Preparacin de Medios de Cultivo y Soluciones

I. INTRODUCCIN

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento
de los microorganismos. La composicin precisa depender de la especie que se quiera
cultivar, porque las necesidades nutricionales varan considerablemente.

Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio
normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias
como vitaminas, suero o sangre para crecer.

Por su minsculo tamao, los microorganismos no pueden estudiarse como individuos,
sino que es necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos, es
decir, favorecer su multiplicacin in Vitro, en ambientes especiales que proporcionen las
condiciones semejantes a las de sus hbitats naturales. En estos ambientes se debe
eliminar a todos aquello microorganismos que interfierenen el estudio del microorganismo
de inters, al que adems de proporcionar los nutrientes necesarios parasu crecimiento
multiplicacin.

OBJETIVOS
1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de
los microorganismos.
3. . Adquirir la idea de la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las
tcnicas ms comunes para realizarlo.





II. MARCO TEORICO
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y
en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos
medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiologa por lo que un control en su
fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y
reproducibilidad de los resultados obtenidos.
En muchos aspectos, el pequeo tamao de los microorganismos los hace sujetos ideales
para laexperimentacin. Se pueden cultivar millones de organismos en un solo mililitro de
medio para su estudio.Para llevar a cabo experimentos con microorganismos
esusualmente necesario cultivarlos en el laboratorio

Clasificacin de los medios de cultivo
De acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en:
Medios naturales o complejos:
Constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, lasque son usualmente
complementadas por la adicin de minerales y otras sustancias. En ellos no seconocen
todos los componentes ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.
Medios definidos o sintticos:
Son los medios que tienen una composicin qumica definidacualitativa y
cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigacin (Para
bacteriascomo:Echerichia coli y Leuconostoc citrovorum)
De acuerdo al uso del medio de cultivo, stos se clasifican en:
Medio de enriquecimiento:
Son medios lquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en
particular. Permiten aumentar el nmero de microorganismos de ese tipo. Usualmente
contienen una o ms sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con
excepcin de los que se quieren cultivar.
Medios selectivos:
Son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios slidos y estn
diseados para el aislamiento de microorganismos especficos.
(Para bacterias como: Salmonella typhi y Clostridium botulinum)
Medios diferenciales:
Son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad microbiana
de los microorganismos. No contienen ningn tipo de sustancia con actividad
antimicrobiana. Permiten revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos.
(Parabacterias como:Streptococcus pyogenes y Escherichia coli)
Por su composicin los medios de cultivo se clasifican en:
Lquido:
Slidos:
Semislidos:

Mtodos de esterilizacin
La esterilizacin es un proceso a travs del que se puede lograr la destruccin total de los
microorganismos viables presentes en un determinado material. Este procedimiento es de
gran utilidad dentro del campo farmacutico, ya que existen muchos procesos que
requieren la utilizacin de materiales estriles
Existen varios mtodos de esterilizacin, detallados a continuacin
1. Mtodos fsicos
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor hmedo el cual
destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor seco que
destruye a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares. El calor es
considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y cuando el material
a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao

a) Esterilizacin por calor: El calor es el mtodo de eleccin para esterilizar el
material de laboratorio resistente a las altas temperaturas. La temperatura y el
tiempo requeridos para esterilizar un material dependende que se est utilizando
calor seco o calor hmedo.
Esterilizacin con calor seco:

La accin bactericida del calor seco se debe a la oxidacin fsica de un procedimiento
lento o coagulacin de la protena bacteriana por quemadura. En ausencia
de humedad se necesita una temperatura ms alta, ya que en esta forma los
microbios son destruidos al absorber el calor. Pueden ser dos tipos:

- Di r ect a: f l ameado o i nci ner aci n ms ut i l i zada en laboratorios y en
algunos hospitales pequeos.

- I ndi r ec t o: ai r e c al i ent e u hor no de Pas t eur c on temperatura de
160C a 180C por 1 a 2 horas siendo el ms eficaz y seguro el elctrico.

Calor hmedo (en autoclave de vapor)

El calor hmedo es la forma de vapor saturado a presin es eficaz para la
destruccin de todas las formas microbianas, incl uso espora. La muerte de
las bacterias es causad a por la desnaturali zacin y coagulacin de su
protena o su sistema intercelular enzima-protena. Estas reacciones son
catolizadas por medio del agua. Estas pueden de dos tipos:


Calor hmedo discontinuo: algunos medios de cultivo que contiene
carbohidratos como la gelatina, leche, etc. no soportan temperaturas elevadas
y se realiza mediante los siguiente procedimientos:

Tindalizacin: hace uso del calor hmedo, para una buena esterilizacin se
debe realizar a 100C por hora (por tres veces discontinuas) durante 1 da.

Ebullicin: es el paso de un lquido al estado de vapor. El agua en ebullicin
representa en forma eficaz y prctica de proporcionar una desinfeccin de alto
nivel de instrumentos y guantes que entren en contacto de las membranas
mucosas, si bien al hervirlos por 20 minutos se aniquilan todas las formas
vegetativas de las bacterias, los virus, las levaduras y los hongos, pero no
destruye a las esporas.

Pasteurizacin: Elimina a todos los microorganismos no esporulados se puede
variar las temperaturas por ejemplo: 62C por 30 min.; 70C por 15 min. Se
utiliza para preservar alimentos como ser leche, cerveza



Vapor a presin: conocido como autoclave, que posee todos los requisitos
indispensables como grados de temperatura y tiempo de exposicin, que junto
con el tamao del autoclave y el flujo del vapor, la densidad y el tamao de la
carga en la cmara aumentan la tasa se muerte de los microorganismos, en
una temperatura de 121C 132C durante 15 minutos o ms.

La cmara presurizada utilizada normalmente en el laboratorio es el autoclave. En
muchos aspectos una autoclave se parece a una olla de presin casera. De hecho, en
algunos pequeos laboratorios de microbiologa se utilizan estas ollas en lugar de
autoclaves. Ambos son recipientes de metal con paredes suficientemente fuertes para
resistir la presin de vapor.

Las autoclaves son grandes cmaras de acero inoxidable que funcionan
automticamente. Los objetos deben ser colocados de manera que el vapor de agua
entre en contacto con todas las partes de cada uno de ellos, y el aire no quede
atrapado en su interior. El aire que no es reemplazado por vapor crea una bolsa seca,
donde la esterilizacin no ser efectiva.



b) Esterilizacin por radiacin:

La ionizacin por radiacin genera iones al liberar electrones de los tomos, estos se
desprenden violentamente con tomos adyacentes y se une a ellos, o bien se desprenden
del segundo tomo. La energa liberada se transforma en energa trmica o qumica la
cual causa la muerte de los microorganismos al romper la molcula del ADN e impide la
divisin molecular y la propagacin de la vida. Las principales fuentes de radiacin
ionizante son las partculas Beta y rayos gamma.

Ventajas:

- Penetra la mor parte de todos los materiales para esterilizarlos con confiabilidad

- Es el mtodo de esterilizacin ms eficaz

- No genera radiacin residual

- Penetran en objetos grandes y voluminosos.



2. Mtodos mecnicos

La filtracin permite la remocin de todos los microorganismos presentes en un lquido o
un gas retenindolos sobre la superficie de un material.

Filtracin

Las clulas microbianas pueden retirarse de los lquidos o gases por filtracin. La filtracin
es lenta y cara (debe usarse un filtro nuevo cada vez); por esta razn, se utiliza slo para
los lquidos termolbiles, que no se pueden esterilizar en el autoclave. Los slidos
termolbiles tambin se pueden esterilizar por filtracin, si previamente se disuelven en un
lquido. Tcnicamente, la filtracin no esteriliza porque los virus pueden pasar a travs de
los filtros, pero el proceso es suficiente para la mayora de los estudios de rutina que se
llevan a cabo en el laboratorio.

3. Mtodos qumicos
Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque
tienen la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces de daar los
componentes celulares de los microorganismos (protenas, membranas, etc.)
Esterilizacin por gas oxido de etileno:
Este es un gas incoloro, soluble en agua y en solventes comunes, se emplea para
esterilizar objetos sensibles al calor, este proceso es relativamente lento. El poder
bactericida depende de la concentracin del mismo gas, temperatura, humedad y tiempo
de exposicin. La actividad esporicida se produce por aniquilacin de los grupos
terminales hidroxilo, carboxilo, amino y sulfridrilo.
Esterilizacin por glutaraldehido:
La solucin acuosa de glutaraldehido activado y amortiguado al 2%,destruye a los
microorganismos por desnaturalizacin de la protena. Es preferida para esterilizar
instrumentos que no pueden esterilizarse al vapor o no se cuenta con otro mtodo de
esterilizacin.
Alcohol
Aldehdos


MATERIALES
- Agar Nutritivo
- Agua Destilada
- Matraz
- Cocineta
- Tubos de ensayo
- Algodn, papel
- Balanza



III. PROCEDIMIENTO
1. Agar Nutritivo 250 ml en matraz
- Pesar 1.3 gr de agar nutritivo colocar en un matraz.








- Hidratar en 250 ml de agua destilada, luego homogenizar con calor y agitando;
mezclar.










- Despus pasamos a esterilizar la muestra (temperatura y tiempo de exposicin)
para eliminar los microorganismos que pudieran haber quedado en el medio. A
una temperatura 121c durante 15-20 min, siempre envolviendo la muestra con
papel







- Y por ltimo envolverlo con papel se coloc el medio en un lugar fresco, con poca
humedad y protegidos de la luz solar directa y libre de contaminacin (Estufa).
CONCLUSIONES
Por medio de esta prctica al investigar la teora y realizar la preparacin de un medio de
cultivo, se logrla elaboracin adecuada de los mismos, as como la seleccin apropiada
para el uso que se les dar posteriormente a los medios del mtodo de esterilizacin que
eliminara los restos microbianos que pudiesen haber quedado en el medio de cultivo ya
que si existe alguno de estos, ya no sera adecuadopara el uso que se le pudiera llegar a
dar.
Tambin se logro aprender los diferentes tipos de Esterilizacin y su importancia para la
Industrial de los alimentos.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFIA
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/preparacion-de-medios-de-cultivo
http://es.scribd.com/doc/14173118/4-Esterilizacion-y-Preparacion-de-Medios-de-
Cultivo