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Coordinacin de Laboratorios
Programa de QFBT

Manual de Practicas
Biologa Celular


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Escuela de Ciencias de la Salud

Manual de Biologa
Celular

M.C. Homero Hernndez Flores

Saltillo, Coahuila, Mxico.
Agosto 2012

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INSTRUCCIONES GENERALES

Para el desarrollo de las prcticas es conveniente tener en cuenta
algunas normas elementales que deben ser observadas con toda
escrupulosidad.
1. Antes de realizar una prctica, debe leerse detenidamente para
adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y tcnica. Los resultados
deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se conozcan.
2. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de
laboratorio. En consecuencia, al terminar cada prctica se proceder a
limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado.
3. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y
de su material.
4. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para
asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su
manipulacin.
5. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los
productos utilizados sin consultar con el profesor
6. No tocar con las manos y menos con la boca los productos
qumicos.
7. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas
y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el
forzar sus mecanismos.
8. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben
mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar
tubos de ensayo con estos productos, se har al bao Mara, nunca
directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener
mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama.
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9. Cuando se manejan productos corrosivos (cidos, lcalis, etc.)
deber hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los
vestidos. Nunca se vertern bruscamente en los tubos de ensayo, sino que
se dejarn resbalar suavemente por su pared.
10. Cuando se quiera diluir un cido, nunca se debe echar agua sobre
ellos; siempre al contrario: cido sobre agua.
11. Cuando se vierta un producto lquido, el frasco que lo contiene se
inclinar de forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar
que si escurre lquido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar
el contenido del frasco.
12. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual,
una jeringuilla o artilugio que se disponga en el laboratorio.
13. Las pipetas se cogern de forma que sea el dedo ndice el que
tape su extremo superior para regular la cada de lquido.
14. Al enrasar un lquido con una determinada divisin de escala
graduada debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente
graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal.
15. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen
lquidos debe evitarse la ebullicin violenta por el peligro que existe de
producir salpicaduras. El tubo de ensayo se acercar a la llama inclinado y
procurando que sta acte sobre la mitad superior del contenido y, cuando
se observe que se inicia la ebullicin rpida, se retirar, acercndolo
nuevamente a los pocos segundos y retirndolo otra vez al producirse una
nueva ebullicin, realizando as un calentamiento intermitente. En
cualquier caso, se evitar dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra
persona.
16. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo
despus de haberlos calentado con el fin de evitar roturas.
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17. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes
para evitar que se engrasen.




















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PRACTICA 1
MICROSCOPIO
OBJETIVO. Que el alumno se familiarice con las partes del microscopio, su uso y su
cuidado


PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO
Sistema ptico
OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo.
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin.
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
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FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecnico
SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular,
binocular.
REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico
que consigue el enfoque correcto.

MANEJO DEL MICROSCOPIO PTICO
1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina
completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera
estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el
de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias.

4. Para realizar el enfoque:
a) Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo
macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del
ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin
pudindose daar alguno de ellos o ambos.

b) mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo
de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la
muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.
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5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de
objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo
anterior y repetir la operacin desde el paso b. El objetivo de 40x enfoca a muy poca
distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con
aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de
inmersin.
6. Empleo del objetivo de inmersin:
a) Bajar totalmente la platina.

b) Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que
nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite.

c) Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino
entre ste y el de x40.

d) Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.

e) Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de
inmersin.

f) Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se
adosara a la lente.

g) Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre
el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo
que el riesgo de accidente es muy grande

h) Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se
puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por
tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el
paso 3.

i) Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se
coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede
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retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en
posicin de observacin.

j) Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial
para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.


MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en
posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale
del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con
su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma
prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el
microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda
en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos
recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con
suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con
una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza,
porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico,
micromtrico, platina, revlver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada
a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a
travs del ocular.
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8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn
lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido
en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin
prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los
mismos.


FACTORES QUE DAAN AL MICROSCOPIO.
1. Lavar las lentes con alcohol.
2. Mojar los objetivos con xilol o alcohol, o bien con alguna otra sustancia.
3. Usar papel ordinario para limpiar las lentes.
4. Poner los dedos sobre las lentes.
5. Limpiar el soporte o la platina con xilol.
6. Limpiar el interior de las lentes con tela o papel, en caso de que sea
completamente necesario, utiliza un pincel de cerdas muy pequeas y/o utiliza papel
seda.
7. Dejar el microscopio sin oculares.
8. Guardar el microscopio con aceite de inmersin en el objetivo.
9. Transportar el microscopio con una sola mano


OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS:
Microscopio de Contraste de Fases. Su sistema est compuesto por lente ocular,
anillo de fases, lente del objetivo, lente del condensador y diafragma anular. Tiene una
amplificacin de 1,000 a 2,000 nm. Permite observar estructuras muy difciles de
distinguir. No requiere de una tincin.
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Microscopio de Fluorescencia. Se compone de un primer filtro de corte o filtro de
excitacin, espejo dicroico, segundo filtro de corte o filtro de emisin, fuente de
iluminacin y condensador. Se observan muestras teidas, inmunofluorescencia directa o
indirecta.
Microscopio de Interferencia. Es un instrumento que permite la medida de la masa
de regiones pequeas y transparentes de clulas vivas, obtenindose datos de tipo
cualitativo y cuantitativo. Sus componentes son analizador rotable, un cuarto de longitud
de onda, objetivo de interferencia, condensador, polarizador y filtro de interferencia.
Microscopio Electrnico de Barrido. Est compuesto por un can de electrones
(nodo, ctodo y electroimn), sistema de barrido y de lentes. Su resolucin depende de
la cantidad de electrones emitidos, contando as con un lmite de resolucin. Tiene una
amplificacin de 100,000 a 200,000 veces y una alta resolucin en 3D.
Microscopio Electrnico de Transmisin. Est compuesto por can electrnico,
lente condensadora, cmara de muestra, lente objetiva, lente intermedia, proyector,
pantalla fluorescente y cmara (placa fotogrfica). Utiliza electrones con una longitud de
onda de 0.5 . Proporciona un aumento de las clulas de 100, 000 veces
aproximadamente

CUESTIONARIO:

1) Cual es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto?

2) Que importancia tiene el uso del microscopio en la Biologa Celular?

3) Porqu es necesario utilizar aceite de inmersin al utilizar el objetivo del mismo
nombre?

4) Que significa resolucin, poder de resolucin y amplificacin, as mismo de que
factores depende cada uno de ellos? Presenta tus respuestas a manera de tabla.

5) Realiza una tabla comparativa de todos los tipos de microscopios incluyendo:
fuente de iluminacin, condensador, longitud de onda, tipo de tincin, resolucin,
amplificacin, tipo de lentes, etc.


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PRACTICA 2

PREPARACIN DE FROTIS BACTERIANO

OBJETIVO. Que el alumno se familiarice con la tcnica de tincin directa de
bacterias y aprenda a fijar por mtodos qumicos y fsicos.

Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una
muestra o cultivo con objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya que si
aparecen agrupados en la preparacin es muy difcil obtener una imagen clara y ntida.
Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los
mtodos habituales de tincin que permiten la observacin al microscopio de las bacterias
sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijacin de una extensin
bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo
menos posible la morfologa y bacteriana y las posibles agrupaciones de clulas que
pudiera haber.

REALIZACIN DEL FROTIS

1. Colocar una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es
necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra,
ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mnima gota de
agua, que resulta suficiente.
2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad
del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. Remover la
mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea que quede
bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en
medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con
colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de
siembra, directamente sobre el portaobjetos.

3. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el
porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaucin de no
calentar demasiado el porta pues las clulas pueden deformarse o romperse.


FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS

1. Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos.
Dejar enfriar el porta entre los pases.
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2. Con metanol (para bacterias procedentes de medio lquido). Aadir unas gotas de
metanol sobre la extensin completamente seca. Golpear el portaobjetos por su
canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de
metanol. Esperar a que el metanol se evapore completamente.Una vez realizado el
frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser observadas al
microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el proceso
de tincin.

TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO

1. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que
indique el protocolo de cada tincin concreta. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. En
ocasiones el colorante tie slo en caliente, por lo que el tiempo que dure su
actuacin se deber sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del
mechero para que humee el colorante, pero teniendo mucho cuidado de que no
llegue a hervir ya que se producira la destruccin de las clulas.

2. Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se realiza
inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de
manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre
l, pues podra arrastrar parte del frotis consigo. Eliminar la mxima cantidad de
agua de los portaobjetos golpendolos por su canto con cuidado contra la
superficie de la mesa de trabajo.

3. Secar el portaobjeto presionando entre dos papeles de filtro, pero en ningn caso
se debe frotar el porta.

4. Observar la preparacin al microscopio llegando hasta el mximo aumento. Si se
quiere montar de forma definitiva no se debe usar ahora el aceite de inmersin

MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN

La tcnica siguiente es de aplicacin para cualquier preparacin microscpica que se
desee montar de forma definitiva. Se anotar en un extremo del portaobjetos el
contenido de la preparacin, la fecha y, en su caso, el nombre del alumno.

1. Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones
mantenindolos un mnimo de 5 minutos en cada bao. La serie de alcoholes
puede modificarse en funcin de la disponibilidad de los reactivos, pero el objetivo
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es que la preparacin quede totalmente deshidratada. Escurrir bien el reactivo
antes de introducirlo en el siguiente bao:
a) Alcohol de 70
b) Alcohol de 95
c) Acetona pura
d) Acetona-xilol (1:1)
e) Xilol

2. Montar la preparacin. Emplear blsamo de Canad, euparal o algn medio de
montaje sinttico. Utilizar preferiblemente cubreobjetos de 22x22 mm.



























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PRACTICA 3

OBSERVACIN DE BACTERIAS

OBJETIVOS

1. Realizar una tincin simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales
2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qu casos se recomienda una u
otra.
3. Observar la morfologa bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de
agrupaciones que existen.
4. Practicar con el microscopio al mximo aumento y con el correcto empleo del aceite de
inmersin.

MATERIAL

o Mechero Bunsen
o Asa de siembra
o Pinzas
o Portaobjetos
o Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro
dental, suelo, etc.
o Colorantes para tincin:
a) Solucin de cristal violeta al 1%
b) Solucin de safranina al 0,5%
c) Azul de metileno al 1%
o Microscopio y aceite de inmersin

BACTERIAS DEL YOGUR

El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la leche. A
escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4% de una
asociacin de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de
cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta
preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas distintas (cocos y
bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Adems,
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el tamao del lactobacilo (unos 30m de longitud) facilita la observacin aunque no se
tenga mucha prctica con el enfoque del microscopio.

1. Realizar el frotis disolviendo una mnima porcin de yogur en una pequea gota
de agua.
2. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa.
3. Teir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos.
4. Observar al mximo aumento del microscopio.

Bacterias del sarro dental

El sarro dental es un depsito consistente y adherente localizado sobre el esmalte
de los dientes. Est constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y
bacterias junto con sus productos metablicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es
muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la
preparacin, pero suelen abundar bacterias saprfitas, pudindose observar gran
variedad de morfologas: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.

1. Con una aguja enmangada tomar una pequea porcin de sarro dental y
disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos.
2. Dejar secar y fijar con calor.
3. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.

Bacterias del suelo

La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es
prcticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas,
incluso, desconocidas para los microbilogos. Para recoger la muestra y hacer el frotis
basta con dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una
maceta o de un jardn. Despus de varios das, las bacterias se habrn adherido al vidrio y
slo habr que fijarlas por calor y teirlas con un colorante cualquiera. Previamente hay
que limpiar los bordes del portaobjetos, as como la parte que no se va a teir.(1)

PREGUNTAS
1.- Qu tipos de morfologa y agrupacin aparecen en los frotis de los cultivos?
2.- Qu fin tiene la fijacin de muestras al realizar un frotis bacteriano?
3.- Seale las ventajas y desventajas de la tincin simple respecto del examen en
fresco.
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DIBUJOS
Suelo (Azul de metileno)






Suelo (cristal violeta)
Suelo (Safranina)






Sarro (azul de metileno)
Sarro (Cristal violeta)






Sarro (Safranina)
Yogurt (cristal violeta)






Yogurt(azul de metileno)
Yogurt (safranina)






Exudado farngeo (azul de metileno)
Exudado farngeo (safranina)






Exudado farngeo (cristal violeta)
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PRACTICA 4
TINCION GRAM

OBJETIVO. Que el alumno aprenda a clasificar las bacterias aplicando una tcnica
diferencial como es la tincin de Gram.

MATERIAL

Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Asa de siembra
Cubeta de tincin
Cultivo bacteriano
Pinzas
Yogurt
Frasco lavador
Tierra
Exudado farngeo
Mechero bunsen
Papel de filtro
Cristal violeta
Lugol
Alcohol-acetona
Safranina

TCNICA

1. Preparar los frotis bacterianos.
2. Teir con cristal violeta 1min.
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
4. Cubrir con Lugol 1min.
5. Lavar con agua el exceso de Lugol.
6. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la
preparacin deje de perder color (30seg)
7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
8. Teir con safranina 1min.
9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
10. Secar la preparacin.
11. Examinar al microscopio fijndose sobre todo en el color de cada
preparacin.

Los tiempos de exposicin a los colorantes son orientativos. Cada vez que se
prepara la batera de colorantes para realizar la tincin Gram presentan algunas
diferencias respecto a los preparados en otro momento, por lo que puede ser necesario
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ajustar los tiempos. En un laboratorio de Microbiologa, cada vez que se preparan los
colorantes, se suelen hacer pruebas con cultivos patrn de los dos tipos (Gram+ y Gram-)
para ajustar as los tiempos y tener la certeza de que el resultado de todas las tinciones
que se hagan mientras duren esos colorantes son fiables. Otra posibilidad es adquirir el
equipo completo de colorantes ya preparados, pero es mucho ms caro.

Dibujos





































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PRACTICA 5

MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO-INFECCIOSOS

OBJETIVO. Que el alumno identifique, maneje, envase y recolecte, los residuos
peligrosos biolgico infecciosos (R.P.B.I.) de manera adecuada y segura; siguiendo la
norma oficial mexicana NOM 087 ECOL 2002 y que conozca los principales mtodos de
desinfeccin.

MATERIAL
Recipientes y bolsas especiales para los RPBI











Residuos peligrosos biolgico infecciosos














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Equipo de seguridad requerido: bata de algodn de color blanco y
de manga larga, guantes de latex, lentes de seguridad.

Clasificacin de los establecimientos generadores de residuos peligrosos biolgico-
infecciosos
















Tabla de identificacin de residuos peligrosos biolgico infecciosos (RPBI)
















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Tabla de Identificacin y envasado de los RPBI





































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PRACTICA 6

OBSERVACIN DE PROTISTAS DE VIDA LIBRE

OBJETIVO. El alumno reconozca diferentes protistas de vida libre que se
desarrollan en nuestro medio ambiente los cuales varan de acuerdo a las estaciones del
ao. Los estanques en tu escuela o colonia contienen muchos protistas e invertebrados. La
composicin de estas comunidades varia a travs de los estanques y conforme avanza el
ao.


MATERIAL
Gota de agua estancada
Porta y cubreobjetos
Pipeta Pasteur
Microscopio
Verde de Malaquita
Azul de Metileno


TCNICA

1. Toma una gota de agua estancada y colcala en un portaobjetos. Cbrela
con un cubreobjetos. Observa al microscopio. Componentes celulares:
flagelos, cilios y diferentes medios de locomocin.

2. Toma una gota de agua estancada y aada una gota de azul de metileno
o verde de malaquita en el portaobjetos. Cbrela con un cubreobjetos.
Observa al microscopio. Componentes celulares: flagelos, cilios y
diferentes medios de locomocin







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Observaciones













































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PRACTICA 7

REPRODUCCIN ASEXUAL POR GEMACIN EN LEVADURAS

OBJETIVO. El alumno reconozca la reproduccin asexual en clulas eucariontes.

MATERIAL
Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Levadura
Agua azucarada
Asa bacteriolgica
Azul de Lactofenol
Azul de metileno

TCNICA

1. Disolver con ayuda de una aguja enmangada un poco de levadura sobre un porta
que contenga 2 o 3 gotas de agua ligeramente azucarada.
2. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio.
3. Repetir los pasos anteriores mezclando sobre el portaobjetos la suspensin
acuosa de la levadura con una gota de lactofenol-safranina. Con este procedimiento se
consigue una doble finalidad:

a) Ver mejor las clulas de las levaduras, teidas por la safranina.
b) Retrasar un poco el desprendimiento de las clulas hijas gracias a la accin
desfavorable del fenol para la vida normal de las levaduras










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Observaciones













































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PRACTICA 8

OBSERVACIN MICROSCPICA DE HONGOS

OBJETIVO. Que el alumno identifique los hongos microscpicos que se encuentran
en el ambiente. Los principales mtodos aplicados para la observacin microscpica de los
cultivos son: la observacin en fresco, con una solucin adecuada, y las preparaciones en
cinta adhesiva.

1. Realizar preparaciones en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de
mohos.
2. Observar la morfologa de los hongos y distinguir entre hifas septadas y no
septadas y entre distintos tipos de esporas y las estructuras que las originan.

MATERIAL

Portaobjetos y cubreobjetos (22x22 mm) muy limpios y desengrasados con
alcohol
Cubetas de Tinciones
Aguja enmangada o lanceta
Cinta adhesiva transparente
Trozo enmohecido de fruta o pan o un cultivo de hongos
Azul de Lactofenol
KOH
Microscopio

PREPARACIONES EN FRESCO DE MOHOS

Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado
grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa.
Realizar la misma operacin en otro portaobjetos que se usar para lavar la muestra.

1. Tomar el material a observar en una mnima cantidad con agujas finas o lancetas
procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno
de los portaobjetos. Con esta especie de lavado se consigue desprender el exceso
de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que
realmente interesa, los conidiforos.

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2. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que ser
ya el definitivo. Si se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas
en su interior por los conidiforos), se aplastarn stos ligeramente sobre la gota o
se seccionarn con un bistur.

3. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede
amontonado.

4. Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se
formen burbujas entre los dos vidrios.


PREPARACIONES EN CINTA ADHESIVA

1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado
grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado
gruesa.

2. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm.

3. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos
o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia
puede haber una excesiva concentracin de esporas.

4. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.

5. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro














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Observaciones Macroscpicas de los hongos













































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Observaciones Microscpicas de los Hongos













































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PRACTICA 9

OBSERVACIN DE CLULAS SANGUNEAS

OBJETIVO. Que el alumno conozca las diferencias estructurales entre clulas
animales y vegetales.

MATERIALES

Microscopio
Portaobjetos
Mechero de alcohol
Lanceta estril
Cubeta de tincin
Frasco lavador
Alcohol absoluto
Hematoxilina
Eosina
TCNICA

1. Con la lanceta estril realizar una puncin en un pulgar.

2. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos.

3. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la
superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina pelcula de
sangre. El porta absorbe la gota y la arrastra, pero sin pasar nunca por encima
de ella para no daar los hemates.








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4. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincin y aadir unas gotas de
alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparacin.

5. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos.
Evitar la desecacin del colorante agregando ms lquido.

6. Lavar la preparacin y aadir unas gotas de eosina dejndola actuar 1 minuto.

7. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.

8. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero.

9. Observar al microscopio.

OBSERVACIN MICROSCPICA

Al microscopio se vern con un dominio predominante los glbulos rojos, hemates
o eritrocitos teidos de color rojo por la eosina. No tienen ncleo y son ms delgados por
el centro que por los bordes. Los glbulos blancos o leucocitos se identifican fcilmente
por la presencia de ncleo, teido de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de
leucocitos:

A. Linfocitos: de tamao aproximado al de los glbulos rojos, tienen un solo ncleo
que ocupa casi todo el glbulo.

B. Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, ncleo
grande, redondo, son los ms mviles y su funcin principal es la fagocitosis.

C. Polimorfonucleares: ncleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinfilos,
con abundantes granulaciones teidas de rojo por la eosina, neutrfilos y basfilos.
Las plaquetas no son visibles ya que precisan una tcnica especial de tincin







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Observaciones Microscpicas de Clulas Sanguneas














































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PRACTICA 10

OBSERVACIN DE LAS CLULAS EPITELIALES DE NUESTRA BOCA

OBJETIVO. El alumno reconozca diferentes componentes de las clulas eucariotas
humanas. En esta seccin, preparars una muestra de tus clulas epiteliales. Adicionars
azul de metileno a tu muestra de clulas, esto volver visible el material nuclear a travs
del microscopio.

Nota: Estars observando clulas epiteliales de tu propia boca. Debido a
cuestiones de salud, es importante que sigas las instrucciones de acuerdo a las normas de
seguridad de los hisopos que usars para colectar tus clulas epiteliales.

MATERIAL

Hisopos
Porta y cubreobjetos
Azul de metileno
Papel secante
Pipetas pasteur
Cubeta de tincin
Microscopio

TCNICA
1. Utilizars un microscopio, un cubreobjetos, portaobjetos, y papel secante.

2. Cuidadosamente coloca una pequea gota de azul de metileno en el centro
del portaobjetos. Si usas demasiado se escurrir del cubreobjetos
ocasionndote problemas. Recuerda que es un colorante que penetrar
todo lo que toca, as que evita el contacto con tu ropa. Adiciona una gota
de agua a la laminilla.

3. Cuidadosamente usa la punta de un hisopo para frotar el tejido epitelial de
la mejilla dentro de tu boca, debajo de tu labio superior.

4. Gira esa parte del hisopo en el centro de tu laminilla. Antes de continuar
coloca ese hisopo en un bote de desechos con cloro al 10%.
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5. Utiliza pinzas para colocar un cubreobjetos sobre tu muestra y obsrvala al
microscopio. Antes de continuar coloca tu portaobjetos, sin lavarlo, en el
bote de residuos punzo cortantes.

6. Dibuja tu clula y seala la membrana plasmtica, la envoltura nuclear, y la
cromatina. La cromatina est compuesta, en parte, de ADN, la molcula
que contiene toda la informacin hereditaria en cada una de tus clulas.

Observaciones Clula Epitelial mucosa.





























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PRCTICA 11

PERMEABILIDAD CELULAR

OBJETIVO: Observar y comparar el efecto de diversas sustancias qumicas a travs
de la difusin en una membrana celular por medio de la hemlisis.

FUNDAMENTO: Existen varios mtodos para medir la presin osmtica celular; la
mayor parte son fsicos. Algunos de stos mtodos son utilizando tanto a la zanahoria
como al celofn, por lo que es conveniente comparar los anteriores modelos utilizando
clulas vivas, como en este caso sern glbulos rojos.(

GENERALIDADES: El movimiento de agua de adentro hacia afuera de las clulas
est influido por la semipermeabilidad de la membrana celular, o sea, su capacidad de
permitir el paso de ciertas molculas o bien impedrselo.












El trmino smosis se deriva de la palabra griega que significa empujar. La
tendencia de empujar sus molculas desde la porcin ms concentrada hacia la menos
concentrada, puede ser el resultado de una fuerza que llamamos presin osmtica.
Puesto que la presin osmtica depende de la concentracin de los materiales en
suspensin, mientras ms grande es la concentracin mayor es la presin osmtica y, el
objetivo de esta es igualar la concentracin de las molculas de agua en ambos lados.

En los lquidos de cualquier clula viva se encuentran sales, azcares y otras
sustancias en solucin; el liquido tiene, pues, cierta presin osmtica. Cuando la clula se
sumerge en un lquido con la misma presin osmtica, no hay movimiento neto de
molculas de agua dentro ni fuera de la clula; esto es que la clula ni se hincha ni se
encoge, por lo que se dice que se encuentra en un medio isotnico o isosmtico respecto
a la clula. Normalmente el plasma sanguneo y todos los lquidos del organismo son
isotnicos pues contienen la misma concentracin de sustancias disueltas que en las
clulas.
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Si la concentracin de las sustancias disueltas en el lquido circundante es mayor
que la existente dentro de la clula el agua tiende a salir de la clula, por lo que esta se
contrae. Este lquido es hipertnico respecto a la clula, es decir, que tiene una
concentracin mayor de solutos. Si el lquido tiene menos sustancias disueltas que la
clula, es hipotnico, es decir que tiene menor concentracin de solutos. Cuando una
clula se coloca en una solucin no isotnica, puede ajustarse al nuevo medio por
modificacin de su contenido de agua, para lograr finalmente la misma concentracin que
el medio; a esto se le conoce como regulacin del volumen intracelular. Muchas clulas
pueden impeler agua o ciertos solutos hacia uno u otro lado de la membrana plasmtica,
de manera que en esta forma mantienen una presin osmtica distinta de la del medio
ambiente

MATERIAL:

5 tubos de ensayo 13 x100 mm.
1 gradilla.
2 pipetas graduadas de 5 ml.
1 cronmetro.
Equipo para venopuncin.

MATERIAL BIOLOGICO:

Sangre.

REACTIVOS:

Glicerol 0.5 M.
Glucosa 0.5 M.
Solucin de urea 0.5 M.
Solucin de etilenglicol 0.5 M.
Solucin salina isotnica.

TCNICA PARA DETERMINAR EL PESO MOLECULAR:

1. Preparar una serie de 4 tubos marcados de la siguiente manera, utilizando la
sangre que se extrajo por venopuncin con previas indicaciones del Maestro.






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2. Es importante utilizar una pipeta limpia y diferente para cada sustancia.

3. Centrifugar a 2500 rpm durante 5 minutos y observar tanto macroscpica como
microscpicamente si se presenta la lisis.

CUESTIONARIO:
1) Por qu se dice que la membrana tiene permeabilidad selectiva?

2) Por qu se dice que la bicapa de la membrana constituye una barrera natural?

3) Cules con los factores que afectan la velocidad de difusin a travs de la
membrana celular?

4) Cmo esta constituida la membrana celular de tal manera que permite la
permeabilidad?