Espectometria de Masas Aplicaciones

Espectrometra de masa
Aplicaciones
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
UBA
Aplicaciones
- Cuantificacin
- Determinacin de frmula molecular (istopos)
- Estudio del metabolismo de drogas
- Estudios clnicos
- Elucidacin estructural de productos naturales
- Estudio de mecanismos de reacciones
- Imgenes
UBA
Aplicaciones
Cuantificacin por EM
Poder correlacionar intensidad de seal vs cantidad
Especificidad
(conviene usar iones de m/z alta)
-Mtodos aplicados sobre la muestra
-Mtodos aplicados sobre el equipo
Purificacin previa
Derivatizacin
Aumento de la resolucin
Uso tcnicas de ionizacin
selectivas
SIM o SRM
UBA
Aplicaciones
Poder correlacionar intensidad de seal vs cantidad
Sensibilidad y lmite de deteccin
(conviene usar iones de AR alta)
- Eleccin de modo positivo-negativo
- Eleccin de la tcnica de ionizacin
- Tiempo de lectura de la seal (adquisicin de datos): scan, SIM, SRM
UBA
Aplicaciones
Estndar externo
M
x
= I
x
M
I
/ I
I
y M
x
= I
x
RF
Errores: variacin en las condiciones de la fuente, inestabilidad de la escala de
masa
Estndar interno (para cada compuesto a analizarse)
Anlogos estructurales (marcados con istopos estables)
Homlogos
Compuestos de la misma familia
(si hay separacin previa pueden ser de igual PM!)
UBA
Aplicaciones
O
PM 152
HOO O
Cl
PM 172/174
m/z 139/141
141
UBA
Aplicaciones
Estndar interno: Mtodo de dilucin isotpica
I
m o
m/z
P
m
P
o
I
m o
m/z
Q
o
Q
m
Sustancia
natural
Sustancia
marcada
I
m o
m/z
Sustancia natural +
sustancia marcada
R = N P
m
+ M Q
m
N P
o
+ M Q
o
N
UBA
Aplicaciones
- Cuantificacin
- Estudios clnicos
- Imgenes
UBA
Aplicaciones
Determinacin de frmula molecular
Identificacin del ingrediente activo de una droga falsificada
RCM 2003, 17, 215-221
Droga supuesta: halofantrina (Halfan
TM
), PM 500.43
antimalrico
F
F
F
Cl
Cl
N
HO
Espectro ESI de la droga extrada del supuesto Halfan
(M + H)
+
(M + Na)
+
(2M + H)
+
(2M + Na)
+
UBA
Aplicaciones
RCM 2003, 17, 215-221
Para 279.0890 u hay 45 FM posibles con C, H, N, O, F y S y dentro de 5 mu
Anlisis de fragmentos con alta resolucin-precisin
Espectro ESI MS/MS del ion m/z 279
UBA
Aplicaciones
RCM 2003, 17, 215-221
Para 279.0890 u hay 45 FM posibles con C, H, N, O, F y S y dentro de 5 mu
Posibles FM: 9 (la molcula tiene por lo menos 2N, 1O, 6C y 4 insat)
Ej. m/z 81.0437 C
4
H
5
N
2
(DBE= 3.5) o CH
6
N
2
OF
m/z 92.0485 C
6
H
6
N (DBE= 4.5) , CH
6
N
3
O
2
(DBE= 0.5),
C
3
H
10
NS (DBE= -0.5), C
3
H
7
NF (DBE= 0.5)
Anlisis de fragmentos con alta resolucin-precisin

UBA
Aplicaciones
RCM 2003, 17, 215-221
Patrn isotpico terico
para C
12
H
12
N
4
O
3
F,
C
12
H
15
N
4
O
2
S y el
observado para el
supuesto Halfan
AR del (M+H+1)
+
es 14.1% n C entre 10 y 15 FM = 4 (slo una con S)
C
12
H
12
N
4
O
3
F
C
15
H
11
N
4
O
2
C
12
H
15
N
4
O
2
S
C
10
H
11
N
6
O4
UBA
Aplicaciones
RCM 2003, 17, 215-221
Con la frmula C
12
H
15
N
4
O
2
S y reanalizando los fragmentos obtienen
compuestos posibles
Bsqueda en literatura
H
2
N S
O
O
HN
N
N
H
2
N S
O
O
HN N
N
sulfametazina sulfisomidina
Comparacin con estndares (MS/MS)
UBA
Aplicaciones
Ventajas de usar Alta resolucin-precisin para realizar SIM / SRM
Cromatogramas de
plasma humano con
derivatizacin previa de
los c. carboxlicos como
steres butlicos
Adv. Mass Spectrom. Vol 16. 2004. Elsevier
UBA
Aplicaciones
- Cuantificacin
- Estudios clnicos
- Imgenes
UBA
Estudio del metabolismo de drogas
Aplicaciones
Posibles reacciones
metablicas y cambios de
masa asociados
UBA
Aplicaciones
Fragmentaciones caractersticas de conjugados de drogas
UBA
Previo HPLC: hidrlisis enzimtica
separar matriz biolgica
desalar
HPLC
EM
EM-EM
EM-RMN
Aplicaciones
Antes:
UBA
Aplicacin al estudio de activacin metablica de pirazinonas
Chem. Res. Toxicol. (2003) 16, 198-207.
Aplicaciones
N N
H
N
N
N
F F
N
O
O
F
Inhibidor de trombina
Cromatogramas (TIC) de los productos obtenidos por incubacin del
inhibidor con microsomas de hgado, fortificados con GSH
UBA
Chem. Res. Toxicol. (2003) 16, 198-207.
Aplicaciones
MS
2
del ion m/z 395 [M + H]
+
del metabolito M
1
N N
H
R-R
N
F F
N
O
F
m/z 127
m/z 237
m/z 269
H
112
UBA
Chem. Res. Toxicol. (2003) 16, 198-207.
Aplicaciones
UBA
Aplicacin al estudio de activacin metablica de ariloxi-derivados
2 metabolitos de
m/z 759
(M + 337 u)
Aplicaciones
O
R
Incubacin con microsomas
de hgado de rata
HPLC-EM (APCI)
UBA
Aplicacin al estudio de activacin metablica de ariloxi-derivados
Aplicaciones
O
R
PM 421
MH-129
MH-75
GSH
MS
2
I
m/z 759 = I +
GSH (307 u) +
2 O
R
+
UBA
Aplicaciones
- Cuantificacin
- Estudios clnicos
- Imgenes
UBA
Aplicaciones
Estudios clnicos
Uso de Espectrometra de masa tndem en estudios clnicos
UBA
Aplicaciones
Estudios clnicos
Desrdenes metablicos detectados en recin nacidos (1 a 5 das) por EM/EM
UBA
Aplicaciones
Estudios clnicos
Desrdenes metablicos detectados en pacientes de ms de 5 das por EM/EM
UBA
Aplicaciones
- Cuantificacin
- Estudios clnicos
- Imgenes
UBA
N
N
N
N
O
O
N
N
N
N
O
O
N
H
N
H
O
O
O
O
1
2
3
4a
4
5
6
7
7a
1'
2'
3'
4'
5'
6'
7'
8'
9'
10'
11'
5a'
8a'
12'
13'
1''
2''
3''
4''
5''
5a''
6''
7''
8''
9''
8a''
10''
11''
12''
13''
Alcaloides pteridnicos de la esponja Clathria sp

Elucidacin estructural de productos naturales
Aplicaciones
UBA
Aplicaciones
EI del compuesto 1
M
+.
UBA
Espectro EI precursores de m/z 362 (B
2
/E)
Aplicaciones
UBA
Espectro EI iones producto de m/z 362 (B/E)
332
m = 30
NO
CH
2
O
CH
4
N
C
2
H
6
332.11475 C
18
H
14
N
5
O
2
Aplicaciones
UBA
N
O
O
NHC O
N N
N
N O
O
O
N
N N
N
N O
O
N N
N
N O
O
N
N N
N
N O
O
NHC O
N
O
O
NHC O
N N
N
N O
O
O
N
N N
N
N O
O
H
H
H
H
H
m/z 522
(-CH
3
OH)
C
18
H
14
N
5
O
2
m/z 332
C
20
H
20
N
5
O
2
m/z 362
- C
2
H
6
m/z 476
m/z 233
m/z 362
m/z 449
1b
m/z 449
m/z 233
m/z 508
m/z 476
m/z 233
m/z 362
m/z 449
1a
+
+
+
+
Aplicaciones
Tetrahedron 58, 4481 (2002)
UBA
Identificacin de
fosfolpidos
Aplicaciones Aplicaciones
UBA
Aplicaciones Aplicaciones Aplicaciones
ESI
del extracto crudo de membrana de Lactobacillus acidophilus CRL 640

(M-H)
-
Identificacin de
fosfolpidos
UBA
Aplicaciones
MS
2
del ion m/z 788 en una IT
Identificacin de
fosfolpidos
J. Mass Spectrom. 35, 1452 (2000)
UBA
Aplicaciones
Identificacin de
fosfolpidos
UBA
Aplicaciones
O
CH
2
OH
OH
OH
OH
O
O
CH
2
OH
OH
OH
O
O
CH
2
OH
OH
OH
O
O
CH
2
OH
OH
OH
O aglicona
H
H
H
H
F
1
H
2
+
F
2
H
2
+
F
3
H
2
+
AH
2
+
Secuenciacin de azcares
UBA
Aplicaciones
NH
N
O
O
N
H
H
N
N
H
HO
O
O
O H
N
N
H
O
O
H
N
N
O
O
OH
O
NH
HN
O
NH
O
N
O
OH
NH
HN
O
O
O
N
H
O
HO
+ H ]
+

m/z 1631
m/z 1556
m/z 1457
m/z 1358
m/z 1245
m/z 835
m/z 1160
m/z 948 m/z 750
m/z 665
m/z 580
m/z 467
m/z 368
m/z 255
m/z 142
Iones fragmento obtenidos por
ESI-EM/EM() y FAB-EM/EM()
del ion precursor m/z 1631,
correspondiente al ion (M+H)
+
del
pptido integramida A, aislado del
extracto del hongo Dendrodochium
sp.
Secuenciacin de pptidos
Org. Lett. 4, 1431 (2002)
UBA
Aplicaciones
- Cuantificacin
- Estudios clnicos
- Imgenes
UBA
Estudio de mecanismos de reacciones
Mecanismo de nitracin electroflica aromtica
JOC 2006, 71, 6192-6203
UBA
JOC 2006, 71, 6192-6203
CH
3
NO
2
-NO
2
+
generado por CH
3
NO
2
(CI)
Q1 q2 Q3 q4 Q5
Comp. aromtico
scan
CID
UBA
JOC 2006, 71, 6192-6203
UBA
JOC 2006, 71, 6192-6203
UBA
Aplicaciones
- Cuantificacin
- Estudios clnicos
- Imgenes
UBA
Fosfolpidos en tejido cerebral
CH
2
-O-CO-R
CH-O-CO-R
CH-O-P-O-CH
2
CH
2
N(CH
3
)
3
O
O
-
(YH
2
)
+
: m/z = 184
Aplicaciones
Imgenes
(generadas por SIMS)
UBA
SIMS sobre cerebro SIMS sobre cerebro
de rata buscando el de rata buscando el
ion ion m/z = 184 m/z = 184
Corte de cerebro de ratn
Imgenes
J. Mass Spectrom. 2001,
36, 355-369
UBA
Im Im genes SIMS (emisi genes SIMS (emisi n de n de
m/z 184) (der.) m/z 184) (der.)
Im Im genes genes pticas (izq.) pticas (izq.)
Cerebro de ratn adulto
Aplicaciones
Imgenes
J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2000,
11, 191-199.
UBA
Letras (1,4 x 1,4 mm.) impresas sobre
una membrana de celulosa catinica
M: tinta amarilla - S: tinta magenta
(sobreimpresa)
314
a) Imagen EM
rea sin tinta
Tinta
amarilla
b) Imagen ptica
Aplicaciones
Imgenes
(generadas por LD)
J. Am. Soc. Mass Spectrom. 1999,
10, 67-71.
UBA
Mapa de densidad de iones para prote Mapa de densidad de iones para prote nas de cerebro de rata nas de cerebro de rata
matriz:
cido sinapnico
imagen de 100 x 70
puntos
50 disparos de lser
Imgenes
36, 355-369
MALDI
UBA
Mapa de densidad de iones para prote Mapa de densidad de iones para prote nas de cerebro de rata nas de cerebro de rata
Imgenes
36, 355-369
Estrategias para la preparacin de muestras por MALDI
UBA
Im Im genes de mol genes de mol culas org culas org nicas peque nicas peque as as
Imagen formada con el [M + H]
+
(rosa) superpuesta a la imagen
ptica (LD)
Imgenes
J. Mass Spectrom. 2001, 36, 355-369 Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
UBA
Imgenes - DIOS
Esquema de 2D-Imaging por DIOS
Anal. Chem. 2007, 79, 3535-3541
UBA
Imgenes - DIOS
Anal. Chem. 2007, 79, 3535-3541
Imagen ptica
Clulas HEK 293 crecidas
sobre el sustrato DIOS
Imagen fluorescente (teidas con PI)
Espectro DIOS
PC
PI
Imgenes DIOS
PC y PI
Pasos de 15 men dir x e y
Haz de lser 15 m
UBA
Imgenes - DESI
Angew. Chem. Int. Ed. 2006, 45, 7188-7192
Espectro DESI (-) sobre una seccin de cerebro de rata de 4 m de ancho (MeOH-H
2
O 1:1)
MS/MS del ion de fosfatidilinositol 38:4
[M-H]
-
UBA
Imgenes - DESI
Angew. Chem. Int. Ed. 2006, 45, 7188-7192
Imagen ptica
Imgenes de iones:
b) PI (38:4)
c) PS (40:6)
d) ST (24:1)
e) ST (h24:1)
f) PS (36:1)
g) Oleato
h) Araquidonato
i) Docosahexaenoato
UBA
Imgenes - DESI
Int. J. Mass Spectrom. 2007, 259, 8-15.
Ilustracin sobre la superficie automatizada para realizar el experimento
UBA
Imgenes - DESI
Int. J. Mass Spectrom. 2007, 259, 8-15.
Imagen ptica
DESI (+) de azul bsico
7 sobre papel (MeOH)
DESI (+) de rodamina
6G sobre papel (MeOH)
Imagen por DESI
UBA

Espectometria de Masas Aplicaciones

Transféré par

Informations du document

Titre original

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Espectometria de Masas Aplicaciones

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Espectrometra de masa

Anlisis de fragmentos con alta resolucin-precisin

Alcaloides pteridnicos de la esponja Clathria sp

del extracto crudo de membrana de Lactobacillus acidophilus CRL 640

Vous aimerez peut-être aussi