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TESTE BIOQUMICO
Teste de Condutividade Eltrica
Teste de Tetrazlio
Mestranda: Elizabeth Nunes Gonzaga
Prof. Coimbra
Maio/2014
UFMT UNIVERSIDADE FEDERAL DO MATO GROSSO Campus Sinop
Programa de Ps-Graduao
Mestrado em Agronomia
Avaliao e Qualidade de Sementes
INTRODUO
Semente
Testes
Conceito de Teste Bioqumico
Teste de Condutividade Eltrica
Teste de Tetrazlio
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O QUE UMA SEMENTE
Pela Legislao Brasileira (Lei n 10711, de 5 de
agosto de 2003)
Semente como o material de reproduo
vegetal de qualquer gnero, espcie ou
cultivar, proveniente de reproduo sexuada
ou assexuada, que tenha finalidade
especfica de semeadura.
Fonte: http://www.ecoarflorestal.org.br/imagens/proj_sementes_01.jpg
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Pela definio botnica: semente o vulo
desenvolvido aps a fecundao, que contm
embrio, reservas nutritivas e tegumento.
Longevidade
Vigor
Vigor em semente remonta as evidencias de que os
indivduos se desenvolvem em taxas diferentes, o que leva
naturalmente, a classificao em fortes, fracos, etc
(MOREIRA 1994).
Vigor tem sido definido com a utilizao de termos com
integridade, adaptabilidade, resistncia, mas nenhum deles
cientificamente respeitvel ; a semente, no o ambiente,
deve receber as maiores atenes nas definies de vigor
(Heydecker, 1972).
Vigor pode ser definido como o potencial para a germinao
rpida e uniforme e um crescimento rpido de plntula, em
condies normais de campo (Ching, 1973).
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TIPOS DE TESTES
Testes Fsicos
Testes Fisiolgicos
Testes Bioqumicos
Testes de Resistncia
TESTES PADRONIZADOS PELA ISTA e AOSA
TESTE BIOQUMICO
Avaliar alteraes bioqumicas
associadas ao vigor das sementes.
Testes de respirao
Teste ADAG
Teste de tetrazlio
Teste de condutividade eltrica
Teste de lixiviao de potssio
Teste dos aldedos volteis
Teste dos cidos graxos livres
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TESTE DE CONDUTIVIDADE ELTRICA
um teste para observar a qualidade fisiolgica das sementes
A organizao do sistema de membranas em sementes pode
refletir o seu estdio de deteriorao e, consequentemente, a
qualidade fisiolgica.
Fonte: http://www.portalsaofrancisco.com.br/alfa/semente/semente.php
Sementes de Sibipiruna
(Caesalpinea Peltophoroides ).
Trs sementes normais,
mostrando o eixo embrionrio e
cotildones e uma semente
deteriorada.
A medio da condutividade eltrica por
meio da quantidade de eletrlitos liberados
pela semente na gua de embebio;
Tem sido aplicada, de modo mais freqente,
em uma amostra de sementes representativa
de uma populao (mtodo massal).
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DESVANTAGEM
Os resultados expressam a condutividade mdia de um
grupo de sementes, onde poucas sementes mortas
podem afetar a condutividade de um lote com muitas
sementes de alta qualidade.
Para minimizar esse problema, recomenda-se escolher as
sementes, excluindo-se as sementes danificadas.
METODOLOGIA
Quatro repeties de 50 sementes puras
Pesadas e, posteriormente, colocadas em copos
plsticos contendo 75mL de gua deionizada (h
trabalhos com 25ml e 50ml)
Manter em germinador regulado a temperatura de
25C, durante 24 horas
Aps o perodo de embebio a condutividade eltrica
deve ser medida.
O resultado obtido no condutivmetro dever ser
dividido pelo peso da amostra, para que o resultado
final seja expresso em mS cm
-1
g
-1
.
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Uma poro significativa dos eletrlitos liberados pelas
sementes, durante a embebio representada por vrios
ons inorgnicos, dentre estes destacam-se o Na, K, Ca e Mg.
O potssio (K), porm, tem merecido especial ateno por se
tratar do principal on em termos de quantidade lixiviada.
Sementes envelhecidas lixiviam maiores quantidades de
potssio e essas quantidades tm sido utilizadas como um
indicador da integridade do sistema de membranas
celulares.
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TESTE DE TETRAZLIO
O teste de tetrazlio (Tz) rpido e grande importncia para a
avaliao da qualidade das sementes, porque, alm da
viabilidade, o mesmo pode informar sobre o vigor e ainda
identificar diversos problemas que afetam o desempenho das
sementes (Marcus Filho, 2005).
A metodologia do teste vem sendo aperfeioada
constantemente, de modo que existem manuais que indicam a
execuo para vrias espcies, tais como a soja, milho, trigo,
feijo, algodo e amendoim.
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Baseia-se na atividade das enzimas desidrogenases, como a
desidrogenase do cido mlico que catalizama reao de reduo
do sal de tetrazlio (2,3,5 trifenil cloreto de tetrazlio), nas clulas vivas.
Por exemplo: nas sementes de soja imersa na soluo de tetrazlio,
esta difundida atravs dos tecidos, ocorrendo nas clulas vivas a
reao de reduo que resulta na formao de um composto
vermelho, no-difusvel, conhecido por formazan.
Se o sal de tetrazlio reduzido, formando o composto vermelho, houve
atividade respiratria nas mitocndrias, significando que h viabilidade
celular e do tecido.
Os tecidos no viveis no reagem e, conseqentemente, no so
coloridos.
A formao de um vermelho carmim claro indica tecido vigoroso e um
vermelho mais intenso para o tecido em deteriorao.
O Tz identifica, em soja, deteriorao por
umidade, danos mecnicos e de percevejos. A
interpretao do teste exige que as sementes
sejam avaliadas individualmente, quando o
exame das partes vitais, a localizao e
intensidade da colorao indicaro a condio
da semente.
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METODOLOGIA
Sal de tetrazlio a 0,075% (75 ml e soluo estoque (1,0%) + 925 ml de gua
100 sementes ( 2 repeties com 50 sementes cada)
Sementes mantidas umedecidas em papel toalha, por um perodo de 16 horas, na
temperatura de + 25 C
Aps o pr-acondicionamento, as sementes so colocadas em bquer ou copinhos de
plsticos, sendo totalmente submersas na soluo de tetrazlio (0,075%)
As sementes devem permanecer assim a uma temperatura de 35C a 40C por
aproximadamente 150 a 180 minutos.
A soluo de tetrazlio sensvel luz, por isso a operao deve ser realizada no
escuro.
Alcanada a colorao adequada as sementes devem ser lavadas em gua e
posteriormente avaliadas, sendo no mximo 12 horas o tempo de armazenamento em
refrigerador.
Muitos outros mtodos, para a
determinao rpida da qualidade das
sementes, vm sendo pesquisados,
porm vrios ainda no mostraram
resultados consistentes, outros
apresentam dificuldades na
padronizao, alguns se mostram
promissores, mas devem ser mais
avaliados antes de sua recomendao
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Classes de Qualidade
A identificao feita por 8 classes de qualidade, as quais foram
descritas por (FRANA NETO ET AL.,1988).
Classes de 1 a 3 identificam sementes viveis e vigorosas,
Classes de 4 a 5 identificam sementes viveis, porm no
vigorosas,
Classes de 6 a 8 englobam sementes que no germinam
A somatria dos percentuais das classes 1 a 3 nos d o ndice de
vigor e a somatria dos valores das classes de 1 a 5 nos d a
viabilidade do lote de semente.
Classificao pelo Vigor
O nvel de vigor pode ser interpretado de acordo com a
seguinte classificao (FRANA NETO, 1989):
Vigor muito alto: superior a 80%
Vigor alto: entre 70 a 79%
Vigor mdio: entre 50 a 69%
Vigor baixo: entre 30 a 49%
Vigor muito baixo: inferior a 29%
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Bhering et al. (1996)
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VIABILIDADE DAS SEMENTES DE BRAQUIRIA
PELO TESTE DE TETRAZLIO
Objetivando estimar a viabilidade de sementes de braquiria
(Brachiaria brizantha) pelo teste de tetrazlio, foram
estudadas as condies para a hidratao e a colorao
das sementes.
Para tanto, utilizando oito lotes de sementes, foram variados
os perodos e as temperaturas (2, 4, e 6 horas a 35C e 40C; 6
e 16 horas a 30C) de hidratao e os perodos e as
temperaturas (1, 2 e 4 horas a 35C, 40C e 45C; 6 horas a
30C) de colorao, em soluo 0,075% de tetrazlio.
As sementes foram classificadas em viveis e no viveis.
Revista Brasileira de Sementes, vol. 28, n 2, p.147-151, 2006
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Os resultados do teste de tetrazlio (Tabela 1) indicaramque a hidratao das
sementes, dos oito lotes de braquiria, por seis horas temperatura de 30C
(6h a 30C/2h a 40C) apresentou semelhanaestatstica com os resultados de
germinao de todos os lotes.
Esse perodo de hidratao das sementes est de acordo com uma das
recomendaes das Regras para Anlise de Sementes (Brasil, 1992), embora as
regras no especifiquema temperatura a ser utilizada.
Com relao colorao das sementes, os resultados
indicaram(Tabela 2) que o perodo de uma hora a 45C (6h a
30C/1h a 45C), independentemente do lote considerado,
apresentou semelhana estatstica com os resultados de
germinao para os oito lotes.
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FIGURA 1. Teste de tetrazlio: sementes viveis
(A) e no viveis (B) de braquiria
Concluso
O teste de tetrazlio, eficiente para
estimar a viabilidade de sementes de
Brachiaria brizantha, pode ser
conduzido com a hidratao das
sementes por seis horas a 30C
(sementes com 25% de gua) e com a
colorao por duas horas a 40C.
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OBRIGADO!!!