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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS



ESCUELA DE MEDICINA

CTEDRA DE PARASITOLOGA
DR.: LUIS VALDIVIESO

MTODOS DIRECTOS E INDIRECTOS




INTEGRANTES
LPEZ SALAZAR IVONNE
MELENDREZ VINICIO
PEREZ KAREN
JAQUELINE PILCO
MARIA JOSE PINANGO
CURSO: TERCEROP62014

MTODOS DIRECTOS E INDIRECTOS
Solicitud de exmenes (situacin clnica) depender:
- Tipo de poblacin servida
- Personal tcnico disponible
- Metodologa disponible
- Costos
- Relevancia clnica de los resultados
Base indispensable de conocimiento para solicitud de exmenes:
- Ciclo de vida de los parsitos locales
- Habitat en el hospedero, usual y ectpica
- Manifestaciones clnicas ms especficas o probables
- Maneras de transmisin
Ejemplos de muestra a enviar al laboratorio para demostrar parsitos en
general:
Heces - Sangre
Orina - Secreciones
Esputo - Excreciones
Pus - Otros lquidos
LCR - Parsito in toto























Tomado de la
Web:http://whqlibdoc.who.int/publications/9243544101_(part1).pdf

MTODOS DIRECTO
Diseados para observar o detectar el parsito o alguno de sus elementos
identificables
Examen Macroscpico o Caracteres Organolpticos:
Cantidad: Diaria entre 100-200 gr/da, la sptima parte del total de alimentos
ingeridos. olor: Normalmente pardo oscuro o claro, dependiendo principalmente de la
estercobilina, en los nios amarrillo claro debido a su rgimen lcteo. Entre las
enfermedades que alteran el color se encuentran las heces (acolicas) o de color arcilla
en Hepatitis y TBC intestinal y las heces hemorrgicas de un aspecto negruzco y
viscosos (Melenas).Olor: Es producido por la presencia de sustancias aromticas
(Indol, Escatol) derivadas de la desaminacin y descarboxilacin del triptofano.
Consistencia: Normalmente las heces son blandas, contienen entre un 60% a un 85%
de agua; patolgicamente son lquidas o duras, dependiendo de alguna enfermedad o
de la dieta. pH: Normalmente es neutro (6.9-7.2), depende del rgimen alimenticio.
cido en dieta rica en carbohidratos, alcalino en dieta rica en protenas.Moco: Se
encuentra generalmente en pequeas cantidades. Por lo general indica inflamacin o
irritacin del intestino.








Examen Microscpico:
Es el denominado examen directo y consiste en observar al microscopio la materia
fecal con solucin salina para observar trofozoitos (formas mviles) y con lugol para
colorear estructura sin ternas (ncleos).En el examen directo se puede observar lo
siguiente :Leucocitos: Se encuentran asociados a moco en enfermedades intestinales.
Cuando son ms de 20 por campo y predominan los PMNN indican diarrea invasiva.
La coloracin con azul de metileno ayuda en la diferenciacin de polimorfos nucleares
y mononucleares. Eritrocitos: Se observan cuando hay hemorragias del colon,
hemorroides y fisuras sangrantes, tambin estn presentes en diarreas invasivas
.Restos alimenticios de origen vegetal: Los almidones son frecuentes, son fciles de
identificar en las preparaciones con lugol debido a que toman un color azul cuando
estn sin digerir y rojos o morados cuando estn parcialmente digeridos. Las clulas y
fibras vegetales forman retculos en forma de panal o espirales y aunque muchas
veces no tienen importancia pueden aparecer en sndromes de malabsorcin o
asociarse a diarreas. Restos alimenticios de origen animal: Son principalmente grasas
y fibras musculares, las fibras musculares son rectangulares con estras transversales
y las gotas de grasa tiene diferente tamao y pueden ser transparente o amarrillas.
Microbita bacteriana: Siempre esta presente de manera normal.





METODO DIRECTO EN FROTE DE HECES
PRINCIPIO:
Este mtodo es una simplificacin del mtodo estndar de Beaver en 2 mg de heces
en el que se utiliza una clula foto-elctrica adaptada y calibrada que mide con
precisin 2 mg de heces en una preparacin en solucin salina. La simplificacin
deriva del Conocimiento que las preparaciones directas que se utilizan en la rutina
para el examen de heces contienen entre 1.5 mg y 2.5 mg especialmente las
preparadas por tcnicos con experiencia.
MUESTRA REQUERIDA:
Heces frescas, recolectadas en frasco (vidrio, plstico o cartn) limpio, de boca ancha,
sin contaminacin de agua, orina, tierra etc.
PREPARACIN DE REACTIVOS:
Solucin salina fisiolgica
Cloruro de sodio 0.85 g.
Agua destilada 100 mL
Mezclar hasta disolucin completa de los cristales. Guardar en frasco rotulado. Para
uso diario mantener en frasco gotero rotulado.
MATERIALES:
Porta-objetos de 3 X 1 pulgada (7,5 x 2.5 cm) 3 X 2 pulgadas {7.5 x 5cm)
Cubre-objetos de 22 X 22 mm, #1 #2
Aplicadores de madera
Solucin salina fisiolgica (0.85%)
Marcador
Contador manual
Frasco con solucin desinfectante para descartar material
PROCEDIMIENTO:
Identificar el porta-objetos con la muestra de heces a examinar
Colocar 1 - 2 gotas de solucin salina en cada extremo del porta-objetos
Con un aplicador, tomar una porcin de heces y emulsificaren cada una de las gotas
de solucin salina
Cubrir cada preparacin con un cubre-objetos
Contar en forma individual los huevos segn la especie: de Ascarislumbricoides
,Trichuristrichuria y/o Uncinariasspp presentes en cada preparacin.
Informar por especie de parsito: No. de huevos/frote de heces o bien No. de huevos/
2 mg de heces
Descartar material usado en el frasco con desinfectante.
Causas de error:
Preparacin muy gruesa o muy fina
Observacin no sistemtica de la preparacin
Falta de prctica en ejecutar conteos
Huevos no distribuidos al azar en la preparacin, o aglomerados por la presencia de
mucho moco
Heces lquidas
REFERENCIAS:
Beaver, PC.The standarization of fecal smears for estimating egg production and
worm burden.
Journal of Parasitology 1950, 36:451-456.







TCNICAS DE CONCENTRACIN
La concentracin de huevos, larvas y quistes en heces ha llegado a ser un
procedimiento de rutina como parte de un examen completo para la deteccin de los
parsitos intestinales y se puede realizar como complemento del examen directo.
Los procedimientos de concentracin permiten la deteccin de protozoos y/o
helmintos emplendose dos mtodos: de sedimentacin y flotacin, o una
combinacin de ambos, para separar los protozoos y los huevos de helmintos de las
heces, utilizando las diferencias en el peso especfico.
Se deben emplear cuando la cantidad de muestra fuera pequea, en un control de
tratamiento o cuando se deba transportar poca cantidad de muestra a un lugar
distante.

Concentracin por Sedimentacin
Los parsitos se concentran por accin de la gravedad, suspendiendo las heces en
agua corriente, agua destilada o solucin salina y dejando que sedimenten
naturalmente o por centrifugacin. Estos mtodos son principalmente tiles para la
concentracin de quistes, ooquistes y huevos.
Ventajas: es fcil de realizar, no requiere observacin microscpica inmediata y se
puede aplicar a la concentracin de la mayora de los parsitos intestinales.
Desventajas: la observacin microscpica puede dificultarse por concentracin de
elementos no parasitarios.

Sedimentacin espontnea:
Mtodo de sedimentacin sencilla
1- Homogeneizar unos 10 gramos de heces en 10 veces su volumen de agua corriente.
2- Verter la materia fecal en copas de vidrio o vasos de precipitado de 250 a 500 ml
3- Dejar que sedimente durante 1 hora.
4- Eliminar por sifn los dos tercios superiores, o verterlos con cuidado, para eliminar
los detritus.
5- Agregar agua hasta llenar casi el recipiente y resuspender las heces con varilla.
6- Repetir la operacin 1 o 2 veces ms hasta que el sobrenadante quede
relativamente lmpido.
7- Eliminar el lquido y con una pipeta obtener una pequea porcin del sedimento
para
8- Observacin microscpica.
Es un mtodo lento y de poca concentracin para los protozoos intestinales. Los
huevos de helmintos sedimentan en el fondo del recipiente en un estado viable y sin
deformacin.

Mtodo de Lumbreras modificado
Se utiliza para la bsqueda de huevos de Fasciola heptica en heces o bilis. No se
puede utilizar un mtodo de centrifugacin porque los huevos se rompen ni de
flotacin porque son muy pesados.
1- Colocar 2 ml de la muestra (heces o bilis) en una copa de Lumbreras o tubo de
centrfuga.
2- Agregar 5 ml de solucin detergente al 10% para emulsionar las grasas.
3- Agregar 0,5 ml de alumbre frrico al 1% para favorecer el gradiente de densidad.
4- Homogeneizar suavemente.
5- Dejar en reposo 30 minutos.
6- Sacar con pipeta pasteur una gota del fondo de la copa.
7- Observar con microscopio.

Sedimentacin por centrifugacin:
Mtodo de Charles Barthelemy modificado por Bacigalupo y Rivero
1-Mezclar 10 gramos de heces con 50 ml de solucin fisiolgica, o agua de la canilla.
2-Tamizar a travs de un colador metlico.
3-Filtrar sobre gasa en un embudo.
4-Recoger 10 ml del filtrado en un tubo de centrfuga.
5-Centrifugar 5 minutos a 1500 rpm. Descartar el sobrenadante.
6-Repetir esta operacin 3 veces o hasta que el sobrenadante quede lmpido.
7-Resuspender el sedimento con solucin fisiolgica o agua de la canilla ms 2 ml de
ter sulfrico. Tapar con tapn de goma y agitar vigorosamente para extraer las
grasas.
8-Centrifugar 1 minuto a 1500 rpm. Descartar el tapn graso de un golpe seco,
conservando el sedimento.
9-Examinar con microscopio el sedimento.

Mtodo de formol- ter o de Ritchie
1- Filtrar 10 ml de suspensin de heces por un embudo con una capa de gasa.
2- Recoger 10 ml del filtrado sobre un tubo de centrfuga.
3- Centrifugar 5 minutos a 2000 -2500 rpm. Descartar el sobrenadante.
4- Repetir esta operacin 3 veces o hasta que el sobrenadante quede lmpido.
5- Resuspender el sedimento con formol 10%. Dejar 5 a 10 minutos en reposo.
6- Agregar 3 ml de ter sulfrico. Tapar con tapn de goma y agitar vigorosamente 30
segundos para extraer las grasas.
7- Centrifugar 1 minuto a 1500 rpm. Se forman cuatro capas: 1) capa de ter, 2) tapn
de restos fecales, 3) capa de formol, 4) sedimento. Descartar las 3 capas primeras,
conservando el sedimento.
8- Examinar con microscopio el sedimento.

TCNICAS DE FLOTACIN
El mtodo de flotacin emplea un medio lquido ms pesado que los parsitos
permitiendo que los mismos suban a la superficie y puedan ser recuperados de la
pelcula superficial.
Ventajas: el preparado es ms lmpido, facilitando la observacin microscpica.
Desventajas: debe hacerse la observacin microscpica en menor tiempo debido a que
la pelcula superficial puede destruirse y los parsitos caer al fondo del tubo, a su vez,
los parsitos de mayor peso que la solucin empleada no flotarn.
Existen varios mtodos de flotacin, el ms utilizado es el mtodo de Faust

Flotacin de Faust
OBJETIVO
Buscar en las muestras biolgicas la presencia de los distintos parsitos para tener un
conocimiento ms amplio sobre ellos.
FUNDAMENTO:
Se conoce como tcnica de Faust, ya que fue l quien la diseo en 1938. Es una de las
ms populares, se utiliza prcticamente en todos los laboratorios del sector salud y
privados.
VentajayDesventajas
Esta tcnica es mejor para quiste y protozoos que para huevos y larvas de helmintos.
El xito depende de la exactitud en la densidad del sulfato de Zinc. El contacto
prolongado con el sulfato de zinc, puede deformar los quiste y dificultar su
identificacin, por lo tanto estas preparaciones debe ser examinan lo antes posible
MATERIAL
Porta objetos.
Cubreobjetos.
Gasas.
Tubos de ensayo.
Embudo
Solucin acuosa de sulfato de Zn.
Vaso de precipitado
Abate lenguas
Muestras biolgicas
Heces
PROCEDIMIENTO:
1) Mezclar bien una porcin de materia fecal para preparar una superficie en 10
partes de agua destilada.

2) Filtrar la suspensin a travs de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de
centrifuga, ayudndose con un embudo pequeo.

3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1min.


4) Decantar el lquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida
anterior, centrifugar nuevamente. Re suspender el sedimento.

5) Repetir el procedimiento hasta 2 veces hasta que el lquido sobrenadante est listo.

6) Decantar nuevamente el lquido sobrenadante remplazndolo por igual cantidad de
solucin de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solucin bien la solucin con el
sedimento. Centrifugar durante 1 minutos por 1500 rpm.









7) Tomar de 3-4 gotas de las partculas que flotan en la superficie del lquido.
Colocarlos en un porta-objeto y mezclar con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre-objeto



8) Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

Mtodo indicado para el diagnstico de huevos livianos de helmintos (Necator
americano, Tricocefalos, scaris lumbricoides).
CONCLUSIONES
La finalidad de la prctica es la bsqueda de parsitos hasta el momento no hemos
encontrado. Con la prctica continua llegaremos a encontrarlos. En las practicas
anteriores y en esta ltima solo hemos hallado grasa, fibra .y restos vegetales e
incluso cremos encontrar una amiba pero no era as solo se trataba de una fibra.
MTODO DE KATO KATS (VARIACIN KATZ), en 41.7 mg de heces
PRINCIPIO:
Aclarar con glicerina un frote grueso de heces no diluidas. El mtodo, originalmente
introducido por japoneses para hacer encuestas epidemiolgicas de Schistosomiasis,
ha sido mejorado y modificado varias veces.
La variacin KATZ entrega una cantidad conocida de heces, que depende del tamao
del templete utilizado, con la condicin quesean heces formadas. El tamao del
templete varia; para asegurar resultados comparables, el templete debe
estandarizarse en el pas a una sola medida. El que se describe aqu entrega 41.7 mg
de heces. Huevos de Taeniaspp o de Hymenolepisnana se informan sin contar. La
Organizacin Mundial de la Salud considera este mtodo como el de eleccin y el ms
adecuado en encuestas, monitoreo y evaluacin de programas de control de
nemtodos transmitidos por el suelo.
VENTAJAS:
Las heces no se diluyen, se utiliza materiales baratos y accesibles, puede transportarse
una vez preparado en el campo, puede guardarse varios meses para verificar
resultados, puede estandarizarse para encuestas en diferentes regiones geogrficas
por diferentes investigadores.
DESVENTAJAS:
Tiene varias limitantes: slo puede utilizar heces frescas; no es adecuada para heces
diarreicas, lquidas o mucoides; no se aplica para la deteccin de protozoos ni larvas
de nemtodos; huevos frgiles como los de Uncinariaspp y a menudo de Hymenolepis
Nana se vuelven irreconocibles en pocas horas; no es indicado para heces que
contengan mucha fibra o grasa.
PREPARACIN DE SOLUCIN DE GLICERINA Y AGUA:
Glicerina pura 100 mL
Agua destilada 100 mL
Verde de malaquita al 3% 1 mL
(Solucin acuosa)
Mezclar bien en frasco de boca ancha con tapadera e introducir los cuadrados de
celofn para sumergir en esta solucin 24 horas o ms antes de usar. (El verde de
malaquita no es indispensable en caso que no se cuente con l).
Un templete de 9 mm X 1 mm entrega 50 mg de heces. El factor de multiplicacin
para determinar huevos por gramo ser de 20.
Un templete de 6 mm de dimetro X 1.5 mm de grosor entrega 41.7 mg de heces. El
factor de multiplicacin ser de 24.
Martin LK, Beaver PC. Evaluation of Kato thick-smear technique for quantitative
diagnosis of helminthinfections.American Journal of Tropical Medicine and Hygiene
1978, 17: 382-391



























RECOBRAR Y CONTAR PARSITOS ADULTOS EXPULSADOS
DESPUS DE TRATAMIENTO
PRINCIPIO:
Recobrar los gusanos adultos, hembras y machos presentes en una infeccin intestinal
para determinar la intensidad de la infeccin, o para comprobar la efectividad de un
antihelmntico. Se requiere la colaboracin fiel del (los) participante(s) durante todo
el tiempo que dure la recoleccin y contar con un antihelmntico efectivo.
PROCEDIMIENTO:
Informar al personal (de hospital si es clnico; al voluntario si es de encuestas) para
que colecte heces de 24 horas durante 4-5 das despus de iniciado el tratamiento.
La forma de hacerlo depender de los recursos e ingenio de cada investigador.
Lavar diariamente y por separado las heces de 24 horas recogidas en bolsas plsticas
con el nombre de cada individuo, utilizando pazcones o un tamiz y bandejas
esmeriladas o de acero inoxidable y recobrar los parsitos de este lavado. Ayudarse
con pinceles finos para recoger los parsitos ms pequeos.
En caso de Ascarislumbricoides;
Medirlos, secarlos y pesarlos (opcional); fijarlos con formalina caliente al 5%, en
frascos apropiados.
En caso de Trichuristrichiura y Uncinariasspp:
Contarlos y separarlos por sexo si se desea y fijarlos. Beaver et al comentan que
gusanos pequeos se estiran en cido actico glacial, se lavan y se fijan, guardndolos
en alcohol etlico al 70% con 5% de glicerol. Otro fijador que da buenos resultados
para todo tipo de gusanos es una mezcla a partes iguales de formalina al 10% y
alcohol etlico de 95%, al que se agrega 5% de cido actico (5 partes de cido actico
y 95 partes de formalina-alcohol).
En situacin de campo, los datos iniciales del estimado de la intensidad de la infeccin
por cuenta de huevos ms la cuenta de adultos proveer datos epidemiolgicos ms
correctos que documenten la relacin entre la cuenta de huevos y el nmero de
gusanos adultos. Esta carga parasitaria variar segn las diferentes regiones del pas,
las distintas condiciones epidemiolgicas y condiciones de la poblacin.

TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN (CIDO-RESISTENTE) MODIFICADA:
Esta tcnica es til en la identificacin de ooquistes de coccidios como
Cryptosporidium, Isospora, y Cyclospora, que son difciles de detectar con colorantes
rutinarios. Esta tincin de Ziehl-Neelsen Modificada no requiere el calentamiento de
los reactivos al teir.

CONCENTRACIN DE HUEVOS, LARVAS Y QUISTES EN HECES
Ha llegado a ser un procedimiento de rutina como parte de un examen completo para
la deteccin de los parsitos intestinales, que se puede realizar como complemento
del examen directo







MTODO DE CONCENTRACIN POR FLOTACIN WILLIS
GENERALIDADES:
En 1921 Willis, basndose en mtodos de flotacin simple anteriores describi el
mtodo que lleva su nombre, el cual dada su sencillez, se puede utilizar en trabajos de
campo, ya que para realizarlo nicamente se requiere microscopio y laminillas. Este
mtodo se basa en un principio de flotacin simple, utilizando una solucin de cloruro
de sodio de una densidad entre 1.200 y 1.250, en la cual los quistes, huevos y larvas
flotan perfectamente.
MATERIAL Y EQUIPO:
Vasos de precipitado de 50 ml
Tubos de ensaye de 13 X 100 mm
Gradilla
Abatelenguas de madera
Portaobjetos de 26 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Microscopio
Solucin de salmuera o solucin saturada de cloruro de sodio
Lugol
MTODO
1.- Se colocan en el vaso de precipitado de 2 a 3 gr de materia fecal, se aade una
pequea cantidad de solucin saturada de cloruro de sodio, se homogeniza.
2.- Se vierte en un tubo de ensaye hasta el borde, se coloca el cubreobjetos de tal
manera que quede en contacto con la suspensin y se deja reposar durante 15
minutos.
3.- Transcurridos los 15 minutos se toma el cubreobjetos y se coloca sobre un
portaobjetos al cual se le ha puesto previamente una gota de lugol.
4.- Se observa al microscopio con objetivos de 10X y 40 X.
5.- Anotar resultados de observacin y hacer dibujos.

MTODO DEL PAPEL DE FILTRO EN TUBO O DEHARADA-MORI
GENERALIDADES:
Los huevos Uncinariasspp observados en muestras fecales pueden ser difciles o
imposibles de diagnosticar, mientras que las larvas que surgen de ellos se identifican
fcilmente. Un problema prctico frecuente es la diferenciacin de las infecciones por
Necator americanode las producidas por Ancylostomaduodenalis. Para cultivar larvas a
partir de huevos, Harada y Mori (1955) describieron un mtodo sencillo y limpio en
tubos de ensaye.
MATERIAL Y EQUIPO:
Agua Destilada
Tubos de ensaye de punta cnica de 15 ml
Gradilla
Abatelenguas o aplicadores de madera
Tiras de papel filtro de 13 X 120 mm
Portaobjetos de 26 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Pipetas Pasteur con bulbo
Sol. De lugol o cido actico al 20%
Microscopio
METODO:
1.- Se extiende una fina pelcula de heces ( de 1 a 2 mm) en un lado del tercio medio de
una tira de papel filtro.
2.- Se coloca el papel en un tubo de ensaye con 3 ml de agua destilada forzando la tira
hasta aproximadamente el nivel de 1 cm y presionando el lado limpio contra la pared
del tubo.
3.- Se conserva el cultivo a temperatura ambiente (24-28C) en la oscuridad durante
un periodo de 1-5 das aadiendo agua segn se vaya necesitando para mantener el
nivel bastante por encima del extremo inferior del papel filtro.
El flujo capilar del agua que sube a travs del papel y la pelcula fecal mantiene
hmedas las heces y transporta sus elementos solubles hacia la parte superior del
papel, donde se evaporan o acumulan en un depsito oscuro. Al alcanzar la fase
infecciosa, las larvas migran hacia abajo contra la corriente del flujo del agua, y al
alcanzar el nivel de sta se sumergen hacia el fondo, donde pueden verse con una lupa
y tomarse con una pipeta para su examen microscpico. La tira de papel filtro puede
transferirse a un tubo limpio lleno de agua para recoger las larvas que hayan podido
quedar en la pelcula fecal. Algunas especies de larvas tienen tendencia a no migrar
hacia abajo. Antes de retirarlas, las larvas pueden inmovilizarse introduciendo el tubo
a bao Mara (50-60C) o aadiendo una cantidad de cido Actico al 20%.




Cpsula de Beal.
Este examen es un complemento del coproparasitoscopico. Se usa para demostrar
la presencia de parsitos intestinales que tiene por hbitat el duodeno y que pueden
encontrarse en muestras biliares, obtenidas ya sea por sonda duodenal, por el
mtodo de la cuerda encapsulada (Enterotest) o por la cpsula de Beal.

METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
Se basa en el uso de una cpsula de gelatina que tiene en su interior un hilo de
algodn absorbente, para la obtencin de parsitos que se encuentran en el
duodeno. Es una tcnica til en la bsqueda de Giardia lamblia, Isospora belli,
Strongyloides stercoralis, Ancylostoma o Necator y Fasciola heptica, cuyos adultos
se localizan en las vas biliares.



TCNICA O PROCEDIMIENTO
1. El mtodo de la cuerda encapsulada o Enterotest requiere que el paciente est
en ayunas.
2. Fijar el extremo de la cuerda con una cinta adhesiva en la mejilla del paciente
y se le hace deglutir.
3. La cpsula, se va desenrollando a medida que desciende por el estmago y
duodeno.
4. Retirar la cuerda despus de 4 5 horas, observndose el extremo que lleg
al duodeno de color amarillo
5. Se exprime el extremo en una lmina excavada o lmina portaobjeto.
6. Observar con 10X y 40X.
7. Al resto del contenido duodenal obtenido con sonda se le agrega una solucin
de hidrxido de sodio al 2 %.
8. Trasvasar a un tubo de 13 x 100, se mezcla tapando el tubo y, por agitacin se
liberan las formas parasitarias del mucus duodenal.
9. Dejar reposar de 30 a 45 minutos, eliminar el sobrenadante y observar el
sedimento directamente o con tincin de lugol.



Mtodo en fresco del exudado vaginal
Es un mtodo sencillo en que se utiliza la secrecin vaginal para la observacin del
protozoario; Trichomonas vaginalis.
METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
El mtodo se basa en la toma de la secrecin vaginal con solucin salina fisiolgica
la cual conserva condiciones semejantes a las del organismo para la observacin de
los trofozoitos de Trichomonas vaginalis.

TCNICA O PROCEDIMIENTO
1. Preparar los materiales para la toma de muestra.
2. Acomodar a la paciente en posicin ginecolgica.
3. Introducir el hisopo (estril) en la cavidad vaginal de la paciente
4. Depositar el hisopo en un tubo que contenga 1 ml se solucin salina al 0.9%.
5. Mezclarlo y tomar una gota de esa suspensin
6. Depositarla en un portaobjeto
7. Colocar el cubre objeto sobre la muestra
8. Observar al microscopio con objetivo de 40 X
9. Reportar.

Frotis sanguneos para la identificacin de parsitos.
Es un mtodo antiguo para la observacin de hemoparsitos por medio de tinciones,
los parsitos a observar son Plasmodium, y Trypanosoma,

METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
El uso del frotis sanguneo se fundamenta en la aplicacin de colorantes
hematolgicos, que sirven para hacer evidente el parsito y tambin se basa en el
conocimiento de la morfologa del mismo.

TCNICA O PROCEDIMIENTO
1. Limpiar perfectamente la zona a puncionar.
2. Tomar firmemente la lanceta entre el dedo ndice y pulgar
3. Puncionar la zona y colocar una pequea gota de sangre cerca de un extremo
de un portaobjeto limpio
4. Sostener otro portaobjeto que sirva de dispersor, darle una inclinacin de 30
grados, esperar que la gota se deslize sobre el borde. fig. No. 3.
5. De manera rpida correr el portaobjeto dispersor hacia la adelante para que la
sangre se extienda y forme un frotis delgado.
6. Dejar secar al aire
7. Teir segn las indicaciones del colorante.
8. Observar con objetivo de inmersin.


Gota gruesa.
La gota gruesa es una tcnica de concentracin para la bsqueda de Plasmodium
que se encuentra en bajas proporciones

METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
Se fundamenta en la defibrinizacin de la sangre y laquear los glbulos rojos, ya que
pierden toda la hemoglobina lo que hace que los eritrocitos que estn acumulados se
vean como fantasma y de esa manera no permiten la observacin de los parsitos.

TCNICA O PROCEDIMIENTO
1. Se procede al mismo tiempo a hacer el frotis y la gota gruesa, en el mismo
portaobjetos, en un extremo la gota gruesa y en el resto el frotis. En este
procedimiento solo de describir la tcnica de gota gruesa.
.2. Colocar una gota en uno de los extremos del portaobjetos, con el ngulo de
otro portaobjetos extender la gota de manera circular esto es con el fin de
desfibrinar la sangre.
3. Dejar secar y enseguida agregar una gota de agua corriente, para laquear la
sangre.
4. Cuando la gota se observa como una pelcula blanquecina se deja secar
nuevamente.
5. Fijar con metanol absoluto, dejar secar.
6. Teir con colorante de Giemsa, Wraight o May Grunwald.
7. Observar con objetivo de inmersin y reportar.

Tincin de Kinyoun.
Esta tcnica se desarrolla para el diagnstico de criptosporidiosis, aunque tambin
se usa para otros coccidios, se trata de una modificacin de la tincin de Ziehl-Neelsen.

METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
Se basa en el comportamiento cido-resistente de la cubierta de algunos parsitos
como Isospora y Cryptosporidium parvum, los cuales se tien de rojo y destacan
sobre un fondo verde o azul, dependiendo del colorante de contraste usado.

TCNICA O PROCEDIMIENTO
1. Realizar un frotis de la muestra.
2. Dejar secar perfectamente.
3. Cubrir las gotas con unas gotas de alcohol metlico y dejar que seque.
4. Cubrir la preparacin con el colorante de fucsina durante 5 mins.
5. Lavar con alcohol cido y enjuagar con agua corriente
6. Agregar verde de malaquita o azul de metileno dejar actuar durante 1 min.,
lavar con agua corriente y dejar secar.
7. Observar con objetivo de inmersin.
Interpretacin de la prueba: los parsitos cido alcohol resistentes se tien de color
rojo.


MTODOS INDIRECTOS
1. Este mtodo implica la deteccin indirecta del parsito, ya sea por la respuesta
humoral que desencadena el paciente o por la captura de los antgenos que el
parsito libera.
2. Mtodos indirectos Debido a que el diagnstico de varias parasitosis incluso las
intestinales puede resultar desalentador mediante pruebas habituales en heces
fecales, se recomienda realizar pruebas indirectas especialmente para aquellos
parsitos cuya identificacin en heces es difcil o para aquellos que pueden
tener localizacin tisular ya sea en la pared intestinal u otros sitios de difcil
acceso incluso por biopsia.
3. Los mtodos indirectos hacen evidente la respuesta inmune especialmente
humoral del hospedero ante antgenos parasitarios. La mayor parte permite
identificar anticuerpos, pero tambin existen pruebas para encontrar clulas
sensibilizadas, complejos antgeno anticuerpo llamados complejos inmunes y
clulas efectoras de la respuesta inmune como reacciones del complemento y
citocinas.
TCNICAS DE AGLUTINACIN
Aglutinacin directa:
Suspensiones de parsitos enteros son enfrentadas a sueros de pacientes.
Los Ac (Y) presentes aglutinan los parsitos, formando acmulos consistentes.
Aglutinacin de partculas (ltex, betonita, carbn,etc.):
Suspensiones de partculas inertes, con su superficie cubiertas de Ag parasitarios, son
enfrentadas a sueros de pacientes. Los Ac presentes aglutinan estas partculas,
formando acmulos consistentes
ELISA
avance significativo gracias a la aplicacin de mtodos de diagnstico molecular
basados en la hibridacin del cido nucleco. Estos estudios son factibles ya que todos
los organismos contienen secuencias de cido nucleco que pueden ser usados en
estudios de hibridacin que ayudan a determinar cepas, especies y gnero. Pueden
detectarse simultneamente varios parsitos dependiendo de la especificidad del
cido nucleco utilizado.







http://para1.wordpress.com/2008/06/21/harada-mori/
http://para1.wordpress.com/2008/06/21/metodo-de-concentracion-por-flotacion-
willis/
https://portal.uah.es/portal/page/portal/epd2_profesores/prof121450/publicacione
s/Presentaci%F3n1a.pdf
http://www.bvs.hn/Honduras/pdf/Manual%20Parasitologia%202007.pdf
PCR
La PCR es una tcnica que permite llevar a cabo la sntesis in vitro de fragmentos de
ADN. Est basada en una reaccin enzimtica catalizada por una ADN polimerasa, que
produce mltiples copias (amplificacin) de un mismo fragmento de ADN. Para la
reaccin se requiere:
El ADN que va a copiarse, que servir como molde a la ADN polimerasa para hacer las
copias. Polimerasa termoestable, habitualmente se utiliza la polimerasa de la bacteria
Thermus aquaticus conocida como Taq polimerasa.
Cebadores o primers especficos, que se unirn a los extremos del fragmento de ADN
que quiere amplificarse. En este caso, se unirn a un fragmento de ADN del genoma
del parsito. Se utiliza la especificidad de los cebadores para amplificar una regin del
genoma del parsito cuando se encuentra presente en una muestra.
Desoxirribonucletidos trifosfato, o dNTPs (dATP, dTTP, dCTP,dGTP), que son los
sustratos para la sntesis de ADN, y un medio de reaccin adecuado, que contenga
iones magnesio y otras sales necesarias para que se produzca la reaccin enzimtica,
y que se consigue utilizando un tampn de reaccin apropiado para la enzima


Una biopsia
Es un procedimiento diagnstico que consiste en la extraccin de una muestra total o
parcial de tejido para ser examinada al microscopio.








WEBGRAFIA
http://www.saberdeciencias.com/index.php/apuntes-de-parasitologia/156-
caracteristicas-de-los-parasitos-mecanismos-de-accion-patogena-evasion-de-la-
respuesta-inmune
http://www.higiene.edu.uy/parasito/teo09/metest.pdf
http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-protocolos.pdf
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf
http://www.infobioquimica.com/wrapper/CDInterpretacion/te/mi/13.htm
http://www.slideshare.net/jmhr23/diagnstico-parasitolgicometodo-directoindirecto-
y-molecular-i-parcial