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Ejemplo de diagrama de flujo de proceso de EXTRACCION-FRACCIONAMIENTO Y PURIFICACION

de metabolitos secundarios:
2200g de polvo de las partes areas de Genista ternera, se extrajeron exhaustivamente en
aparato de Soxhlet con etanol. Luego, este extracto fue fue llevado a sequedad el vaco, y el
residuo fue disuelto con agua caliente, filtrado y extraido con ter dietlico. El extracto etreo
(9,2g) se fraccion por cromatografa en columna(CC) sobre Kieselgel 60 PF y eluido con los
solventes adecuados, y la purificacin de las fracciones eluidas se llevaron a cabo por
cromatografa en capa fina preparativa en Kieselgel 60 F
254
Merck, rindiendo la flavona apigenina
(7mg)(1), y chrysoeriol(6mg)(2), y las isoflavonas genisteina(5,8mg)(3), 3- O- metilorobol(5mg)(4),
y 5 O metilgenisteina(10mg)(5). La solucin acuosa fue extraida con acetato de etilo(EtOAc), y
el extracto (15,5g) fue sometido a CC en Kieselgel 60 PF y eluido con EtOAc/MeOH (8:2). La
purificacin de una fraccion eluida se llev a cabo por cromatografa en capa fina preparativa en
Kieselgel 60 F
254
Merck, rindiendo 5-O-metilgenisteina 7-O--D-glucopiranosido(6mg) (6).



AHORA PRACTIQUE LA CONSTRUCCION DE DIAGRAMAS DE FLUJO CON LOS
SIGUIENTES METODOS OPERATORIOS:
A) FLAVONOIDES DE Piper hispidum
Las inflorescencias de Piper hispidum Kunth secas y troceadas (160 g) se sometieron a extraccin por
maceracin con etanol del 96%. El extracto etanlico resultante se concentr a presin reducida, obteniendo
16,1 g de extracto crudo. Se sometieron 14,9 g de extracto a fraccionamiento por CC (slica gel, solventes de
polaridad creciente EdP, CH2Cl2, CHCl3, iPrOH y MeOH), obteniendo 135 fracciones que fueron agrupadas
en 38 fracciones finales de acuerdo con su perfil en cromatografa en capa delgada. Las fracciones 9-11 (583
mg) se sometieron a purificacin por CC (slica gel; C6H5CH3-AcOiPr 9:1), obteniendo cuatro fracciones. La
fraccin 3 se someti a lavados sucesivos con MeOH y cristalizacin en C6H5CH3 para obtener el compuesto
(350,6 mg) en forma de lminas blancas con punto de fusin 92-93 C. Las fracciones 13 y 14 de la columna
fraccionamiento se sometieron a CC (slica gel; C6H5CH3-AcOiPr 8:2), obteniendo cuatro fracciones finales.
Las fracciones 2-3 se reunieron y recristalizaron con MeOH, obteniendo cristales blancos en forma de agujas
y p.f. 112-113 C, compuesto (509,2 mg). A las fracciones 18-25 (1129,2 mg) se les realiz CC (slica
gel; n-hexano-acetona 7:3), obteniendo doce fracciones. La fraccin 7 de esta columna se someti
nuevamente a CC con slica gel y hexano/acetona 6:4; la fraccin 7-3 fue recristalizada con metanol
obteniendo el compuesto (722,6 mg) como un slido amarillo en forma de agujas con p.f. 156-158 C.

B) ALCALOIDES DE Portulaca oleracea
Las plantas secas (9 kg) de P. oleracea se calentaron a reflujo en tres ocasiones (1 h cada vez)
con EtOH-H2O (7:3, 45 L, 36 L y 36 L). El extracto combinado se condens al vaco para dar una
concentracin de 0,5 g / ml. El extracto concentrado (15 L) se aplic a AB-8 de resina y se eluy
secuencialmente con H2O (27 L), H2O-EtOH (7:3) (18 L), H2O-EtOH (4:6) (18 L) y EtOH-H2O
(95:5) (12 L). Las fracciones combinadas (200 g) obtenidos con H2O-EtOH (7:03 y 04:06) se
sometieron a gel de slice (1,2 kg) de CC y se eluy secuencialmente con CHCl3-MeOH (9:1, 8:02,
7:03 , 6:04, 5:05) y MeOH (500 ml cada fraccin), para obtener eluatos 1-76. El eluato L-4 (CHCl3-
MeOH (9:1), 6,2 g) se refractionated sobre gel de slice (360 g), eluyendo secuencialmente con ter
de petrleo (60-90 _C)-EtOAc (95:5, 09:01, 08:02, 07:03, 06:04, 05:05), EtOAc y EtOAc-95% de
EtOH (09:01, 04:01, 2: l) (cada fraccin 100 ml). El P. resultante. 67-78 (ter de petrleo-EtOAc
(05:05), 0,46 g) se aplic a una poliamida (20 g), eluyendo con H2O-EtOH (7:3) (cada fraccin de
20 ml) para dar los compuestos 6 (8 mg) y 7 (8 mg). El P. resultante. L00-122 (EtOAc-95% de
EtOH (4:1), 1,52 g) se someti a la poliamida (20 g) CC y se eluy con EtOH-H2O (1:09)
(Cada fraccin de 20 ml) para dar el compuesto 5 (60 mg). El eluato 31-38 (CHCl3-MeOH (7:3), 7,2
g) se aplic a Sephadex LH-20 (150 g) CC y se eluy con MeOH (20 ml cada uno). El eluato
resultante 25-34 (0,93 g) se someti a Sephadex LH-20 (150 g) CC de nuevo y se eluy con MeOH
(20 ml cada fraccin). El P. resultante. 7-15 (0,14 g) se fraccion por ODS (L00 g) CC y se eluy
con MeOH-H2O (1:1) (cada fraccin de 20 ml) para dar 1 (6 mg) y 2 (3 mg). La recristalizacin del
p. 17-18 se obtuvo el compuesto 8 (6 mg). El eluato 65-68 (CHCl3-MeOH (05:05), 4,18 g) se aplic
a una columna de Sephadex LH-20 (150 g) y se eluy con MeOH-H2O (4:1) (20 ml de cada
fraccin). El P. resultante. 7-16 (1,02 g) se fraccion adicionalmente por ODS (L00 g) CC y se
eluy con EtOH-H2O (1:09 y 1:04) (cada fraccin de 20 ml). La resultante Fr. A continuacin 41-49
se purific utilizando Sephadex LH-20 (100 g) y se eluy con MeOH-H2O (6:4) (cada uno 20 ml)
para dar el compuesto 3 (27 mg). Fr. 50-56
se purific por este mismo mtodo y dio el compuesto 4 (9 mg).












C) SAPONINAS TRITERPENOIDES DE Pteleopsis suberosa
La corteza en polvo seca de P. suberosa (405,0 g), desgrasada con n-hexano, se extrajo
sucesivamente durante 48 h con CHCl3, CHCl3-MeOH (9:1), y MeOH, por maceracin exhaustiva
(3 2 l), para dar 3,2, 5,0, y 70,4 g de los respectivos residuos secos. Una porcin del extracto de
metanol (50,0 g) se reparti entre n-BuOH y H2O, con el fin de obtener una porcin soluble en n-
butanol (12,5 g) que
se someti a una columna de Sephadex LH-20 utilizando MeOH como eluyente y recogindose
fracciones de 8 ml cada una. Tres fracciones principales (A-C) se obtuvieron resultados de TLC en
slice 60 F254 de lminas de vidrio recubiertas de gel con n-BuOH-AcOH-H2O 60:15:25 y CHCl3-
MeOH-H2O 40:9:1. Fraccin B (940,0 mg) se purific por cromatografa ultrarrpida en columna
RP-18 (B = 40 mm, caudal 20 ml min_1) eluyendo con MeOH-H2O (3:7) seguido de
concentraciones crecientes de MeOH en H2O. Las siguientes mezclas de disolventes se utilizan
para dar el compuesto 6 (113,8 mg) y cinco grupos principales (1-5): MeOH-H2O (3:7), MeOH-H2O
(2:3), MeOH-H2O (1:01), MeOH-H2O (3:2), MeOH-H2O (7:3), y finalmente MeOH-H2O (4:1). El
grupo 1 (20,9 mg) se cromatografi sucesivamente sobre RP-HPLC en una columna C18 L
Bondapak (30 cm 7,8 mm, la tasa de min_1 2,0 ml de flujo) con
MeOH-H2O (3:7) para producir compuestos 4 (1,2 mg), 1 (1,8 mg), y 2 (1,0 mg). Grupo 3 (139,0
mg) se purific adicionalmente por RP-HPLC en una columna L-Bondapak C18 (30 cm 7,8 mm, la
tasa de min_1 2,0 ml de flujo) con MeOH-H2O (1:1) para proporcionar los compuestos 5 (26,1 mg)
y 3 (2,5 mg). El aislamiento de los compuestos 7 (10,7 mg) y 8 (22,7 mg) se produjeron
presentacin de grupo 4 a RP-HPLC en una columna C18 L-Bondapak (30 cm 7,8 mm, la tasa de
min_1 2,0 ml de flujo) con MeOH-H2O (3:02 ). El residuo CHCl3-MeOH (5,0 g) se cromatografi
sobre Sephadex LH-20 utilizando MeOH como eluyente; fracciones de 8 ml se recogieron y se
agrupan en cuatro fracciones principales (A-D), utilizando el mismo anlisis de TLC de extracto de
n-BuOH. Fraccin B (2,2 g) se someti a cromatografa en columna ultrarrpida en gel de Si (B =
2,5 cm, caudal 20 ml min_1) eluyendo con mezclas de CHCl3-MeOH. La cromatografa se llev a
cabo en polaridad creciente a partir de CHCl3 seguido de CHCl3-MeOH (9:1), CHCl3-MeOH
(8,5:1,5), CHCl3-MeOH (4:1), CHCl3-MeOH (7:3), CHCl3 -MeOH (1:1), y terminando con MeOH
para dar los compuestos 13 (11,1 mg), 8 (22,6 mg), y 7 (10,2 mg). Todos los otros tubos recogidos
se combinaron para obtener siete grupos principales (1-7). Grupo 1 (100,0 mg) se someti a RP-
HPLC en una columna C18 L-Bondapak (30 cm 7,8 mm, velocidad de 2,0 ml / min de caudal) con
MeOH-H2O (6,5:3,5) para dar los compuestos 11 (1,6 mg) y 12 (2,2 mg). Grupo 3 (188,0 mg) se
purific adicionalmente por RP-HPLC utilizando columna C18 L-Bondapak (30 cm 7,8 mm,
velocidad de flujo min_1 2,0 ml) con MeOH-H2O (5.5:4.5) obtenindose el compuesto 9 (2,1 mg),
mientras grupo 5 (121,3 mg) se separ en la misma columna de elucin
con MeOH-H2O (1:1) para dar el compuesto 10 (12,6 mg).