Sinalizao Celular

(parte 1)
Mariana S. Silveira
Inst.de Biofsica Carlos Chagas Filho
SINALIZAO CELULAR
Figure 15-4 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Diversos Sinais Iniciam a Sinalizao Intracelular
FATORES DE
CRESCIMENTO
MATRIZ
EXTRACELULAR
HORMNIOS
CITOCINAS
MOLCULAS SINALIZADORAS
NA MEMBRANA
DE OUTRAS CLULAS
NEUROTRANSMISSORES
MORFGENOS
Figure 15-9 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Figure 15-10 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Ex. Shh
Morfgenos: concentraes diferentes geramefeitos diferentes
(durao e exposio a multiplos sinais tambm so relevantes)
Fonte do
morfgeno
gradiente do morfgeno
Clulas
no comprometidas
Clulas
comprometidas
Altaba et al., 2003.
Combinaes de Sinais Induzem
Respostas Celulares Diferentes
Complexidade e Sinalizao Celular
http://www.mfpl.ac.at/index.php?cid=51
Max Perutz Laboratories
Conceitos Gerais em Sinalizao
Celular
Sinal A
Ncleo
Ambiente
Extracelular
Sinal B
Membrana
Plasmtica
Citoplasma
Receptor 2
Sinal C1
Receptor 3
Sinal D
Receptor 4
Receptor 1
Sinais Distintos Reconhecem Receptores Especficos
Sinal C2
1500 genes no genoma humano codificam receptores
+splicing alternativo
+modificaes ps traducionais.
Ncleo
Ambiente
Extracelular
Membrana
Plasmtica
Citoplasma
Receptor 1
Interao do Ligante ao Receptor induz mudanas
conformacionais e alterao funcional do Receptor
Sinal A
Receptor 1
Sinal (Ligante)
Ambiente
Extracelular
Membrana
Plasmtica
Receptor
Molculas Sinalizadoras
Intracelulares
Protena Reguladora
da Expresso Gnica
Enzima
Metablica
Protenas
Estruturais
ALTERAO
MORFOLGICA
ALTERAO
METABLICA
ALTERAO DA
EXPRESSO GNICA
Alterao da transcrio
gnica
Independente da transcrio gnica
Figure 15-6 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
CURSO TEMPORAL DA SINALIZAO
Ligante Ambiente
Extracelular
Membrana
Plasmtica
Receptor
SEGUNDOS MENSAGEIROS so
Molculas Sinalizadoras Intracelulares
Molcula Sinalizadora
Intracelular, cujos nveis
so alterados aps
ativao do receptor pelo ligante,
chamado de 1 mensageiro
Segundo
Mensageiro
EFEITOS BIOLGICOS
Exemplos:
Clcio, AMPc, GMPc, DAG, IP3
SNTESE E
DEGRADAO
DE
NUCLEOTDEOS
CCLICOS
MTODOS DE ESTUDO
Adenilil ciclase
Fosfodiesterase
Receptor
Em algumas vias, a Ativao do Receptor Resulta em Induo
de Atividades Enzimticas Especficas
Molcula Sinalizadora
Intracelular, cuja atividade
regulada por uma alterao
ps-traducional, como
fosforilao (cinase)
desfosforilao (fosfatase).
Ligante
Receptor
EFEITOS BIOLGICOS
Cascata Sinalizadora
Cinases e fosfatases constituem
2-4% do genoma na maioria dos
eucariotos!
Resduos alvo:
Tyr
Ser
Thr
Modificaes ps-traducionais (exemplificadas aqui por
Fosforilao/desfosforilao) podem afetar atividade, mas
tambm:
-Localizao de protenas;
- meia vida de protenas (sinal para degradao);
- stios especficos de interao.
Outras Modificaes Ps-traducionais
Seet et al., 2006.
Lys ou Arg
Lys
KATs x KDACs
Outras Modificaes Ps-traducionais
Seet et al., 2006.
Prolina
Lys
Outras Modificaes Ps-traducionais
Yang XJ, 2005.
Importncia atribuda ubiquitinao vem
crescendo...
Crosetto et al., 2006.
(Leva a ativao de IKK)
Importncia atribuda ubiquitinao vem
crescendo...
Seet et al., 2006.
# SUMO- small
ubiquitin-like
modifier.
OBS. Modificaes no esto restritas a
protenas, lipdeos tambm sofrem
modificaes com impacto importante
na transduo de sinal.
Figure 15-18 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Protenas G: Importante Classe de Molculas
Sinalizadoras Intracelulares
- PtnG so protenas monomricas ou trimricas, capazes de se ligar a GTP ou GDP;
- Quando ligadas a GTP esto ativas e quando ligadas a GDP inativas;
- A atividade das PtnG regulada por 2 classes de protenas;
GAPGTPase activating protein
INATIVAM,
pois induzem hidrlise do GTP
GEF guanidine exchange factor
ATIVAM
pois induzem ligao ao GTP
- PtnG tm atividade GTPsica intrnseca;
Capacidade de hidrolisar GTP, gerando GDP e Pi > auto-inativao
Animao RAS
RAS
Karnoub & Weinberg, 2008.
FAMLIA RAS
Karnoub & Weinberg, 2008.
Sinal A
Ncleo
Ambiente
Extracelular
Sinal B
Membrana
Plasmtica
Citoplasma
Receptor 2
Sinal C1
Receptor 3
Sinal D
Receptor 4
Receptor 1
Sinais Distintos Reconhecem Receptores Especficos
Sinal C2
1500 genes no genoma humano codificam receptores
+splicing alternativo/edio de RNA
+modificaes ps traducionais.
Sinal A
Ncleo
Ambiente
Extracelular
Sinal B
Membrana
Plasmtica
Citoplasma
Sinal C
Sinal D
TIPOS DE RECEPTORES
Maioria dos Receptores Intracelulares so Fatores de
Transcrio ativados por Ligantes Hidrofbicos
Dimerizao comum a vrios receptores intracelulares!
Figure 15-12b Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
GUANILIL CICLASE ATUA COMO UM RECEPTOR INTRACELULAR PARA NO
Viagra- inibe a fosfodiesterase
de GMPc, mantendo nveis
elevados deste 2
o
mensageiro
Fluxo sanguneo e
manuteno da
ereo
Sinal A
Ncleo
Ambiente
Extracelular
Sinal B
Membrana
Plasmtica
Citoplasma
Sinal C
Sinal D
TIPOS DE RECEPTORES
Ligante A
Ncleo
Ambiente
Extracelular
Membrana
Plasmtica
Citoplasma
Canais Inicos
Fluxo de ons depende
da seletividade do canal inico
e do gradiente eletroqumico do on
- Receptores oligomricos que formam poros permeveis a ons na Membrana Plasmtica
- Alterao do potencial eltrico j uma forma de sinalizao intracelular
- Se ativados, abrem-se, permitindo entrada de ons
Ligante A
Ncleo
Ambiente
Extracelular
Membrana
Plasmtica
Citoplasma
Canais Inicos
Fluxo de ons depende
da seletividade do canal inico
e do gradiente eletroqumico do on
Segundo
mensageiro
Neurotransmissor Glutamato
Ca
++
Protena alvo X
- Receptores oligomricos que formam poros permeveis a ons na MP
- Alterao do potencial eltrico j uma forma de sinalizao intracelular
- Se ativados, abrem-se, permitindo entrada de ons
- O on clcio tambm atua como segundo mensageiro
Ca
2+
COMO SINALIZADOR INTRACELULAR.
Manuteno de baixas concentraes citoplasmticas: 10
-7
M.
Calmodulina uma protena ligadora de clcio capaz de ativar
diferentes Molculas Sinalizadoras Intracelulares
Calmodulina e seus stios
de ligao ao Clcio
Ativao da CaMKII pela Ca
2+
/Calmodulina
Existem outras vias de sinalizao reguladoras dos nveis de clcio
Memria molecular
Ca
2+
COMO SINALIZADOR INTRACELULAR.
Roderick & Cook, 2008.
Ca
2+
COMO SINALIZADOR INTRACELULAR.
Roderick & Cook, 2008.
Figure 15-7 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Junes Comunicantes
GAP JUNCTIONS- JUNES COMUNICANTES
VDEO Ca
2+
Sinal A
Ncleo
Ambiente
Extracelular
Sinal B
Membrana
Plasmtica
Citoplasma
Sinal C
Sinal D
TIPOS DE RECEPTORES
-Interao do ligante ao receptor altera sua conformao e induz
ligao da subunidade a GTP> Ativao da PtnG
-Em seguida, h dissociao da subunidade do dmero /
-A inativao da PtnG ocorre quando a subunidade
hidrolisa GTP a GDP, retornando ao seu estado inativado e
se reassociando a /
-Tanto a subunidade ativada, quanto o dmero /,
interagem e regulam alvos celulares distintos
denominados protenas efetoras
RECEPTORES ACOPLADOS A PTN G (GPCR)
Sinalizao Celular
(parte 2)
Mariana S. Silveira
Inst.de Biofsica Carlos Chagas Filho
AMP
cclico
Neurotransmissor Dopamina, Neuropeptdeos, Hormnios
Receptor
Adenilato
Ciclase
Gs
ATP
+
PKA
inativa
PKA ativada
Ncleo
BDNF
Creb
Creb
Via Gs, Adenilato Ciclase, AMPc no Controle de Sobrevivncia Celular
1 segundo mensageiro descrito
Table 15-1 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Canais Inicos Regulados por Nucleotdeos Cclicos Participam da
Transduo de Sinais Sensoriais: Sabor, Odor e Luz
AMP
cclico
Odorantes (cheiros)
Receptor
Adenilato
Ciclase 3
Golf
ATP
+
Despolarizao
Disparo
de
Potencial de Ao
Liberao
de
Neurotransmissores
Na
+
Ca
++
EPAC
EPAC
As protenas Epac so tambm alvos diretos de AMPc
Grandoch et al, 2010.
Epacs so GEFs!
Ptn Gq ativa a enzima Fosfolipase C que induz a Produo dos
Segundos Mensageiros IP3 e DAG a partir de PIP2
Ca
2+
COMO SINALIZADOR INTRACELULAR.
Roderick & Cook, 2008.
Protena Cinase C (PKC) outra importante Molcula Sinalizadora
Intracelular
Mackay & Twelves, 2007.
Protena Cinase C (PKC) outra importante Molcula Sinalizadora
Intracelular
Mackay & Twelves, 2007.
Ser/Thr Cinases
GPCR
Amplificao do Sinal Inicial uma Caracterstica Importante das Vias
de Sinalizao mediada por Segundos Mensageiros
Sinal A
Ncleo
Ambiente
Extracelular
Sinal B
Membrana
Plasmtica
Citoplasma
Sinal C
Sinal D
TIPOS DE RECEPTORES
Receptores acoplados a enzimas
1- Receptores tirosina cinase
(atividade intrnseca ou associada)
2- Receptores serina/treonina cinase
(atividade intrnseca)
3- Receptores guanilato ciclase
nico domnio transmembrana
4- Receptores histidina cinase (atividade associada)
5- Receptores-like tirosina fosfatase (ligantes especficos ainda no foram identificados)
1-Receptores Tirosina Cinase (RTKs)
Figure 15-53a Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
DIMERIZAO DE RTKs
Aumento da
atividade de cinase
+
Gerao de stios de
alta afinidade para
ligao de outras
protenas
Diferentes Domnios de Associao de um mesmo receptor podem Recrutar
Diferentes Componentes Ativadores de Vias de Sinalizao
Figure 15-55a Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
PI3K uma cinase de Lipdeos que Regula vias de Proliferao,
Sobrevivncia e Crescimento Celular
Ligantes que ativam Pi3K
Via das MAP Cinases (mitogen-activated protein kinases)
Via das MAP Cinases (mitogen-activated protein kinases)
SOS
Grb2
Raf
MEK
Erk
Torii et al., 2006.
Fatores de Crescimento Regulam a Expresso de Molculas
Necessrias para a Progresso no Ciclo Celular
Torii et al., 2006.
Sinalizao Ativada por Tirosina Cinases Solveis
Ligantes que sinalizam pela via Jak-Stat incluem:
Interleucinas, interferon, GH, prolactina e a eritropoetina
Serina treonina cinase
TGF
SMAD
2-Receptores para protenas da Superfamlia TGF- Tm Atividade
Intrnseca de Serina/Treonina Cinase
Importncia crucial no controle de expresso da
protena reguladora de proliferao celular p15
Ink4b
.
SINALIZAO MEDIADA POR
RECEPTORES QUE NO SE ENCAIXA
NAS CATEGORIAS DISCUTIDAS
ANTERIORMENTE
(participao de protelise):
Notch-delta
Wnt
HH/Shh
Outros tipos de receptores de membrana
Via Notch-Delta
Sinalizao Intracelular Regulada por Protelise
Receptor Transmembrana
ativado por protenas TM de
clulas adjacentes (Delta,
Jagged)
Notch crucial para o
desenvolvimento de vrios
sistemas, especialmente o
sistema nervoso
>sinalizao anti-
neurognica
Fascinante possibilidade de
sinalizao bidirecional
Figure 15-75 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
INIBIO LATERAL
EM DROSOPHILA
Figure 15-77 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Sinalizao Intracelular Regulada por Protelise
ex. c-myc
VIA CANNICA
VIAS NO CANNICAS DE WNT
Inestrosa e Arenas, 2009.
Shh
SINALIZAO DE HH EM DROSOPHILA
Figure 15-78b Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
SINALIZAO DE HH EM DROSOPHILA
D
SINALIZAO DE SHH EM MAMFEROS
So 3 os fatores de
transcrio envolvidos:
Gli1- ativador
Gli2- ativador ou repressor
Gli3 - repressor (ativador?)
Sinalizao descrita
como ocorrendo no clio
primrio (primary
cilium).
Adaptado de Dessaud et al., 2008.
block
enhance
OUTROS CONCEITOS DA MODULAO DA
SINALIZAO DE RECEPTORES DE MEMBRANA
Sofrem dessensibilizao:
GPCRs
Receptores com atividade cataltica
Canais inicos
DESSENSIBILIZAO DE RECEPTORES
Endocitose e Sinalizao Intracelular
Endocitose termina a sinalizao
DESSENSIBILIZAO de receptores
acoplados a PtnG
PORM, ALM DISSO...
Sinalizao por receptores endocitados
gera sinalizao diferente dos
receptores localizados na membrana
Descrito para receptores Trk e GPCR.
Sorkin & von Zastrow, 2002.
Endocitose e Sinalizao Intracelular
Adaptado de Rajagopal et al., 2005.
DIMERIZAO DE RECEPTORES
T
e
r
r
i
l
l
o
n

&

B
o
u
v
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,

2
0
0
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.
TRANSATIVAO DE RECEPTORES
D
e
l
c
o
u
r
t

e
t

a
l
.
,

2
0
0
7
.
IMPORTANTE:
Pense numa teia, no em linhas paralelas
A Sinalizao Intracelular NO LINEAR!
Comunicao Cruzada entre Vias de Sinalizao
Como Restringir?
COMPARTIMENTALIZAO DE SINAIS
COMPARTIMENTALIZAO DE SINAIS
Protenas Adaptadoras
Diferentes Domnios de Associao de um mesmo receptor podem Recrutar
Diferentes Componentes Ativadores de Vias de Sinalizao
BALSAS LIPDICAS E CAVOLAS
(Lipid rafts)
Compartimentalizao de Sinais
Domnios de Membrana
MAP cinases e conceitos importantes em sinalizao celular
Shaul & Seger, 2007.
Complexidade e Sinalizao Celular
http://www.mfpl.ac.at/index.php?cid=51
Max Perutz Laboratories
Fimia & Sassone-Corsi, 2001