1

RESUMEN EJECUTIVO


Esta investigacin se llev a cabo con los objetivos de identificar los agentes
causales del enchurcamiento de las hojas de oiti (Licania tomentosa), aplicar
pruebas de patogenicidad para los organismos patgenos identificados y
evaluar el control con algunos productos qumicos y biolgicos, en laboratorio y
vivero.


En el desarrollo de la investigacin, primero se realiz un muestreo de los
rboles de oit, en Bucaramanga y su rea metropolitana, incluyendo a los
municipios de Girn, Piedecuesta, Floridablanca, a travs del cual se tomaron
muestras de material vegetal de rboles enfermos, con sintomatologa como
manchas oscuras en las pstulas de color naranja y enchurcamiento de las
hojas. Luego las muestras se llevaron al Laboratorio de Diagnostico
Fitosanitario del Instituto Colombiano Agropecuario-ICA, Seccional Santander,
en el cual se hizo el diagnstico de los agentes causales de las
sintomatologas, siguiendo los procedimientos del manual de procedimientos
ICA (2005), para hongos o bacterias. En el diagnostico fitopatolgico, se
pudieron identificar los hongos de los gneros Pestalotia sp., Colletotrichum
sp., Puccinia sp., Fusarium sp., y Cladosporium sp., como los agentes causales
del dao.


Para corroborar si estos hongos son los causantes de la enfermedad, se
realizaron pruebas de patogenicidad siguiendo los Postulados de Koch
(Duarte, 2007). En estas pruebas se indujeron algunos sntomas como el
necrosamiento de las hojas, producido por la interaccin de Colletotrichum sp.,
y Pestalotia sp. Sin embargo, no se pudo inducir el enchurcamiento de las
hojas, ya que pueden existir otros hongos asociados a la etiologa del dao,
como Puccinia sp., Fusarium sp y Cladosporium sp, de los cuales no se pudo
hacer pruebas de patogenicidad ni evaluacin de controladores, por
dificultades presentadas al momento de aislarlos a cultivo puro en el
laboratorio.


Para el control de los agentes causales del enchurcamiento de las hojas, se
realiz un ensayo en laboratorio, en el que se evaluaron 4 tratamientos
qumicos (Vercani, Antrasin, Control 500 y Kazugal), un tratamiento biolgico
(Kocide) y un control o testigo, a travs de un diseo experimental de bloques
completos al azar y 3 repeticiones. Los resultados indicaron que el producto
qumico Antrasin en dosis de 3 g/L de agua, fue el ms efectivo para el
control de los patgenos Colletotrichum sp., y Pestalotia sp.
2



En un ensayo conducido en el vivero Nazareth, de propiedad de la CDMB,
localizado en la ciudad de Bucaramanga, se evaluaron los mismos tratamientos
y diseo experimental y repeticiones iguales a los empleados en el ensayo de
laboratorio. Los resultados que se obtuvieron concuerdan con los de
laboratorio, ya que el tratamiento con Antrasin, en dosis de 3 g/L de agua, fue
el ms efectivo para controlar el enchurcamiento de las hojas de oit, al reducir
la incidencia en forma significativa con respecto a los dems tratamientos, de
100% a 91,3%, mientras que en los dems tratamientos sta estuvo entre
96,6% y 99,6%.


A la luz de los resultados, no se puede concluir que los hongos Colletotrichum
sp., y Pestalotia sp., son los causantes del enchurcamiento de las hojas de oit,
sin embargo, la aplicacin del producto qumico Antrasin, fue la que redujo en
un mayor porcentaje la incidencia de la enfermedad en el vivero.
3





INTRODUCCION



La Corporacin Autnoma Regional para la Defensa de la Meseta de
Bucaramanga (CDMB) y el Instituto Colombiano Agropecuario (ICA), seccional
Santander, son entidades gubernamentales encargadas de la vigilancia,
proteccin y administracin de los recursos naturales del departamento de
Santander, dentro de estos recursos naturales se encuentran las plantaciones
forestales y los sistemas agroforestales, los cuales han ido presentando
problemas fitosanitarios que deben ser identificados y tratados a tiempo.

La CDMB en conjunto con el ICA, busca mejorar la situacin sanitaria de las
plantaciones forestales y los sistemas agroforestales, as como de especies
arbreas ornamentales. En el caso de la zona verde de Bucaramanga, se ha
identificado al oit (Licania tomentosa), como la especie arbrea ms
abundante y, adems, ha venido presentado un enchurcamiento en las hojas,
que se ha generalizado en todos los rboles de la ciudad.
En estudios preliminares, se ha identificado a los hongos patgenos Pestalotia
sp., y Peronospora sp., como los agentes causales del dao sanitario (Escobar
et, al., 2007); sin embargo, an faltan ms elementos de diagnstico para estar
seguros de la causa de la afectacin de los rboles y cul sera la forma ms
efectiva para su control, razn que justific la realizacin de esta investigacin.
4





1. OBJETIVOS

1.1 General

Realizar la identificacin y pruebas de control del o los agentes causales del
enchurcamiento de las hojas en el oit (Licania tomentosa).

1.2 Especficos

Identificar el o los agentes causales del dao del enchurcamiento de las
hojas en el oit (Licania tomentosa).

Aplicar pruebas de patogenicidad para los organismos patgenos
identificados.

Evaluar el control de la enfermedad con productos qumicos y biolgicos,
en laboratorio y vivero.
5



2. MARCO TEORICO



2.1 Clasificacin taxonmica del oit

Reino: Plantae
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Subclase: Rosidae
Orden: Rosales
Familia: Crisobalanaceae
Gnero: Licania
Especie: tomentosa Benth.

2.2 Morfologa

Raz: Sistema radicular profundo con races laterales.
Tallo: rbol de 10 a 15 metros de altura; tallo leoso ramificado a partir de los 2
metros aproximadamente, corteza lisa de color grisceo, copa frondosa.
Hojas: Alternas, de color verde claro en su estado inicial, con una pubescencia
blanquecina tanto en el haz como en el envs, el cual cumple la funcin de
evitar la excesiva evaporacin del agua.
Flores: Inflorescencias, tipo racimo, son florecillas pequeas, blancas,
aromticas, filamentosas, estaminales de cinco ptalos.
Fruto: carnoso, tipo drupa de forma ovoide de 8 a 10 centmetros de largo con
olor caracterstico.



2.3 Ecologa y Manejo: La especie es originaria del Brasil y se emplea como
rbol ornamental en ciudades como Bucaramanga y Ccuta; su mejor
adaptacin se presenta en zonas clidas y secas, y permanece frondoso
durante todo el ao. Como rbol ornamental se puede emplear en barreras
contra el ruido y contaminantes, para dar privacidad, controlar vientos, y como
rbol vistoso en parques, orejas de puentes, cerros, laderas y caadas. Sus
frutos de mediano tamao pueden limitar su uso en zonas de trfico vehicular y
peatonal (Escobar et, al., 2007).




2.4 Importancia del rbol urbano

El rbol urbano desempea mltiples funciones que contribuyen al
mejoramiento de la calidad de vida en las ciudades. Estas funciones consisten
en la produccin de lea y alimentacin de humanos y la fauna silvestre;
establecimiento de barreras contra el ruido, los vientos y los contaminantes
como monxido de carbono (CO), dixido de carbono (CO
2
), monxido de
6



azufre (SO), dixido de azufre (SO
2
), xido ntrico (NO), dixido de nitrgeno
(NO
2
), xido nitroso (N
2
O), ozono troposfrico (O
3
) y partculas en suspensin;
sombro; mejoramiento de la biodiversidad; uso, reutilizacin y conservacin del
agua; conservacin del suelo, tales como control de erosin, taludes y cauces
(Escobar et, al., 2007).



2.5 Composicin de las especies arbreas de Bucaramanga

De acuerdo a un muestreo realizado en las principales calles, avenidas y
parques de la ciudad de Bucaramanga, as como en pequeas reas en el
norte de la ciudad y el municipio de Floridablanca, se encontraron 4.722
rboles, representados en 75 especies diferentes y 29 familias. De acuerdo con
los resultados, la especie ms abundante es el oit (Licania tomentosa), con
una participacin del 32,2%, es decir la tercera parte del total de rboles
encontrados en la muestra. Otras especies abundantes son los guayacanes
(Tabebuia rosea y T. crysantha) con 14,1%, el gallinero (Pithecellobium dulce)
con 7,6%, palma real (Roystonea regia) con 6,1%, laurel (Ficus benjamina)
con 5,5%, leucaena (Leucaena leucocephala) con 3,5%, almendro (Terminalia
catappa) con 2,8%, tulipn africano (Spathodea campanulata) con 2,8%, palma
areca (Chrysalidocarpus lutescens) con 1,9% y mango (Manguifera indica)
con 1,8% (figura 2). (Escobar et, al., 2007).




2.6 Principales enfermedades de los rboles urbanos de Bucaramanga

Segn Escobar et, al., en 2007, se identificaron 13 especies de hongos
patgenos ocasionando diferentes daos en los arboles urbanos de la ciudad
de Bucaramanga, estos, se ilustran en la tabla N 1



Tabla N 1: Agentes patolgicos identificados en rboles urbanos de
Bucaramanga, Santander.


AGENTE CAUSAL

CLASE/ORDEN

NOMBRE COMUN

SINTOMAS
Colletotrichum sp. Muerte
descendente
Coloracin parda
azulosa en las ramas.
Graphium sp. Muerte fuste Pudricin de fuste
Fusarium
proliferatum
Pudricin Destruccin sistema
radicular
Phythopthora sp. Pudricin Destruccin del sistema
radicular.
Botrytis sp. Pudricin blanda Pudricin hmeda en
hojas.
Cercospora sp. Deuteromycetes Necrosis foliar Causa amarillamiento
7



(Moniliales). del follaje.
Cylindrocladium sp Amarillamiento
foliar
Manchas foliares color
pardo oscuro.
Pestalotia sp. Deuteromycetes
(Melanconiales
Roya Hojas con manchas
coloracin amarilla.
Nectria sp Pudricin basal
Armillaria mellea. Basidiomycete Necrosis foliar Amarillamiento y cada
prematura de hojas.
Capnodium sp. Ascomycetes
Dothideales
Fumagina Hojas pelcula negra
sobre el haz.
Rosenillia sp Ascomycete
(Shaeriales).
Pudricin fuste Retardos de crecimiento
y poco follaje, clortico.
Phoma sp. Manchas foliares Manchas necrticas en
follaje.
Fuente: Escobar, et al., 2007.



2.7 Los Postulados de Koch

Robert Koch enunci sus ya famosos postulados en el curso de sus
investigaciones sobre el carbunco bacteriano, una enfermedad que se
transmita de forma frecuente al hombre desde el ganado lanar y vacuno. En
sus investigaciones sobre el carbunco bacteriano, Koch descubri que el
patgeno se encontraba siempre en la sangre de los animales enfermos, por lo
que, en una primera fase de investigacin, tom pequeas muestras de sangre
de estos animales y se las inocul a animales sanos. El resultado fue la
transmisin de la enfermedad y, por tanto, el establecimiento de la etiologa de
la enfermedad. En una segunda fase de investigacin, Koch descubri que el
patgeno poda ser aislado de los individuos enfermos y cultivado en el
laboratorio sin perder su capacidad patognica, ya que cuando se les inoculaba
a nuevos individuos se reproduca la enfermedad. (Fuentes, 2007).




A partir de estas investigaciones propuso los siguientes postulados:

1. La bacteria patgena debe aislarse siempre de animales enfermos y nunca
de animales sanos.

2. Cuando un animal est enfermo la bacteria debe aislarse en cultivo puro.

3. Si la bacteria se inocula a otro individuo debe reproducirse la enfermedad.

4. La bacteria debe aislarse nuevamente en cultivo puro.

Robert Koch public sus postulados por primera vez en el ao 1882 en un
artculo sobre la etiologa de la tuberculosis, pero no fue hasta 1890 cuando
8



estos postulados fueron publicados tal y como los conocemos hoy. No hay
duda de que la publicacin de estos postulados, junto con otros
descubrimientos de sus contemporneos, supuso una autntica revolucin para
la comunidad cientfica y sobre todo para la nueva ciencia microbiolgica.
(Fuentes, 2007).
9



3. METODOLOGIA



3.1 Identificacin de los agentes causales del enchurcamiento de las
hojas en el oit (Licania tomentosa).


3.1.1 Toma de muestras

Las muestras se recolectaron de frutos o partes de plantas enfermas o con
sntomas de aparente enfermedad o sintomatologa de enchurcamiento de
hojas, en el rea metropolitana de Bucaramanga, departamento de Santander.

Los sitios muestreados se encuentran en la tabla N 2

Tabla N 2: Geoposicin, en coordenadas geomtricas de los sitios de
muestreo para toma de material vegetal de oit, en Bucaramanga y su rea
metropolitana

N W ALTITUD
(m.s.n.m)
06.98539

073.05138

1018
06.98945

073.05167

995
06.99341

073.05209

1005
07.06498

073.16645

688
07.06493

073.16656

684
07.06490

073.16653

686
07.06490

073.16653

688
07.06498

073.16650

684
07.07307

073.16634

690
07.07307

073.16632

682
07.13006

073.11555

1029
07.13029

073.11538

1030
07.13029

073.11548

1030
07.13029

073.11558

1030
07.11738

073.10833

1004
07.11668

073.10585

997
07.11865

073.10475

985
07.11871

073.10473

982
07.11176

073.10712

960
07.11851

073.10477

956
07.09466

073.11206

906
07.09438

073.11212

907
07.08570

073.11375

918
07.08532

073.11654

916
10



07.10230

073.11762

916
07.07437

073.16506

700
07.06621

073.16834

748
07.07231

073.10039

884
06.98530

073.05048

1040
06.99872

073.05486

1042
06.99947

073.05436

1046
07.06517

073.08900

954
07.06517

073.08910

954
07.08649

073.11262

921
07.49054

073.26273

908
07.13472

073.13242

923



3.1.1.1 Materiales

Bolsas nuevas de polietileno, calibre 5 mm, de diferentes tamaos
Lupa
Navaja o tijeras
Tijeras de podar
Alcohol al 70%
Hipoclorito de sodio al 0.5%
Cinta de enmascarar
Papel absorbente suave



3.1.1.2 Procedimiento

Para garantizar la buena calidad de la muestra se consideraron varios
aspectos:

Seleccin de partes afectadas.
Estados de desarrollo de la enfermedad
Se recolectaron las muestras cuando estaban libres de humedad de lluvia o
roco.
Antes de cortar la muestra de la planta sta se introdujo dentro de la bolsa
donde se empac, para evitar la contaminacin externa.
El corte de la muestra se realiz con una tijera podadora, la cual estaba bien
afilada y muy limpia.
Cada muestra estaba debidamente marcada (nombre, nmero, fecha) y
acompaada de su respectivo formato.
11



3.1.2 Procesamiento de las muestras para diagnostico fitopatolgico

Al llegar la muestra al laboratorio se analizaron los sntomas y de acuerdo a
estos se realiz el montaje para hongos, bacterias o para identificacin de
material insectil.



3.1.2.1 Diagnstico de bacterias

La muestra se lav con abundante agua corriente.
Se cortaron fragmentos de la lesin y de partes sanas.
Se realiz una suspensin del tejido enfermo, que consisti en incubar los
trozos cortados en agua destilada estril durante 24 horas entre 25 y 30 C.
Se sembr en agar nutritivo y se incub durante 24 horas entre 25 y 30 C.
Se sembr en agares especficos para identificacin, segn el gnero del cual
se sospechaba, siguiendo el diagrama de Schaad (Garcs et al., 1996), ver
anexo A
Se realiz coloracin de Gram (Vase el Anexo B) a partir de cultivo en agar
nutritivo, a los bacilos Gram negativos se les realizaron pruebas de la batera
bioqumica para identificacin, tales como: utilizacin de citrato, TSI, LIA,
prueba de O-F, movilidad, indol, Rojo de Metilo y Vogues Proskauer. (ICA,
2005).



3.1.2.2 Diagnstico de hongos

La muestra se lav con abundante agua corriente.
Se cortaron fragmentos de la lesin y de partes sanas, para los cultivos en
agar (cuadrados de 5 mm aproximadamente).
Para los cultivos en agares, se tomaron los fragmentos que se cortaron
anteriormente y se introdujeron en Hipoclorito de sodio al 0.9%, en una
proporcin de 1 a 3 (que cubra totalmente la muestra) por un tiempo de 1 a 3
minutos.
Se enjuag con agua destilada estril por 1 a 3 minutos.
Se sec con papel filtro estril.
La siembra en agar se realiz colocando 5 trozos de la muestra sobre agar
PDA, avena y/o extracto de malta, incubar de 5-15 das a 25-28 C.
Se realiz tincin con azul de Lactofenol (Vase el Anexo C) para la
caracterizacin microscpica de los aislamientos. (ICA, 2005).
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3.2 Pruebas de patogenicidad para los organismos patgenos
identificados

Las pruebas de Patogenicidad se realizaron en el Laboratorio de Diagnstico
Fitosanitario del ICA Bucaramanga, tomando tejidos de plantas de oit que se
encontraban sanas, se les realiz la desinfeccin del material, se coloc en una
cmara hmeda dentro de la cual se inocul con el patgeno previamente
aislado a cultivo puro, realizando una pequea incisin sobre el tejido (Duarte,
2007), se evalu el tejido cualitativamente, mediante la observacin diaria de la
sintomatologa despus de la inoculacin con el patgeno.

3.2.1 Rutina de desinfeccin de tejidos para montaje de pruebas de
patogenicidad:

Lavar con agua y jabn 3 veces (elimina materia orgnica).
Sumergir en solucin de Hipoclorito de sodio durante 1 minuto.
Sumergir en etanol al 70% durante 30 segundos.
Lavar 3 veces con agua destilada estril.



3.3 Evaluacin del control de la enfermedad en laboratorio y vivero



3.3.1 Pruebas de efectividad en laboratorio

Se evalu la capacidad de los controladores comerciales para los patgenos
identificados; para los productos qumicos, se prepararon medios de cultivo
PDA a los cuales se les adiciono cada uno de los productos a evaluar (Tabla N
3) y posteriormente se realizo la siembra de los patgenos sobre cada medio
de cultivo con el producto, para la evaluacin de la efectividad se midi el
dimetro de crecimiento en centmetros del hongo cada 2 das; para el
producto biolgico se realizo una solucin de 2 g/ 1 L de agua y tambin se
realizaron soluciones con los patgenos previamente asilados a cultivo puro,
estas soluciones fueron inoculadas en pozos equidistantes que se encontraban
en cajas petri con medio PDA; este ensayo se realiz por duplicado para cada
uno de los tratamientos y el control. El efecto antagnico se evalu midiendo el
dimetro de crecimiento de los microorganismos alrededor de los pozos cada 2
das. En las figuras N1 y N2 se ilustra la distribucin de los tratamientos para
las evaluaciones de los productos qumicos y el biolgico para Pestalotia sp.
13






















Figura 1: Distribucin de los tratamientos para controlar al hongo Pestalotia sp.
Fuente: Maldonado, 2011.






















Figura 2: Distribucin de los tratamientos para controlar al hongo Colletotrichum sp.
Fuente: Maldonado, 2011.



3.3.2 Aplicacin y evaluacin de los controladores en vivero

Las plntulas de oiti para la evaluacin de los productos controladores en
vivero, se seleccionaron del vivero la Rosita de propiedad de la CDMB. Todas
las plntulas de oiti se encontraban enfermas y presentaban la sintomatologa
del enchurcamiento de las hojas.
Se realiz el montaje de la estructura de malla que protege las plntulas de oiti
que se utilizaron para la evaluacin de los productos, este montaje se realiz
en el vivero Nazareth de propiedad de la CDMB (Figura N 3).
14
1





















Figura 3: Estructura de malla en el vivero Nazareth.
Fuente: Maldonado, 2011.

Se estableci el ensayo en vivero siguiendo el modelo de bloques
completamente al azar; con 6 tratamientos, 3 repeticiones y una unidad
experimental de 8 plntulas de oit. A las plntulas se les realiz una
aplicacin de Urea 3 das despus del establecimiento en la casa de malla y
posteriormente otra aplicacin, 22 das despus, buscando con esto, la
generacin de nuevas hojas en las plntulas y de esta manera obtener mas
tejido vegetal para la evaluacin de la incidencia de la enfermedad.
Los tratamientos, con sus concentraciones se ilustran en la tabla N 3, se
realizaron 10 aplicaciones con intervalos de 4 das; antes de cada
aplicacin se realizo la evaluacin de la incidencia de la enfermedad
siguiendo la siguiente frmula:

%INC
# plantasAf ectadas
00

#totalPlantas

Tabla N 3: Distribucin de los productos en el montaje de prueba en vivero.

TRATAMIENTO PRODUCTO CONCENTRACION

Control Sin aplicacin
Tratamiento 1 Vercani 2 g/ 1 L de agua
Tratamiento 2
Antrasin
3 g/ 1 L de agua
Tratamiento 3 Control 500 600 ml/ 200 L de agua
Tratamiento 4 Kocide 2 kg / 200 L de agua
Tratamiento 5 Kazugal 1.5 L / 200 L de agua



La distribucin de los tratamientos y sus repeticiones en uno de los bloques se
ilustra en la figura N 4.
15



















Figura 4: Distribucin de los tratamientos y sus repeticiones en uno de los bloques.
Fuente: Maldonado, 2011.

3.3.3 Anlisis estadstico

Los anlisis de varianza y comparacin de medias mediante la Prueba de
Tukey, del crecimiento de los hongos (Colletotrichum sp. y Pestalotia sp.) en
laboratorio y de la incidencia de la enfermedad en plantas de oit en vivero,
fueron analizados a travs del programa Biometric (Olivares, 1994).




4. RESULTADOS Y DISCUSION

4.1 Identificacin de los agente causales del dao del enchurcamiento de
las hojas en el oit (Licania tomentosa)



4.1.1 Toma de muestras

Se tomaron un total de 54 muestras de material vegetal de oit en
Bucaramanga y su rea metropolitana, con sntomas como enchurcamiento de
las hojas nuevas (Figura 5), manchas oscuras caf o negro en las hojas (Figura
6) y pstulas de color naranja en las hojas o manchas polvosas (Figura 7), para
su anlisis en el Laboratorio de Diagnostico Fitosanitario del ICA.
16


















Figura 5: Rebrotes de hojas nuevas de oit con enchurcamiento.
Fuente: Maldonado, 2011.

















Figura 6: Mancha oscura en hojas de oit.
Fuente: Maldonado, 2011.















Figura 7: Pstulas de color naranja en hojas de oit.
Fuente: Maldonado, 2011.
17



4.1.2 Diagnostico Fitopatolgico

A las muestras vegetales recolectadas se les realizo diagnostico Fitopatolgico
segn el Manual de Procedimientos ICA, 2005.



4.1.2.1 Pestalotia sp.

Se aisl el hongo del gnero Pestalotia sp., de muestras de hojas con
manchas oscuras (Fig. 5), en cultivo el hongo presenta un micelio de
color negro o caf y blanco (Fig. 8), de los cuales se observaron conidias
cortas y oscuras elpticas, con apndices apicales (Fig. 9) (Barnett y
Hunter, 1996).
















Figura 8: Caractersticas microscpicas de Pestalotia sp.
Fuente: Maldonado, 2011.



















Figura 9: Esporas de Pestalotia sp., vistas al microscopio en aumento de 40X.
Fuente: Maldonado, 2011.
18





4.1.2.2 Puccinia sp.

Se identifico el hongo del genero Puccinia sp., de las hojas que presentaban
pstulas de color naranja en la superficie, las estructuras que forman estas
pstulas fueron identificadas como urediniosporas (Fig. 10), que son las
estructuras de reproduccin de este hongo dentro del ciclo asexual (Fig. 11) (
Milus et. al., 2010).



















Figura 10: Urediniosporas de Puccinia sp., vistas al microscopio en aumento de 10X.
Fuente: Maldonado, 2011.


























Figura 11: Ciclo de vida de Puccinia graminis.
Fuente: Milus et. al, 2010.
19





4.1.2.3 Fusarium sp.

Se identific el hongo del genero Fusarium sp., en muestras de tejidos
vegetales. Segn la publicacin de Barnett y Hunter, 1996, Fusarium sp.,
presenta un micelio considerable y textura algodonosa en cultivo,
frecuentemente con algunos matices rosa, prpura o amarillo.
Microscpicamente, presenta conidiforos variables, escasos y simples o
corpulentos, cortos con ramificaciones irregulares, conidias hialinas,
macroconidias ovoides algunas conidias se subdivides en 2 o 3 clulas (Fig.
12)


















Figura 12: Macroconidias de Fusarium sp., vistas en aumento de 40X
Fuente: Maldonado, 2011.



4.1.2.4 Colletotrichum sp.

A las muestras de material vegetal de oiti se les realizo el proceso para
identificacin de hongos fitopatgenos y se aisl el hongo del genero
Colletotrichum sp., esta especie ocasiona la antracnosis de muchas plantas de
cultivo (Agros, 2004). Se observaron en el laboratorio, acrvulos en forma de
disco o almohadilla (Figura 13), serosas, subepidrmicas, conidiforos
simples, alongados, conidias hialinas unicelulares, ovoides o elongadas que
coincide con la descripcin de Barnett y Hunter, 1996.
20


















Figura 13: Esporas de Colletotrichum sp., vistas en aumento de 40X
Fuente: Maldonado, 2011.



4.1.2.5 Cladosporium sp.

Responsable de la enfermedad conocida como Moho de las hojas, la cual
afecta gran parte de la superficie foliar y queda inutilizada para realizar
fotosntesis, microscpicamente, se observa conidios y micelio obscuro,
macrosifonado y septado (Pea et al., 1998) como se ilustra en la figura N 14.
















Figura 14: Estructuras microscpicas de de Cladosporuim sp., en aumento de 40X
Fuente: Maldonado, 2011.

4.2 Pruebas de patogenicidad

Se realizo montaje de pruebas de patogenicidad, siguiendo la metodologa de
Duarte, 2007 para los patgenos Colletotrichum sp., Pestalotia sp., y para la
interaccin de estos 2 patgenos en conjunto, los resultados se ilustran en las
figuras 15, 16, 17 y 18, en ninguno de los montajes se obtuvo la sintomatologa
de enchurcamiento de las hojas; en la figura 15 se observa una coloracin
negro-caf en la nervadura de la hoja; Colletotrichum sp., produce antracnosis
en muchas plantas, la cual se caracteriza por lesiones oscuras en hojas, tallos
y frutos (Agrios, 2004). En la Figura 16 se observan cuerpos fructferos en el
21



tallo, estos son acrvulos caractersticos del hongo del genero Pestalotia sp.,
los cuales constituyen estructuras de reproduccin asexual (Agrios, 2004); en
las figuras 17 y 18 se observan etapas iniciales de formacin de acrvulos de
Pestalotia sp.

Los hongos de los gneros Puccinia sp., Colletotrichum sp., y Cladosporuim
sp., no se pudieron aislar a cultivo puro en el laboratorio, ya que no se obtuvo
crecimiento micelial, a pesar de que se hicieron mltiples siembras en agar
PDA. Por esta razn, no se realizaron las pruebas de patogenicidad ni la
evaluacin de la efectividad de los productos en laboratorio.


















Figura 15: Sintomatologa de Colletotrichum sp., para pruebas de patogenicidad
Fuente: Maldonado, 2011.



















Figura 16: Sintomatologa de Pestalotia sp., para pruebas de patogenicidad
Fuente: Maldonado, 2011.
22


















Figura 17: Sintomatologa de Pestalotia sp., en conjunto con Colletotrichum sp., para
pruebas de patogenicidad
Fuente: Maldonado, 2011




















Figura 18: Sintomatologa de Pestalotia sp., en conjunto con Colletotrichum sp., para
pruebas de patogenicidad, se observan los acrvulos de Pestalotia sp., sobre la hoja.
Fuente: Maldonado, 2011.


4.3 Evaluacin del control de la enfermedad en laboratorio y vivero

4.3.1 Pruebas de efectividad en laboratorio

Los ensayos de laboratorio se realizaron por separado para los hongos
Colletotrichum sp., y Pestalotia sp.

El anlisis de varianza hecho para el crecimiento de las colonias de
Colletotrichum sp., indica que hubo diferencias significativas entre los
tratamientos (P> F 0.000) y entre bloques (P>F 0.000) (tabla No. 4).
23



Tabla N 4 Anlisis de varianza del crecimiento de las colonias de
Colletotrichum sp., en cm, en el ensayo de laboratorio.

FV GL SC CM F P

Tratamientos

5

14.188820

2.837746

18.0805

0.000
Bloques 9 25.990158 2.887795 18.3992 0.000
Error 45 7.062843 0.156952

Total 59 47.241821




Para saber cual tratamiento fue el mas efectivo se realiz una prueba de
comparacin de medias donde se puede observar entre cuales tratamientos
hay diferencias significativas. Esta comparacin indica que entre los
tratamientos con Vercani, Kazugal y el control no hubo diferencia significativa y
tuvieron las medias ms altas denotando baja efectividad en el control de la
enfermedad; el tratamiento con Control 500 tuvo un efecto intermedio;
mientras que la aplicacin de Kocide y Antrasin redujo significativamente la
colonia del Colletotrichum sp., por lo que se puede concluir que stos
tratamientos fueron los ms efectivos en el control de este patgeno (Tabla
N5).

Tabla N 5. Comparacin de medias del crecimiento de Colletotrichum sp., en
pruebas de laboratorio (Nivel de significancia = 5%).



Tratamientos Media
2 (Vercani) 1.4700 A
6 (Kazugal) 1.3900 A
1 (Control) 1.1700 AB
4 (Control 500) 0.9300 B

5 (Kocide)

0.4000 C

3 (Antrasin)

0.1700 C



Al analizar el crecimiento del hongo Colletotrichum sp. a travs del tiempo en
cada uno de los tratamientos, se observa que el tratamiento 2 con Antrasin es
el que menor crecimiento presento del hongo (figura 19).
24



Figura 19: Crecimiento de las colonias de Colletotrichum sp., en cm, por
tratamiento, en 10 evaluaciones realizadas.




























El anlisis de varianza hecho para las colonias de Pestalotia sp., indica que
hubo diferencias significativas entre los tratamientos (P>F 0.000) y entre
bloques (P> F 0.000) (tabla No. 6).

Tabla N 6. Anlisis de varianza del crecimiento de las colonias de Pestalotia
sp., en el ensayo de laboratorio.

FV GL SC CM F P

Tratamientos

5

8.096836

1.619367

10.8469

0.000
Bloques 9 34.546833 3.838537 25.7115 0.000
Error 45 6.718159 0.149292

Total 59 49.361828




Al igual que en el ensayo con las colonias de Colletotrichum sp., la
comparacin de medias, indica que entre los tratamientos con Vercani, Kazugal
y el control o testigo no hubo diferencia significativa y tuvieron las medias ms
altas, denotando baja efectividad en el control de Pestalotia sp. , al igual que
el Kocide, que fue efectivo en el control de Colletotrichum sp.; el tratamiento
con Control 500 tuvo un efecto intermedio; mientras que la aplicacin de
Antrasin redujo significativamente la colonia del Pestalotia sp sp., por lo que
25



se puede concluir que ste tratamiento fue el ms efectivo en el control del
patgeno (tabla No. 7).

Tabla N 7. Comparacin de medias del crecimiento de Pestalotia sp., en
pruebas de laboratorio (Nivel de significancia = 5%)

Tratamientos Media
1 (Control) 1.3200 A
2 (Vercani) 1.2600 A
5 (Kocide) 1.0000 AB
6 (Kazugal) 1.0000 AB
4 (Control 500) 0.8500 B

3 (Antrasin)

0.2000 C



Al analizar el crecimiento del hongo Pestalotia sp., a travs del tiempo en cada
uno de los tratamientos, se observa que el tratamiento 2 con Antrasin es el
que menor crecimiento presento del hongo (figura 20).

Figura 20: Crecimiento de Pestalotia sp., en evaluacin de los controladores
en laboratorio
26



4.3.2 Aplicacin y evaluacin en vivero



El anlisis de varianza hecho para la incidencia del enchurcamiento de las
hojas, indica que hubo diferencias significativas entre los tratamientos (P>F
0.000) y entre bloques (P>F 0.000) (tabla No. 8).

Tabla N 8:.Anlisis de varianza de la incidencia en % del enchurcamiento de
las hojas en plntulas en vivero.

FV GL SC CM F P

Tratamientos

5

510.187500

102.037498

7.2353

0.000
Bloques 9 521.312500 57.923611 4.1072 0.001
Error 45 634.625000 14.102777

total 59 1666.125000


Los resultados de la comparacin de promedios de la incidencia de cada
tratamiento, indica que no hubo diferencias significativas entre las aplicaciones
de Kazugal, Control 500, Vercani y Kocide con el control o testigo, cuyos
valores oscilaron entre el 96.65% y 100%; y solamente el Antrasin present
diferencias significativas con los dems tratamientos, al reducir la incidencia
hasta el 91.28% (tabla No. 9). Todo lo anterior indica que el Antrasin fue el
nico tratamiento que fue efectivo en el control del dao, denotando adems la
bondad de los productos qumicos en el manejo de la enfermedad.


Tabla N 9: Comparacin de medias de la incidencia del enchurcamiento de las
hojas de oiti de cada tratamiento.

Tratamientos Media
1 (Control) 100.000 A
6 (Kazugal) 99.5800 A
4 (Control 500) 98.3200 A
2 (Vercani) 97.9000 A
5 (Kocide) 96.6500 A

3 (Antrasin)

91.2870 B
27



Al analizar el comportamiento o la evolucin de la incidencia en un perodo de
40 das, se observa que sta comienza a disminuir con la aplicacin de los
tratamientos, a partir del da 24, la cual no cambia en el control cuya tendencia
se mantiene igual y decrece en los dems tratamientos, siendo mayor en el
tratamiento 2, o sea aquel que corresponde a la aplicacin del Antrasin (figura
21).

Figura 21: Incidencia de la enfermedad del enchurcamiento de las hojas de oiti
en vivero.
28



5. CONCLUSIONES




5.1 En los rboles
de oiti de Bucaramanga y rea metropolitana, que comprende los
municipios de Floridablanca. Girn y Piedecuesta, se lograron identificar
los hongos del los gneros Pestalotia sp., Puccinia sp., Colletotrichum
sp., y Fusarium sp., en el diagnostico fitopatolgico de la enfermedad del
enchurcamiento de las hojas del oiti (Licania tomentosa).


5.2 Las pruebas de
patogenicidad mostraron como resultado la sintomatologa de
Colletotrichum sp., como manchas caf y oscuras en las hojas; Pestalotia
sp., acrvulos oscuros en tallos y hojas y manchas oscuras en las hojas y
la interaccin de estos 2 patgenos en conjunto, como manchas y
acrvulos sobre las hojas.


5.3 En laboratorio
se obtuvo que el mejor tratamiento para el control de los hongos de los
gneros Pestalotia sp., y Colletotrichum sp., fue Antrasin, inhibiendo el
crecimiento de los hongos en el medio de cultivo que lo contena.

5.4 En vivero, el
mejor tratamiento para la enfermedad del enchurcamiento de las hojas de
oiti, fue, al igual que en laboratorio, el tratamiento con Antrasin,
reduciendo la incidencia de la enfermedad hasta un 79%, por los que se
puede concluir que este producto, es efectivo para controlar la afeccin
en plntulas.
29



6. RECOMENDACIONES



6.1 Los hongos del
genero Puccinia sp., Cladosporuim sp., y Fusarium sp., no se
lograron aislar a cultivo puro en el laboratorio, se recomienda hacer
evaluaciones de diferentes medios de cultivo para su aislamiento y
posterior evaluacin de agentes de control.

6.2 Se recomienda
realizar aplicaciones peridicas del producto Antrasin en una
concentracin de 3 gr./litro de agua, a plntulas en vivero para
disminuir la incidencia de la enfermedad.
30



7. REVISIN BIBLIOGRAFICA



AGRIOS,
George N., 2004, Fitopatologia, Editorial Limusa, segunda edicin,
Pg. 809-820.

BARNETT Y
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DUARTE
Sanmiguel, Silvia, 2007, Trabajo de grado para la carrera de
microbiologa agrcola y veterinaria Pruebas de Patogenicidad in-
Vitro con microorganismos aislados de palmas afectadas por
marchitez letal., Pontificia Universidad Javeriana, Facultad de
Ciencias, Carrera de Microbiologa Agrcola y Veterinaria, 112
paginas



ESCOBAR
Mnera Milagro, DAZ Fonseca Alfonso, ANGARITA Garca Myriam,
2007, Identificacin y manejo de problemas sanitarios en arboles
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FUENTES
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perspectiva actual, revista complutense de ciencias veterinarias
(RCCV), ISSN: 1988-2688, RCCV Vol. 1 (2), 5 Pginas.



GARCES de
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Nacional de Colombia, Facultad de ciencias, Departamento de
biologa, Primera edicin, 57 pginas.



ICA
Bucaramanga, 2005, Manual de procedimientos laboratorio de
Diagnostico Vegetal, pg. 15-54.
31



MILUS Gene,
DEWOLF Erick, DILL-MACKY Ruth, STEFFENSON Brian, WEGULO
Stephen, BERGSTROM Gary, SORRELLS Mark, McMULLEN
Marcia, PAUL Pierce, HUNGER Robert, MUNDT Chris, ISARD Scott,
STEIN Jeff, MURRAY Timothy, BAKER Heyward, BULLUCK Russ,
DIVAN Chuck, ENGLE Jessica, HEBBAR Prakash, BOWDEN Bob,
CARSON Marty, CHEN Xianming, JIN Yue, MARSHALL David,
SMITH Kent, SZABO Les, 2010, Recovery Plan for Stem Rust of
Wheat, (caused by Puccinia graminis f. sp. tritici Ug99 (race TTKSK)
and other newly emerging races derived from it), 27 pginas.



OLIVARES
Senz, Emilio, 1994, Paquete de diseos experimentales, FAUANL,
versin 2.5, Facultad de agronoma UANL.

PEA, Carola,
SHANUM M., Victoria, LUCANA Ch, Celia, MIRANDA CH., Mara,
GIMENEZ T., Alberto, 1998, Aislamiento, identificacin y perfil
biolgico de especies fngicas de tierras, revista BIOFARBO,
volumen VI, 8 Pginas

STREETS
Rubet B, 1982, The Diagnosis of plant diseases, 245 Pginas.



ICA
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Vegetal, 2005, pg. 15-54.

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GIMENEZ T., Alberto, Aislamiento, identificacin y perfil biolgico de
especies fngicas de tierras, revista BIOFARBO, volumen VI.




Rubet B. The Diagnosis of plant diseases.
STREETS
32



8. ANEXOS




Anexo A. Diagrama de Schaad para identificacin de bacterias
fitopatgenos



33



Anexo B. Procedimiento para la coloracin de Gram



Cubrir la preparacin con cristal violeta por un minuto
Lavar muy bien con agua corriente. Eliminar el exceso de agua
Cubrir con lugol de Gram. por un minuto
Lavar con agua corriente, eliminando el exceso de agua
Decolorar con alcohol etlico de 95% por 15 segundos
Lavar con agua corriente, eliminando el exceso de agua
Cubrir la preparacin de safranina por un minuto
Lavar con agua corriente. Dejar secar al aire y observar al microscopio. Con el
objetivo de 100x y utilizando aceite de inmersin. (ICA, 2005).
34



Anexo C. Procedimiento para la coloracin con azul de lactofenol.



1) Poner una gota de azul de Lactofenol en un portaobjetos estril.
2) Con una cinta transparente realizar impronta al cultivo tomando las hifas con
cuidado de no daar el tejido
3) Pegar la cinta sobre el portaobjetos.
4) Observar al microcopio las estructuras del hongo en estudio para comparar
con claves de identificacin. (ICA, 2005).
35
Sulfato de cobre pentahidratado 2%
Sulfato de calcio dihidratado 18%
Ingrediente activo csp 100%




Anexo D. Composicin de los productos usados como tratamientos para
el control de la enfermedad del enchurcamiento de las hojas de oiti




1. Vercani:
Lecanicillium lecanii 1*10
5
Esporas/ gr.
Ingrediente activo Arroz y tensoactivos



2. Antrasin:




3. Control 500
Clorotalonil 200 gr./ Lt
Ingredientes activos csp 1 Litro



4. Kocide
Oxido cprico 77%
Ingredientes activos 23%



5. Kazugal
Kazugamicina 20 gr. / Lt
Ingredientes activos 1 Litro
36



Anexo E. Registro fotogrfico de la evaluacin de los controladores
qumicos y biolgicos en laboratorio
























Foto #1: Evaluacin en laboratorio del tratamiento con Kazumin como
controlador de Pestalotia sp.





















Foto #2:Evaluacin en laboratorio del tratamiento con Kocide como controlador
de Colletotrichum sp..
37





















Foto #3: Evaluacin en laboratorio del control biolgico a base de Lecanicillium
lecanii, como antagonista para Colletotrichum sp.




















Foto #4: Evaluacin en laboratorio del control qumico Control 500, para
Colletotrichum sp.