNESTOCK et al., 1998). Em alguns
casos, dependendo das caractersticas do solo, os valores podem chegar a 10.000 mg de
HPT/kg de solo. Em outros casos, os BTEX e os HPA tambm so estabelecidos como
compostos alvos.
57

CAPTULO 4
MATERIAIS E MTODOS
58
Os experimentos foram divididos em trs etapas: (a) respirometria; (b) pilhas em escala
de bancada; (c) reatores tipo coluna.
Todos os experimentos foram realizados com dois tipos de solos da Unidade de
Negcios de Explorao e Produo Sergipe Alagoas da Petrobras (UN-SEAL),
coletados no municpio de Carmpolis, Sergipe. Em cada ensaio, o solo foi contaminado
com um petrleo cru representativo dessa unidade de produo de petrleo.
A seguir, sero apresentados os dados fsico-qumicos dos solos e a caracterizao
qumica do leo cru, alm dos procedimentos experimentais, equipamentos e materiais
empregados em cada etapa.

4.1. Solos
Todos os experimentos foram realizados com trs tipos de solos do municpio de
Carmpolis, Sergipe, coletados em quatro perodos diferentes, entre agosto de 2002 e
setembro de 2004. O primeiro solo (Solo A) foi coletado junto ao poo CP-132, na
localidade de Entre Rios (teores de silte e argila mais altos) (Figura 4.1). O segundo solo
(Solo B) foi coletado junto mina de argila de Alto de Jeric (teores de silte e argila
mais baixos) (Figura 4.2). O terceiro solo (Solo C) foi tambm coletado junto ao poo
CP-132, porm apresenta uma textura arenosa.
Amostras do solo foram enviadas para o Laboratrio de gua, Solos e Plantas (LASP)
da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria (EMBRAPA - Solos) e para o
Laboratrio de Anlise de Solo, Plantas e Resduos (LABFER) da Universidade Federal
Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ) para a realizao das anlises de fertilidade,
condutividade eltrica (CE), capacidade de troca catinica (CTC), granulometria,
carbono orgnico total, pH e capacidade de campo.

59

Figura 4.1 Solo de Entre Rios Solo A.

Figura 4.2 Solo de Alto de Jeric Solo B.

A Tabela 4.1 rene as principais propriedades fsico-qumicas do Solo A - original e
triturado, do Solo B e Solo C, coletadas em diferentes bateladas.

Tabela 4.1 Caractersticas dos Solos A, B e C.
60
Solo A Solo B Solo C
Parmetro
A1 A2 A2 (*) A3 (*) B1 B2 C
Areia (%) 27,3 27,4 55,6 58,2 45,8 46,4 75,0
Silte (%) 33,9 34,4 20,1 21,3 17,9 18,9 21,0
Argila (%) 38,8 38,2 24,3 20,5 36,3 34,7 4,0
Tipo de textura
Franco-
argiloso
Franco-
argiloso
Franco-
arenoso
Franco-
arenoso
Argilo-
arenoso
Argilo-
arenoso
Areia
franca
Grau de
floculao (%)
11 11 25 100 99
Relao
Silte/Argila
0,87 0,9 0,83 1,04 0,49 0,54 5,25
pH 8,1 7,8 8,3 7,9 4,5 5,1 6,2
Ca
2+
(cmolc/kg) 5,9 7,5 6,1 5,6 0,6 9,1
Mg
2+
(cmolc/kg) 3,3 2,6 3,2 3,3
0,8
0,4 2,3
K
+
(cmolc/kg) 0,06 0,08 0,09 1,2 0,03 0,02 0,46
Na
+
(cmolc/kg) 0,46 0,69 0,37 0,59 0,02 0,07 0,25
Valor de S (soma)
(cmolc/kg)
9,7 10,87 9,76 10,6 0,8 1,09 12,11
Al
+3
(cmolc/kg) 0 0 0 0 0,5 0,3 0
H
+
(cmolc/kg) 0 3,7 0 1,6 0,8 0,9 2,5
CTC (cmolc/kg) 9,7 14,57 9,76 12,2 2,1 2,29 14,62
Carbono orgnico
(g/kg)
17,8 45,6 17,7 0,8 3,4 28,8
Nitrognio (g/kg) 1,1 2,4 1,3 1,3 0,2 0,2 2,2
C/N 16,2 19,0 17,0 4,0 13,6 13,2
Potssio
assimilvel
(mg/kg)
7 8 6 6 9 650
(100xNa+)/CTC
(%)
5 5 4 5 < 1 3 1,7
C.E. do extrato
(mS/cm a 25C)
1,2 4,36 1,02 0,9 0,18 0,22 0,99
Capacidade de
campo (%)
33,4 16,0 22,5 17,2
(*) aps triturao
O Solo A tem uma textura franco-argilosa, com porcentagem de finos (silte e argila) de
61
72,7 % (A1) e 72,6% (A2). O grau de floculao das argilas nas amostras A1 e A2 de
11%. Isto mostra uma tendncia das argilas de se dispersarem em gua, no havendo a
tendncia de formao de agregados. O pH do solo levemente bsico (em torno de 8).
O seu teor de carbono orgnico elevado, de 17,7 g/kg e 45,6 g/kg, para os solos A1, e
A2, respectivamente. Os resultados da relao C/N ficaram na faixa de 16,2 a 19, o que
indica uma boa fertilidade para o Solo A. A capacidade de troca catinica (CTC) do solo
na faixa de 9,7 a 14,57 cmolc/kg e sua condutividade eltrica na faixa de 1,2 a 4,36
mS/cm a 25C. A capacidade de campo foi de 33,4%. Estes dados mostram ser este um
solo de boas caractersticas para a agricultura.
O Solo A2 foi triturado para os ensaios com biopilhas em bancada. Aps a triturao a
textura do solo ficou mais arenosa em relao ao material no submetido a este
processamento. Outra mudana observada foi na capacidade de campo que diminui para
16%.
O Solo B tem uma textura argilo-arenosa, com uma percentagem de finos na faixa de
53,6% a 54,2%. O grau de floculao das argilas de 100%, o que mostra tendncia de
formao de agregados. O pH encontrado neste solo ficou entre 4,5 e 5,1, de
caracterstica cida. A quantidade de carbono encontrada neste solo baixa, na faixa de
0,8 a 3,4 mg/kg, quando comparado com os valores encontrados em todas as bateladas
do Solo A. A relao C/N ficou na faixa de 4 a 17. A capacidade de troca catinica
encontrada foi muito baixa, em torno de 2 cmolc/kg. A condutividade eltrica do Solo B
muito baixa (0,18 a 0,22 mS/cm a 25C).
J o Solo C apresenta uma textura areia franca, com uma percentagem de finos baixa
(25%). O pH levemente cido, igual a 6,2. A quantidade de carbono orgnico de 28,8
g/kg e a relao C/N igual a 13,6, o que indica um solo com boa fertilidade.
62
4.2. Petrleo
O petrleo escolhido para ser usado nas trs etapas dos experimentos foi o Sergipano
Terra, da UN-SEAL, coletado na Estao de Atalaia, em Aracaj, em 22/08/2002
(primeira coleta) e em 01/06/2004 (segunda coleta). Este petrleo tem uma faixa de grau
API de 24,1 a 26,2, que o classifica como um petrleo mdio (entre 22 e 30 grau API).
O petrleo foi analisado em termos de hidrocarbonetos totais de petrleo por GC-FID,
famlias qumicas por cromatografia lquida e anlise elementar. Uma caracterizao
parcial do leo est no Anexo A (anlise elementar e de famlias qumicas).
Em termos de famlias qumicas, o petrleo usado nos experimentos contm 65,22% de
hidrocarbonetos saturados, 21,40% de hidrocarbonetos aromticos e 13,38% de resinas
e asfaltenos, em massa. Portanto, o leo tem um carter parafnico. Os resultados em
massa da anlise elementar so: 86,2% de carbono; 12,3% de hidrognio; 0,44% de
enxofre; <0,3% de nitrognio.
63
4.3. Primeira Fase dos Experimentos - Respirometria
4.3.1. Procedimentos Experimentais
O processo de degradao do contaminante estudado o aerbio. Isto , o oxignio o
aceptor de eltrons no processo de oxidao de um dado composto orgnico genrico
C
x
H
y
O
z
, segundo a expresso abaixo (SONTHEIMAR et al., 1980):

C
x
H
y
O
z
+ s O
2
x CO
2
+ y/2 H
2
O

O nmero de molculas de oxignio consumido calculado segundo a Equao 4:

s = x + y/4 z/2 (Eq. 4)

Usando o resultado da anlise elementar do leo normalizada (87,51% de carbono e
12,49% de hidrognio), obteve-se uma formula molecular hipottica do leo igual a
C
7,3
H
12,4
. A demanda total de oxignio terica calculada para biodegradar o leo igual
a 3,322g O
2
/g de leo.
Com o emprego do equipamento de respirometria Sapromat (Figura 4.3), se obteve a
curva de consumo de oxignio (em massa) com o tempo.

Ebene 1
6
5 4 3 2 1
12 11 10 9 8 7
I
SAPROMAT E
02
Start
Stop
Reset
0.1 0.5 1.0 2.0
Val ues
Factor s
1-12
t

Software de avaliao Unidade de controle Recipiente Gerador Detector
de reao de oxignio de presso

Figura 4.3 Respirmetro Sapromat (adaptado da Voith).
64
Segue o conjunto de variveis estudadas e suas faixas de variao:
Temperatura 2 nveis (22 e 30C)
Teor de leo a ser incorporado 3 nveis (3, 5 e 10% em peso)
Correo de pH e adio de nutrientes 2 nveis (Sim e No)
Tipo de solo 2 nveis (teores de finos baixo e alto)
Colocao de material estruturante na relao solo/material estruturante de 9/1 e
4/1 (em base mssica e volumtrica) 2 nveis.
Nesta fase do estudo foram testados sete diferentes tipos de materiais estruturantes:
casca de coco, fibra de coco, casca de arroz, casca de pinho, torta de cana, composto
obtido do processo de compostagem de lixo domstico (com 6 meses de maturao) e
serragem.
Os testes foram realizados em dois tempos. O primeiro conjunto de testes foi realizado
nos laboratrios do Centro de Pesquisa e Desenvolvimento Leopoldo A. Miguez de
Mello (CENPES). A segunda srie de ensaios respiromtricos foi executada nos
laboratrios do Departamento de Gerenciamento de Resduos (Abfallwirtschaft) da
Universidade Tcnica de Hamburgo-Harburgo (Technische Universitt Hamburg-
Harburg) - TUHH. Os procedimentos seguidos nas duas sries de testes foram
diferentes e sero apresentados nos itens seguintes.

4.3.1.1. Procedimentos Experimentais no CENPES
O procedimento de operao do sistema Sapromat est descrito no mtodo Petrobrs
PE-3E-00657-0 (PETROBRAS, 2003a). O consumo de oxignio foi medido em frascos
de vidro com capacidade de 500mL, contendo 100g do Solo A1 previamente peneirado
para a retirada de razes e pedras ( 2 mm), misturado com o petrleo Sergipano Terra
na concentrao estipulada, em triplicata. O material estruturante testado foi adicionado
posteriormente, nas relaes solo-material estruturante igual a 9:1 e 4:1, em base
mssica, dependendo do ensaio. A umidade foi mantida na faixa de 60 a 70% do valor
de capacidade de campo do solo. Os nicos nutrientes adicionados foram potssio e
fsforo na relao C/P/K igual 100/1/1. Para tanto foi usado KH
2
PO
4
. Os frascos
65
foram imersos em banho-maria, com temperatura controlada em 22 C ou 30 C. Cada
srie de testes teve a durao mnima de 12 dias consecutivos (288 horas). Foram
realizadas sete sries de teste, cujas condies esto resumidas na Tabela 4.2. O
respirmetro utilizado foi o Sapromat modelo E, fabricado pela H+P Labortechnik
GmbH.

Tabela 4.2 - Condies dos testes realizados no CENPES.
Teste Solo Temperatura Adio
de PK
Material
estruturante
Razo da mistura
solo:material
estruturante (base
mssica)
Concentrao
de leo
(base mssica)
SAP-1 A1 22C
-
3%, 5%, e 10%
SAP-2 A1 22C
+
3% e 10%
SAP-3 A1 22C
+
serragem 9:1 3%, 5%, e 10%
SAP-4 A1 30C
+
serragem 9:1 3%, 5%, e 10%
SAP-5 A1 30C
+
torta de cana e
fibra de coco
9:1 5%
SAP-6 A1 30C
+
casca de pinho 4:1 e 9:1 3%
SAP-7 A1 30C
+
casca de arroz 9:1 3%

4.3.1.2. Procedimentos Experimentais no TUHH
O consumo de oxignio foi medido em frascos de vidro com capacidade de 500mL,
colocando-se 47,5g de solo (massa seca), j misturado com o leo na concentrao
estipulada (5%, m/m), em triplicata. O material estruturante testado foi adicionado
posteriormente, nas relaes solo-material estruturante iguais a 9:1 e 4:1, agora em base
volumtrica, dependendo do ensaio. A umidade foi mantida entre 70 e 80 % de valor de
capacidade de campo. Os nicos nutrientes adicionados foram potssio e fsforo na
relao C/P/K igual 100/1/1. Para tanto foi usado KH
2
PO
4
. Os frascos foram imersos
em banho-maria, com temperatura controlada em 30 C. Cada srie de testes teve a
durao mnima de 110 horas consecutivas.
66
Foram realizadas dez sries de testes, cujas condies esto resumidas na Tabela 4.3. Os
solos usados nestes experimentos foram B2 e C. O respirmetro utilizado foi o
Sapromat modelo D12, fabricado pela IBUK.

Tabela 4.3 - Condies dos testes realizados no TUHH.
Teste Solo Temperatura Adio
de PK
Material
estruturante
Razo da
mistura
solo:material
estruturante
(base
volumtrica)
Concentrao
de leo
(base
mssica)
Durao
do teste
(horas)
SAP-8 C 30C
-
5% 762
SAP-9 C 30C
+
5% 110
SAP-10 C 30C
-
casca de
arroz
9:1 5% 492
SAP-11 C 30C
+
casca de
arroz
9:1 5% 264
SAP-12 C 30C
-
casca de coco 9:1 5% 762
SAP-13 C 30C
-
composto 9:1 5% 492
SAP-14 B2 30C
+
5% 685
SAP-15 B2 30C
+
casca de
arroz
9:1 5% 685
SAP-16 B2 30C
+
composto 9:1 5% 685
SAP-17 B2 30C
+
composto 4:1 5% 685

4.3.2. Mtodos Analticos
4.3.2.1. pH
O pH das amostras de solo virgem e contaminado com leo foi determinado conforme o
mtodo Petrobras PE-3E-00575-0 (PETROBRAS, 2003a). Nesta, a amostra de solo
inicialmente peneirada para a retirada de razes e pedras. Em seguida, 30g de solo so
67
misturadas a uma quantidade de gua destilada suficiente para formar uma pasta
consistente e homognea. As leituras de pH das amostras so realizadas num
potencimetro (Digimed, modelo DM21, com eletrodo combinado), introduzindo o
eletrodo combinado de pH na pasta.
Nas anlises feitas na TUHH, empregou-se outro procedimento, resumido a seguir.
Inicialmente, 10 gramas do solo so misturados em 75 mL de uma soluo de CaCl
2

(0,01 mol/L). Agita-se a mistura com um basto de vidro por alguns segundos, deixando
a soluo em repouso por 24 horas temperatura ambiente. As leituras de pH das
amostras so realizadas num potencimetro (Wissenschaftlich Technische Werksttten
WTW, modelo pH91), introduzindo o eletrodo combinado de pH na soluo.

4.3.2.2. Umidade
A umidade nas amostras de solo foi determinada conforme a metodologia Petrobras PE-
3E-00462-0 (PETROBRAS, 2003b). Inicialmente, as razes e pedras so retiradas da
amostra de solo por intermdio de uma peneira. Aps uma boa homogeneizao, 10g da
amostra so colocadas em placa de Petri (em triplicata), que so transferidas para estufa
de secagem previamente regulada para 60 C 0,1. Aps 16 horas em estufa, as placas
so transferidas para um dessecador, por aproximadamente 30 minutos. O clculo da
umidade feito por gravimetria, subtraindo a massa final da massa inicial, considerando
a mdia das trs rplicas.
Nas anlises feitas na TUHH, empregou-se uma variao do procedimento acima
descrito. As nicas diferenas esto na temperatura da estufa de secagem (105 C 0,1)
e no tempo de secagem (24 horas).

4.3.2.3. Granulometria e textura do solo
As anlises so realizadas pela Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Embrapa, segundo o seu manual de mtodos para solo (CLAESSEN et al., 1997).

68
4.3.2.4. Nitrognio total no solo
A anlise foi realizada pela Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria Embrapa,
segundo o seu manual de mtodos para solo (CLAESSEN et al., 1997). O nitrognio
convertido em sulfato de amnio por meio de oxidao com uma mistura de CuSO
4
,
H
2
SO
4
ou K
2
SO
4
(mineralizao). Posteriormente em meio alcalino, o sulfato de
amnio convertido da matria orgnica libera amnia que, em cmara de difuso,
complexada em soluo de cido brico contendo indicador misto, sendo finalmente
determinado por acidimetria (H
2
SO
4
ou HCl). As anlises realizadas na Universidade
Federal Rural do Rio de Janeiro seguiram o mtodo descrito por Tedesco et al. (1995).

4.3.2.5. Fsforo assimilvel no solo
A anlise realizada pela Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria Embrapa,
segundo o seu manual de mtodos para solo (CLAESSEN et al., 1997). As anlises
realizadas na Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro seguiram o mtodo descrito
por Tedesco et al. (1995).

4.3.2.6. Cromatografia do Petrleo Total (Whole Oil)
A anlise feita com a injeo no cromatgrafo gasoso da amostra do petrleo total
(whole oil), com detector do tipo FID, conforme a metodologia Petrobrs PE-3C-00160-
C (PETROBRS, 2002). Para tanto, empregou-se o cromatgrafo gasoso Agilent,
modelo 6890, com coluna DB-5.

4.3.2.7. Anlise Elementar do Petrleo
A anlise elementar de carbono, hidrognio e nitrognio de petrleo e de seus produtos
realizada conforme a metodologia Petrobrs PE-3E-00093-0 (PETROBRAS, 2003c).
Para tanto, empregou-se o analisador elementar Perkin Elmer 2400.
69
4.4. Segunda Fase dos Experimentos - Biopilhas em Bancada
Os testes em bancada foram realizados nos laboratrios do Centro de Tecnologia
Mineral (CETEM) em escala de 20 L. Empregaram-se solos (A2, A3 e B2) coletados no
Campo de Carmpolis, da UN-SEAL, cujas caractersticas esto apresentadas na Tabela
4.1. Os solos foram contaminados artificialmente com petrleo Sergipano Terra, da UN-
SEAL, cuja caracterizao mostrada na no item 4.2.

O experimento foi realizado em duas sries de ensaios, cada uma com seis condies
diferentes, listadas na Tabela 4.4.
Tabela 4.4 Condies dos testes de biopilha em escala de bancada.
ESTRUTURANTE
S
R
I
E

P
I
L
H
A

S
O
L
O

F
R
E
Q
N
C
I
A

D
E

R
E
V
O
L
V
I
M
E
N
T
O

Tipo Relao
Solo/
Estruturante
(volumtrica)
Volume
(L)
Massa
(kg)
P-1 A2
(*)
14 dias sem
P-2 A2
(*)
14 dias casca de arroz 10:1 2 0,235
P-3 A2
(*)
P-4 A2
(*)
P-5 A2
(*)
14 dias serragem 10:1 2 0,205

1
P-6 A2
(*)
14 dias casca de coco 10:1 2 1,800
P-7 A3
(*)
7 dias sem
P-8 A3
(*)
P-9 A3
(*)
P-10 A3
(*)
7 dias sem (**)
P-11 B2 7 dias sem

2
P-12 B2 7 dias casca de arroz 10:1 2 0,225
(*) solo triturado (**) controle abitico
70
4.4.1.1. Srie 1
O Solo A2, cuja umidade era de 15,5% (m/m) quando de sua retirada das bombonas, foi
espalhado em uma lona em rea com plena circulao de ar, localizada na usina piloto
do CETEM, para que fosse seco por evaporao natural. Aps a secagem natural, que
durou 6 dias, a umidade chegou a 0,79% (m/m). Em seguida, o solo foi encaminhado
para a desagregao, em um sistema em srie composto por um britador de mandbula
grande (Figura 4.4), um britador mandbula pequeno e um moinho de rolos. O material
resultante de cada etapa passou por uma peneira de 4# (4,76 mm), cujo material
passante foi utilizado na montagem das biopilhas. O fluxograma completo do processo
de preparao do solo est apresentado na Figura 4.5.

Figura 4.4 - Britador de mandbula grande.

Os testes foram realizados em bandejas de 37 litros de volume. O solo com
granulometria inferior a 4,76mm foi distribudo nas bandejas, cada uma recebendo 20
litros deste solo (24,70kg). Em seguida, foi adicionado a cada uma das bandejas 1,235
kg do leo cru de Sergipe Terra, de forma a simular um nvel de contaminao de 5%
(m/m). Aps a contaminao do solo, as bandejas foram deixadas na usina piloto do
CETEM por dois dias, de forma a favorecer a perda por evaporao das fraes mais
leves dos hidrocarbonetos presentes no leo cru (Figura 4.6).
71

Figura 4.5 Fluxograma representativo do processo de preparao das amostras
de solo.

Figura 4.6 Bandejas com solo desagregado e contaminado.

Solo
Seco
Britador de
Mandbula
Grande
Peneiramento
4# (4,76 mm)
Britador de
Mandbula
Pequeno
Moinho de
Rolos
Solo Retido
Solo Retido
Peneiramento
4# (4,76 mm)
Peneiramento
4# (4,76 mm)
Solo Retido
Passante
Passante
Passante
Solo Seco < 4#
(4,76 mm)
BIOPILHAS
72
Aps os dois dias da intemperizao do leo cru, incorporaram-se os nutrientes em cada
bandeja. Os resultados dos ensaios de fertilidade no Solo A2 (aps sua triturao e
peneiramento) mostraram que a quantidade de nitrognio j presente no solo era
suficiente (1,3 g/Kg, na massa bruta, Tabela 4.1), segundo a concepo de Walworth e
colaboradores (1997). Esta se baseia no teor de nitrognio disponvel na fase aquosa do
solo. Considerando-se que uma super fertilizao com nitrognio deprime a atividade
dos microrganismos que degradam os hidrocarbonetos de petrleo, esta seria controlada
pelo teor de gua no solo.
Solos molhados fornecem um maior volume de gua para diluir o composto de
nitrognio do que um solo seco. Assim, a resposta adio de nitrognio estaria
intimamente correlacionada com a umidade do solo. Nesse estudo, o nvel timo de
nitrognio em gua foi de 2.000 mg N/kg H
2
O, para os solos estudados (WALWORTH
et al., 1997). Considerando um teor de umidade correspondente a 50 % da capacidade
de campo (CC) do solo, o que d 16,7% (m/m), o valor de nitrognio encontrado em
soluo (7.784,4 mg N/kg de gua) est acima do limite mnimo preconizado por
Walworth e colaboradores. Portanto, s foram corrigidos os teores de fsforo e potssio,
adicionando-se 4,64 g de KH
2
PO
4
por bandeja. Posteriormente, acrescentaram-se os
materiais estruturantes nas relaes indicadas na Tabela 4.4. Depois, a umidade foi
corrigida para 50% da CC e as bandejas foram transferidas para o laboratrio do
CETEM (Figura 4.7).

Figura 4.7 Bandejas com solo suprido de nutrientes colocadas no laboratrio do
CETEM.
73
O revolvimento do solo nas bandejas foi executado manualmente com um ancinho de
jardim, cujo garfo foi alongado para que se pudesse atingir o fundo das bandejas.
Visando uma padronizao, o procedimento de revolvimento era executado com o
arraste do solo com o ancinho 4 vezes em cada sentido longitudinal da bandeja, 2 vezes
em cada sentido transversal da bandeja e 1 vez do centro para os lados, tambm no
sentido transversalmente bandeja. A Figura 4.8 mostra o esquema do revolvimento do
solo. A freqncia de revolvimento para cada ensaio est indicada na Tabela 4.4.
Durante o experimento, a correo da umidade era feita com um regador, aps o
revolvimento, quando necessria.

Figura 4.8 - Esquema de revolvimento do solo nas pilhas

4 vezes
4 vezes
2 vezes
2 vezes
1 vez
74
4.4.1.2. Srie 2
Nesta srie, foram empregados dois solos, o Solo A3 e o do Alto de Jeric (Solo B2).
Ambos passaram por uma etapa inicial de preparao que consistiu no espalhamento,
em uma lona, dos solos midos (165 kg de Solo A com 16,86% de umidade e 314 kg de
Solo B com 8,25% de umidade), em rea com plena circulao de ar, localizada na usina
piloto do CETEM, para que ocorresse a secagem desses solos por evaporao natural.
Em seguida, somente o Solo A foi encaminhado para a etapa de desagregao. Os solos,
em seguida foram peneirados, sedo aproveitado o material com granulometria inferior a
4# (4,76 mm).
A seguir, os solos sofreram secagem natural, por aproximadamente 6 dias. Aps o que,
foi registrado uma massa de 136 kg de Solo A (teor de umidade final 1,65 %) e 289 kg
de Solo B (teor de umidade final 0,29%).
A adio do leo cru, agente estruturante e nutrientes seguiu o mesmo procedimento
usado na Srie 1. A nica diferena ocorreu na Pilha P-10, para o qual no houve adio
de nutrientes e houve aporte de azida de sdio (0,3% m/m). Esta pilha tinha a funo de
ser um controle abitico.

4.4.2.1. pH
mtodo Petrobras PE-3E-00575-0 (PETROBRAS, 2003a), conforme descrito no item
4.3.2.1.

4.4.2.2. Umidade
A umidade nas amostras de solo foi determinada conforme o mtodo Petrobras PE-3E-
00462-0 (PETROBRAS, 2003b), j descrito no item 4.4.2.2.
75
4.4.2.3. leos e Graxas
O teor de leos e graxas das amostras de solo virgem e contaminada com leo foi
determinado conforme o mtodo Petrobras PE-3E-00697-0 (PETROBRAS, 2005a). O
procedimento se inicia com a extrao com o equipamento ASE (Accelerated Solvent
Extractor), modelo 200 da Dionex. Aps determinar a umidade da amostra de solo, 2
gramas da amostra desidratada so colocados em clula de ao inox do com capacidade
de 33 mL. Em seguida, adicionado 4 mL de diclorometano na clula de extrao
iniciando-se o processo automtico de extrao. Aps a extrao, transfere-se o extrato
para o copo concentrador do equipamento Turbovap modelo II. Concentra-se o extrato
at o volume de 1mL. Para a determinao do teor de leo e graxas, o extrato em um
frasco mantido em banho-maria (45C) e purgado com nitrognio at a secura. Da
diferena entre o peso do frasco limpo e o do frasco com o extrato seco, quantifica-se a
massa de leo extrada da amostra de solo.

4.4.2.4. Hidrocarbonetos de Petrleo Totais
A anlise dos hidrocarbonetos de petrleo totais (HPT) em amostras de solo foi
realizada no extrato obtido no item 4.4.2.3., por cromatografia gasosa, segundo a
metodologia EPA 8015B (USEPA, 1996a). O equipamento usado foi um HP 5890 com
coluna cromatogrfica HP-5.

4.4.2.5. Determinao de Famlias Qumicas
A obteno de famlias qumicas (hidrocarbonetos alifticos, hidrocarbonetos
aromticos, resinas e asfaltenos) foi feita por cromatografia lquida de mdia presso
(marca Magot) usando coluna de vidro com eluio gravitacional, segundo o mtodo
Petrobras PE-3C-00368-0 (PETROBRAS, 2001a).

4.4.2.6. Microrganismos Heterotrficos Totais
A suspenso original do solo foi preparada utilizando-se 20g de solo e 95mL de soluo
salina 0,85% (p/v). Aps o preparo, a suspenso submetida agitao a 150 rpm, por
76
20 minutos. A determinao do nmero de microrganismos heterotrficos totais feita
pela tcnica do nmero mais provvel (NMP), utilizando-se meio de cultura Tryptic Soy
Broth (TSB). Preparam-se sucessivas diluies da suspenso original em meio TSB at
atingir a diluio 10
-9
, utilizando-se 3 tubos por diluio. A incubao feita a 30C por
48h. Ao trmino do ensaio, a quantificao feita com o emprego de tabela de NMP.

4.4.2.7. Microrganismos Degradadores de Hidrocarbonetos
As populaes de microrganismos degradadores de hidrocarbonetos foram determinadas
pela tcnica do nmero mais provvel (NMP), utilizando-se meio mineral Bushnell-
Haas, respectivamente, conforme o mtodo Petrobras PE-3E-00547-0 (PETROBRAS,
2003d). O meio mineral Bushnell-Haas tem a seguinte composio:

Sulfato de magnsio (MgSO
4
) 0,20 g/L
Cloreto de clcio (CaCl
2
) 0,02 g/L
Fosfato de potssio monobsico (KH
2
PO
4
) 1,00 g/L
Fosfato de potssio dibsico (K
2
HPO
4
) 1,00 g/L
Nitrato de amnio (NH
4
NO
3
) 1,00 g/L
Cloreto frrico (FeCl
3
) soluo 60% (p/v) 2 gotas
gua destilada 1000 mL

20 g de amostra de solo so transferidas para um frasco contendo 95 mL de soluo
salina 0,85% (m/v). Em seguida, iniciam-se diluies sucessivas da amostra inicial at
se atingir a diluio 10
-6
, em microplacas. Adiciona-se em cada poo da microplaca,
5L de petrleo de referncia (tipo rabe Leve). A incubao feita durante sete dias a
30C, quando se observa diariamente alterao da turbidez do meio de cultura e o
desaparecimento do petrleo. Ao trmino do ensaio, a quantificao feita com o
emprego de tabela de NMP.
77
4.4.2.8. Granulometria e Textura do solo
As anlises foram realizadas pela Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Embrapa, conforme descrito no item 4.3.2.3.

4.4.2.9. Nitrognio total no solo
segundo o procedimento descrito no item 4.3.2.4.

4.4.2.10. Fsforo assimilvel no solo
conforme descrito no item 4.3.2.5.

4.4.2.11. Mtodo de Avaliao de Toxicidade por Microtox
A avaliao da toxicidade das amostras de solo virgem e contaminada com leo foi
determinada conforme procedimento descrito na norma L5.227 (CETESB, 2001b),
complementados por solubilizao da amostra de solo em gua destilada (1:4), seguida
de centrifugao (6000 rpm) e ajuste osmtico. Os testes foram conduzidos com quatro
diluies sucessivas a partir deste extrato aquoso.
O teste consiste em expor uma suspenso de uma cultura de bactrias da espcie Vibrio
fischeri a diferentes concentraes da amostra. A toxicidade medida em termos de
reduo da luminescncia emitida naturalmente pela bactria. A concentrao efetiva da
amostra que causa 50% do efeito medido (CE50) obtida em leituras aps 5 e 15
minutos de exposio. A luminescncia medida no sistema Microtox, que consiste
de um fotmetro com controle de tempo e temperatura integrado a um computador para
compilao dos dados e clculo dos resultados.
As condies do teste de toxicidade com Vibrio fischeri esto resumidas na Tabela 4.5.

78

Tabela 4.5 - Condies do teste de toxicidade com Vibrio fischeri.

O controle do teste feito mantendo-se um grupo de organismos sob as mesmas
condies daqueles expostos amostra, mas apenas com o meio apropriado, isento de
qualquer contaminante. Alm disso, cada teste ou lote de testes deve ser acompanhado
de um teste de sensibilidade com uma substncia de referncia padro, que tem sua
toxicidade conhecida, para verificar se os organismos esto respondendo dentro da faixa
de sensibilidade previamente estabelecida para as condies de laboratrio. Para o teste
com Vibrio fischeri, a substncia padro utilizada foi o sulfato de cobre.
So consideradas txicas amostras que causam efeitos em no mnimo 50% dos
organismos-teste em qualquer concentrao. So consideradas no txicas amostras que,
sem qualquer diluio, ou seja, na maior concentrao testada, no apresentam efeitos
adversos superior ao limite de aceitao para o controle.
PARMETRO CONDIO ESTABELECIDA
Tipo de teste Agudo, esttico, sem renovao.
gua de diluio NaCl 2%
Frasco teste Cubeta de borossilicato
Volume de soluo 1 mL
n
o
de organismos/frasco Suspenso de clulas (1 milho de bactrias)
n
o
de rplicas 1
Luminosidade Sem luz
Fotoperiodismo No tem
Temperatura 15
o
C
Agitao No tem
Tempo de exposio 5 e/ou 15 minutos
Parmetro final de avaliao Inibio da emisso de luminescncia
Leitura Fotmetro de absoro de luz (MICROTOX 500)
Expresso dos resultados CE50
5minutos
e/ou CE50
15minutos

Clculo estatstico Programa computacional do prprio equipamento
Substncia de referncia Sulfato de cobre
79
4.4.2.12. Mtodo de Avaliao de Toxicidade pela Inibio no Crescimento de Razes
O mtodo de avaliao de toxicidade pela inibio no crescimento das razes empregado
foi o ISO nmero 11269-1 (ISO, 1993). Empregaram-se sementes de cevada - Hordeum
vulgare, germinadas e plantadas no solo com o comprimento da radcula inferior a
2mm. Os testes foram realizados com solo padro alemo LUFA 2.2 como controle. As
principais caractersticas deste solo esto mostradas na Tabela 4.6.
Cada solo testado foi peneirado (4 mm), antes do seu uso, e replicado 3 vezes. Os testes
foram realizados em cmara de crescimento a uma temperatura na faixa de 18C
(mnimo) a 24C (mximo) e iluminao de 13000 2000 luxes (16 horas por dia). As
mudas (seis por vaso) foram permitidas crescer por exatamente 4 dias. Depois, o
comprimento da raiz e do broto de cada muda foi determinado. Os testes foram
realizados nos laboratrios da ECT Oekotoxikologie GmbH, em Flrsheim, Alemanha.

Tabela 4.6 Propriedades dos solos padres usadas como controles adicionais ao
teste.

Parmetros LUFA 2.2 LUFA 2.3
Carbono orgnico [%] 2,26 0,12 1,02 0,17
Partculas < 0,02 mm [%] 15,7 2,6 20,8 2,6
pH (0,01 mol CaCl
2
) 5,8 0,3 6,3 0,4
Capacidade Troca Catinica [meq/100 g] 11 2 10 2
Distribuio de tamanho de partculas de
acordo com o Dep. de Agricultura dos EUA

< 0,002 mm [%] 8,0 1,1 8,5 1,4
0,002 0,05 mm [%] 14,9 2,6 29,2 3,2
0,05 2,0 mm [%] 77,1 3,1 62,3 4,1
Tipo de solo areia franca franco
arenoso
Capacidade de campo [g/kg solo] 486 41 352 34
Massa por volume [g/L] 1148 40 1335 85
80
4.4.2.13. Mtodo de Avaliao de Toxicidade pela Germinao
O mtodo empregado para a avaliao de toxicidade pela germinao foi o ISO nmero
11269-2 (ISO, 1995). Sementes de Avena sativa (aveia) e de Brassica napus (nabo)
foram plantadas em solo de controle padro (LUFA 2.3, ver caractersticas na Tabela
4.6), um solo especfico de controle e nas amostras tratadas, onde foram permitidos
brotar e crescer. Cada solo testado foi peneirado (4 mm), antes do seu uso, e replicado 4
vezes. O desenvolvimento das plantas foi observado por 19 dias seguintes ao dia em que
pelo menos 50% das plantas brotou no solo controle (dia 0 do teste). O teste foi
realizado em cmara de crescimento a uma temperatura na faixa de 18C (mnimo) a
24C (mximo) e iluminao de 13000 2000 luxes (16 horas por dia). Os testes foram
realizados nos laboratrios da ECT Oekotoxikologie GmbH, em Flrsheim, Alemanha.
81
4.5. Terceira Fase dos Experimentos Reatores em Coluna
Os experimentos foram realizados nos laboratrios do Departamento de Gerenciamento
de Resduos (Abfallwirtschaft) da Universidade Tcnica de Hamburgo-Harburgo
(Technische Universitt Hamburg-Harburg) - TUHH.

As condies das duas sries de testes esto mostradas na Tabela 4.7. Na srie BR1, os
testes com contaminao de leo foram feitos em duplicata para avaliar a disperso dos
resultados em funo de heterogeneidade do solo. O reator BR1-1 foi usado para medir
a respirao do solo enquanto que o reator BR1-2 foi usado para medir a influncia da
casca de arroz na produo de CO
2
. O teor de leo usado foi de 5% (m/m) em relao ao
solo seco. O solo usado foi o C sem ter sido peneirado.

Tabela 4.7 Condies dos testes.
Srie Reator Teor de
leo [%,
m/m]
Tipo de
Estruturante
Relao
Solo/
Estruturante
(volumtrica)
Massa de
solo seco
[g]
Vazo
mdia de
ar [L/h]
BR1-1 sem sem 2171,44 2,29
BR1-2 sem casca de arroz 10:1 2175,66 2,84
BR1-3 5 sem 2042,85 2,44
BR1-4 5 sem 2045,45 2,28
BR1-5 5 casca de arroz 10:1 2036,58 2,26

BR1
BR1-6 5 casca de arroz 10:1 2059,70 2,27
BR2-1 sem sem 2511,15 2,52
BR2-2 sem composto 10:1 2504,58 2,62
BR2-3 5 sem 2397,61 2,57
BR2-4 5 composto 10:1 2563,61 2,47
BR2-5 3 sem 2460,42 2,46

BR2
BR2-6 3 composto 10:1 2460,84 2,52
82
A segunda srie de experimentos BR2 empregou tambm o solo C. O reator BR2-1
foi usado para medir a respirao do solo enquanto que o reator BR2-2 foi usado para
medir a influncia do composto na produo de CO
2
. Nos testes da segunda serie (BR2)
foi testado o composto como material estruturante e variou-se a concentrao de
contaminante (3 e 5% em massa).
A Figura 4.9 mostra um diagrama simplificado do sistema utilizado para a avaliao do
balano de massa de carbono no processo de biodegradao. O sistema composto de
seis reatores (colunas) de vidro com volume de 3,4L (volume de headspace = 0,56L e
volume abaixo da tela de conteno do solo = 0,38L), cada. O ar que circula pelos
reatores vem do exterior do laboratrio e passa por um sistema de limpeza com filtro de
carvo ativado, de fabricao da Bernath Atomic GmbH & Co., modelo 2000, antes de
ser injetado nas colunas. O ar distribudo para os seis reatores por meio de um sistema
de seis vlvulas, cuja vazo de ar controlada por um sistema de controle eletrnico de
vazo da Bronkhorst High-Tech B.V., modelo F 201D-FD. O controlador eletrnico de
vazo possui um canal para cada vlvula, cujo parmetro controlado corrente eltrica,
na faixa de 4 a 20 mA (correlao linear da faixa de 0 a 6 L/h). O acompanhamento da
vazo, temperatura ambiente, teor de CO
2
e COT (carbono orgnico total) feito pelo
aplicativo WorkBench PC 2.0 para DOS. A medio destes parmetros feita em um
reator por vez, durante uma hora. Os valores registrados nos 30 minutos iniciais no so
contabilizados no clculo da mdia, para que qualquer possvel instabilidade no sistema
no seja levada em conta no calculo da mdia. Enquanto isso, as outras 5 vlvulas
continuam controlando o fluxo de ar para os outros reatores, sem qualquer registro dos
parmetros.
O ar que sai do reator passa por um banho a 11 C para retirada de umidade antes de
entrar no analisador de CO
2
(analisador infravermelho de fabricao da Analytical
Development Company Limited, tipo SBE). Este equipamento tem dois canais de faixa
de concentrao de CO
2
(0 1% e 0 10%). O gs de calibrao usado uma mistura
de 0,9% de CO
2
e 99,1% de nitrognio, que injetado semanalmente.
O ar, aps passar no analisador de CO
2,
injetado no analisador de COT, que possui um
detector FID (usa hidrognio para a chama), de fabricao da Bernath Atomic GmbH &
Co., modelo 3002 RC. A vazo de entrada do gs no analisador de CO
2
mantida
constante em 60 L/h (2,5 L/h de gs efluente da coluna e 57,5 L/h de ar do ambiente
83
passado pelo sistema de carvo ativado). O analisador possui 5 canais de faixa de
concentrao de COT (0 10 ppm; 0 100 ppm; 0 1000 ppm; 0 10000 ppm; 0
100000 ppm). O sistema est ajustado automaticamente para iniciar sempre empregando
o canal de maior faixa de concentrao de COT (0 100000 ppm). O gs de calibrao
usado ar sinttico com 77,3 ppm de propano, que injetado semanalmente.

Figura 4.9 Diagrama do sistema de biorreatores.

CO
2
COT
Carvo
Ativado
Reator
Leito
Slido
H
2
O
PI
FRc
FRc
Banho
11 C
AR
84
A Figura 4.10 mostra a sala climatizada onde os ensaios com os biorreatores foram
realizados. A temperatura da sala foi mantida a 30 C em todos os experimentos.

Figura 4.10 Sistema de biorreatores em sala climatizada a 30 C.

Os biorreatores foram montados em rack (Figura 4.11). A foto em close de um dos
reatores vista na Figura 4.12, onde se v o umidificador da corrente de ar que entra no
reator, em baixo esquerda.
85

Figura 4.11 Detalhe do conjunto de biorreatores.

O sistema de controle de vazo de ar e medio em linha de CO
2
e COT mostrado na
Figura 4.13. A apresentao grfica do aplicativo WorkBench mostrada na tela do
computador (Figura 4.14).

86

Figura 4.12 Detalhe do biorreator.

Figura 4.13 - Sistema de controle de
vazo de ar e medio em linha.

Figura 4.14 - Apresentao grfica do aplicativo WorkBench.
87

4.5.2.1. Extrao de leo
O mtodo de extrao de leo um mtodo modificado do ento existente no Gaslabor
do Departamento de Gerenciamento de Resduos da TUHH. De cada amostra de solo
contaminado com leo retiraram-se no mnimo 3 alquotas, 10g cada. Para solos no
contaminados, foi amostrada somente uma alquota. Cada alquota colocada em tubo
de centrfuga de Teflon com tampa rosqueada com capacidade de 50mL. Usa-se um
teste branco para cada srie de extrao.
Em seguida, adicionam-se 20 mL de acetona em cada tubo, incluindo o do teste em
branco, e agita-se vigorosamente o tubo por alguns segundos. Depois se adicionam 10
mL de heptano somente no tubo do teste em branco. Nos frascos contendo alquotas de
solo so adicionados 10 mL de heptano contendo 30mg de C9 e 30mg de C40 (padres
internos), e agita-se vigorosamente o tubo por alguns segundos. Os tubos so colocados
em agitador por 30 minutos (625 agitaes por minuto). Para tanto, foi usado o agitador
da Ika Labortechnik, modelo HS 501 digital.
Posteriormente, adiciona-se gua deionizada em cada tubo at quase a boca de cada tubo
e agita-se vigorosamente tubo por alguns segundos. Depois, colocam-se os tubos em
uma centrfuga refrigerada com uma acelerao de 10000 g, a 15C e durante 10
minutos. Aps a centrifugao, a fase oleosa (acima da fase aquosa) transferida
cuidadosamente para outro tubo de centrfuga de Teflon usando-se pipeta Pasteur. A
seguir, adiciona-se pela segunda vez gua deionizada fase oleosa at a metade do tubo
e agita-se vigorosamente tubo por alguns segundos. Colocam-se a seguir os tubos na
centrfuga refrigerada com uma acelerao de 10000 g, a 15C e durante 10 minutos.
Depois, a fase oleosa transferida cuidadosamente para um frasco de vidro com uma
pipeta Pasteur.
Aps esses procedimentos, se inicia a etapa de clean up do extrato (retirada da
umidade remanescente). Para tanto, utiliza-se uma bureta e adicionam-se os seguintes
materiais abaixo descritos, respeitando a seguinte seqncia de enchimento:
1. L de vidro;
88
2. 2g de Na
2
SO
4
, previamente seco a 550 C por 2 horas e armazenado em
dessecador;
3. 2g de Florisil (84.0% SiO2, 15.5% MgO, e 0.5% Na
2
SO
4
- 60/80 mesh,
previamente seco a 160 C por 16 horas e armazenado em dessecador);
4. 2g de Na
2
SO
4
, previamente seco a 550 C por 2 horas e armazenado em
dessecador;
5. L de vidro.
Finalmente, o extrato passado na bureta transferido para fracos cromatogrficos.

O extrato obtido no item anterior foi injetado em cromatgrafo gasoso Varian, modelo
Chrompack CP 9002, detector FID. A coluna cromatogrfica usada foi a BPX-5. A
programao de temperatura do forno usada se inicia com 45C (mantida constante por
3 minutos) com aquecimento de 30 por minuto at atingir 360C (mantida constante por
5 minutos). Esta programao foi usada para quantificar os hidrocarbonetos na faixa de
9 a 40 carbonos.

4.5.2.3. Umidade
A umidade nas amostras de solo foi determinada conforme o mtodo interno do
Gaslabor da TUHH. Inicialmente, as razes e pedras so retiradas da amostra de solo por
intermdio de uma peneira. Aps boa homogeneizao, 10g da amostra so colocadas
em placa de Petri (em triplicata), que so transferidas para estufa previamente regulada
para 105 C 0,1. Aps 24 horas em estufa, as placas so transferidas para um
dessecador, por aproximadamente 30 minutos. O clculo da umidade feito por
gravimetria, subtraindo-se a massa final da massa inicial, considerando a mdia das trs
rplicas.

89
4.5.2.4. pH
mtodo interno do Gaslabor da TUHH, previamente descrito no item 4.3.2.1.

4.5.2.5. Massa do Carbono Microbiano (Mtodo SRI)
O procedimento usado para a quantificao da massa de carbono microbiano baseia-se
no mtodo SRI modificado, desenvolvido pelo Professor Theodore Beck da Bayerische
Landesanstalt fr Bodenkunde und Pfanzenbau (ALEF, 1994). Ele consiste em colocar
50g da amostra de solo com 0,5 g de glicose em frasco de 250 mL, em duplicata. Os
frascos so colocados no respirmetro Sapromat, com a temperatura regulada 22C.
Observa-se a curva de evoluo do consumo de oxignio nas primeiras 2 a 4 horas. A
taxa de consumo de oxignio obtida da inclinao da curva, expressa em mg de
O
2
/h.100 g de solo seco, multiplicada pelo fator 28 para fornecer a massa de carbono
relativa aos microorganismos presentes na amostra de solo, em mg de C de biomassa
por 100 g de solo seco. O fator 28 tem origem na equao desenvolvida por Anderson e
Domsch (1978) que relaciona a produo de CO
2
com a quantidade de C da biomassa
presente no solo. Aproximadamente 40 mg de C de biomassa produz 1mL de CO
2
por
hora.
90

CAPTULO 5
RESULTADOS E DISCUSSO
91
5.1. Respirometria
Os resultados de consumo de oxignio dos testes de respirometria realizados no
CENPES esto apresentados na Tabela 5.1. Do consumo de O
2
j est descontado o
consumo dos controles. O solo usado foi o A1 e a concentrao inicial de petrleo
variou de 3% a 10%, m/m. Os testes tiveram a durao de 288 horas, desse modo o
consumo de oxignio corresponde a quantidade total consumida nesse intervalo de
tempo em relao massa de leo originalmente presente no solo.

Tabela 5.1 Consumo mdio de oxignio nos testes de respirometria realizados no
CENPES.
Consumo mdio de O
2
(mg/g de leo.h)
Concentrao de leo (m/m)

TESTE

CONDIO
3% 5% 10%
SAP-1 Controle (solo + leo) (22C) 0,0218 0,0157 0,0068
SAP-2 + Nutriente (PK) (22C) 0,0301 0,0146
SAP-3 + Serragem (10% m/m) + PK (22C) 0,1845 0,2432 0,1016
SAP-4 + Serragem (10% m/m) + PK (30C) 0,4748 0,3261 0,1543
SAP-5 + Torta de cana (10% m/m) + PK (30C) 0,0206
SAP-5 + Fibra de coco (10% m/m) + PK (30C) 0,0441
SAP-6 + Casca de pinho (10% m/m) + PK (30C) 0,0503
SAP-6 + Casca de pinho (20% m/m) + PK (30C) 0,0400
SAP-7 + Casca de arroz (10% m/m) + PK (30C) 0,0236

A concentrao inicial de leo cru teve influncia na taxa de consumo de oxignio,
pelos resultados apresentados na Tabela 5.1. Os testes com a concentrao inicial de
leo igual a 3% mostraram valores de consumo de oxignio maiores em praticamente
todos os testes, quando comparados com os dos testes com 5% e 10% de leo. Os
valores do consumo de oxignio alcanados nos ensaios com 3% de leo foram
aproximadamente o dobro dos obtidos nos testes com 10% de leo. Os valores do
consumo de oxignio encontrados nos testes com 5% de leo ficaram, de modo geral,
92
entre os obtidos nos testes com 3 e 10% de leo. O nico teste no qual o efeito da
concentrao do contaminante no seguiu este padro foi o SAP-3, cujo resultado com
5% de leo apresentou o maior consumo de oxignio (0,2432 mg/g leo.h).
Com o aumento da concentrao de leo h um aumento das demandas de nutrientes e
aceptores de eltrons, nem sempre supridas facilmente nas condies dos experimentos.
A transferncia de massa dos constituintes do leo da fase livre ou sorvido nas
partculas para as fases aquosa e gasosa tambm seria um fator limitante para o processo
de biodegradao. Alm disso, as concentraes dos compostos txicos presentes no
leo aumentam com a quantidade de leo, causando a elevao do efeito txico destes
compostos nas bactrias biodegradadoras de leo.
A adio de nutrientes (fsforo e potssio) produziu um aumento no consumo de
oxignio, nos ensaios com 3% e 10% de concentrao inicial de leo. No teste SAP-2
(3% de leo), o aporte de nutrientes incrementou os valores de consumo de oxignio de
0,0218 para 0,0301 mg O
2
/g leo.h. J no caso do ensaio com 10% de leo (SAP-2), o
aumento da demanda de oxignio foi de 0,0068 para 0,0146 mg O
2
/g leo.h.
O efeito da temperatura na biodegradao do leo foi tambm estudado. O incremento
na temperatura de 22C para 30C elevou a taxa de consumo de oxignio nos ensaios
com 3% de leo em mais de duas vezes, de 0,1845 (SAP-3) para 0,4748 mg O
2
/g leo.h
(SAP-4). Este aumento foi menos acentuado nos testes com 10% de contaminante.
Provavelmente, neste caso o fator limitante para a biodegradao do leo tenha sido a
transferncia de massa dos contaminantes, e no aspectos microbiolgicos controlados
pela temperatura.
O primeiro material estruturante testado foi a serragem. Este material considerado um
bom estruturante (MCMILLEN et al., 1996, VON FAHNESTOCK et al., 1998). A
adio da serragem causou um aumento na taxa de consumo de oxignio nos ensaios
com 3% de leo, quando o valor subiu de 0,0301 (SAP-2) para 0,1845 mg O
2
/g leo.h
(SAP-3). No caso dos ensaios com 10% de leo, o incremento foi ainda mais
expressivo, passando de 0,0146 para 0,1016 mg O
2
/g leo.h.
O segundo material testado foi a torta de cana, que um rejeito da fabricao de acar,
facilmente encontrado em Sergipe. O seu teor de carbono de 110,9 g/kg, nitrognio de
4,9 g/kg, fsforo assimilvel de 2.650 mg/kg, pH de 7,6 e CTC de 43,7 cmol/kg. A sua
93
utilizao foi testada somente com 5% de leo e o seu efeito no consumo de O
2
foi bem
negativo (0,0206 mg O
2
/g leo.h), comparando-se com o valor obtido com a serragem.
Uma possvel razo para este baixo desempenho seria o alto teor de carbono orgnico
existente no material (110,9 g/kg), alm da grande disponibilidade de nutrientes, o que
estimulou a metabolizao desse carbono pelos microorganismos, em detrimento do
consumo dos hidrocarbonetos.
O uso da fibra de coco como material estruturante tambm no apresentou um bom
desempenho, quanto ao consumo de oxignio. Este foi um pouco maior (0,0441 mg
O
2
/g leo.h) que o obtido com a torta de cana.
O consumo de oxignio alcanado com o uso da casca de pinho (0,0503 mg O
2
/g leo.h)
foi bem inferior ao obtido com serragem (0,4748 mg O
2
/g leo.h). Tambm foi
observado o baixo desempenho da casca de arroz (0,0236 mg O
2
/g leo.h). Este baixo
desempenho da casca de arroz pode ser explicado pela baixa relao solo e material
estruturante (S/ME) em base volumtrica usada no teste, aproximadamente igual a 1.
Esta baixa relao mostrou ser inibitria para a biodegradao dos hidrocarbonetos
presentes no solo.
A variao da quantidade do material estruturante foi estudada no ensaio SAP-6, onde a
casca de pinho foi adicionada em duas relaes diferentes S/ME (4:1 e 9:1). O valor da
taxa de consumo de oxignio caiu com a diminuio da relao S/ME, isto , com o
aumento da proporo de casca de pinho utilizada. Uma possvel explicao para este
comportamento seria o efeito negativo da resina de pinho na biodegradao do leo
(CLARKSON et al., 1995). Outra possibilidade seria o incremento da toxicidade
relacionada com a liberao de toxinas produzidas por fungos. Seabra e colaboradores
(2005) reportaram que o aumento do emprego de material celulsico, no caso casca de
arroz, induziu o aparecimento de uma grande quantidade de fungos nas primeiras
semanas de tratamento, que desapareceram posteriormente. Neste mesmo experimento,
foi tambm observado um acrscimo da toxicidade por meio do teste de Microtox,
durante este mesmo perodo.
A segunda srie de testes de respirometria foi realizada nos laboratrios da TUHH. As
condies dos testes realizados esto apresentadas na Tabela 4.4. Foram usadas
amostras dos solos C e B2. O teor de leo escolhido nesta serie de ensaios foi de 5%
94
(m/m) e a temperatura de 30C.
Foram testados casca de coco, casca de arroz e composto. Contudo, nessa srie, as
relaes solo/material estruturante (S/ME) usadas foram em base volumtrica. Na srie
de experimentos realizada no CENPES, o uso da relao S/ME em base mssica levou
ao emprego de relaes S/ME volumtricas muito elevadas, em funo da baixa massa
especfica de alguns materiais estruturantes usados, como no caso da casca de arroz
(aproximadamente 125 mg/mL, em base mida). Este grande volume de material
estruturante levou a uma diminuio na eficincia da biodegradao do leo cru,
ocorrido com a casca de arroz. Neste caso, os microrganismos presentes no solo
preferiram degradar os compostos orgnicos presentes na casca em detrimento do leo.
Alm disto, no interessante utilizar relaes S/ME elevadas (acima de 30%), pois
neste caso estaramos diluindo o solo contaminado, condio normalmente no aceita
pelos rgos de controle ambiental.
Na Tabela 5.2, os resultados de consumo de oxignio mdio por massa de leo por hora
so apresentados em diferentes tempos de ensaio. As faixas de valores de consumo de
oxignio foram obtidas em mais de um teste desenvolvido em uma mesma condio.
Em todos os ensaios com o solo C, observou-se uma diminuio da taxa mdia de
consumo de oxignio com o tempo. O solo contaminado sem o aporte de material
estruturante (SAP-8) apresentou valores do consumo mdio de oxignio na faixa de
0,3083 a 0,3822 mg O
2
/g leo.h, aps 110 horas de ensaio. O consumo de oxignio
diminui com o tempo, chegando a 0,1657 mg O
2
/g leo.h, aps 685 horas de ensaio.
Este padro se repetiu tambm nos ensaios em que houve a adio de um material
estruturante. Por exemplo, no ensaio com adio de casca de arroz (10%, m/m) e sem o
emprego de nutrientes (SAP-10), o consumo mdio de oxignio caiu da faixa de 0,4222-
0,5099 mg O
2
/g leo.h (tempo de 110h) para 0,2667 mg O
2
/g leo.h (tempo de 492
horas). Isto sugere que o decrscimo da taxa biodegradao do leo cru no transcorrer
do teste possivelmente funo do desaparecimento dos compostos mais facilmente
biodegradveis. Com o tempo os compostos remanescentes se mostraram mais
recalcitrantes biodegradao em funo de sua menor biodisponibilidade.
A adio de potssio e fsforo (PK) ao Solo C, na relao mssica C/P/K igual a
100/1/1, no mostrou qualquer efeito estatisticamente significativo na biodegradao do
95
leo. O teor de potssio assimilvel encontrado neste solo de 650 mg/kg, bastante alto,
quando comparado com os teores dos solos A e B.
O uso da casca de arroz proporcionou um incremento no consumo mdio de oxignio
(0,4222 - 0,5099 mg O
2
/g leo.h, tempo de 110 horas), quando comparado com o ensaio
sem o aporte de material estruturante (0,3083 - 0,3822 mg O
2
/g leo.h). Este incremento
de consumo mdio de oxignio no se alterou com o aporte de PK.
A utilizao do composto, a 10% m/m, levou a um acrscimo considervel no consumo
de oxignio, 78% a mais do obtido sem a adio de material estruturante. Obteve-se
0,6153 mg O
2
/g leo.h no tempo 110 horas, contra 0,3083 - 0,3822 mg O
2
/g leo.h no
ensaio sem o uso de estruturante. Com o tempo esta diferena foi diminuindo, em
funo da reduo da biodisponibilidade das substncias remanescentes. Mas ainda
assim, manteve-se uma diferena de cerca de 74% para mais no consumo de oxignio,
no tempo de 492 horas. Quanto ao emprego da casca de coco (na faixa de tamanho de 2
a 5 mm), no se verificou qualquer benefcio na biodegradao dos hidrocarbonetos.

Tabela 5.2 - Consumo mdio de oxignio nos testes de respirometria realizados na
TUHH.
Consumo de O2 (mg O2/g leo.h) Solo Teste Condio Concentrao
do ME
Tempo = 110h Tempo = 288h Tempo = 492h Tempo = 685h
SAP-8 Solo + leo 0,3083 0,3822 0,2124 0,2375 0,1790
0,2008
0,1657
SAP-9 Solo + leo + PK 0,3696
SAP-10 Solo + leo + casca de
arroz
10 % (v/v) 0,4222 0,5099 0,3103 0,2667
arroz + PK
10 % (v/v) 0,4785
coco
10 % (v/v) 0,2824 0,1844 0,1516 0,1394

A4

SAP-13 Solo + leo + composto 10 % (v/v) 0,6153 0,4108 0,3318
SAP-14 Solo + leo + pH + PK 0,0526 0,0483 0,0409 0,0432
arroz + pH+ PK
10 % (v/v) 0,0688 0,0494 0,0374 0,0408
SAP-16 Solo + leo + composto
+ pH+ PK
10 % (v/v) 0,0687 0,0517 0,0415 0,0382

B2

SAP-17 Solo + leo + composto
+ pH+ PK
20 % (v/v) 0,0741 0,0531 0,0412 0,0378
96
Uma srie de experimentos foi realizada com o solo B, cujos resultados de respirometria
podem ser vistos na Tabela 5.2. Os valores de taxa de consumo de oxignio alcanados
com o solo B foram bem inferiores aos dos ensaios com o solo tipo C. Uma possvel
explicao para esta diferena seria o baixo teor de carbono orgnico (3,4 g/kg) e de
pH (5,1) encontrados no solo B. Isto manteria uma baixa densidade microbiana no solo,
o que levaria uma baixa atividade biodegradativa do leo. Outra possibilidade seria o
longo armazenamento do solo, superior a seis meses, antes do incio dos testes. Isto
levou a desidratao do solo, cujo teor de umidade antes do incio dos testes era inferior
2%. Isto tambm levaria a uma baixa densidade microbiana no solo.
Para o solo B, o aporte da casca de arroz apresentou uma melhoria na biodegradao do
leo nas primeiras 110 horas de teste (aumento de 30,8% no consumo de O
2
),
comparando-se com os resultados do ensaio sem estruturante. Com o transcorrer do
ensaio a diferena de taxa de consumo de oxignio entre as duas condies praticamente
desapareceu no tempo de 288 horas, este aumento no consumo de O
2
foi de apenas 2%.
A utilizao de composto, na concentrao de 10% m/m, mostrou o mesmo
comportamento da adio da casca de arroz, causando um incremento de cerca de 30%
do consumo de oxignio observado apenas nas primeiras 110 horas de teste. A partir do
tempo 288 horas, este aporte no se mostrou vantajoso para o processo de
biodegradao do contaminante. O aumento da quantidade de composto (20% m/m)
gerou um maior incremento no consumo de oxignio, de cerca de 40% em relao ao
ensaio SAP-14, porm, observado apenas no perodo inicial do teste (110h).
Em resumo, verificou-se que o aporte de nutrientes (PK) e o uso de temperatura mais
elevada (30C) incrementaram a taxa de consumo de oxignio relacionada
biodegradao do leo cru. No caso do efeito da temperatura, este foi mais intenso nos
sistemas com menores teores de leo (Tabela 5.1). O efeito da aplicao de serragem
com nutrientes foi muito mais intenso nos sistemas com teores de leo mais elevados.
Dentre os materiais empregados nos testes com o Solo C o composto foi aquele que
mais incentivou a biodegradao do leo. O desempenho da casca de arroz foi
considerado bom, porm inferior ao do composto. Teores mais elevados de material
estruturante no se mostraram benficos para a biodegradao do leo, produzindo em
alguns casos efeitos deletrios.
97
O valor de consumo de oxignio considerado adequado e aprecivel (SAP-13) foi de
0,3316 mg de O
2
/g de leo.h. para 492 horas de teste. Isto corresponde a um valor
acumulado de 163,2 mg O
2
/g de leo. Este valor est aqum da faixa obtida por
Stegmann et al. (1991) 350 a 1330 mg O
2
/g de leo, aps 300 horas de ensaio.
Contudo, no trabalho de Stegmann foi empregado um solo contaminado por leo diesel,
frao bem mais leve que o petrleo de Sergipe, empregado no presente trabalho. Alm
disso, a quantidade de leo empregada por Stegmann foi seis vezes menor. Portanto, o
nvel de consumo alcanado no presente trabalho pode ser considerado bastante
satisfatrio.
98
5.2. Biopilhas em Bancada
5.2.1. Srie 1
Este tipo de experimento permitiu o acompanhamento dos teores de hidrocarbonetos de
petrleo totais (HPT) extraveis das amostras das biopilhas. A Tabela 5.3 mostra os
resultados de remoo de HPT na primeira serie de ensaios, aps 16 semanas de
tratamento. So mostrados tambm os teores de HPT inicial (T0) e final (T16), os
coeficientes de remoo de HPT e o nmero de amostragens por pilha para a sua
obteno, usando regresso linear, e os respectivos coeficientes de correlao (R
2
).

Tabela 5.3 Teores de HPT e constante de remoo de contaminante.

Os resultados de remoo de HPT mostram que a percentagem de desaparecimento de
HPT no teve grande variao entre as pilhas, variando de 60,17% a 69,13%. A pilha
controle (P-1) foi aquela onde ocorreu a melhor remoo de HPT (69,13%). Isto sugere
que o aporte dos estruturantes no apresentou beneficio remoo do petrleo.
Entre os materiais estruturantes utilizados, a casca de arroz e a serragem apresentaram
resultados de remoo de HPT muito prximos entre si, 67,23 % e 68,25 %,
respectivamente, e em relao ao controle. A casca de coco teve uma eficincia de
remoo de HPT um pouco menor (62,04 %).
HPT [mg/kg solo seco] Pilha % estruturante e
freqncia de
revolvimento em dias
T0 T16
Remoo
aps 16
semanas [%]
Coeficiente
de remoo
[dia
-1
]
R
2
N de
amostras
por pilha
P-1 14 d 38516,4 11889,9 69,13 0,0098 0,9488 4
P-2 10% arroz e 14 d 38688,5 12679,2 67,23 0,0093 0,9420 4
P-3 10% arroz e 28 d 40273,8 14488,2 64,03 0,0087 0,9656 4
P-4 10% arroz e 7 d 36323,9 14468,9 60,17 0,0081 0,9182 4
P-5 10% serragem e 14 d 43701,8 13876,5 68,25 0,0096 0,9530 4
P-6 10% coco e 14 d 39149,8 14862,4 62,04 0,0083 0,9702 4
99
A influncia da freqncia de revolvimento do solo na remoo do leo foi avaliada.
Comparando-se os resultados obtidos nas pilhas P-2, P-3 e P-4, houve um desempenho
levemente superior da pilha com o revolvimento do solo a cada 14 dias (Pilha P-2)
67,23% de remoo de HPT. O pior desempenho foi obtido com o revolvimento a cada
7 dias, 60,17%. Com isso, pode-se inferir que a freqncia de revolvimento do solo no
teve influncia significativa na eficincia de remoo dos HPT, nas condies e na
escala testadas.
No sistema de biopilha, a cintica de biodegradao dos contaminantes orgnicos
presentes no solo pode ser considerada de 1 ordem, como sugerido por diversos autores
(JRGENSEN et al., 2000; NAMKOONG et al., 2002). Em relao aos valores de
coeficiente de remoo encontrados, na faixa de 0,0081 a 0,0098 dia
-1
, eles foram
relativamente baixos quando comparados, por exemplo, a valores obtidos na
biorremediao de solos contaminados por leo diesel (0,036 a 0,124 dia
-1
)
(NAMKOONG et al., 2002). Contudo, em experimentos com petrleo, foram
encontrados coeficientes de 0,0032 dia
-1
(LUNDGREN et al., 1997) e 0,0038 dia
-1

(CHACONAS et al., 1997). Isto mostra que as eficincias de degradao obtidas nos
experimentos em bancada foram superiores s encontradas em literatura para solos
contaminados por petrleo.
Observa-se na Figura 5.1 um decrscimo no teor de HPT extraveis mais acentuado nas
oito primeiras semanas do teste. Da oitava dcima sexta semana, houve uma
diminuio na taxa de desaparecimento de HPT em todas as pilhas. Uma possvel
explicao para este comportamento seria o decrscimo acentuado da quantidade dos
compostos mais facilmente biodegradveis nas 8 primeiras semanas de tratamento. Nas
semanas subseqentes, a biodisponibilizao dos compostos orgnicos presentes no leo
residual foi bastante diminuda, o que se refletiu em menores taxas de remoo dos
poluentes no solo.
A Figura 5.2 mostra a taxa de remoo dos contaminantes em cada perodo de oito
semanas em que se dividiu o ensaio, e no perodo total. Nas primeiras oito semanas de
tratamento a pilha P-5 (com 10% de serragem) apresentou a maior taxa mdia de
remoo, igual a 361,6 mg de HPT/kg.dia. As taxas mdias de remoo de HPT
diminuram na segunda parte do experimento, sendo que as pilhas P-2 e P-5
apresentaram as maiores taxas mdias, em torno de 170 mg de HPT/kg.dia. Para todo o
100
perodo do experimento, a pilha P-5 apresentou o melhor desempenho (266,3 mg de
HPT/kg.dia). Estes valores so indicativos de um bom desempenho do sistema. Balda et
al. (1998) conseguiram taxa mdia de desaparecimento de HPT de 71,2 mg de
HPT/kg.dia, num tempo de tratamento de 12 meses para um solo arenoso contaminado
por petrleo.

Figura 5.1 Evoluo dos teores de HPT nos ensaios com biopilhas Srie 1.

Os cromatogramas do leo extrado de todas as pilhas esto apresentados das Figuras
5.3 a 5.8. O padro da evoluo dos picos dos cromatogramas com o tempo
praticamente se repetiu em todas as pilhas. J no tempo de quatro semanas os
cromatogramas apresentavam os picos bem reduzidos em funo do desaparecimento
dos compostos mais leves. Isto ficou mais acentuado no tempo de 16 semanas. Convm
ressaltar que o desempenho das seis biopilhas foi similar como atestam os dados
quantitativos de HPT residual (Figura 5.1), de taxas mdias de remoo de HPT (Figura
5.2) e os aspectos qualitativos dos cromatogramas mostrados nas Figuras 5.4 a 5.9.

Srie 1
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
35000
40000
45000
50000
1 2 3 4 5 6
Pilha
H
P
T

[
m
g
/
k
g

s
o
l
o

s
e
c
o
]
T0 T8 T16
101
0
50
100
150
200
250
300
350
400
0-8 8-16 TOTAL
P-1
P-2
P-3
P-4
P-5
P-6
Tempo [semana]
T
a
x
a

d
e

d
e
s
a
p
a
r
e
c
i
m
e
n
t
o

[
m
g

T
P
H
/
k
g

s
o
l
o
.
d
i
a
]

Figura 5.2 Taxas mdias de desaparecimento de HPT nos ensaios com biopilhas
Srie 1.

102
BIOPILHA P-1

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000
FID1 A, (BIOCET\002F0202.D)

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000

Figura 5.4 Evoluo dos cromatogramas na Biopilha P-1.
Tempo 0
Tempo 4
Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
103
BIOPILHA P-2

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000
min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000


Tempo 0
Tempo 4
Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
104
BIOPILHA P-3

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
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Tempo 0
Tempo 4
Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
105
BIOPILHA P-4

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Tempo 0
Tempo 4
Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
106
BIOPILHA P-5

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50000
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70000
80000
90000

Figura 5.8 - Evoluo dos cromatogramas na Biopilha P-5.
Tempo 0
Tempo 4
Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
107
BIOPILHA P-6

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90000

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20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000

Tempo 0
Tempo 4
Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
108

5.1.1.2. Contagem Microbiana
Os resultados da contagem de microrganismos heterotrficos totais so mostrados na
Tabela 5.4. A quantidade de microrganismos medida antes da contaminao do solo foi
de 5,23 x 10
6
NMP/g de solo seco. Com a contaminao, houve um leve decrscimo na
contagem microbiana, mantido nas quatro primeiras semanas de teste, observado em
todas as pilhas. Este resultado mostra certo efeito txico do leo na populao
microbiana. O aumento na contagem foi observado na oitava semana, quando os valores
passaram para a faixa de 10
7
a 10
8
NMP/g de solo seco. Na ltima medida (T16), a
contagem diminuiu cerca de uma ordem de grandeza (10
7
) em todas as pilhas. A Figura
5.10 mostra a evoluo da contagem das heterotrficas na forma de grfico de barras.

Tabela 5.4 Contagem de microrganismos heterotrficos totais.

PILHA
P-1 P-2 P-3 P-4 P-5 P-6

TEMPO
(NMP/g solo seco)
Solo limpo 5,23E+06 5,23E+06 5,23E+06 5,23E+06 5,23E+06 5,23E+06
T0 2,57E+06 2,54E+06 1,14E+06 6,24E+06 2,57E+06 2,63E+06
T4 1,06E+06 8,07E+05 2,48E+06 1,61E+06 1,08E+06 1,37E+06
T8 5,86E+07 5,82E+07 7,48E+07 2,36E+08 5,91E+08 2,44E+08
T12 5,98E+07 8,21E+07 6,19E+08 8,28E+07 8,39E+07 2,46E+08
T16 2,38E+07 5,97E+07 2,42E+07 1,35E+07 2,37E+07 1,33E+07
109
1,00E+00
1,00E+01
1,00E+02
1,00E+03
1,00E+04
1,00E+05
1,00E+06
1,00E+07
1,00E+08
1,00E+09
Solo T0 T4 T8 T12 T16
N
M
P
/
g

d
e

s
o
l
o

s
e
c
o
Pilha 1 Pilha 2 Pilha 3 Pilha 4 Pilha 5 Pilha 6

Figura 5.10 - Contagem de microrganismos heterotrficos totais Srie 1.

Em termos de bactrias degradadoras de leo, antes da contaminao a contagem no
solo era bem baixa, 5,23 x 10
3
NMP/g de solo seco. Com a contaminao, no houve
aumento considervel da contagem de degradadores de leo nas primeiras quatro
semanas. O aumento da contagem s ficou evidenciado a partir de oito semanas de
tratamento (T8), quando as contagens atingiram a faixa de 10
7
NMP/g de solo seco
(Figura 5.11 e Tabela 5.5), a qual se manteve at o final do teste. Estes resultados
mostram que houve presena significativa de degradadores de leo durante grande parte
dos experimentos.
1,00E+00
1,00E+01
1,00E+02
1,00E+03
1,00E+04
1,00E+05
1,00E+06
1,00E+07
1,00E+08
1,00E+09
Solo T0 T4 T8 T12 T16
N
M
P
/
g

d
e

s
o
l
o

s
e
c
o

Figura 5.11 - Contagem de microrganismos degradadores de leo Srie 1.
110
Tabela 5.5 Contagem de microrganismos degradadores de leo.

PILHA
P-1 P-2 P-3 P-4 P-5 P-6 TEMPO
(NMP/g solo seco)
Solo 5,23E+03 5,23E+03 5,23E+03 5,23E+03 5,23E+03 5,23E+03
T0 5,42E+03 1,18E+04 1,60E+04 3,07E+03 8,00E+04 8,17E+03
T4 9,58E+04 5,10E+04 1,22E+04 2,90E+04 1,52E+04 1,75E+04
T8 5,05E +06 1,48E+07 1,18E+07 1,83E+07 1,50E+07 4,98E+07
T12 9,78E+06 1,91E+06 1,57E+07 1,22E+07 8,94E+07 1,91E+07
T16 8,46E+06 8,67E+06 9,13E+06 2,46E+06 1,26E+07 1,49E+07
111
5.2.2. Srie 2
Na segunda srie de experimentos, dois tipos de solos foram testados: solos A3 e B2. Os
resultados de porcentagem de remoo de HPT aps 16 semanas de tratamento esto
mostrados na Tabela 5.6, assim como o coeficiente de remoo de HPT e os respectivos
coeficientes de correlao.

Tabela 5.6 - Teores de HPT e constante de degradao de contaminante.

O aporte da casca de arroz no trouxe beneficio na remoo de HPT, quando comparado
com o resultado da pilha sem material estruturante (P-7), aps 16 semanas de teste. A
remoo de HPT na pilha P-7 foi de 67,99%, contra 63,65% e 61,07% para as pilhas
com 10% e 20% de casca de arroz, respectivamente. O efeito negativo no processo de
desaparecimento do petrleo foi maior com o aumento da concentrao da casca de
arroz.
O teste com a pilha P-10, com a adio de azida de sdio, no pde quantificar o
desaparecimento dos HPT referente aos processos abiticos. As concentraes de
microrganismos totais e biodegradadores de leo foram inferiores aos das outras pilhas,
porm altos suficientes para que a biodegradao do leo ocorresse. Tanto assim, que o
valor encontrado para o desaparecimento de HPT foi 43,64%, muito elevado para um
ensaio pretensamente abitico. Os resultados microbiolgicos sero mostrados no
prximo item. Para que a pilha se mantivesse abitica, seria necessria a adio
contnua da azida, e, provavelmente, em concentrao mais elevada que a usada no
teste.
HPT (mg/kg solo seco) Aps 16 semanas Pilha Solo % de estruturante
(v/v) e freqncia de
revolvimento em
dias
T0 T8 T16 Remoo
(%)
Coeficiente de
remoo (dia
-1
)
R
2
N de
amostras
P-7 A 7 d 58577,1 35449,3 18747,6 67,99 0,0109 0,9533 4
P-8 A 10% arroz e 7 d 53643,1 32109,9 19498,3 63,65 0,0096 0,9609 4
P-9 A 20% arroz e 7 d 57708,7 35306,9 22463,7 61,07 0,0087 0,9968 4
P-10 A azida de sdio e 7 d 61847,3 47107,1 34857,1 43,64 0,0051 0,9861 4
P-11 B 7 d 60216,7 44406,1 30735,9 48,96 0,0061 0,9813 4
P-12 B 10% arroz e 7 d 59469,5 42543,9 27043,5 54,53 0,0069 0,9896 4
112
A anlise dos resultados para o solo B mostra que o aporte do arroz foi positivo para o
desaparecimento dos hidrocarbonetos, diferentemente do caso do solo A. A remoo de
HPT foi de 54,53% na pilha P-12 (com o aporte de arroz), contra 48,96% da pilha P-11
(sem o aporte de arroz).
O grfico da Figura 5.12 mostra a evoluo da diminuio dos teores de HPT com o
tempo.
Figura 5.12 Evoluo do decrscimo de HPT na Srie 2.

Os cromatogramas dos extratos de cada pilha da serie 2 esto mostrados nas Figuras
5.13 a 5.18. Os cromatogramas referentes s pilhas com o solo A apresentam picos
menores que os referentes ao solo B. Isto, adicionalmente, indica que o nvel de
biodegradao do petrleo foi maior no solo A. Em termos de porcentagem de
desaparecimento de HPT, os valores alcanados com o solo A foram superiores aos
obtidos com o solo B (Tabela 5.6). Os resultados melhores obtidos com o solo A se
devem sua melhor qualidade, tanto em termos de fertilidade (macro e micro-
nutrientes) como de textura mais equilibrada (franco-argiloso).
A despeito das caractersticas menos favorveis do solo B, observam-se das 5.17 e 5.18
que a biodegradao do contaminante est seguindo o seu curso, embora de modo mais
lento do que no solo A.
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
35000
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45000
50000
55000
60000
65000
70000
7 8 9 10 11 12
Pilha
H
P
T

(
m
g
/
k
g

s
o
l
o

s
e
c
o
)
T0 T8 T16
113
BIOPILHA P-7

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
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60000
70000
80000
90000
FID1 A, (BANDE2\002F0201.D)

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10000
20000
30000
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10000
20000
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10000
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Tempo 0
Tempo 16
Tempo 12
Tempo 8
Tempo 4
114
BIOPILHA P-8

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10000
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80000
90000

Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
Tempo 4
Tempo 0
115
BIOPILHA P-9

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10000
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Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
Tempo 4
Tempo 0
116
BIOPILHA P-10

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Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
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Tempo 0
117
BIOPILHA P-11

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Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
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Tempo 0
118
BIOPILHA P-12

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80000
90000

min 0 10 20 30 40 50
counts
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000

Tempo 8
Tempo 12
Tempo 16
Tempo 4
Tempo 0
119
5.2.2.2. Contagem Microbiana
A contagem de bactrias heterotrficas nas biopilhas, no incio do teste, ficou acima 10
6

NMP/g de solo seco (Figura 5.19). Aps 4 semanas de ensaio as contagens apresentaram
leve aumento para as pilhas com o Solo A. No transcorrer do teste, para as pilhas
contendo o Solo A, a contagem microbiana se manteve constante, com uma ligeira
queda na ltima semana (T16). Para as pilhas com o Solo B observaram-se oscilaes
na contagem, com aprecivel queda no tempo T4, para a pilha P-11. A densidade
microbiana nas pilhas contendo solo do tipo A foi, em geral, maior do que a observada
nas pilhas com o Solo B. Isto tambm reflete a melhor qualidade do solo A, com teores
de nutrientes e carbono mais elevadas. O ensaio pretensamente abitico (P-10) mostrou
atividade microbiana, ao longo do teste, o que invalidou a avaliao do desaparecimento
de HPT por processos abiticos.

1,00E+00
1,00E+01
1,00E+02
1,00E+03
1,00E+04
1,00E+05
1,00E+06
1,00E+07
1,00E+08
1,00E+09
T0 T4 T8 T12 T16
N
M
P
/
g

d
e

s
o
l
o

s
e
c
o

Figura 5.19 - Contagem de microrganismos heterotrficos totais Srie 2.

A anlise do grfico da Figura 5.20 mostra que as contagens de bactrias degradadoras
de leo foram tambm maiores na biopilhas com o solo A, com exceo da pilha
abitica (P-10). Este resultado permite verificar a relao existente entre densidade de
microorganismo degradadores de leo com o nvel de desaparecimento dos HPT.
120
As contagens apresentaram tendncia de crescimento nas primeiras oito semanas, com
posterior decrscimo. As pilhas P-11 e P-12 apresentaram, durante quase todo o ensaio,
densidade microbiana significativamente menor que a observada nas demais pilhas,
indicando que o solo B apresentou caractersticas prejudiciais ao crescimento
microbiano. Provavelmente, o menor teor de matria orgnica presente no solo B possa
ser a explicao para estes resultados. Outro fator para uma menor densidade
microbiana no solo B seria a sua textura argilosa. As argilas apresentam uma afinidade
com os certos contaminantes orgnicos deixando-os menos biodisponveis ao ataque dos
microrganismos.

1,00E+00
1,00E+01
1,00E+02
1,00E+03
1,00E+04
1,00E+05
1,00E+06
1,00E+07
1,00E+08
1,00E+09
T0 T4 T8 T12 T16
N
M
P
/
g

d
e

s
o
l
o

s
e
c
o

Figura 5.20 - Contagem de microrganismos degradadores de leo Srie 2.

Pode-se resumir os resultados das anlises qumica e microbiolgica, afirmando que o
aporte da casca de arroz no trouxe beneficio na remoo de HPT, no caso do solo A.
Entretanto, no caso do solo B, o aporte do arroz foi positivo para o desaparecimento dos
hidrocarbonetos. Observou-se tambm que as eficincias de degradao obtidas nos
experimentos em bancada foram superiores s relatadas em literatura.
A freqncia de revolvimento do solo no teve influncia estatisticamente significativa
na eficincia de remoo dos HPT, nas condies e na escala testadas. Os resultados
microbiolgicos mostraram que houve presena significativa de degradadores de leo
durante grande parte dos experimentos.
121
5.2.3. Ecotoxicidade
Os testes usados para avaliar a toxicidade presente em solos das Sries 1 e 2 de
experimentos foram: Microtox (emisso de luminescncia pela bactria Vibrio fischeri);
inibio de crescimento do broto e raiz do Hordeum vulgare (cevada); inibio de
germinao de sementes de Avena sativa (aveia) e de Brassica napus (nabo).

5.2.3.1. Testes com Microtox
A Tabela 5.7 apresenta os resultados de toxicidade pelo Microtox em amostras de solo
coletadas durante os ensaios da Srie 1. A amostra de solo contaminada antes de
qualquer tratamento (T0) apresentou efeito txico, na maior concentrao testada, de
47,4%, resultando em uma CE50
15min
igual a 88,29% do extrato.
Aps 16 semanas de tratamento foi observada uma reduo do efeito txico em todas as
seis pilhas, ainda que um efeito txico residual tenha ficado remanescente (de 21 a 40%
de efeito adverso na maior concentrao testada do extrato aquoso). Para todas as pilhas
no foi possvel estimar a CE50
15min
j a partir da quarta semana de tratamento.
122

Tabela 5.7 Resultados da avaliao da ecotoxicidade por Microtox para a Srie 1.
Efeito em 15 minutos Pilha Tempo pH Salinidade
(g/l)
Maior
concentrao
testada (%)
CE50% Efeito da
maior
concentrao
testada (%)
T0 7,38 0 81 88,29 47,4
T4 6,68 0 81 > 81 28
T12 7,54 0 81 > 81 32

P-1
T16 7,20 0 81 > 81 21
T0 7,38 0 81 88,29 47,4
T4 6,79 0 81 > 81 37
T12 7,17 0 81 > 81 34

P-2
T16 7,11 0 81 > 81 40
T0 7,38 0 81 88,29 47,4
T4 6,56 0 81 > 81 38
T12 7,15 0 81 > 81 40

P-3
T16 7,18 0 81 > 81 38
T0 7,38 0 81 88,29 47,4
T4 6,75 0 81 > 81 28
T12 7,12 0 81 > 81 38

P-4
T16 7,08 0 81 > 81 36
T0 7,38 0 81 88,29 47,4
T4 6,88 0 81 > 81 35
T12 7,18 0 81 > 81 42

P-5
T16 7,18 0 81 > 81 34
T0 7,38 0 81 88,29 47,4
T4 6,96 0 81 > 81 26
T12 7,19 0 81 > 81 39

P-6
T16 7,20 0 81 > 81 36

5.2.3.2. Testes com Vegetais
A Tabela 5.8 apresenta um resumo dos resultados dos testes ecotoxicolgicos usando
vegetais, dado em porcentagem em relao ao solo de controle (Solo A limpo), para a
Srie 1.

123
Tabela 5.8 - Resultados dos testes ecotoxicolgicos usando vegetais, em
porcentagem em relao ao controle - Srie 1.
%
Hordeum vulgare
(cevada)
Avena sativa
(aveia)
Brassica napus
(nabo)
Comprimento Germinao do broto Germinao do Broto
Amostra
Estruturante
[% v/v]
broto raiz comprimento massa comprimento massa
Solo A limpo 100 100 100 100 100 100
Solo A
contaminado
85 45 55 19
Solo A
tratado P-1
109 110 93 59 61 27
Solo A
tratado P-2
casca de
arroz [10]
81 66 87 48 39 8
Solo A
tratado P-3
casca de
arroz [10]
94 66 87 45 29 4
Solo A
tratado P-5
serragem
[10]
74 72 86 47 55 20
Solo A
tratado P-6
casca de
coco [10]
99 98 88 57 75 35
Areia 63 110
LUFA 110 122 110 117 110 152

Os resultados dos testes de inibio no crescimento da cevada (Hordeum vulgare)
mostram que o solo limpo A (controle) apresenta uma qualidade prxima do solo de
referncia LUFA 2.2. Este comportamento foi observado tanto no crescimento da raiz
como no do broto (Figura 5.21).
O solo que passou pelo tratamento, sem a adio da casca de arroz (P-1), no apresentou
efeito txico cevada, comparado com o solo limpo (Figura 5.21). Isto tambm
aconteceu com a pilha em que foi empregada a casca de coco (P-6). J o aporte da
serragem no conduziu mesma recuperao da qualidade do solo. Isto ficou mais
evidente nos dados da inibio do crescimento da raiz da cevada. A adio de casca de
arroz trouxe certa recuperao da qualidade do solo, porm abaixo daquela promovida
pela casca de coco e serragem.

124
0
20
40
60
80
100
120
140
160
Areia LUFA 2.2 Solo A
limpo
P-1 P-2 P-3 P-5 P-6
C
o
m
p
r
i
m
e
n
t
o

[
%

d
o

c
o
n
t
r
o
l
e
]
Broto Raiz

Figura 5.21 - Crescimento do broto e raiz de Hordeum vulgare (cevada), em
percentagem do valor do controle, Srie 1.

Os resultados do teste de germinao com a Avena sativa (aveia) esto mostrados na
Figura 5.22, em percentagem do valor do controle. O efeito negativo do contaminante
na germinao da aveia pode ser observado, com maior clareza na massa do broto.
As amostras dos solos que sofreram tratamento nas biopilhas no apresentaram
diferena significativa de qualidade em relao ao solo contaminado antes do
tratamento, em termos de comprimento do broto. Tambm em termos de massa, as
amostras de solos tratados no apresentaram qualquer melhoria significativa na
qualidade. A nica amostra que demonstrou uma leve melhora de qualidade foi quela
processada sem o aporte de qualquer material estruturante. Em termos gerais, todos os
solos tratados no apresentaram diminuio significativa do efeito txico para a
germinao da aveia.

125
0
20
40
60
80
100
120
140
LUFA 2.3 Solo A limpo Solo A
contaminado
P-1 P-2 P-3 P-5 P-6
%

d
o

c
o
n
t
r
o
l
e
Comprimento Massa

Figura 5.22 - Germinao da Avena sativa (aveia), em percentagem do valor do
controle, Srie 1.

No caso do teste com Brassica napus (nabo), o efeito negativo do leo no
desenvolvimento do broto foi maior que o observado com a Avena sativa (Figura 5.23).
Este efeito foi mais evidenciado na massa do broto de nabo.
Quanto aos solos tratados, o material que recebeu o aporte da casca de coco (P-6) foi o
nico que apresentou melhora na qualidade em relao ao solo contaminado original. O
material das pilhas P-1 e P-5, sem aporte de material estruturante e com serragem,
respectivamente, no mostraram uma melhora significante na qualidade. A casca de
arroz (P-2 e P-3) apresentou uma diminuio mais acentuada na germinao da Brassica
napus.
Analisando o conjunto de resultados de fitotoxicicidade, pode-se concluir que nenhuma
das condies usadas para o tratamento do solo contaminado conseguiu restabelecer a
qualidade do solo limpo, dentro do prazo de 16 semanas. A maioria dos tratamentos no
alcanou nem mesmo uma melhoria da qualidade em relao ao solo originalmente
contaminado. As excees foram as pilhas P-1 e P-6, que alcanaram leve melhora na
qualidade do solo, porm ainda aqum do nvel de qualidade do solo limpo. Uma
possvel explicao para o melhor desempenho da pilha P-1, em termos
126
ecotoxicolgicos, seria o menor teor de leo residual alcanado (11889,9 mg HPT/kg de
solo seco) na srie. Contudo, o valor final de HPT alcanado na P-6 foi o mais elevado
da srie (14862,4 mg HPT/kg de solo seco). Com isso, o teor de leo residual
isoladamente no poderia explicar estes resultados.
Uma outra possibilidade seria a proliferao de fungos observada na superfcie das
pilhas que receberam material estruturante, na primeira semana de tratamento. Com isto,
houve a produo de uma quantidade de toxinas suficientes para causar efeito negativo
no crescimento dos vegetais. A pilha P-5, que recebeu a serragem, foi aquela onde se
observou a proliferao de fungos mais intensa. As pilhas que receberam casca de arroz
(P-2 e P-3) tiveram um crescimento menor de fungos, enquanto que a pilha com casca
de coco teve o menor aparecimento dos fungos. J a pilha que no recebeu material
estruturante (P-1) no teve qualquer crescimento de fungos. Assim, dessas observaes
qualitativas infere-se que as pilhas onde houve maior proliferao de fungos foram
detectados efeitos txicos mais fortes nos vegetais testados. Os fungos vieram a
desaparecer visualmente a partir da segunda semana de tratamento, em todas as pilhas.

Figura 5.23 - Germinao de Brassica napus (nabo), em percentagem do valor do
controle, Srie 1.

-20
0
20
40
60
80
100
120
140
160
LUFA 2.3 Solo A limpo Solo A
contaminado
P-1 P-2 P-3 P-5 P-6
%

d
o

c
o
n
t
r
o
l
e
Comprimento Massa
127
A segunda srie de experimentos foi conduzida com os solos A e B. O resumo dos
resultados dos testes ecotoxicolgicos usando vegetais est apresentado na Tabela 5.9.

Tabela 5.9 - Resultados dos testes ecotoxicolgicos usando vegetais, em
porcentagem em relao aos respectivos controles - Srie 2.
%
Hordeum vulgare
(cevada)
Avena sativa
(aveia)
Brassica napus
(nabo)
Comprimento Germinao do Broto Germinao do Broto
Amostra
Estruturante
[% v/v]
raiz broto comprimento massa comprimento massa
Solo A limpo 100 100 100 100 100
Solo A
contaminado
122 32 39 21 0
Solo A
tratado P-7
85 138 229 181 433
Solo A
tratado P-8
casca de
arroz [10]
93 139 260 174 389
Solo A
tratado P-9
casca de
arroz [20]
110 137 245 113 78
Areia 67
LUFA 79 146 332 532 5111
Solo B limpo 100 100 100 100 100
Solo B
contaminado
0 0 0 0 0
Solo B
tratado P-11
226 125 185 243 525
Solo B
tratado P-12
casca de
arroz [10]
224 131 219 339 875

A Figura 5.26 mostra os resultados dos testes de inibio com a cevada (Hordeum
vulgare) para os testes com o solo A (Entre Rios). Pode-se observar que o crescimento
da raiz da cevada foi maior no solo contaminado que no solo limpo (controle). Uma
possvel razo para este resultado seria a dificuldade encontrada no controle da umidade
para o incio dos experimentos. As amostras estavam bastante secas e apresentavam um
comportamento hidrofbico muito grande.
O crescimento de raiz nas amostras P-7 e P-8 se situou abaixo ao do controle. Para a
amostra P-9 o crescimento mdio foi superior ao do controle. Contudo, estatisticamente
no houve diferenas significativas de efeito txico cevada para os solos das trs
pilhas.
Os fungos no se proliferaram visualmente das pilhas da Srie 2, conseqentemente, o
efeito txico no foi observado em nenhum dos testes ecotoxicolgicos nos solos
tratados, ao contrrio do ocorrido nos solos da Srie 1.
128
0,0
20,0
40,0
60,0
80,0
100,0
120,0
140,0
160,0
Arei a LUFA Solo A li mpo Sol o A
cont ami nado
P- 7 P- 8 P- 9
%

d
o

c
o
n
t
r
o
l
e

Figura 5.26 - Crescimento da raiz da Hordeum vulgare (cevada), em percentagem
do valor do controle, Solo A - Srie 2.

O efeito txico ao crescimento da raiz da Hordeum vulgare nas amostras do solo B
apresentou resultado bastante diferente do observado para as amostras de solo A. A
contaminao causou um efeito extremamente negativo cevada, pois todos os brotos
morreram (Figura 5.27). Isto indica que os hidrocarbonetos residuais ou metablicos
foram fitotxicos. Porm, as amostras de solos tratados com a biopilha mostraram-se
com melhor qualidade do que a do solo controle (solo B limpo). O efeito da utilizao
do estruturante (casca de arroz) no crescimento da raiz da cevada (P-12) no se
diferenciou daquele promovido pelo solo tratado sem este estruturante (P-11).

0,0
50,0
100,0
150,0
200,0
250,0
Ar eia LUFA Sol o B l impo Solo B
cont aminado
P-11 P- 12
%

d
o

c
o
n
t
r
o
l
e

Figura 5.27 - Crescimento da raiz da Hordeum vulgare (cevada), em percentagem
do valor do controle, Solo B - Srie 2.
129
O efeito na germinao da aveia (Avena sativa) est mostrado na Figura 5.28. A
contaminao por hidrocarbonetos teve um efeito negativo tanto no crescimento da raiz
como na massa do vegetal. Todos os solos que passaram por tratamento biolgico
tiveram sua qualidade incrementada, superando mesmo a do solo limpo. Estes
resultados foram observados nos ensaios com os solos A e B.
Quanto influncia da adio da casca de arroz na qualidade do solo B limpo, os
resultados de germinao mostraram que no houve diferena estatisticamente
significativa de qualidade entre o solo B limpo e o com a adio da casca de arroz
(Figura 5.28). Assim, a casca de arroz no apresentou efeito txico na inibio da
germinao da aveia.

0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
LUFA Solo A limpo Solo A
contaminado
P-7 P-8 P-9 Solo B limpo Solo B
contaminado
P-11 P-12 Solo B limpo
c/arroz
%

d
o

c
o
n
t
r
o
l
e
Comprimento Massa
Figura 5.28 - Germinao da Avena sativa (aveia), em percentagem do valor do
controle, Srie 2.

O teste de germinao com Brassica napus (nabo) mostrou ser esta espcie mais
sensvel aos hidrocarbonetos que a aveia (Figuras 5.29 e 5.30). Como nos testes com
aveia, os solos A e B tratados mostraram uma recuperao de sua qualidade em
comparao com os respectivos solos contaminados.
130
No caso dos ensaios com o solo B, a qualidade do solo aps o tratamento teve um
incremento superior ao do solo limpo. Aparentemente a adio da casca de arroz
melhorou a estrutura do solo, aumentando o volume dos macro-poros, facilitando assim
a germinao e o crescimento dos vegetais.

-50
0
50
100
150
200
250
300
Solo A limpo Solo A
contaminado
P-7 P-8 P-9
%

[
e
m

r
e
l
a
c
a
o

a
o

c
o
n
t
r
o
l
e
]

Figura 5.29 - Germinao da Brassica napus (nabo), em percentagem do
comprimento do controle, Solo A - Srie 2.

0
50
100
150
200
250
300
350
400
Solo B limpo Solo B
contaminado
P-11 P-12 Solo B limpo
c/arroz
%

[
e
m

r
e
l
a
c
a
o

a
o

c
o
n
t
r
o
l
e
]

Figura 5.30 - Germinao da Brassica napus (nabo), em percentagem do
comprimento do controle, Solo B - Srie 2.
131
Em resumo, os testes de ecotoxicidade com vegetais mostraram ser uma ferramenta
importante no controle da eficincia de processos de remediao de solos. Eles
fornecem predio mais consistente dos efeitos prejudiciais dos contaminantes aos
organismos do solo, o que concordante com os resultados obtidos por Van Gestel et al.
(2001).
Para os vegetais Hordeum vulgare (cevada) e Avena sativa (aveia) o tratamento do solo
por 16 semanas em biopilhas (Srie 1) no promoveu expressiva reduo de
ecotoxicidade, embora tenha havido significativo progresso na biodegradao expresso
pela reduo dos teores de HPT extraveis. O crescimento de fungos nos estgios
iniciais do processo pode ter afetado os resultados de ecotoxicidade. Nos ensaios da
Srie 2, o tratamento em biopilha, em geral, contribuiu para melhorar a qualidade dos
solos em termos de ecotoxicidade. Para o Solo B os ganhos de qualidade foram ainda
maiores.
O vegetal Brassica napus (nabo) mostrou-se a espcie mais sensvel presena do leo
residual. Todos os testes apresentaram um crescimento menor nos solos tropicais do que
nos solos LUFA.
132
5.3. Reatores em Coluna
5.3.1. Srie BR1
O ensaio com os reatores de coluna BR1 teve a durao de 30 dias corridos. Na corrente
de sada dos reatores BR1-3 e BR1-4, foram medidos automaticamente os teores dos
compostos orgnicos volteis (COVs), quantificados em termos de COT, e de CO
2
. Os
valores acumulativos de COT e de CO
2
, que correspondem percentagem do carbono
original presente no petrleo adicionado ao solo, para cada reator, so mostrados no
grfico da Figura 5.31.
As curvas para os dois reatores mostram uma boa repetibilidade, uma vez que foram
operados sob as mesmas condies.

0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
4,5
0 5 10 15 20 25 30 35
Tempo [dias]
C
a
r
b
o
n
o

d
o

o
l
e
o

c
r
u

[
%
]
BR1-4 / Total [%-C do Oleo]
BR1-4 / CO2-C [%C do Oleo]
BR1-4 / COT [%C do Oleo]

Figura 5.31 - Desaparecimento acumulativo de carbono nos biorreatores BR1-3 e
BR1-4.

133
Houve grande aumento na taxa de emisso de COVs no primeiro dia de operao, em
funo da circulao de ar. Em seguida, essa taxa apresentou tendncia de estabilizao.
Uma anlise mais detalhada da evoluo dos COVs ser feita mais a frente.
A anlise na produo de CO
2
mostra que houve uma fase lag que durou cerca de dois
dias, provavelmente em funo do choque aos microorganismos do solo pela adio do
petrleo. Em seguida, houve uma elevada taxa de produo de CO
2
entre os dias 2 e 4.
Aps este perodo, a taxa de produo de CO
2
se estabilizou em um nvel mais baixo at
o final dos ensaios.
A evoluo das quantidades acumuladas de CO
2
e do COT na sada dos reatores BR1-5
e BR1-6 apresentada na Figura 5.32. Estes reatores receberam o aporte de 10% (v/v)
de casca de arroz. A repetibilidade dos resultados dos dois reatores foi boa, porm no
no mesmo nvel do obtido para os reatores BR1-3 e BR1-4.

0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
0 5 10 15 20 25 30 35
Tempo [dia]
C
a
r
b
o
n
o

d
o

l
e
o

c
r
u

[
%
]

Figura 5.32 - Desaparecimento acumulado de carbono nos biorreatores BR1-5 e
BR1-6.

134
Observa-se tambm uma forte emisso de COVs nos dois primeiros dias de teste, como
ocorreu nos reatores BR1-3 e BR1-4. Em seguida, houve diminuio e estabilizao na
taxa de emisso de COVs. A produo de CO
2
nos dois primeiros dias de teste foi
praticamente nula, o que indica uma fase lag em virtude do choque microbiota do solo
pela adio do petrleo, tal como ocorrido nos reatores BR1-3 e BR1-4. Passada esta
fase, houve um forte crescimento na produo de CO
2
que durou cerca de dois dias.
Logo depois, a produo de CO
2
se estabilizou em um valor mais baixo at o trmino
dos experimentos.
A evoluo dos teores de CO
2
na corrente do gs exausto dos reatores pode ser
visualizada no grfico da Figura 5.33. O reator BR1-1 (controle da respirao do solo)
teve produo de CO
2
praticamente constante no transcorrer de todo ensaio. O teor de
CO
2
se manteve em torno de 0,1% de volume da fase gasosa. O reator que teve o aporte
de casca de arroz (BR1-2), mas sem a adio do leo, teve uma produo de CO
2
mais
elevada do que a do reator s com o solo. As concentraes de CO
2
medidas estiveram
na faixa de 0,2% a 0,3% de volume da fase gasosa. Isto evidenciou uma pequena
produo de CO
2
em funo de processo de metabolizao da matria orgnica presente
na casca de arroz. Normalmente, a casca de arroz considerada relativamente inerte
quanto sua biodegradao, isto , tem uma lenta metabolizao microbiana de seu
carbono em comparao com outros substratos.

0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
2,0
0 5 10 15 20 25 30
Tempo [dia]
C
O
2

[
%

V
o
l
u
m
e
]
BR1-1
BR1-2
BR1-3
BR1-4
BR1-5
BR1-6

Figura 5.33 Evoluo dos teores de CO
2
no acumulativos no efluente gasoso dos
reatores da srie BR1.
135
Nos reatores onde houve contaminao do solo com o leo cru de Sergipe, observa-se
que no segundo dia houve um pico na concentrao de CO
2
na corrente gasosa da sada
dos reatores. O pico de teor de CO
2
medida na sada dos reatores BR1-3 e BR1-4 foi de
1,3% de volume da fase gasosa. A partir do dcimo dia de experimentos o valor de CO
2

se manteve constante em torno de 0,5% de volume.
A fase gasosa efluente dos reatores BR1-5 e BR1-6, que receberam solos contaminados
e o aporte de 10% de casca de arroz, apresentou tambm um pico de concentrao de
CO
2
(1,7% de volume) em torno do segundo dia de ensaio. Em seguida, a concentrao
de CO
2
foi diminuindo at se estabilizar na faixa de 0,5% a 0,6% de volume gasoso.
Os resultados dos reatores com solo contaminado evidenciam que a mineralizao do
leo foi mais intensa nos primeiros dias de tratamento, diminuindo nas semanas
seguintes para um patamar constante.
Os valores de COT no cumulativo na sada dor reatores mostram que houve forte
emisso nas primeiras 24 horas de ensaio (Figura 5.34). Os reatores com a adio de
casca de arroz mostraram picos de COT na ordem de 0,500 g de C/kg de solo seco por
dia, superior aos verificados nos reatores sem utilizao da casca (~ 0,400g de C/kg de
solo seco por dia). Uma possvel explicao para esta diferena seria um aumento dos
macro-poros do solo pela adio da casca, o que favoreceria a sada dos COVs do meio
poroso.
Aps a ocorrncia dos picos de COVs, os teores de volteis decresceram rapidamente
at um patamar de cerca de 0,002 g de C/kg de solo seco por dia, observado em todos os
reatores, incluindo os controles. Com isso, mostra-se que a contribuio da volatilizao
no desaparecimento do leo cru durante o teste foi muito baixa.

136

Figura 5.34 - Evoluo dos teores de COT no acumulativos no efluente gasoso dos

O balano completo de carbono durante o processo de desaparecimento do leo cru no
foi possvel de ser obtido nesta srie de ensaios. Os valores de HPT e de biomassa
obtidos se mostraram inconsistentes. Por isso, s foi possvel fazer um balano parcial
de carbono, levando-se em conta quanto de leo foi transformado em CO
2
pela
mineralizao e quanto foi transferido para a fase gasosa por volatilizao.
O grfico da Figura 5.35 mostra que o desaparecimento acumulativo do carbono do leo
cru, em termos de mineralizao e volatilizao, foi similar entre os reatores com e sem
o aporte da casca de arroz. Deste modo, fica evidente que a casca de arroz no
promoveu aumento na eficincia de desaparecimento do leo cru.

0,000
0,100
0,200
0,300
0,400
0,500
0,600
0 1 2 3 4
Tempo [dia]
C
O
T

[
g

C
/
k
g

m
a
s
s
a

s
e
c
a
*
d
i
a
]
BR1-1
BR1-2
BR1-3
BR1-4
BR1-5
BR1-6
137
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
4,5
0 5 10 15 20 25 30 35
Tempo [dia]
C
a
r
b
o
n
o

d
o

p
e
t
r
l
e
o

[
%
]

Figura 5.35 Desaparecimento acumulativo do carbono do petrleo nos
biorreatores da srie BR1.

138

5.3.2. Srie BR2
Na srie BR2 no houve rplicas em funo da boa repitibilidade obtida na srie BR1. O
ensaio teve a durao de 69 dias. Os valores acumulativos de COT e de CO
2
, que
correspondem percentagem do carbono original presente no leo cru adicionado ao
solo, para cada um dos reatores BR2-3 e BR2-4, so mostrados no grfico da Figura
5.36. Em ambos os reatores foram adicionados 5% de leo cru (m/m).
Observa-se que no reator BR2-3 a vaporizao dos compostos volteis oriundos do leo
foi mais elevada (cerca de 2 vezes) do que no reator BR2-4, que teve a adio do
composto. Uma possvel explicao para este comportamento seria uma maior atividade
microbiana presente no reator BR2-4. Com isto, os compostos orgnicos volteis seriam
degradados mais facilmente nesse reator, o que diminuiria a concentrao de volteis no
gs de sada do reator.

0,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
0 10 20 30 40 50 60 70
Tempo [dia]
C
a
r
b
o
n
o

d
o

o
l
e
o

c
r
u

[
%
]

BR2-4 / TOC [%C do Oleo]

Figura 5.36 - Desaparecimento acumulativo de carbono nos biorreatores BR2-3 e
BR2-4.
A mineralizao do carbono do leo cru a CO
2
foi mais elevada no reator BR2-4 em
139
praticamente todo o perodo de teste. S ao final do experimento houve uma tendncia a
produo acumulada de CO
2
dos dois reatores se igualar.
Os reatores BR2-5 e BR2-6 receberam solo contaminado pelo leo cru de Sergipe 3%
(m/m). No grfico da Figura 5.37, o consumo do carbono original do leo, em termos de
mineralizao (produo de CO
2
), foi estimulado com a adio do composto. O
consumo de carbono no reator com o aporte de composto (BR2-6) foi cerca do dobro do
obtido no reator sem a adio do composto (BR2-5). O pico do teor de CO
2
no reator
BR2-6 ocorreu entre o dia 2 e 3, atingindo 2,9% vol, contra 0,5% no reator BR2-5. Isto
evidenciou o benefcio do emprego do composto como material para melhorar a
estrutura do solo, assim como fonte de nutrientes.

0,0
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0
14,0
16,0
0 10 20 30 40 50 60 70
Tempo [dia]
C
a
r
b
o
n
o

d
o

o
l
e
o

c
r
u
[
%
]


Figura 5.37 - Desaparecimento de carbono nos biorreatores BR2-5 e BR2-6.

Os teores de CO
2
no acumulativos podem ser visualizados no grfico da Figura 5.38. O
reator BR2-6 apresentou a concentrao de CO
2
na sada do reator mais elevada entre
todos os reatores, principalmente nos cinco primeiros dias de ensaio. Isto mostra que o
composto estimulou maior nvel de mineralizao do leo cru, provavelmente em
funo da melhora na estrutura do solo trazida pelo composto.
140
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
0 10 20 30 40 50 60 70
Tempo [dias]
C
O
2

[
V
o
l
.
-
%
]
MT30 CO2 RK1
MT31 CO2 RK2
MT32 CO2 RK3
MT33 CO2 RK4
MT52 CO2 RK5
MT34 CO2 RK6
(BR2-1)
(BR2-2)
(BR2-3)
(BR2-4)
(BR2-5)
(BR2-6)

Figura 5.38 Evoluo dos teores de CO
2
no acumulativos no efluente gasoso dos

A Tabela 5.10 mostra o resultado da quantificao de carbono relacionada biomassa
obtida pelo mtodo no padronizado SRI (item 4.5.2.5). Observa-se, na maioria dos
reatores, a tendncia de crescimento da quantidade de biomassa nos primeiros sete dias
de ensaio, com a posterior diminuio de seu valor. Contudo, o uso deste mtodo se
mostrou limitado em funo da dificuldade de interpretar os resultados obtidos.

Tabela 5.10 Quantidade de carbono relacionada biomassa.
mg C/100g massa seca
de solo
TEMPO [dia]
Biorreator 0 7 21 47 69
BR2-1 20,7 18,2 9,8 11,2 5,6
BR2-2 15,2 19,6 8,4 12,6 11,2
BR2-3 11,2 11,2 11,8 13,4 19,0
BR2-4 3,7 20,7 10,1 17,4 n.a.
BR2-5 5,0 13,4 10,6 11,8 11,8
BR2-6 10,0 21,3 15,7 17,9 16,8
n.a. = no analisado
141
O grfico da Figura 5.39 mostra os dados consolidados da evoluo da percentagem da
biodegradao do carbono presente originalmente no leo adicionados aos solos. O
reator BR2-6 foi o que apresentou a maior porcentagem de biodegradao de carbono
13,3%, aps 67 dias de tratamento. Ele recebeu 10% em volume de composto. J para o
reator sem o aporte de composto a percentagem de degradao de carbono foi de 6,87%.
Com isso, ficou evidenciado o benefcio da adio de composto ao solo na
biodegradao do leo cru.

Total Carbon Balance - Bioreactor Serie 2
0
3
6
9
12
15
0 10 20 30 40 50 60 70
Time [days]
O
i
l

d
e
g
r
a
d
a
t
i
o
n

[
%
C

O
i
l
-
i
n
p
u
t
]

Figura 5.39 - Desaparecimento de carbono dos biorreatores da srie BR2, em
termos de biodegradao.

A realizao do balano de carbono durante o processo de estimulao da biodegradao
do leo cru foi possvel nos primeiros 47 dias de teste. O teor de carbono mineralizado
foi obtido pela anlise de CO
2
na sada da corrente gasosa de cada reator. O carbono
volatilizado foi tirado da anlise de COT, tambm da corrente gasosa de sada do reator.
A quantidade de carbono da biomassa foi obtida pelo ensaio de SRI. E por fim, a
142
quantidade de carbono extrado foi obtida pela anlise de hidrocarbonetos de petrleo
totais extraveis (Tabela 5.11). A diferena encontrada no balano de massa
considerada carbono no medido.

Tabela 5.11 Evoluo com o tempo do HPT extraveis nos biorreatores.
mg HPT/kg massa
seca de solo
TEMPO [dia] Remoo
dos HPT
Biorreator 0 7 21 47 [%]
BR2-1 233 80 500 <10
BR2-2 160 n.a. 20 0
BR2-3 53080 50485 49890 45800 14,4
BR2-4 51795 46030 45070 39503 23,7
BR2-5 32827 24953 23055 21550 34,3
BR2-6 30840 21177 19580 17307 43,9

Os resultados do balano de carbono em relao ao leo cru esto na Tabela 5.12. No
reator BR2-3, a porcentagem de carbono metabolizado a CO
2
foi de 0,49% aps 7 dias
de teste. Este valor subiu para 3,52% no tempo de 47 dias. O nvel de volatilizado
atingiu 0,98% do carbono inicial no tempo igual a 47 dias. Neste tempo, os valores de
carbono da biomassa e do leo residual extrado foram de 0,20 e 86,28%,
respectivamente. A diferena no balano, o chamado carbono no medido, foi
aumentando no transcorrer do teste, tendo variado de 3,54% (T7) para 9,02% (T47).

Tabela 5.12 Balano de carbono em termos do encontrado no leo cru original.

O reator BR2-4 apresentou um nvel de biodegradao um pouco mais elevado que o do
BR2-3. Aps 47 dias de teste a porcentagem de carbono metabolizado a CO
2
chegou
4,59%. O carbono no quantificado tambm aumentou para 18,31%. O nvel de carbono
7dias 21 dias 47 dias 7dias 21 dias 47 dias 7dias 21 dias 47 dias 7dias 21 dias 47 dias
Mineralizado 0,49 1,37 3,52 0,84 2,30 4,59 0,61 2,24 4,75 3,58 7,06 10,98
Extrado 95,11 93,99 86,28 88,87 87,02 76,27 76,02 70,23 70,09 68,67 63,49 56,12
Volatilizado 0,67 0,88 0,98 0,29 0,47 0,56 0,67 0,86 0,97 0,78 0,96 1,02
Biomassa 0,19 0,19 0,20 0,39 0,17 0,27 0,40 0,29 0,30 0,65 0,44 0,46
No Medido 3,54 3,57 9,02 9,61 10,04 18,31 22,30 26,38 23,89 26,32 28,05 31,42
BR2-6 BR2-3 BR2-4
% C inicial
BR2-5
143
volatilizado foi inferior ao emitido no reator BR2-3. Este resultado mostra uma leve
melhoria na mineralizao do leo em funo da adio de 10% de composto.
Nos ensaios onde houve a contaminao com 3% de leo cru (BR2-5 e BR2-6), o nvel
de carbono mineralizado alcanado foi superior ao dos ensaios com adio de leo mais
elevada (5%, m/m). O reator BR2-5, sem o aporte de composto, mostrou um nvel de
biodegradao correspondente 4,75% do carbono inicial. O reator que recebeu o
composto (BR2-6) mostrou um desempenho na biodegradao do leo bem superior ao
obtido no reator sem o material estruturante, conseguindo atingir 10,98%.
Contudo, o material no medido nos reatores BR2-5 e BR2-6 aumentaram em relao
aos ensaios com 5% de leo. No reator BR2-6 a porcentagem de carbono no medido
foi de 31,42%. Com o aumento da percentagem de carbono mineralizado a CO
2
houve
tambm um aumento do material no medido.
Esta diferena de balano observada, chamada de carbono no medido, pode ser
explicada pela formao de resduos de ligao. O processo geral de formao de
resduos de ligao freqentemente considerado como uma transformao de
poluentes antropognicos em hmus, j que o carbono xenobitico fica associado com a
matria orgnica natural presente no solo. Assim, o carbono xenobitico seqestrado
pelas matrizes orgnicas macromoleculares, de difcil acesso com procedimentos
analticos convencionais. Com a ligao, o composto xenobitico perde a sua identidade
estrutural, o que inclui suas caractersticas fsicas, qumicas e biolgicas (KSTNER e
RICHNOW, 2001). O esquema da Figura 5.40 mostra o fluxo de carbono durante a
degradao microbiana de compostos orgnicos em solo.
144

Figura 5.40 Fluxo de balano de carbono na biodegradao de substncias
orgnicas (KRTER e RICHNOW, 2001)

A formao de resduos de ligao de hidrocarbonetos foi evidenciada em testes onde se
empregou hexadecano
14
C (KSTNER et al., 1995). Lotte e colaboradores (2001)
realizaram um estudo com solo contaminado por leo diesel (1% em relao ao solo, em
base seca), tendo sido observada uma diferena no balano de 35% aps 53 dias de
teste. Esta diferena foi explicada pela formao de resduos de ligao sorvidos
matriz do solo. Este estudo foi realizado em sistema de balano de carbono similar ao
usado na presente tese.
Assim, pode-se considerar que o carbono no medido nos experimentos em coluna foi
aquele que no pode ser extrado pelo mtodo utilizado para a quantificao dos HPT.
Pode-se, ento, concluir que este carbono ficou sorvido na matriz do solo. Ele estaria
ligado matria orgnica, aos minerais de argila ou ao complexo argila-hmus.
A Figura 5.41 ilustra a variao dos diversos compartimentos de balano de carbono
para o reator BR2-3. A porcentagem de carbono sorvido no solo aumentou com o
aumento da mineralizao do leo cru. Este comportamento foi tambm seguido no
reator BR2-4 (Figura 5.42). Mas foi no reator BR2-6 onde essa tendncia ficou mais
evidente (Figura 5.43). medida que o processo de mineralizao do carbono do leo
145
foi tendo curso a quantidade de carbono sorvido foi aumentando. Com o tempo,
esperado que a quantidade de carbono sorvido se estabilize. O processo de
mineralizao do leo residual e de seus metablitos tender a decrescer
consideravelmente com a diminuio de sua biodisponibilidade. Esta variao do
carbono mineralizado e sorvido com o tempo foi observada por diversos autores
(KONING et al., 1998, LOTTE et al., 2001, KSTNER et al., 2001).
Acredita-se que a estabilidade dos resduos de ligao em relao ao acesso qumico,
mecnico e microbiolgico aumenta com o grau de humificao. Porm, necessrio
desenvolver mais pesquisas para conhecer melhor as conseqncias ecolgicas dos
resduos de ligao. Principalmente em ambientes tropicais, onde se est sujeito a
condies de temperatura e chuvas mais severas.
A avaliao da eficincia de um processo de biorremediao de solo contaminado por
leo, com o uso de anlise de HPT extraveis, pode levar a um erro de interpretao,
pois neste caso no se leva em conta o quanto do leo ficou sorvido na matria orgnica
do solo. Isto exemplificado com o reator BR2-6, no qual o valor encontrado de
desaparecimento de HPT foi de 43, 9% (Tabela 5.11), que pode ser confundido como a
percentagem de leo biodegradado. Contudo, pelo balano de carbono, a mineralizao
correspondeu a 10,98% do carbono presente no petrleo (Tabela 5.12).

146
BR2-3
0%
20%
40%
60%
80%
100%
7dias 21 dias 47 dias
tempo [dia]
Mineralizado Extrado Volatilizado Biomassa Sorvido

Figura 5.41 Balano de carbono com o tempo do reator BR2-3.

147
BR2-4
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
7dias 21 dias 47 dias
tempo [dia]

Figura 5.42 - Balano de carbono com o tempo do reator BR2-4.

148

Figura 5.43 - Balano de carbono com o tempo do reator BR2-6.

BR2-6
0%
20%
40%
60%
80%
100%
7 21 47
tempo [dia]
149

CAPTULO 6
CONCLUSES

150
RESPIROMETRIA

A concentrao inicial de leo cru teve influncia na taxa de consumo de oxignio.
Quanto maior a concentrao inicial de leo menor foi a taxa de consumo de
oxignio. Com o aumento da concentrao de leo h um aumento das demandas de
nutrientes e aceptores de eltrons, nem sempre supridas facilmente nas condies
dos experimentos. Alm disso, as concentraes dos compostos txicos presentes
no leo aumentam com a quantidade de leo, causando a elevao do efeito txico
destes compostos nas bactrias biodegradadoras de leo.
Verificou-se que o aporte de nutrientes (PK) incrementou taxa de consumo de
oxignio relacionada biodegradao do leo cru. Para solos com teores de
potssio e fsforo assimilveis altos, a adio de nutrientes se mostrou incua. Este
foi o caso do solo usado nos ensaios de respirometria na TUHH (Solo C).
O incremento na temperatura de 22C para 30C elevou a taxa de consumo de
oxignio nos ensaios com o solo A. O incremento da demanda de oxignio chegou
a duplicar nos ensaios com 3% de leo. Este efeito foi mais intenso nos sistemas
com teores de leo menores. Este aumento foi menos acentuado nos testes com
10% de contaminante. Provavelmente, neste caso o fator limitante para a
biodegradao do leo tenha sido a transferncia de massa do contaminante, e no
os aspetos microbiolgicos controlados pela temperatura.
Dentre os materiais estruturantes empregados nos testes com o solo A, a serragem
foi aquele que mais incentivou a biodegradao do leo. No caso dos testes como o
solo B, o melhor estruturante foi o composto.
Teores mais elevados de material estruturante no se mostraram benficos na
biodegradao do leo, produzindo, em alguns casos, efeitos deletrios.
Em todos os ensaios com o solo B, observou-se uma diminuio da taxa de
consumo de oxignio com o tempo. Isto evidencia o decrscimo da taxa
biodegradao do leo cru no transcorrer do teste em funo do desaparecimento,
em primeiro lugar, dos compostos mais facilmente biodegradveis. Com o tempo os
compostos remanescentes se mostraram mais recalcitrantes biodegradao em
funo de sua menor biodisponibilidade.
151
BIOPILHAS

O aporte da casca de arroz no trouxe beneficio na remoo de HPT, quando
comparado com o resultado obtido na pilha sem material estruturante, no caso do
solo A. A anlise dos resultados para o solo B mostra que o aporte do arroz foi
positivo para o desaparecimento dos hidrocarbonetos, elevando a percentagem de
remoo de HPT de 48,98 % para 54,53 %;
A freqncia de revolvimento do solo no teve influncia significativa na eficincia
de remoo dos HPT, nas condies e na escala testadas;
O decrscimo no teor de HPT extraveis foi mais acentuado nas oito primeiras
semanas do teste. Da oitava dcima sexta semana, houve diminuio na taxa de
desaparecimento de HPT em todas as pilhas. Uma possvel explicao para este
comportamento seria o decrscimo acentuado da quantidade dos compostos mais
facilmente biodegradveis nas oito primeiras semanas de tratamento. Nas semanas
subseqentes, a biodisponibilizao dos compostos orgnicos presentes no leo
residual foi bastante diminuda, o que se refletiu em menores taxas de remoo dos
poluentes no solo;
Os resultados de contagem microbiana indicaram nveis elevados de degradadores
de leo (>10
4
NMP/g de solo seco) ao longo dos experimentos durante grande parte
dos experimentos;
Os testes de ecotoxicidade com vegetais mostraram ser uma ferramenta importante
no controle da eficincia de processos de remediao de solos. Eles forneceram uma
predio mais segura dos efeitos prejudiciais dos contaminantes aos organismos do
solo;
Nos solos em que houve proliferao de fungos, os testes ecotoxicolgicos
indicaram um efeito txico causado provavelmente pelas toxinas produzidas por
esses microrganismos;
Brassica napus (nabo) foi a espcie que se mostrou mais sensvel presena do
leo residual;
No foi possvel estabelecer correlao entre os diversos vegetais usados nos
152
ensaios de ecotoxicidade, contudo esses testes mostraram ser uma ferramenta
importante para a avaliao do processo de biorremediao de solos.

REATORES

O composto foi o material estruturante que mais beneficio trouxe biodegradao
do leo cru. A casca de arroz, por sua vez, no propiciou aumento na eficincia de
desaparecimento do petrleo;
A contribuio da volatilizao no desaparecimento do petrleo durante o teste foi
muito baixa, correspondendo a menos de 1% do carbono contido no petrleo;
No balano de carbono, foi observada uma diferena, chamada de carbono no
medido, que pode explicada pela formao de resduos de ligao. Estes estariam
sorvidos na matriz do solo, ligados matria orgnica;
A porcentagem de carbono sorvido no solo aumentou com o aumento da
mineralizao do leo cru. No caso do ensaio em que houve maior nvel de
mineralizao (BR2-6), a porcentagem de carbono sorvido chegou a 31,42 %, aps
47 dias de ensaio. Com o tempo, esperado que a quantidade de carbono sorvido se
estabilize.

GERAL

A aplicao da biopilha no tratamento de solos argilosos contaminados com
petrleo vivel, podendo eliminar os risco do leo residual ao meio ambiente a
curto e mdio prazo, por meio de sua mineralizao e humificao;
O sistema de balano de carbono usado neste trabalho mostrou-se muito til para
avaliar os processos sofridos pelos contaminantes orgnicos em solo.
153

CAPTULO 7
SUGESTES

154
necessrio desenvolver mais pesquisas para conhecer melhor as conseqncias
ecolgicas dos resduos de ligao. importante verificar a sua estabilidade
qumica, mecnica e microbiolgica, principalmente em ambientes tropicais,
onde se est sujeito a condies de temperatura e chuvas mais severas;
necessrio aplicar e desenvolver ensaios de ecotoxicidade em solo, com o uso
de uma maior gama de organismos (minhocas, colembola etc.), principalmente
organismos nativos, para uma melhor compreenso dos efeitos biolgicos da
presena de substncias orgnicas no solo e aprimorar a consistncia dos
resultados e de sua interpretao.

155

CAPTULO 8
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

156
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ALEXANDER, M., 1977, Introduction to Soil Microbiology. 2 ed. New York, John
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Waste Management in Exploration and Production Operations. Publication API
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166

ANEXOS

167

ANEXO A (Caracterizao do Petrleo)

168

169

Aplicação de Biopilha Na Biorremediação de Solos Argilosos Contaminados Com Petróleo

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APLICAO DE BIOPILHA NA BIORREMEDIAO DE SOLOS ARGILOSOS

CONTAMINADOS COM PETRLEO

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