Cdigo: UPT-PIB-01 Pgina 1 de 7

Fecha Rev.: 1/mayo /2014 Nm. Rev.: 0

Elabor:
M. en C. Gabriela Vargas Oliver, Dr. Eric
Ortega Sanchez
Revis: Academia de Biotecnologa
Aprob: Dr. Saul Tlecuitl Beristain

Aislamiento del ADN

Documento Controlado
1. Objetivo y Alcance

1.1 Objetivo:
El alumno aislar y observara el ADN extrado de forma rudimentaria.


1.2 Alcance.
Esta prctica aplica para su realizacin en el laboratorio ligero del PE de Ingeniera Biotecnologa
de la Universidad Politcnica de Tlaxcala



2. Seguridad y declaraciones

2.1 Indicaciones de seguridad
1 Uso obligatorio de bata blanca, guantes, botas y lentes de seguridad.


2.2 Trminos especficos
El aislamiento del ADN es el principio de muchos mtodos usados en la ingeniera gentica,
como la transformacin, secuenciacin, mapeo fsico, mutagnesis sitio dirigidas, etc. El
aislamiento de los cidos nucleicos implica la destruccin de la clula por choque osmtico;
homogeneizacin, digestin enzimtica o tratamiento mecnico suave.

2.3 Vigencia
Mayo-agosto 2014



3. Desarrollo de la prctica

3.1 Equipo necesario para el desarrollo de la prctica
1 Mortero y pistilo 3 Aplicadores de madera o palillos
3
1
Tubos de ensayo de 15 X 125 mm
Probeta de 250 ml
Muestra biolgica: ajo, jitomate,
cebolla o fresas.
1 Pipeta de 10 ml 1 Agitador (vortex)
1
1
Pipeta pasteur
bulbo
1
1
Par de guantes de ltex
Varilla de vidrio
2 Vaso de precipitado de 250 ml Papel filtro
1 Centrifuga 1 Propipeta
1

2
Bandeja de metal o hielera de
unicel
Tubo de ensaye de 13 X 100 mm
1


pizeta







Cdigo: UPT-PIB-01 Pgina 2 de 7
Fecha Rev.: 1/mayo /2014 Nm. Rev.: 0
Elabor:
M. en C. Gabriela Vargas Oliver, Dr. Eric
Ortega Sanchez
Revis: Academia de Biotecnologa
Aprob: Dr. Saul Tlecuitl Beristain

Aislamiento del ADN

Documento Controlado


3.2 Sustancias o insumos

Cant. Reactivo Cant. Reactivo
Agua destilada 1 Detergente liquido o champ
1 Bicarbonato de sodio
1 l Alcohol isoamilico
NaCl



3.2

Estudiante
Fase 1 de la prctica: Preparacin de la solucin tampon
3.2.1 Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y
mantener en el refrigerador o en un bao de hielo triturado:

120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No
usar agua de la llave.
1,5 g de NaCl, preferiblemente puro.
5 g de bicarbonato sdico.
5 ml de detergente lquido o champ.

3.3.2 Fase 2 de la practica: Extraccin del ADN
1. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los
vegetales (cebolla, ajo, tomates, fresas, etc.) y cortarla en
cuadraditos.
2. Triturar la muestra con un poco de agua en el mortero. As
se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a la
accin del detergente.
3. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con
10 ml del tampn fro y agitar vigorosamente durante al
menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales ms
grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador
lo ms fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5
minutos y despus pipetear el sobrenadante.
4. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensaye y aadir
con pipeta 10 ml de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se
debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna
del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar
flotando sobre el tampn.
5. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo
debajo de la separacin entre el alcohol y el tampn.
Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco
se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN.
Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de
alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo
con el aspecto de un copo de algodn mojado.


Cdigo: UPT-PIB-01 Pgina 3 de 7
Fecha Rev.: 1/mayo /2014 Nm. Rev.: 0
Elabor:
M. en C. Gabriela Vargas Oliver, Dr. Eric
Ortega Sanchez
Revis: Academia de Biotecnologa
Aprob: Dr. Saul Tlecuitl Beristain

Aislamiento del ADN

Documento Controlado

3.2 Registro de resultados
3.2.1 Anota como se observa el ADN fsicamente.










4. Referencias

4.1) Procedimientos relacionados

No existen procedimientos relacionados



5. Anexos

5.1) CUESTIONARIO

Cul es la funcin del detergente y agentes quelantes en la purificacin del ADN?

Por qu se dice que las protenas contaminan al ADN purificado?

Por qu es til el estudiar y analizar al ADN de una clula?

Si todos los organismos vivos tienen ADN en sus clulas, Que es lo que hace a los organismos
diferentes de otros?

5.2) Informacin:
Manejo de Residuos:


6. Revisiones

No. Revisin Descripcin
0 Creacin del documento.



Cdigo: UPT-PIB-01 Pgina 4 de 7
Fecha Rev.: 1/mayo /2014 Nm. Rev.: 0
Elabor:
M. en C. Gabriela Vargas Oliver, Dr. Eric
Ortega Sanchez
Revis: Academia de Biotecnologa
Aprob: Dr. Saul Tlecuitl Beristain

Aislamiento del ADN

Documento Controlado
Anexos

5.1 Formatos















ELABORA: FECHA:
TITULO:
OBSERVACIONES:
ACADEMIA DE INGENIERIA QUIMICA
ACUSE DE ENTREGA DE MANUAL
SE ENTREGA MANUAL DE ASIGNATURA PARA:
REVISION
REVISION
MODIFICACION
ES
APROBACION Otros
RECIBIO: FECHA:
UPT-PIQ-01 F1

Cdigo: UPT-PIB-01 Pgina 5 de 7
Fecha Rev.: 1/mayo /2014 Nm. Rev.: 0
Elabor:
M. en C. Gabriela Vargas Oliver, Dr. Eric
Ortega Sanchez
Revis: Academia de Biotecnologa
Aprob: Dr. Saul Tlecuitl Beristain

Aislamiento del ADN

Documento Controlado

5.2 Formatos

Cdigo: UPT-PIB-01 Pgina 6 de 7
Fecha Rev.: 1/mayo /2014 Nm. Rev.: 0
Elabor:
M. en C. Gabriela Vargas Oliver, Dr. Eric
Ortega Sanchez
Revis: Academia de Biotecnologa
Aprob: Dr. Saul Tlecuitl Beristain

Aislamiento del ADN

Documento Controlado

TITULO:
No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
OBSERVACIONES:
DESTINO DEL DOCUMENTO: REVISION: RESGUARDO:
SUSTITUYE AL
ANTERIOR:
LISTA DE DISTRIBUCION
UPT-PIQ-01-F2 ACADEMIA DE INGENIERIA QUMICA
FECHA NOMBRE
ELABORA:
SE ENTREGA UNA COPIA CONTROLADA DE MANUAL DE ASIGNATURA
PUESTO FIRMA

Cdigo: UPT-PIB-01 Pgina 7 de 7
Fecha Rev.: 1/mayo /2014 Nm. Rev.: 0
Elabor:
M. en C. Gabriela Vargas Oliver, Dr. Eric
Ortega Sanchez
Revis: Academia de Biotecnologa
Aprob: Dr. Saul Tlecuitl Beristain

Aislamiento del ADN

Documento Controlado
5.2 Mapa de proceso del procedimiento.