MTODOS DE PREPARO DE MATERIAL EM EMBRIOLOGIA E HISTOLOGIA

OBS: O material apresentado, constiti m roteiro de estdo para o alno, !e

de"e consltar a #i#lio$ra%ia I&DI'ADA no inicio do crso(
)*rios s+o os m,todos de estdos dos tecidos, "ariando do estdo dos tecidos I& )I)O
at, a!eles !e tili-am os tecidos mortos( O m,todo mais tili-ado em .istolo$ia , o
PREPARADO PERMA&E&TE /L0MI&A 1 estdado em microsc2pio 2ptico( A se$ir
descre"emos as etapas de prod3+o :

4
5
Etapa: 'OLETA DA AMOSTRA

A primeira etapa de todo o processo de prepara3+o de ma l6mina .istol2$ica consiste
em coletar a amostra, o se7a o#t89la e isto pode ser %eito de cinco di%erentes maneiras:

A1 'ir:r$ica ; o#ten3+o da amostra de tecido, 2r$+o o em#ri+o atra",s de ma incis+o
#1 &ecr2psia ; procedimento tili-ado para estdo anat<mico de todos os 2r$+os o
tecidos, no em#ri+o morto(

As pe3as $randes , de"em ser cli"adas pre"iamente para red-ir sa espessra
permitindo a penetra3+o %*cil do %i=ador( O princ>pio %ndamental de cli"a$em , !e o
%ra$mento possa em torno de ?mm de espessra(

@
5
Etapa: AIBACDO

A #ase de ma #oa prepara3+o .istol2$ica , a %i=a3+o !e de"e ser completa e
ade!ada( Para tanto , preciso tomar al$mas preca3Ees !e s+o o#ri$at2rias:

A1 O material coletado de"e ser imerso rapidamente no %i=adorF
B1 O "olme de %i=ador de"e ser no m>nimo de- "e-es /4G B1 maior !e o "olme da
pe3a coletada(

Os principais o#7eti"os da %i=a3+o s+o:
A1 Ini#ir o parar a at2lise tecidalF
B1 'oa$lar o endrecer o tecido e tornar di%s>"eis as s#st6ncias insol:"eisF
'1 Prote$er, atra",s do endrecimento, os tecidos moles no manseio e procedimentos
t,cnicos posterioresF
D1 Preser"ar os "*rios componentes cellares e tisslaresF
E1 Mel.orar a di%erencia3+o 2tica dos tecidosF
A1 Aacilitar a s#se!ente colora3+o(

A %i=a3+o pode ser %>sica /tili-ando9se o calor o o %rio1 o !>mica( A %i=a3+o em
.istolo$ia , !ase e=clsi"amente !>mica, onde s#st6ncias /%i=adores1 s+o tili-adas com
a principal %n3+o de insol#ili-ar as prote>nas dos tecidos( Os %i=adores podem a$ir
precipitando as prote>nas o as coa$lando, assim temos como principais %i=adores:

A1 He precipitam as prote>nas: cloreto de merc:rio e *cido p>cricoF
B1 He coa$lam as prote>nas: alde>do %2rmico /o mais tili-ado, con.ecido como
%i=ador ni"ersal1, tetr2=ido de 2smio e o alde>do $lt*rico(

O tempo de %i=a3+o "aria de acordo com o taman.o da pe3a, constiti3+o do tecido,
poder de %i=a3+o do %i=ador, o#7eti"os a pes!isar e temperatra am#iente( &o entanto, de
%orma $eral, tendo o %ra$mento, a ser %i=ado, ma espessra de ? mm o tempo m>nimo de
%i=a3+o , de do-e /4@1 .oras(

O#ser"a3+o: Para !e se possa e=aminar o tecido 2sseo o tecido com *reas de
calci%ica3+o, de"e9se antes de process*9lo, incl>9lo e cort*9lo, proceder a
DES'AL'IAI'ACDO o desminera3+o !e consiste na remo3+o dos sais de c*lcio !e se
encontram depositados nos tecidos or$6nicos sem altera3+o da sa estrtra cellar(
Os ossos o otros materiais calci%icados de"em ser cortados em pe!enos peda3os
/cerca de ?mm1 com serra ade!ada, antes da %i=a3+o( Depois de completada a %i=a3+o ,
!e se coloca na sol3+o descalci%icadora( Geralmente s+o empre$ados como a$entes
descalci%icadores os se$intes *cidos((

PRO'ESSAME&TO

Ap2s a preser"a3+o do tecido a etapa se$inte consiste em prepar*9lo para o e=ame
microsc2pico( 'om a %inalidade de permitir !e a l- o atra"esse, cortes mito del$ados de
tecido t8m !e ser %eitos( In%eli-mente, em#ora o processo de %i=a3+o endre3a o tecido, o
material n+o se torna s%icientemente %irme o coeso para permitir cortes del$ados
per%eitos( Para !e esse $ra de %irme-a se7a atin$ido, o tecido de"e ser completamente
impre$nado com al$m meio de sstenta3+o !e manter* 7ntas as c,llas e as estrtras
intercellares( Os materiais de sstenta3+o sados s+o denominados materiais de incls+o(

I
5
Etapa ; DESIDRATACDO

Antes !e m material de incls+o, tal como a para%ina, possa penetrar no tecido se
conte:do em *$a de"e ser remo"ido( A desidrata3+o , le"ada a e%eito imer$indo o #loco de
tecido em concentra3Ees crescentes de *lcool et>lico( O *lcool , o a$ente mais commente
tili-ado neste processo, sendo empre$ado nma s,rie crescente /JGK 9 LGK 9 MGK 9
4GGK1 para se e"itar a retra3+o pronnciada do tecido ocasionando lesEes estrtrais da
c,lla de car*ter irre"ers>"el( O *lcool tem a "anta$em de endrecer mais o tecido( O
"olme de *lcool de"er* ser 4G a @G "e-es maior !e o "olme da pe3a( A e%ici8ncia da
desidrata3+o depende da rela3+o entre a !antidade de *lcool e o n:mero de #an.os
empre$ados !e de"em ser s%icientes(
)*rias s+o as s#st6ncias tili-adas como a$entes de desidrata3+o: *lcoois et>lico,
#t>lico, met>lico e isoprop>lico, a acetona, o ,ter, o cloro%2rmio o o 2=ido propileno( O
*lcool et>lico , o mais tili-ado em t,cnica de rotina(

?
5
Etapa ; DIAAA&INACDO /'LARIAI'ACDO1

A impre$na3+o do tecido com meio de incls+o , imposs>"el nesse est*$io por!e as
s#st6ncias semel.antes O para%ina sadas para a incls+o n+o se mistram com o *lcool( O
tecido de"e, portanto, ser imerso em m prodto !>mico e !e o *lcool e a para%ina se7am
sol:"eis( Assim a dia%ani-a3+o consiste na in%iltra3+o do tecido por m sol"ente da para%ina
!e se7a ao mesmo tempo desalcoli-ante( A para%ina n+o se mistra com *$a e nem com
*lcool( Am#os de"em ser completamente remo"idos para !e a para%ina possa penetrar
e%icientemente no tecido( O =ilol , commentemente tili-ado( Tal prodto !>mico ,
mitas "e-es c.amado de a$ente clari%icador por!e torna o tecido semi9transl:cido, !ase
transparente( Entre os rea$entes mais tili-ados na %ase de dia%ani-a3+o podemos citar
ainda: tolol, cloro%2rmio, 2leo de cedro, #en-ol e salicilato de metila(
A !antidade de =ilol /s#st6ncia mais empre$ada1 tili-ada de"e ser 4G a @G "e-es o
"olme da pe3a( A dra3+o da clari%ica3+o "aria com as dimensEes, a constiti3+o do
material e a temperatra(

P
5
Etapa ; I&'LQSDO /IMPREG&ACDO1

A %inalidade da impre$na3+o , eliminar completamente o =ilol contido no material e a
total penetra3+o da para%ina nos "a-ios dei=ados pela *$a e $ordra, antes e=istentes no
tecido( Este processo ser"e tam#,m para preparar o material para os cortes, remo"endo o
clari%icante e endrecendo9o s%icientemente e dando9l.e a consist8ncia ade!ada para !e
possa ser cortado(
O tecido , passado em das trocas de para%ina para asse$rar a s#stiti3+o de todo o
a$ente clari%icador pela para%ina( Empre$a9se a para%ina a ma temperatra de PR a RG S'
/para%ina %ndida1( O #loco de tecido permanecer* imerso na para%ina %ndida /em est%a1
drante o tempo necess*rio para a completa impre$na3+o( Posteriormente ser+o retirados da
est%a e dei=ados O temperatra am#iente at, !e a para%ina endre3a, ap2s o !e o #loco
de para%ina com o tecido ser* retirado da %orma e cond-ido ao corte( Pode9se citar ainda
como a$entes de impre$na3+o: celoidina, $oma ar*#ica, para%ina pl*stica, polietileno $licol,
para%ina esteri%icada e car#o"a=(

R
5
Etapa ; MI'ROTOMIA

Para se o#ter cortes de material incl>do em para%ina o por con$ela3+o , necess*rio
m instrmento especial: o micr2tomo( Os micr2tomos "ariam com os %a#ricantes e tem
como %ndamento das pe3as principais: o sporte o mandril /onde , %i=ada a pe3a a
cortar1 e a na"al.a( O sporte , sempre encai=ado a m para%so microm,trico o a ma
espiral met*lica !e o %a- adiantar se$ndo se ei=o, em medida con.ecida e !e pode ser
re$lada O "ontade( Esta medida tem como nidade o micr<metro !e corresponde a
mil,sima parte do mil>metro( &ormalmente m micr2tomo %a- cortes c7a espessra "aria
de 4 a PG micr<metros, mas a espessra mais tili-ada em microscopia 2ptica , de ? a R
micr<metros(
J
5
Etapa ; 'OLAGEM DO 'ORTE T LAMI&A

As %itas de cortes de para%ina s+o estiradas cidadosamente e os cortes indi"idais s+o
separados por m #istri( &a sper%>cie de m l6mina de "idro , %eito m ponto de
ader8ncia /normalmente com al#mina de o"o1 e o corte de para%ina , colocado em #an.o9
maria /*$a morna1 de %orma !e as do#ras pro"ocadas pelo corte no tecido desapare3am(
Ap2s o !e o corte , UpescadoV com a l6mina, preparada com al#mina, na !al se adere(

L
5
Etapa 9 'OLORACDO

a t,cnica tintorial empre$ada para %acilitar o estdo dos tecidos so# microscopia( A
colora3+o , de import6ncia %ndamental em .istolo$ia, pois os tecidos n+o tratados t8m
poca di%erencia3+o 2ptica( As colora3Ees de m modo $eral se e%etam por processos
%>sico9!>micos o pramente %>sicos e podem ser consideradas se$ndo: a modalidade, a
a3+o, o car*ter, o $ra de a3+o, o tempo, o n:mero de corantes e a cromati-a3+o(
Hanto O cromati-a3+o, o se7a, de acordo com o n:mero de cores con%eridas Os
estrtras pelas colora3Ees simples o com#inadas, estas tomam a denomina3+o de
colora3Ees MO&O'RWMI'AS /ma cor1, BI'RWMI'AS /das cores1, TRI'RWMI'AS
/tr8s cores1 e POLI'RWMI'AS /mais de tr8s cores1(
Para se colorir con"enientemente a c,lla, de"e9se recorrer a m m,todo de colora3+o
scessi"a do n:cleo e do citoplasma(
A com#ina3+o mais comm de corantes sada em .istolo$ia e .istopatolo$ia , a
HEMATOBILI&A e EOSI&A /HE1( A .emato=ilina , m corante natral o#tido das casca
de pa campec.e( Ela n+o , realmente m corante e de"e ser o=idada em .emate>na a %im
de tornar9se m corante( Ademais, o corante !e reslta /.emato=ilina9.emate>na1 n+o tem
a%inidade para os tecidos( De"e ser sado m mordente, como o alm>nio o o %erro,
7ntamente com a mistra de .emato=ilina antes !e ela possa corar os tecidos( A mistra
cora em a-l9p:rpra( A eosina , m corante sint,tico e prod- ma colora3+o "ermel.a(
&as c,llas coradas com HE os *cidos ncleicos presentes no n:cleo s+o corados pela
.emato=ilina, dando ao n:cleo m tom a-l9p:rpra( A eosina , atra>da pelos elementos
#*sicos da prote>na do citoplasma da c,lla, corando9o de r2seo a "ermel.o( Os
componentes dos tecidos !e se coram prontamente com os corantes #*sicos s+o c.amados
BASXAILOSF os !e tem a%inidade pelo corantes *cidos s+o c.amados A'IDXAILOS( A
.emato=ilina comporta9se como m corante #*sico e, portanto, cora o n:cleo de modo
#as2%ilo( A eosina , m corante *cido e cora os elementos #*sicos da prote>na do citoplama
de maneira acid2%ila(
Antes !e o corte se7a corado, a para%ina em !e ele %oi incl>do de"e ser remo"ida( O
corte, !e 7* %oi aderido O l6mina de "idro /pesca$em em #an.o maria1, , #an.ado no =ilol
para dissol"er a para%ina( De"ido ao %ato de mitos corantes serem sol:"eis em *$a, torna9
se necess*rio remo"er o =ilol do tecido e s#stit>9lo por *$a /.idrata3+o1( O corte ,
imerso em ma s,rie de concentra3Ees decrescentes de *lcool et>lico at, !e este7a
.idratado( Depois !e o corte esti"er .idratado procede9se a colora3+o propriamente dita
!e consiste, no caso da t,cnica HE, da imers+o do tecido primeiramente em .emato=ilina
ap2s o !e procede9se la"a$em com *$a para retirada de e=cedente, depois imers+o em
eosina ap2s o !e tam#,m se %a- la"a$em(

M
5
Etapa ; MO&TAGEM

Depois !e o corte ti"er sido corado com a sol3+o apropriada, ele , passado atra",s
de concentra3Ees crescentes de *lcool para remo"er, de no"o, a *$a /desidrata3+o1(
O#7eti"a9se com esta desidrata3+o amentar a so#re"ida do preparado .istol2$ico(
Ainalmente o corte , #an.ado em =ilol antes de ser montado em m meio sol:"el em
=ilol, !e , o meio de monta$em /para os cortes de para%ina , sado o B*lsamo de 'anad*1(
Qma $ota do meio de monta$em , colocada so#re o corte o na lam>nla e esta ,
posicionada so#re o corte de %orma delicada, de ma %orma tal !e o meio de monta$em
c#ra completamente o corte( Depois a lam>nla , comprimida com %irme-a so#re o corte e
o meio de monta$em se espal.a %ormando ma del$ada pel>cla entre a l6mina e a
lam>nla( He posteriormente "+o estar %irmemente aderidas ma O otra pela esta#ili-a3+o
do meio de monta$em(

Re%er8ncias:
GART&ER, L( P(, Tratado de histologia( Rio de Yaneiro: Gana#ara Zoo$an, @GGI(
MORIS'OT, A ( S(, Histolo$ia para Aisioterapia e otras *reas da Rea#ilita3+o. Rio de Yaneiro:
Gana#ara Zoo$an, @GG?
YQ&HQEIRA, L( '( Q( Histologia bsica( L( ed( Rio de Yaneiro: Gana#ara Zoo$an, @GG?(
ZQH&EL, [(, Atlas de citologia, histologia e anatomia microscopia: para teoria e pr*tica( J(
ed( Rio de Yaneiro: Gana#ara Zoo$an, 4MM4(