Perguntas e respostas

Workshop validao de mtodos

analticos
Gerncia Geral de Medicamentos
03-12-2013
O objetivo de uma validao demonstrar que o mtodo
apropriado para a finalidade pretendida, ou seja, a
determinao qualitativa, semi-quantitativa e/ou
quantitativa de frmacos e outras substncias em
produtos farmacuticos.
Faz-se necessrio avaliar a especificidade da anlise de sais
inorgnicos quando o mtodo traz anlises de identificao
que parecem no ser to conclusivas, tais como
desenvolvimento de colorao, turbidez ou formao de
precipitado?

Se no conclusivo significa que o mtodo no est apto
para essa avaliao ou pode-se utilizar mais de um mtodo
de maneira que um mtodo complemente a parte falha do
primeiro mtodo. Utilizar mtodos complementares para
uma resposta conclusiva a partir da garantia da medida
analtica.


ANVISA
GGMED
Caso a metodologia tenha uma verso atualizada
(exemplo da USP 35 para USP 36) porm no
obteve nenhuma alterao de anlise,
necessrio fazer uma nova validao ou posso
revisar a metodologia de anlise justificando que
no houve alterao de anlise, e sim, apenas,
atualizao de referncia?

Se no houve mudana alguma na metodologia e
condies cromatogrfica no haveria a
necessidade de revalidao.

ANVISA
GGMED
Em formulaes farmacuticas multiativos, o
coeficiente de correlao deve ser avaliado
ativo a ativo?

Sim. Os coeficientes de correlao (R) e o de
correlao linear (r), usados para avaliar a
linearidade de curvas, revelam a relao entre
concentrao x rea, portanto, a linearidade
deve ser avaliada ativo por ativo.

ANVISA
GGMED
Durante os ensaios de validao, possvel determinar a
especificao de teor para o (s) ativo (s) para a rotina?

importante destacar que os conceitos de validao e
especificao do mtodo so distintos. Portanto, no
possvel garantir a especificao por meio da validao.

O ensaio de validao tem por objetivo demonstrar que o
mtodo analtico est apto para quantificar o teor, ou seja,
que ele capaz de quantificar a substncia em anlise o mais
prximo possvel do real. A especificao um estudo mais
aprofundado que relaciona ao intervalo aceitvel para a
variao de teor, correlacionando com a segurana e
eficcia.

ANVISA
GGMED
Em formulaes farmacuticas multiativos iguais,
porm, concentraes diferentes, que compartilham
do mesmo mtodo de anlise de teor, possvel
desenhar um nico protocolo de validao de
mtodo? aceitvel?

Sim, desde que a concentrao final das amostras para
anlise sejam exatamente iguais e que os passos de
extrao sejam exatamente os mesmos bem como se
no houve alteraes nos parmetros
cromatogrficos.Em se tratando de concentraes
distintas no possvel.
ANVISA
GGMED
Para mtodos de uniformidade de dose em que o mtodo
quantitativo idntico ao teor, diferindo apenas no preparo de
amostra (visto que um dos medicamentos deve ser diludo a partir
da forma farmacutica, e o outro deve partir de uma amostra
triturada), qual o nvel de prioridade desta validao? Neste caso,
como proceder com os testes de exatido e preciso?

A resoluo RE n. 899/2003 no estabelece prioridades para
validao, bem como desconhece-se qualquer Guia que estabelea
prioridade. Segundo a 899 um teste de performance, no tem a
mesma prioridade do teor. Se o mtodo for exatamente igual o de
teor, ou seja, mesma concentrao, pode usar os resultados da
exatido e da preciso. Porm a faixa de linearidade diferente.
ANVISA
GGMED
Qual o nvel de recuperao (exatido) ideal para os testes
de teor, dissoluo, produtos de degradao e
uniformidade de dose? Em alguns casos, pode no ser
vivel utilizar os 5% preconizados pela RE 899/03 para o
teste de preciso. Como proceder?

Aqui tem-se um equvoco, os 5% preconizados pela 899
para preciso e no exatido. Quanto ao nvel de
recuperao (exatido) para os testes acima relacionados
depender da concentrao ( por exemplo o guia da AOAC
traz uma tabela com limites), j os 5% entrar para a
discusso do Grupo Revisor da RE n899/2003.
ANVISA
GGMED
O que o % intercepto-Y? Como ele calculado? Como
estabelecer um critrio de aceitao para este parmetro?

A linearidade avaliada pela relao prevista na equao
matemtica linear simples onde y=ax+b em que a o
coeficiente angular ou inclinao da reta e b o intercepto.
Para estabelecer critrios para esse parmetro quanto ao
coeficiente angular, deve ser realizado procedimentos
estatsticos como anlise de regresso, por exemplo,
pressupostos de regresso, anlise de resduos, Anova, r
2
,
teste f, teste t de student para avaliar significncia
estatstica desses parmetros.

ANVISA
GGMED
Com relao ao IFA, a validao tem que ser a
mesma que feita para o produto final
(medicamento)?

Os parmetros da validao so exatamente os
mesmos. No entanto, para a validao do mtodo
referente ao IFA, deve-se considerar as
particularidades relacionadas a rota de sntese do
IFA. J para o produto terminado, leva-se em
considerao, as particularidades da formulao
e potenciais produtos de degradao.

ANVISA
GGMED
De acordo com a RE 899 de maio de 2003: Limite de Deteco 2.5.2.
No caso de mtodos no instrumentais (CCD, titulao, comparao
de cor), esta determinao pode ser feita visualmente, onde o limite
de deteco o menor valor de concentrao capaz de produzir o
efeito esperado (mudana de cor, turvao, etc). No caso da
titulao, vou considerar o LD no momento do ponto de viragem?
Sim. Ser no ponto de viragem da menor concentrao que gera o
efeito esperado (mudana de cor, turvao, etc).

Como vou documentar na validao?
Deve-se anotar o volume e concentrao do titulante e determinar
o ponto da viragem.

ANVISA
GGMED
Quais testes so importantes nos casos de mudana de
site fabricante do ativo? Quais testes de validao so
necessrios?
necessrio proceder com uma validao completa e
no caso de matriz e filial, uma vez mantido o mesmo
mtodo analtico que foi inicialmente validado em
conformidade com a RE 899/2003 e, caso mantidas as
mesmas condies de anlise, deve ser efetuada uma
validao parcial.

Avaliar s produto acabado?
No. necessrio avaliar o IFA tambm.

ANVISA
GGMED
Quais testes referentes a insumos so passiveis de validao, sejam
provenientes de farmacopeias ou no (ex metais pesados, pH,
densidade, resduo de ignio, etc)?

Todos os testes que de utilizarem: tcnicas analticas que faam uso
de mtodos de cromatografia gasosa (CG) ou cromatografia lquida
de alta eficincia (CLAE);1.2.2. mtodos no-cromatogrficos, desde
que estes ofeream uma seletividade aceitvel (por ex.
titulometria,espectrofotometria UV-VIS); testes imunolgicos ou
microbiolgicos, desde que observado o grau de variabilidade
usualmente associado a estas tcnicas.Todos os ensaios destinados
a quantificao do ativo e de impurezas e performance e alguns
para identificao (ver tabela 1 da resoluo RE n. 899/2003).

ANVISA
GGMED
necessrio realizar os testes de system suitability em
todos os parmetros da validao ou apenas a cada set up
de mquina? DPR de injees de padres considerado
SST, mesmo em parmetros de linearidade e
especificidade?

Deve ser realizado a cada set up da mquina.No entanto,
testes de adequao adicionais podem ser executados
durante a anlise. No caso de mtodos que se utilizam de
um detector de alta sensibilidade, por exemplo, a soluo
de sensibilidade pode ser avaliada ao incio e ao final da
corrida a fim de garantir a performance adequada do
detector ao longo da anlise. O DPR utilizado como
parmetro para a verificao da adequabilidade do sistema.

ANVISA
GGMED
Existe algum guia de orientao para valores de recuperao
utilizados no teste de exatido? A RE 899 no traz
orientaes/ sugestes quanto as recuperaes adequadas.

No est previsto na RE 899. Referncia podem ser obtidas
em artigos cientficos e na AOAC , por exemplo.

ANVISA
GGMED
Com relao a transferncia de metodologia analtica, gostaramos de esclarecer a seguinte dvida:Para produtos importados de
empresas parceiras (ou seja, no filiadas ao detentor do registro no Brasil), cujo o fabricante do medicamento realiza a anlise de
controle de qualidade do produto acabado, porm as validaes de mtodo do mesmo so realizadas em site diferentes por empresa
parceira pertencente ao mesmo grupo, conforme exemplo abaixo:














Considerando o exemplo descrito acima, gostaramos de saber se para fins de registro, aceito por esta Agncia a
apresentao de transferncia de metodologia analtica do parceiro conforme USP <1224> realizada do Site B para
o Site A, na qual realizada somente a concordncia entre resultados obtidos em laboratrios diferentes (Ex: Site
A versus Site B), juntamente com a Validao da Metodologia Analtica conforme RE 899/03 realizada pelo Site B,
sem que seja necessrio a apresentao de uma nova Validao de Metodologia Analtica ou Validao Parcial
realizada pelo Site A, visto que tratam-se de empresas do mesmo grupo.

Para empresas na situao de matriz/filial a RE 899 prev a avaliao dos parmetros de preciso (repetibilidade,
intermediria), especificidade e linearidade pela filial bem como a apresentao de cpia de toda a documentao
original da validao contemplando todos os parmetros previstos na RE 899/2003.Para a validao parcial
consideram-se a mesma metodologia e condies cromatogrficas aplicadas pela matriz. A RDC 31/2010 prev
alm dos parmetros citados a realizao do parmetro exatido. No caso de no filiadas, a validao dever ser
completa.



ANVISA
GGMED

Range de linearidade para teste de performance -
Dissoluo: A resoluo RE 899/03 demonstra em sua
tabela 3 no item 2.3 Intervalo, um valor de +/- 20% sobre o
valor especificado para o intervalo. Portanto, devemos
considerar o valor adotado para o Q (especificado) ou valor
de 100% para o concentrao terica do mtodo?

A validao do ensaio de dissoluo deve ser realizada a
partir do perfil de dissoluo e, no que se refere
linearidade do mtodo, deve estabelecer limites em
relao porcentagem dissolvida esperada. Assim, a
linearidade deve contemplar de -20% da menor
concentrao esperada a + 20% da maior concentrao
esperada para o perfil de dissoluo.

ANVISA
GGMED
Conforme RE 899, o intervalo utilizado para ensaio de dissoluo de + - 20%
sobre o valor especificado para o intervalo (Q). No entanto, como utilizamos o
ensaio de dissoluo para avaliar o perfil de liberao, a avaliao feita em
concentraes iniciais menores (por exemplo: 15% de dissoluo no primeiro
ponto). Para esta avaliao, devemos validar o mtodo de dissoluo em
concentraes mais amplas que o intervalo de + - 20% sobre o valor especificado
para o intervalo (por exemplo: 15% a 120%). Porm, se validarmos neste intervalo,
a validao de dissoluo ficar em desacordo com a legislao e se validarmos no
intervalo de dissoluo da RE 899, alguns pontos do perfil no estaro no range
validado. Sendo assim, gostaramos de saber se poderemos utilizar este range
maior contemplando os cinco pontos neste intervalo?

A validao do ensaio de dissoluo deve ser realizada a partir do perfil de
dissoluo e, no que se refere linearidade do mtodo, deve estabelecer limites
em relao porcentagem dissolvida esperada. Assim, a linearidade deve
contemplar de -20% da menor concentrao esperada a + 20% da maior
concentrao esperada para o perfil de dissoluo. O intervalo dever contemplar
o mnimo de 5 pontos e caso necessrio poder contemplar mais pontos a fim de
determinar a curva de linearidade.

ANVISA
GGMED
No teste de robustez de um determinado mtodo, quais so os critrios de
aceitao a serem utilizados? necessrio apenas verificar se os testes de
adequao de sistema (Tailing, Resoluo, Eficincia, Fator de capacidade, entre
outros) cumprem com o especificado ou necessrio avaliar algum parmetro
especfico para a amostra? Ou seja, durante o teste de robustez necessrio
avaliar tambm a soluo amostra (cumpre com os limites de especificao de
Teor / Impurezas)?

Um mtodo robusto tem a capacidade de no ser afetado por uma pequena e
deliberada modificao em seus parmetros, ou seja, os parmetros que a
empresa determinou para considerar o seu mtodo apto (Tailing, Resoluo,
Eficincia, Fator de capacidade, entre outros, casos esses tenham sido escolhidos).
A robustez de um mtodo de teor, por exemplo, deve demonstrar que deliberadas
modificaes nas condies de anlise (em cromatografia pode ser: fluxo, pH,
proporo de fase mvel entre outras) no iro afetar a quantificao do princpio
ativo. Na robustez, no se aconselha utilizar amostra, pois, no caso de diferena de
teor, no h como correlacionar com as sutis diferenas da amostra ou com os
problemas relacionados uniformidade de contedo da amostra, por exemplo. O
critrio de aceitao da variao na robustez o mesmo para a exatido.

ANVISA
GGMED
Robustez: A resoluo RE 899/03 menciona que o
parmetro de robustez deve ser realizado durante o
desenvolvimento do mtodo, pois pequenas variaes
devem ser avaliadas para definio do mtodo final. Sendo
assim, quando deve ser realizado tal parmetro
(desenvolvimento ou validao)?

A robustez est relacionada a pequenas alteraes do
mtodo que podem ocorrer na rotina do laboratrio, como
troca de marca da coluna, lote de solvente. A RE 899/2003
traz que durante o desenvolvimento da metodologia, deve-
se considerar a avaliao da robustez. No entanto, a RE
899/2003 est sendo revista .

ANVISA
GGMED
Nos estudos de especificidade onde solues amostras so submetidas a
condies de estresse, exigida uma degradao % mnima para considerar o
estudo de estresse vlido?!

a) Sim, a empresa deve obter uma quantidade apropriada de degradao de 10 a
30%, por exemplo. A empresa pode submeter a amostra a uma condio mais
severa de estresse ou apresentar comprovao de que a molcula estvel e que
no sofre degradao mesmo em condies drsticas de estresse.

Ou seja, aps submetida a amostra a uma condio de estresse, calcula-se o % de
ativo degradado, caso no seja atingido um percentual mnimo eu devo invalidar
este teste e forosamente submeter a amostra a uma condio semelhante em
tempo maior?!

b) A degradao dever ser suficiente a fim de permitir a verificao da formao
de produtos de degradao. A empresa dever utilizar mtodo pertinente que no
degrade completamente a amostra e inviabilize essa verificao e que gere
degradao em ordem suficiente a fim de permitir a avaliao de produtos de
degradao.

ANVISA
GGMED
H alguma norma / diretriz / artigo que estabelea quais
devem ser as condies de estresse (tempo / temperatura /
concentrao do agente de estresse) mnimos para ser
realizado um estudo de estresse?!

Existem inmeras publicaes nacional e internacional
sobre degradao forada.

Exemplo: Guia WHO. 2005. Expert Committee on
specifications for Pharmaceutical Preparations.
Pharmaceutical Development (or preformulations studies).
Expert Report Series. Geneve, WHO. 929: 152 estabelece
propores.

ANVISA
GGMED
Especificidade e seletividade: Como e quando "parar"
com as degradaes foradas se no geram
% satisfatrios? (5-30%) // Robustez, critrios de
aceitao, internacionalmente no so definidos...qual
a posio da Anvisa frente a isto?

A degradao dever ser suficiente a fim de permitir a
verificao da formao de produtos de degradao. A
empresa dever utilizar mtodo pertinente que no
degrade completamente a amostra e inviabilize essa
verificao e que gere degradao em ordem suficiente
a fim de permitir a avaliao de produtos.

ANVISA
GGMED
No teste de especificidade, a legislao requer a degradao
forada, esse teste precisa realmente ser realizado na validao ou
isso aplicvel somente para o desenvolvimento analtico ou
quando no se tem os padres de impurezas?

O teste de degradao tem a finalidade de avaliar o
comportamento do medicamento diante de uma situao de
estresse e prever quais possveis impurezas podem originar dessa
situao. A empresa deve desafiar seu produto e avaliar se sua
metodologia suficientemente seletiva. Nem sempre esto
disponveis para aquisio todos os padres de impureza, a
empresa dever, portanto, conhecer seu produto e desafi-lo. A RE
899/2003 contempla a realizao desse teste na validao da
metodologia, embora tambm seja possvel no desenvolvimento.
No entanto, os dados devero ser demonstrados para Anvisa.

ANVISA
GGMED
Item Ensaio Especificidade e Seletividade (item 2.1.3.):
Quando a empresa no possui no lab. Controle da
Qualidade um equipamento com detector DAD ou um
detector de massa, como deve ser feito o ensaio de
"Pureza de picos". Este ensaio pode ser terceirizado em
outro laboratrio?

Sim, desde que sejam tomadas as devidas precaues
de transferncia de mtodo e rastreabilidade para o
laboratrio terceirizado. Esse, preferencialmente,
dever ser habilitado pela Anvisa (EQFAR), reblado
(ANALI), ou pertencentes a universidades.

ANVISA
GGMED
Ainda referente a Especificidade e Seletividade,
posso determinar que um pico pertence a uma
molcula pelo peso molecular da mesma quando
ela e outra possui o mesmo tempo de reteno?

Se duas molculas possuem o mesmo tempo de
reteno ento os picos esto sobrepostos. Nesse
caso, possivelmente, houve a coeluio de picos e
a metodologia no seletiva.

ANVISA
GGMED
Como realizado o clculo de pureza de um
determinado pico em cromatografia?

A empresa responsvel por apresentar o racional
correto para o clculo da pureza. Todavia, o clculo de
pureza em essncia deve demonstrar a
homogeneidade espectral do pico de forma a garantir
que o pico do ativo atribudo a um nico
componente. O clculo dever ser realizado de acordo
com o equipamento que se opera e metodologia
aplicada para tal. A avaliao realizada considerando
a tcnica e metodologia desenvolvida.

ANVISA
GGMED

O que determina o valor (%) mnimo a ser
aceito para LDD e LDQ?!

a sensibilidade analtica do equipamento e
do mtodo em conseguir avaliar as diferenas
entre sinal e rudo, conseguindo separar o que
um pico cromatogrfico do que um rudo.

ANVISA
GGMED
Pureza de Pico: Recebemos exigncias determinando o valor de 0,99, mas
este no determinado na RE 899/03, no definido um critrio de
aceitao. E alm disso temos diferentes softwares de equipamentos, que
em seus manuais nos do diferentes valores de aceitao. Como por
exemplo o Ezchorm que nos d um valor aprovado para pureza de pico de
no mnimo 0,95 e no Empower temos um valor de aproximadamente
12. Como definir um valor de aceitao para Pureza de Pico?

O critrio de aceitao est relacionada a sensibilidade do programa
computacional utilizado para verificar a pureza do pico e da avaliao do
analista.O clculo de pureza em essncia deve demonstrar a
homogeneidade espectral do pico de forma a garantir que o pico do ativo
atribudo a um nico componente. O clculo dever ser realizado de
acordo com o equipamento que se opera e metodologia aplicada para tal.
A avaliao realizada considerando a tcnica e metodologia
desenvolvida. Assim, a empresa dever se atentar com a correta execuo
do mtodo.

ANVISA
GGMED
Em casos em que determinamos a pureza de pico
na seletividade do produto acabado, necessrio
a utilizao do placebo para comprovar a
seletividade?

Sim porque quando a amostra for estressada
perde-se a rastreabilidade dos picos, ou seja, no
se sabe a origem dos picos. Nesse caso, para
exatido, no podemos utilizar apenas o ativo.
Deve-se utilizar placebo, placebo contaminado,
ativo isolado.

ANVISA
GGMED
a Qual o critrio a ser utilizado para estabelecer qual a faixa a ser aplicada
para Linearidade quando realizada validao de Substncias
Relacionadas ou Impurezas Desconhecidas?! E assim, obter os respectivos
valores de LDD e LDQ?

A determinao de LD e LQ segue o previsto na RE 899/2003. Possuindo o
padro da impureza possvel perfeitamente a realizao do LDD e LDQ e
a linearidade pode ser estabelecida a partir da especificao definida para
a impureza a 120% desse valor conforme consta na RE 899/2003.

Em caso de impurezas conhecidas e devidamente caracterizadas e
purificadas pode-se usar o devido padro de referncia. Mas em caso de
impurezas desconhecidas os respectivos padres no esto disponveis.
Na ausncia de padro, a empresa deve demonstrar a aplicabilidade da
normalizao de rea, ou seja, correlao de rea com a rea do ativo.


ANVISA
GGMED
Na Tabela 3. Limites porcentuais do teor do analito que devem
estar contidos no intervalo da linearidade para alguns mtodos
analticos da RDC 899 de maio de 2003 especifica que, para
Determinao de impurezas: Do nvel de impureza esperado at
120% do limite mximo especificado. Quando apresentarem
importncia toxicolgica ou efeitos farmacolgicos inesperados, os
limites de quantificao e deteco devem ser adequados s
quantidades de impurezas a serem controladas. Qual seria o
intervalo ideal? E o limite mximo especificado para a impureza
seria a individual ou a total?

O intervalo o preconizado na RE 899/2003 Do nvel de impureza
esperado at 120% do limite mximo especificado aceitando
limites inferiores mais restritos e superiores mais amplos. O limite
mximo referente impureza individual. Isso aplicvel para
mtodos quantitativos.

ANVISA
GGMED
Impurezas - De acordo com a RE 899/03, o range de
linearidade para impurezas deve ser realizado do nvel de
impurezas esperado at 120% do limite mximo. Mas o
limite mximo no seria o esperado, ou seja, 100%?
Portanto, porque validar at 120% se 101% do especificado
j reprovaria, estaria fora do especificado?

A RE 899/2003 est harmonizada com outros guias
internacionais como o Guia do ICH Q2(R1)e cobre faixa
suficiente a fim de determinar a curva analtica para
impurezas ao se considerar que, na maioria dos casos, as
quantidades de impurezas so muito baixas. Uma faixa
mais ampla que o esperado agrega maior confiabilidade
analtica especificamente para esse teste.

ANVISA
GGMED

Obrigada!