Eletroforese

A eletroforese uma tcnica fundamental no estudo de protenas e cidos

nuclicos, ela se baseia no comportamento de molculas em um campo
eltrico. A eletroforese foi proposta inicialmente por Ame Teselius em 1937
como um mtodo que permitia a visualizao de protenas de acordo com o
comprimento dos fragmentos de aminocidos e cargas eltricas. Esta tcnica
se mostrou extremamente simples e rpida, o que impulsionou seu
aprimoramento e utilizao, atualmente, para identificar, separar e purificar
partes de DNA.
Tanto o DNA quanto o RNA so eletricamente carregados e possuem cargas
negativas, devido aos grupos fosfato presente nas suas estruturas.
Conclumos, portanto, que ao colocarmos fragmentos desses cidos nuclicos
em um campo eltrico, eles migraro para o plo positivo do mesmo. Na
eletroforese usa-se um suporte slido, geralmente um gel, que pode ser
agarose ou poliacrilamida, dependendo do tamanho das molculas que se
pretende analisar. A estrutura da poliacrilamida composta por poros menores,
sendo por isso utilizada na separao e visualizao de protenas, enquanto a
agarose possui poros maiores, sendo, portanto utilizada para a anlise dos
cidos nuclicos.
O processo envolve o endurecimento do gel (como acontece com a gelatina),
que preparado entre placas de vidro com a criao de pequenos poos com o
auxlio de um pente. O espao restante preenchido com algum lquido que
seja bom condutor de eletricidade e aps esta etapa as amostras podem ser
depositadas nos poos. Um dos poos deve conter uma amostra padro, cujas
molculas possuam pesos conhecidos. Na eletroforese, acontece a separao
e identificao das protenas e cidos nuclicos pelo seu peso molecular.
Depois da deposio das amostras o sistema submetido a uma diferena de
potencial eltrico e durante esse processo h uma corrida onde os
fragmentos migram para o plo positivo da corrente saindo dos poos e
penetrando no gel. Nesta corrida os fragmentos que possuem maior massa e
tamanho migram mais lentamente, ao contrrio dos menores.
Aps a separao das molculas pela corrente eltrica, o gel retirado para
que seja possvel a visualizao das mesmas. Para isso, necessria a
aplicao de um corante especial, como por exemplo, o brometo de etdio
(EtBr) de frmula C
21
H
20
BrN
3.
A eletroforese mais eficiente na determinao de fragmentos de DNA do que
outras tcnicas como a centrifugao atravs de gradiente de concentrao, e
largamente utilizada em testes de paternidade, a at mesmo na fabricao de
vacinas e antibiticos quando combinada com outras tcnicas como, por
exemplo, enzimas de restrio. Tambm possibilita agropecuria a criao de
transgnicos, alm de ser utilizada no diagnstico de anemia falciforme,
clonagem e engenharia gentica e diagnstico de variaes de vrus. No
mundo forense a eletroforese pode ser usada na comparao de DNA do
criminoso, encontrado no local do crime, com o DNA de um suspeito, o que em
muitas situaes auxilia na soluo de casos difceis.