Ultimate Manual de Bioquimica Basica

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
CAMPUS CIUDAD MENDOZA

MEDICO CIRUJANO

DRA. MARIA DE JESUS HUERTA
CORTES
DR. RAUL MARISCAL REYES
DRA. MIRIAM DEL CARMEN SANCHEZ
FLORES

E. E.: INICIACION DISCIPLINAR

FORMACIN: BSICA

ACADEMIA
MORFOLOGICAS

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA BASICA
INDICE

PRACTICA 1. Reglamento interno de laboratorio y explicacin de RPBI .......................... 3
PRACTICA 2. Material y equipo de laboratorio ................................................................ 13
PRACTICA 3. Toma de muestra sangunea ...................................................................... 17
PRACTICA 4. Separacion de plasma y coagulo................................................................. 20
PRACTICA 5. Determinacion de glucosa sangunea ......................................................... 23
PRACTICA 6. Determinacion de colesterol total ............................................................... 27
PRACTICA 7. Determinacin de triglicridos. .................................................................. 31
PRACTICA 8. Determinacion de lpidos totales ............................................................... 35
PRACTICA 9. Determinacin de protenas totales .......................................................... 39
PRACTICA 10. Determinacin de enzimas: Transaminasas ............................................. 42
PRACTICA 11. Determinacin de enzimas: Amilasa ........................................................ 46
PRACTICA 12. Determinacion de enzimas: Fosfatasa alcalina ......................................... 49
PRACTICA 13. Determinacion de enzimas: Fosfatasa cida ............................................. 51
PRACTICA 14. Examen general de orina .......................................................................... 53

PRACTICA No 1
REGLAMENTO INTERNO DE LABORATORIO Y
EXPLICACION DE RPBI

GENERALIDADES
El laboratorio tiene una ubicacin especifica dotada de espacios fsicos
como: rea de trabajo con medad provistas de instalaciones de agua, gas,
regadera, cuarto de preparacin de reactivos, almacn de reactivos y materiales,
cuarto de aparatos y equipos, lavabos, pizarrones, bancos y gavetas.
Cuenta con personal de laboratorio especficamente capacitado para el
trabajo de estos.
Se trabaja con reactivos qumicos, equipo de reactivos de determinacin
cuantitativa para diagnstico, frmacos, medios, reactivos de tincin,
desinfectantes, antispticos.
El material biolgico de trabajo incluye: animales, cepas microbiolgicas
vivas, atenuadas y muertas, rganos, tejidos, fluidos corporales (principalmente
sangre, plasma, suero y orina), heces fecales, exudados (principalmente de
mucosas).
El alumno debe de contar con:
Bata blanca de manga larga.
Guantes desechables.
Cubrebocas.
Estuche de diseccin.
Manual o libro de texto.
Atlas (Por ejemplo de Orina microscopio del sedimento urinario- de
microbiologa).
Libreta de apuntes.
Lpices o plumines de colores.

REGLAS BASICAS DE SEGURIDAD:
Usar siempre la bata.
Cargar la bata y los guantes en una bolsa, el cubrebocas y los pauelos en
otra.
No introducir ni consumir alimentos.
No fumar.
Al finalizar, dejar limpia el rea de trabajo y comprobar que las llaves y
vlvulas de gas queden cerradas.
Terminando el trabajo, lavarse minuciosamente las manos antes de salir.

MANEJO DE REACTIVOS:
Los reactivos nicamente sern provistos por el(la) encargado(a) del
laboratorio.
No debern ser manejados de manera directa sino usando siempre
guantes, lentes de seguridad y material especfico para su manipulacin
(pipetas, esptulas, perillas, pinzas, etc.) y bajo la estricta supervisin del
profesor(a) o del encargado.
Las sustancias toxicas o venenosas, causticas, irritantes o que constituyan
un riesgo o peligro (explosivas, inflamables, corrosivas) nicamente podrn
ser manejadas por el profesor(a) o por el (la) encargado(a).
Cualquier reactivo derramado no deber tocarse directamente para
recogerlo. Llmese inmediatamente al profesor(a) y/o encargado(a) del
laboratorio para que se ocupe de ello.
Nunca se proceda a utilizar un reactivo si se desconocen su identidad y
manejo.
Toda duda acerca del manejo y disposicin de un reactivo deber ser
aclarada por el profesor(a) antes de proceder a utilizarlo.

MANEJO DE ESPECIMENES:
Vigilar antes de sacar los especmenes de los frascos, que el rea este bien
ventilada, abrir ventanas.
Portar cubrebocas.
Usar lentes de seguridad.
Usar guantes desechables.
Siempre manejar el espcimen dentro de una charola.

Nota: Si accidentalmente cae formol en los ojos y/o boca, lavar nicamente con
abundante agua.

MANEJO DE PREPARACIONES O LAMINILLAS:
Las preparaciones o laminillas requieren ser transportadas preferentemente
en charolas.
No deber haber grasa o crema en las manos para revisar el microscopio.
Marcar con plumn el campo por sealar.
Nunca usar aceite de inmersin sin indicacin del acadmico.
Si alguna preparacin o laminilla se rompe, avisar inmediatamente al
acadmico o encargado(a).

MANEJO Y DISPOSICION DE RESIDUOS BIOLOGICOS (DE
ADUERDO A LA NORMA OFICIAL PARA EL MANEJO DE
RESIDUOS PELIGROSOS BIOLOGICOS-INFECCIOSOS Y
TOXICOS MANUAL DE PROCEDIMIENTOS BI-UV-OP-01-)

EN TODOS LOS CASOS DEBERA USARSE: BATA, GUANTES, CUBREBOCAS,
Y SI ES NECESARIO, LENTES DE SEGURIDAD)

1. SANGRE: sangre caduca o contaminada, sangre coagulada, muestras de
sangre de anlisis, suero, plasma, paquete globular, depositar en
RECIPIENTE HERMETICO ROJO (lquidos).
2. SANGRE: bolsas de sangre de transfusin, tubos de ensaye, algodones
con sangre, se depositaran en BOLSA ROJA (slidos).
3. PATOLOGICOS: orinas, salivas, vomito, liquido amnitico, liquido
cefalorraqudeo, liquido espermal, depositar en RECIPIENTE HERMETICO
AMARILLO (lquidos).
4. PATOLOGICOS: rganos, partes del cuerpo, tejidos, heces fecales,
cadveres de animales pequeos (conejos, ratas, etc), partes corporales y
desechos de animales, depositar en BOLSA AMARILLA (slidos).
5. CEPAS Y CULTIVOS: Cultivos, inoculos, mezcla de microorganismos en
medio de cultivo inoculados, caldos de cultivo con caja de Petri desechable,
depositar en BOLSA ROJA (slidos).
6. NO ANATOMICOS: Guantes, cubrebocas, cofias, gasas, torundas,
algodones, abatelenguas, hisopos, aplicadores, papel, vendas, curitas,
batas desechables, paales, toallas sanitarias, espejos vaginales,
dispositivo intrauterino, equipo de venoclisis sin aguja, equipo de dilisis,
aserrn de camas de bioterio, se deben depositar en BOLSA ROJA
(slidos).
7. PUNZOCORTANTES: Agujas hipodrmicas, ampolletas, jeringas (con o sin
aguja acoplada), lancetas, bistures, recipientes de vidrio rotos o intactos
tales como pipetas de Pasteur, pipetas graduadas, vacutainers, tubos para
sangre, placas de cultivos, cajas de Petri, portaobjetos, cubreobjetos, etc.
Depositar en RECIPIENTE ROJO.

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS BI UV OP 01 PARA EL
MANEJO DE RESIDUOS PEIGROSOS BIOLOGICO-
INFECCIOSOS Y TOXICOS

Separacin y Envasado de Residuos Biolgico Infecciosos

1. OBJETIVO:
Separar y envasar los residuos biolgicos-infecciosos que se generen en
las diversas reas que se realicen prcticas de docencia, investigacin y de
centro de atencin mdica.

2. REFERENCIAS:
2.1 NOM-052-ECOL-1993. Que establece las caractersticas de los
residuos peligrosos, el listado de los mismos y los limites que hacen
peligrosos a un residuo por su toxicidad el medio ambiente.
2.2 NOM-087-ECOL-1995. Que establece que los requisitos de separacin,
envasado, almacenamiento, recoleccin, trasporte, tratamiento y
disposicin final de los residuos peligrosos biolgicos-infecciosos que se
generan en los establecimientos que presentan atencin mdica.
2.3 NOM-001-ECOL-1996. Que establece los lmites mximos permisibles
de contaminantes en las descargas residuales en aguas y bienes
nacionales.
2.4 NOM-001-STPS-1994. Relativa a las condiciones de seguridad e
higiene en los edificios, locales, instalaciones, y reas de los centros de
trabajo.
higiene en los centros de trabajo donde se produzcan, almacenen o
manejen sustancias qumicas capaces de generar contaminacin en el
medio ambiente laboral.
2.6 NOM-017-STPS-1993. Relativa al equilibrio de proteccin personal para
los trabajadores.

3. POLITICAS:
3.1 El personal que genere los residuos deber portar obligatoriamente el
equipo bsico de seguridad acorde a la actividad que est desarrollando.
3.2 Los recipientes para envasar los diferentes tipos de residuos, estarn
colocados en lugares estratgicos dentro de las reas de generacin.
3.3 De acuerdo al tipo y estado fsico del residuo se llevara a cabo su
envasado.
3.4 Los recipientes para almacenamiento temporal de Residuos Biolgicos
no son reciclables.
3.5 Los recipientes debern estar rotulados con el smbolo de riesgo
biolgico.
3.6 Se llevara a cabo una supervisin operativa por lo menos una vez a la
semana, para observar el cumplimiento de las disposiciones oficiales e
institucionales.

4. DESARROLLO:
Una vez generado el residuo lo identifica, lo separa y lo envasa de acuerdo
a la siguiente tabla:

CLASIFICACION
TIPO DE RECIPIENTE
PARA ENVASADO
RESIDUO
RPNE 1.2/01
SANGRE
Recipiente Hermtico
Rojo (lquidos)
Sangre caduca o contaminada,
sangre coagulada, muestras de
sangre de anlisis, suero, plasma,
paquete globular.
Bolsa Roja (slidos)
Bolsas de sangre de transfusin,
tubos de ensaye, algodones con
sangre.
RPNE 1.2/02
PATOLOGICOS
Recipiente Hermtico
Amarillo (liquido)
Orinas, saliva, vomito, liquido
amnitico, liquido cefalorraqudeo,
liquido espermal.
Bolsa Amarilla (slidos)
rganos, partes del cuerpo,
tejidos, heces fecales, cadveres
de animales pequeos (conejos,
ratas, etc.), partes corporales y
desechos animales.
RPNE 1.2/03
CEPAS Y
CULTIVOS
Bolsa Roja (slidos)
Cultivos, inoculos, mezcla de
microorganismos en medios de
cultivo inoculados, caldos de
cultivo con caja Petri desechable.
RPNE 1.2/04 NO
ANATOMICOS
Bolsa Roja (slidos)
Guantes, cubrebocas, cofias,
gasas, torundas, algodones,
abatelenguas, isopos, aplicadores,
papel, vendas, curitas, batas
desechables, paales, toallas
sanitarias, espejos vaginales,
dispositivo intrauterino, equipo de
venoclisis sin aguja, equipo de
dilisis, aserrn de camas de
bioterio
RPNE 1.2/05
PUNZOCORTAN
TES
Recipiente Rojo
Agujas hipodrmicas, ampolletas,
jeringas (con o sin aguja
acoplada), lancetas, bistures,
recipientes de vidrio rotos o
intactos, tales como pipetas de
Pasteur, pipetas graduadas,
vacutainers, tubos para sangre,
placas de cultivos, cajas Petri,
portaobjetos, cubreobjetos, etc.

RECOLECCIN INTERNA DE RESIDUOS PELIGROSOS

1. OBJETIVO:
Recolectar los residuos peligrosos de las reas de generacin y enviarlas al
almacn temporal respectivo.

2. REFERENCIAS:
2.1 Reglamento de la Ley General del Equilibrio Ecolgico y la
Proteccin al Ambiente en Materia de Residuos Peligrosos.
2.2 NOM-087-ECOL-1995. Que establece los requisitos para la
separacin, envasado, almacenamiento, recoleccin, transporte,
tratamiento y disposicin final de los residuos peligrosos biolgico-
infecciosos que se generan en los establecimientos que prestan
atencin medica.
2.3 NOM-017-STPS-1993. Relativa al equipo de proteccin personal para
los trabajadores.

3. POLITICAS:
3.1 El personal encargado de la recoleccin interna deber portar
obligatoriamente el equipo bsico de seguridad personal.
3.2 El personal encargado de la recoleccin deber realizar esta por
separado de la recoleccin de los residuos biolgico-infecciosos de los
residuos qumicos, radiactivos y municipales.
3.3 La recoleccin de los residuos desde el rea de generacin hasta el
almacn temporal, se deber llevar a cabo bajo una ruta de
recoleccin establecida.
3.4 La recoleccin de los residuos deber llevarse a cabo en horarios de
bajo flujo de personas, para evitar al mximo accidente.
3.5 La recoleccin interna se debe llevar a cabo con materiales y equipo
de seguridad de acuerdo al tipo de residuo.
institucionales.

4. DESARROLLO:
4.1 La recoleccin interna de los Residuos Peligrosos Biolgico-
Infecciosos se debe realizar de acuerdo a una ruta de recoleccin
acorde a las caractersticas de la edificacin de las instalaciones de la
institucin.
4.1.1 Se debern depositar los recipientes perfectamente cerrados en
el carrito recolector exclusivo de Residuos Biolgico-Infecciosos.
4.1.2 El personal deber verificar en el momento de la recoleccin que
los residuos biolgico-infecciosos se encuentren perfectamente
envasados.
4.1.3 Los recipientes para envasar residuos de punzocortantes, los
retirara solo cuando alcancen su capacidad al 90%.
4.1.4 Los residuos envasados en las bolsas rojas, deben estar
perfectamente cerrados, antes de ser depositados en el carrito
recolector.
4.1.5 Los recipientes que contengan residuos en estado liquido deben
estar perfectamente cerrados, antes de depositarlos en el carrito
recolector.
4.1.6 Concluida la recoleccin, se dirigir al almacn temporal, para su
respectivo almacenamiento de los residuos.
4.1.7 Los carritos manuales no deben rebasar su capacidad de carga
durante su uso.
4.1.8 Una vez depositados los residuos en el almacn, se debe lavar y
desinfectar el carrito recolector.
4.2 La recoleccin de reactivos qumicos debe hacerse con cuidado para
evitar algn derrame, debern estar envasados en recipientes de
acuerdo a su estado fsico y a sus caractersticas fsico-qumicas y
debidamente etiquetados de acuerdo a sus caractersticas CRETI:
corrosivo, reactivo, explosivo, toxico y su smbolo universal, como
requisito, para poder ser retirados del rea de generacin.
ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE RESIDUOS
PELIGROSOS

1. OBJETIVO:
Almacenar temporalmente los residuos que han sido recolectados, en un
rea especfica asignada dentro de la institucin, cuidando que cumplan
con las normas de seguridad e higiene.

2. REFERENCIAS:
2.1 Reglamento de la Ley General del Equilibrio Ecolgico y la
Proteccin al Ambiente en Materia de Residuos Peligrosos.
2.2 NOM-087-ECOL-1995. Que establece los requisitos para la separacin,
envasado, almacenamiento, recoleccin, transporte, tratamiento y
disposicin final de los residuos peligrosos biolgico-infecciosos que se
generan en los establecimientos que prestan atencin mdica.
higiene en los edificios, locales, instalaciones y reas de los centros de
trabajo.
2.4 NOM-002-STPS-1994. Relativa a las condiciones de seguridad para la
prevencin y proteccin contra incendios en los centro de trabajo
2.5 NOM-004-STPS-1993. Relativa a los sistemas de proteccin y
dispositivos de seguridad en la maquinaria, equipos y accesorios en los
centros de trabajo.
2.6 NOM-005-STPS-1998. Relativa a las condiciones de seguridad en los
centros de trabajos para el mantenimiento, transporte y manejo de
sustancias inflamables y combustibles.
higiene para el almacenamiento, transporte y manejo de sustancias
corrosivas, irritantes y toxicas en los centros de trabajo.
higiene en los centro de trabajo donde se produzcan, almacenen o manejen
sustancias qumicas capaces de generar contaminacin en el medio
ambiente.
2.9 NOM-017-STPS-1993. Relativa al equipo de proteccin personal para
los trabajadores.
2.10 NOM-026-STPS-1994. Seguridad Colores y su aplicacin.
2.11 NOM-026-STPS-1997. Colores y seales de seguridad e higiene, e
identificacin de riesgos por fluidos conducidos por tuberas.
2.12 NOM-114-STPS-1994. Sistemas para la identificacin y comunicacin
de riesgos por sustancias qumicas en los centros de trabajo.

3. POLITICAS:
3.1 El personal que maneje los residuos en el almacen temporal deber
portar obligatoriamente el equipo bsico de seguridad personal.
3.2 Los residuos biolgico-infecciosos no podrn almacenarse con otro tipo
de residuos peligrosos.
3.3 El almacn temporal debe contar con sealizacin y acceso restringido.
3.4 El personal responsable del almacenamiento debe tener la capacitacin
adecuada para esa actividad.
3.5 El almacn temporal debe cumplir con los requerimientos de
construccin de acuerdo a las normas oficiales mexicanas vigentes.
institucionales.

4. DESARROLLO:
4.1 Los residuos biolgico-infecciosos debern cuantificarse y anotar los
datos en las bitcoras correspondientes, previo a su almacenamiento
temporal.
4.1.1 Los residuos los debern depositar en los contenedores con el
smbolo universal de riesgo biolgico correspondientes ubicados en
el almacn de la siguiente manera:
Bolsas rojas: contenedores rojos.
Bolsas amarillas y recipientes hermticos amarillos: en refrigeracin
(4C)
Recipientes de punzocortantes: en los anaqueles del almacn.
4.2 Los residuos de tipo qumico antes de enviarlos a su almacenamiento
se debern tomar en cuenta su estado fsico, sus caractersticas
fisicoqumicas y de compatibilidad.
4.3 Los residuos del rea de Rayos X, deber colocarlos en los estantes
de forma segura y en la que observe la etiqueta de recipiente que contiene
el residuo.
4.3.1 Las placas de Rayos X deben mantenerse fuera de toda
posible humedad.
4.4 Terminado de estibar los recipientes, cerrar de forma segura el almacn
temporal.

SEGURIDAD EN LABORATORIOS Y CENTROS DE TRABAJO

1. OBJETIVO:
Proveer de un ambiente seguro de trabajo en los laboratorios de la
Universidad Veracruzana.

2. REFERENCIA:
Reglamento Federal de Seguridad, Higiene y Medio Ambiente de Trabajo.

3. DEFINICIONES:
3.1 Actividades peligrosas. Es el conjunto de tareas derivadas de los
procesos de trabajo, que generan condiciones inseguras y sobreexposicin
a los agentes fsicos, qumicos o biolgicos capaces de provocar daos a la
salud de los trabajadores o al centro de trabajo.
3.2 Contaminantes del medio de trabajo. Son los agentes fsicos, qumicos
y biolgicos capaces de modificar las condiciones del medio ambiente de
trabajo, que por sus propiedades, concentracin, nivel y tiempo de
exposicin o accin pueden alterar la salud de los trabajadores.
3.3 Material. Es todo elemento, compuesto o mezcla, ya sea de materia
prima, producto, subproducto, residuo o desecho que se utiliza o genera en
las operaciones y procesos en los centro de trabajo.
3.4 Materiales y sustancias qumicas peligrosas. Son aquellos que por sus
propiedades fsicas y qumicas al ser manejados, transportados,
almacenados o procesados, presentan la posibilidad de inflamabilidad,
explosividad, toxicidad, reactividad, radiactividad, corrosividad o reaccin
biolgica daina, y pueden afectar a la salud de las personas expuestas o
causar daos materiales a instalaciones o equipos.
3.5 Microorganismo patgeno. Organismo viviente microscpico, causante
de enfermedades.

4. DESARROLLO:
4.1 Identificar el tipo de riesgos a los que se exponen los profesores,
estudiantes, trabajadores y visitantes que ingresan a cada uno de los
laboratorios y centros de trabajo.
4.2 Utilizar el equipo de proteccin personal indicado por el responsable del
laboratorio o centro de trabajo.
4.3 El profesor, jefe de rea y jefe de departamento son los responsables
de realizar la primera demostracin de cmo se debe usar el equipo de
proteccin personal, as como de efectuar demostraciones peridicas.
4.4 Dependiendo del grado de riesgo de cada rea o centro de trabajo,
algunos equipos de proteccin personal debern ser manejados como
residuos peligrosos despus de su uso.
4.5 Los profesores, estudiantes, trabajadores y visitantes que entran en
contacto con materiales potencialmente infecciosos, deben de lavarse las
manos tan pronto como sea posible. El lavado debe de hacerse
vigorosamente por al menos diez segundos utilizando un detergente suave.
Las manos deben de lavarse tan pronto como sea posible despus de
haberse quitado los guantes y antes de salir del laboratorio o centro de
trabajo.
4.6 Queda prohibido comer, beber, fumar, aplicarse cosmticos y manipular
lentes de contacto en el laboratorio o centro de trabajo.
4.7 Queda prohibido almacenar alimentos y bebidas en los refrigeradores
donde se guarde material de laboratorio.
4.8 Mantener ordenados los bancos de trabajo y limpiarlos con un
desinfectante al menos una vez por da e inmediatamente despus de un
derrame de material potencialmente peligroso.
4.9 queda prohibido pipetear directamente con la boca.
4.10 Queda prohibido dejar que el contenido de la pipeta caiga desde la
altura hasta el contenedor. Esta operacin debe hacerse dejando resbalar
por la pared contenedor.
4.11 El uso de agujas y otros materiales punzocortantes debe eliminarse
tanto como sea posible.
4.12 Los materiales empleados en las prcticas deben de desinfectarse tan
pronto como sea posible.
4.13 Los derrames de sangre y fluido corporales deben de limpiarse
inmediatamente con toallas absorbentes desechables, lavarse con
detergente y agua, y desinfectarse con blanqueadores casero diluido a 1:10
si la superficie es porosa y 1:100 si la superficie es dura.

BIBLIOGRAFIA:
Manual de procedimientos para el manejo de residuos peligrosos biolgico-
infecciosos y txicos.
PRACTICA No 2
MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

OBJETIVO:

Conocer los aspectos generales y usos del material de laboratorio y del equipo
empleado para la realizacin de las prcticas.

MARCO TEORICO:

El laboratorio de bioqumica debe tener el material adecuado para la
realizacin de sus prcticas, con el propsito de favorecer y apoyar el proceso de
aprendizaje.

En el laboratorio se utiliza material de vidrio de uso variado y delicado,
como los vasos de precipitado de vidrio refractario que sirven para contener
diferentes volmenes de sustancias y para preparar soluciones y mezclas. El
matraz es un instrumento til para contener lquidos y as generar reacciones;
tiene por lo regular varias presentaciones: redondo, de fondo plano, de destilacin
y el de Erlenmeyer. Los tubos de ensayo son tambin de vidrio refractario y se
usan para contener pequeas cantidades de sustancias con las que se realizan
las pruebas o ensayos.

En el laboratorio hay adems instrumentos de vidrio GRADUADOS para
medir volmenes de lquidos como la probeta, vasos de pp, matraz erlenmeyer y,
los VOLUMETRICOS como los matraces aforados y las pipetas volumtricas y
pipetas automticas.

El material de uso especfico es til para determinadas prcticas por
ejemplo el termmetro instrumento utilizado para medir la temperatura y el
densmetro, el cual es utilizado para medir la densidad de los lquidos.

El material de soporte est integrado por las pinzas para tubos de ensayo, y
la gradilla que sostiene los tubos de ensayo en determinada posicin.

Como material de porcelana se utiliza la placa de porcelana.

Los aparatos de laboratorio de bioqumica son:

A.- Centrfuga: La centrifugacin es un mtodo muy til en el laboratorio para
separar sustancias de diferente densidad suspendidas en un lquido; en ella, la
accin de la fuerza centrfuga da como resultado que las partculas ms pesadas
se sedimenten ms rpido que las partculas ligeras.
Las centrfugas ordinarias operan a rotaciones menores de 10 000
revoluciones por minuto (rpm). Las condiciones que limitan esta velocidad son la
resistencia de la parte de la centrfuga que sostiene el rotor (brazo), la friccin con
el aire y el calentamiento.

Precauciones para el uso de la centrfuga:

1. Los tubos en la centrfuga debern colocarse por pares para que no quede
desnivelada. Enfrente de un tubo con un volumen determinado, debe estar
otro, en la misma posicin, con el mismo volumen. El descuido de esta
regla implica un desnivel que, a las velocidades y fuerzas sealadas puede
daar el aparato.
2. Para no forzar el motor arrnquese gradualmente la centrfuga hasta
alcanzar la velocidad requerida.
3. Nunca se frene una centrfuga; djese parar por su propia inercia; el no
hacer esto conduce a que se agite el contenido de los tubos y se eche a
perder el trabajo.
4. No alzar las tapas de la centrfuga cuando est en movimiento ya que
podra proyectase el contenido de los tubos
5. Ante cualquier dificultad o duda consulte al profesor o tcnico de
laboratorio.

B.- Espectofotmetro: El espectrofotmetro es un aparato utilizado para medir
la variacin del poder difusor de una superficie determinada ( cociente entre el
flujo luminoso difundido y el incidente) en funcin de la longitud de onda y de la
radiacin incidente. Por medio de la espectrofotometra se puede determinar la
longitud de onda correspondiente a cada componente de un espectro y medir su
intensidad.

C.- Microscopio: El microscopio es un instrumento ptico que aumenta la
imagen de objetos pequeos. Puede ser simple y compuesto. El simple est
constituido por una lente convergente y equivalente a una lupa. El compuesto
cuenta bsicamente con 3 sistemas: MECANICO, OPTICO Y ELECTRICO, y,
algunas de sus partes son:

Un sistema de iluminacin y uno de observacin tiene una base y soporte
en forma de V U.
Una plataforma llamada platina donde se coloca el objeto que se ilumina
por transparencias.
Un sistema de lentes llamado condensador, colocado debajo de la platina y
precedido de un diafragma o iris y de un portafiltros.
Un dispositivo porta objetos que puede ser de revlver o de corredera.
Un tornillo macromtrico que enfoca por medio de cremallera y un tornillo
micromtrico.
Una fuente de luz que enva los rayos al objeto.
Un ocular por donde el observador examina la imagen aumentada del
objeto.

El ocular tiene una distancia focal de 1 a 5 cm. A menudo el instrumento lleva
varios oculares intercambiables de aumentos diferentes.

NORMAS DE SEGURIDAD:

Utiliza la bata de laboratorio (blanca, manga larga y con un largo que cubra
hasta la rodilla).
Evita introducir alimentos y sobre todo consumirlos.
Adopta una actitud de responsabilidad y disciplina.
No manipules las sustancias qumicas con los dedos. Utiliza una esptula,
cuchara o papel.
No utilices la pipeta con la boca.

ACTIVIDADES:

1. Lectura previa de la prctica.
2. Efectuar la identificacin y uso de cada uno de los materiales.
3. Por qu razn se debe colocar el material en la parte media de la mesa de
trabajo?
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4. Representar con dibujos el material y equipo expuestos en la prctica.
Material:

Equipo:

BIBLIOGRAFA.

Manual de Bioqumica y biologa molecular. Facultad de medicina UNAM.
PRACTICA No 3
TOMA DE MUESTRA SANGUINEA

OBJETIVOS:

Aprender a realizar una extraccin de sangre para las determinaciones de
pruebas de qumica sangunea.

MARCO TEORICO:

La sangre de un tejido contenido dentro del sistema vascular, corazn,
arterias, venas y capilares, est constituida por un lquido, el plasma sanguneo en
el cual circulan elementos que son las clulas: glbulos rojos, blancos y plaquetas.

Al extravasar la sangre en un recipiente se coagula, separndose en dos
partes una lquida de color pajizo que es el suero y la otra slida que es el
cogulo. El suero carece de los factores de la coagulacin uno de ellos es el
fibringeno que se ha transformado en fibrina constituyendo una red que
aprisiona a los elementos formes de la sangre dejando solo la parte lquida que es
el suero.

MATERIAL:

Torunda con alcohol.
Ligadura.
Tubos Vacutainer de tapn rojo.
Agujas Vacutainer verde (21 x 28 mm).
Gradilla.

PROCEDIMIENTO:

El sitio ms usado es la fosa antecubital (hueco del codo); otros sitios son la
mueca y el dorso de la mano o el pie. Se le pedir al paciente que se siente en
una silla y se apoye en el portabrazos o mesa.
1. Se debe colocar adecuadamente al paciente, segn se encuentre sentado o
en decbito prono, para tener acceso fcil a la fosa antecubital.
2. Se debe de preparar todo el material, incluidos los tubos, la ligadura, los
objetos para limpiar la piel, las jeringas, etc.
3. Insertar (roscar) la aguja Vacutainer en el adaptador (cada equipo deber
contar con el suyo propio).
4. Rotular con el nombre del paciente el tubo Vacutainer de tapn rojo (sin
anticoagulante), agregando adems el tipo de estudio a realizar, as como
la fecha de la toma.
5. Se solicita al paciente que cierre el puo para que las venas resulten ms
palpables.
6. Se selecciona la vena adecuada para la puncin. Las ms frecuentemente
usadas son la baslica y la mediana,
7. Colocar firmemente el torniquete en el brazo completamente firme estirado
y recargado en una almohadilla indicndole que abra y cierre varias veces
su mano.
8. Se limpia la zona con una torunda humedecida con alcohol. Se comienza
en el punto de la puncin y se prosigue la limpieza hacia fuera siguiendo un
movimiento espiral.
9. Fijar la piel junto con la vena con la mano izquierda y con la derecha
insertar la aguja con el bisel hacia arriba y empleando un movimiento firme
y rpido.
10. Insertar el tubo Vacutainer de tapn rojo al adaptador y extraer la sangre.
11. Cuando se tiene la cantidad necesaria se debe retirar el tubo Vacutainer,
aflojar el torniquete con la mano izquierda, oprimir el sitio de la puncin con
la torunda alcoholada y extraer la aguja rpidamente, indicar al paciente
que l mismo comprima el sitio de la puncin y doble o eleve su brazo para
prevenir la extravasacin de sangre a travs del sitio de puncin.
12. Separar la aguja del adaptador y colocarla en el contenedor de
punzocortantes (bote rojo proporcionado por el Tcnico acadmico y/o
catedrtico responsable).

MEDIDAS DE SEGURIDAD:

Es una regla de laboratorio que todos los accidentes personales, por
triviales que sean, se comuniquen inmediatamente al profesor, as como el uso
obligatorio de la bata, la cual deber permanecer cerrada durante todo el tiempo
que se permanezca en el laboratorio. La sangre, el plasma o el suero y todos los
recipientes que lo contengan deben considerarse como material potencialmente
infectante, por lo que (torundas y punzocortantes) debern colocarse en los
recipientes especiales para dicho fin (RPBI).

ACTIVIDADES:

1.- Efectuar una toma de muestra por equipo.

2.-Representar los dibujos de la prctica realizada.

BIBLIOGRAFIA:

Obtencin de muestras sanguneas de calidad analtica.
Asociacin Mexicana de Bioqumica Clnica A.C. Moran Villatoro, Luis.
Editorial Mdica Panamericana, 2001.
PRACTICA No 4
SEPARACION DE PLASMA Y COAGULO

OBJETIVOS:

Diferenciar al suero del plasma y la importancia de cada uno en las
determinaciones de bioqumica clnica.

MARCO TEORICO:

Para obtener el plasma es necesario detener la coagulacin cuando se
extravasa la sangre esto se consigue por medio de los anticoagulantes. Por medio
de los anticoagulantes se obtiene la sangre en forma parecida a como se
encuentra dentro del sistema vascular, y se centrfuga, se separan los elementos
formes en un paquete llamado paquete globular y queda un lquido, el plasma.
Tanto el suero como el plasma contienen numerosas sustancias disueltas
accesibles a ser detectadas y cuantificadas.

MATERIAL:

Torunda con alcohol.
Ligadura.
Tubos Vacutainer de tapn rojo.
Agujas Vacutainer verde (21 x 28 mm).
Gradilla.
Centrfuga.
Bao Mara.

PROCEDIMIENTO:

El sitio ms usado es la fosa antecubital (hueco del codo); otros sitios son la
mueca y el dorso de la mano o el pie. Se le pedir al paciente que se siente en
una silla y se apoye en el portabrazos o mesa.
1. Se debe colocar adecuadamente al paciente, segn se encuentre sentado o
en decbito prono, para tener acceso fcil a la fosa antecubital.
2. Se debe de preparar todo el material, incluidos los tubos, la ligadura, los
objetos para limpiar la piel, las jeringas, etc.
3. Insertar (roscar) la aguja Vacutainer en el adaptador (cada equipo deber
contar con el suyo propio).
4. Rotular con el nombre del paciente el tubo Vacutainer de tapn rojo (sin
anticoagulante), agregando adems el tipo de estudio a realizar, as como
la fecha de la toma.
5. Se solicita al paciente que cierre el puo para que las venas resulten ms
palpables.
6. Se selecciona la vena adecuada para la puncin. Las ms frecuentemente
usadas son la baslica y la mediana.
7. Colocar firmemente el torniquete en el brazo completamente firme estirado
y recargado en una almohadilla indicndole que abra y cierre varias veces
su mano.
8. Se limpia la zona con una torunda humedecida con alcohol. Se comienza
en el punto de la puncin y se prosigue la limpieza hacia fuera siguiendo un
movimiento espiral.
9. Fijar la piel junto con la vena con la mano izquierda y con la derecha
insertar la aguja con el bisel hacia arriba y empleando un movimiento firme
y rpido.
10. Insertar el tubo Vacutainer de tapn rojo al adaptador y extraer la sangre.
11. Cuando se tiene la cantidad necesaria se debe retirar el tubo Vacutainer,
aflojar el torniquete con la mano izquierda, oprimir el sitio de la puncin con
la torunda alcoholada y extraer la aguja rpidamente, indicar al paciente
que l mismo comprima el sitio de la puncin y doble o eleve su brazo para
prevenir la extravasacin de sangre a travs del sitio de puncin.
12. Separar la aguja del adaptador y colocarla en el contenedor de
punzocortantes (bote rojo proporcionado por el Tcnico acadmico y/o
catedrtico responsable).
13. Incubar el tubo con la sangre en posicin vertical en Bao Mara a 37
grados C, durante 20 minutos.
14. Retirar del bao y con la ayuda de un palillo de madera desprender el
cogulo de las paredes del tubo.
15. Centrifugar el tubo con la sangre a 2 500 rpm (revoluciones por minuto)
durante 5 minutos.
16. Separar el suero por decantacin en otro tubo de ensaye.
17. Debe evitarse que el suero se mezcle con porciones de cogulo; si esto
sucede, es necesario centrifugar y volver a separar el suero con una pipeta
Pasteur.
18. Para obtener plasma, hay que evitar la coagulacin por medio de un
anticoagulante (heparina o EDTA) en el tubo que recibe la sangre (en ste
caso se utiliza tubo Vacutainer con tapn lila). Mezclar suavemente por
inversin. Centrifugar a 2 500 rpm durante 5 minutos y extraer enseguida el
plasma sobrenadante con una pipeta Pasteur; pasarlo a otro tubo.

MEDIDAS DE SEGURIDAD:

Es una regla de laboratorio que todos los accidentes personales, por
triviales que sean, se comuniquen inmediatamente al profesor, as como el uso
obligatorio de la bata, la cual deber permanecer cerrada durante todo el tiempo
que se permanezca en el laboratorio. La sangre, el plasma o el suero y todos los
recipientes que lo contengan deben considerarse como material potencialmente
infectante, por lo que (torundas y punzocortantes) debern colocarse en los
recipientes especiales para dicho fin (RPBI).

ACTIVIDADES:
1.- Efectuar una toma de muestra por equipo.

2.- Separar el suero de la muestra de sangre.

3.- Cul es la diferencia entre suero y plasma y cul su importancia?
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_______________________________________________________________
______________________________________________________

4.-Representar los dibujos de la prctica realizada.

BIBLIOGRAFIA

Obtencin de muestras sanguneas de calidad analtica.
Asociacin Mexicana de Bioqumica Clnica A.C. Moran Villatoro, Luis.
Editorial Mdica Panamericana, 2001.
PRACTICA No 5
DETERMINACION DE GLUCOSA SANGUINEA

OBJETIVOS:

Realizar el mtodo enzimtico para la determinacin de glucosa en suero.
Conocer que la determinacin de glucosa sangunea es una de las mediciones
qumicas ms usada en clnica, y que se emplea para determinar el
metabolismo de los carbohidratos y llevar el control de los diabticos.

FUNDAMENTO DEL METODO:

El esquema de la reaccin es el siguiente:

Glucosa + O
2
-------GOD--------------------- cido glucnico + H
2
O
2

2 H
2
O
2
+ 4 AF + fenol ---------POD--------- quinona coloreada + 4 H
2
O

GOD= solucin de glucosa oxidasa.
POD = peroxidasa.

MARCO TEORICO:

La glucosa es el energtico principal del organismo y se obtiene
bsicamente de la alimentacin, aunque puede producirse durante el propio
metabolismo del cuerpo. Los azcares distintos a la glucosa por lo general son
convertidos a glucosa lo mismo que la mayor parte de los carbohidratos ingeridos.
Los azcares simples como la glucosa son usados con rapidez, mientras que los
dems nutrimentos, como las protenas, cuando se ingieren en cantidad mayor de
la necesaria, son convertidos de manera gradual a glucgeno y almacenados en el
hgado para ser usados en la conservacin de los valores sricos normales de
glucosa entre comidas. La conservacin de los valores sricos normales en
ayunas depende de la interaccin de cierto nmero de estructuras corporales,
entre ellas el hgado, los tejidos perifricos y las hormonas, todos los cuales
actan para elevar o reducir la glucosa srica. Tambin los riones realizan la
gluconeognesis, ya que pueden sintetizar hasta 10% de la capacidad del hgado.
Debido a que la concentracin de glucosa srica por lo general se vuelve anormal
slo cuando hay un trastorno grave de esta interaccin, verificar la glucosa srica
ayuda a evaluar la funcin e integridad del sistema.

La patologa ms comn relacionada con el metabolismo de los hidratos de
carbono es la Diabetes Mellitus. El diagnstico precoz y el control de los pacientes
diabticos, tienen por objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones de los
sntomas resultantes de la hiperglucemia, mediante el tratamiento adecuado. Dado
que existen mltiples factores causales de hiper o hipoglucemia, debe
considerarse en cada caso la condicin fisiolgica y / o la patologa presente en el
paciente en cuestin.

MATERIAL:

Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 505 nm.
Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
Equipamiento habitual de laboratorio.

MUESTRAS:

Suero o plasma libre de hemolisis.
El suero debe separarse lo antes posible de coagulo.
Estabilidad: la glucosa en suero o plasma es estable 3 dias a 2-8 C.

REACTIVOS:

Segn el kit que sea utilizado.

PROCEDIMIENTO:

Segn el kit que sea utilizado.

1. Efectuar la extraccin de sangre y obtener el suero sanguneo.
2. En tres tubos de ensaye marcados con B (blanco) S (standar) y D
(desconocido) colocar :

B S D

Standard - 20 ul -

Muestra - - 20 ul

Reactivo de trabajo 2 ml. 2 ml. 2ml

3. Incubar 10 minutos en bao de agua a 37 0C. Luego leer en espectrofotmetro
a 550 nm llevando el aparato a cero con el blanco.

CALCULO DE LOS RESULTADOS:

Glucosa g/l = D x f donde f = 1,00 g/l
----------
S
Valores de referencia:

Suero o plasma: 0.70 1.10 g/l

ACTIVIDADES:

1. Definir hiper e hipoglucemia y explicar su fisiologa.
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2. Explique el papel de las hormonas en la regulacin de la glucosa.
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3. Defina los tipos de diabetes.
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4. Cundo aumentan y cundo disminuyen las concentraciones sricas de
glucosa?
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CASO CLNICO:
Hipoglucemia secundaria a intoxicacin alcohlica.

Paciente de 58 aos, alcohlico crnico, cuyos familiares relatan que ha ingerido
una gran cantidad de alcohol en los dos ltimos das con un consumo muy escaso
de alimentos. Inici su padecimiento con nusea, vmito, mareo, sudacin,
cefalea, visin borrosa y confusin; present en una sola ocasin, una convulsin,
por lo que es llevado al servicio de urgencias. A la exploracin se encuentra
semiconsciente con aliento alcohlico e hipotermia.
Se procede a un lavado gstrico para remover el alcohol an no absorbido; se
mantienen permeables las vas respiratorias; se instala oxigenoterapia y se le
administra solucin glucosada por va endovenosa.
Los resultados de laboratorio demuestran: Alcohol 300 mg/dl, Glucosa 2.0
mmol/l, Lactato 9.0 mmol/l, PH 7.2

1. Cules son los sntomas de la hipoglucemia?
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2. De qu forma el etanol produce acidosis lctica e hipoglucemia?
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3. El alcoholismo es la base de muchas deficiencias vitamnicas Qu
implicaciones metablicas tienen estas deficiencias (complejo B)?
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_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________

BIBLIOGRAFA:

Kathleen Morrison Treseler. Laboratorio clnico y pruebas de diagnstico. Editorial
Manual Moderno S.A. de C.V.
Rex Montgomery. Bioqumica: Casos y texto. Editorial Mosby-Year Book. Wolfe
Publishing.
Manuales Departamentales. Bioqumica y Biologa celular. Facultad de Medicina
UNAM. Editorial Mc.Graw Hill.
PRACTICA No 6
DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL

OBJETIVOS:

Conocer uno de los mtodos utilizados para el anlisis de colesterol.
Determinar los valores normales y anormales en una muestra tomada en el
laboratorio.

INTRODUCCIN:

Las concentraciones sricas de colesterol permanecen en forma
notablemente constante de un da a otro en una persona sana, pero tiende a
aumentar con la edad y cambia con las poblaciones adems de que hay variacin
amplia entre individuos.

La mayor parte de colesterol corporal es producido por sntesis, alrededor
de 1 g/ da. Slo cerca de un tercio de esa cantidad es proporcionada por los
alimentos. Aunque hay una proporcin inversa de la sntesis a la ingestin oral, la
produccin endgena no es suprimida del todo por el consumo, ya que slo se
deprime la sntesis heptica. Ningn nivel srico de colesterol ha sido determinado
como valor anormal crtico, sin embargo, en individuos mayores de 30 aos, una
concentracin de colesterol elevada sigue siendo uno de los mejores indicadores
de las poblaciones en riesgo para el desarrollo de cardiopata isqumica (Harvey y
colaboradores, 1991).

El colesterol es un constituyente primario de las lipoprotenas de baja
densidad (LDL, del ingls Low-Density Lipoproteins), pero puede encontrarse
tambin en las lipoprotenas de alta densidad (HDL, High-Density Lipoproteins) y
en las de muy baja densidad (VLDL, Very-Low Density Lipoproteins).

La medicin de colesterol srico solo tiene valor limitado. Sin embargo,
cuando se considera junto con mediciones del complejo lipoprotenas de alta
densidad-colesterol (HDL-c), es posible determinar el riesgo de coronariopata
(CRP). Este riesgo aumenta 25 % con cada 5 mg/100 ml que decrece HDL-c
debajo de la media. Los riesgos pueden calcularse usando la proporcin de HDL-
C a LDL-c o al colesterol total. Existe una relacin inversa entre HDL-c y la
incidencia y prevalencia de CRP. Otro clculo del riesgo puede hacerse
calculando la proporcin de HDL-c a LDL-c o al colesterol total.

El colesterol de los alimentos se absorbe con facilidad. Los vegetales no
contienen colesterol pero poseen otros esteroles, mal absorbidos por el cuerpo,
los cuales inhiben l absorcin del primero cuando se administran en cantidades
abundantes- una base para incrementar los regmenes dietticos de grasas no
saturadas en el tratamiento de hipercolesterolemia ( Howard y Herbold, 1982).

El colesterol y todos los lpidos son digeridos en el duodeno. Despus de
emulsificacin biliar, el colesterol difunde a la sangre y a la linfa.

Slo el hgado se encarga de retirar al colesterol de la circulacin. Es
secretado directamente en la bilis y tiene una ligera utilizacin a cidos biliares. La
mayor parte del colesterol de la bilis se reabsorbe del intestino, pero , en las heces
se excreta una cantidad pequea , la cual constituye alrededor de la mitad de todo
el colesterol excretado del cuerpo.

El colesterol es secretado del hgado a la sangre y a la bilis , incluyendo los
cidos biliares, y el primer paso en la sntesis de esteroides a partir del colesterol
tiene lugar dentro del hgado. Alrededor de tres cuartas partes del colesterol
esterificado por rl hgado es transportado a los tejidos corporales donde penetra a
las clulas y es usado. En la corteza suprarrenal, el colesterol acta como un
precursor para la pregnenolona, que a su vez es precursora de progesterona,
testosterona, estrgeno, aldosterona y cortisol. En la piel, el colesterol es
precursor de la vitamina D que es activada por la aplicacin de la luz ultravioleta.

MATERIAL:

3 Tubos de ensayo.
2 pipetas de 1 .0 ml.
Una pipeta de 5.0 ml.
1 vaso de precipitado.
Termmetro.
Suero.
Centrfuga.
Bao mara.
Espectrofotmetro.

PROCEDIMIENTO:

1. Marcar 3 tubos de ensayo: B (blanco) , M (muestra) y P (patrn) y proceder
como sigue:

BLANCO MUESTRA PATRON
Suero
Solucin patrn
Agua destilada
Reactivo de
colesterol
------
-----
0.05 ml.-
2.0 ml.
0.05 ml.
------
------
2.0 ml
------
0.05 ml.
------
2 ml.
2. Despus de 10 minutos, pipetear sobre la pared de cada tubo sobre la
superficie del lquido 0.5 ml de cido sulfrico.
3. Colocar los tubos inmediatamente despus de la adicin de cido sulfrico
en un bao de agua a temperatura de 15 25 C durante 5 minutos.
4. Medir la absorcin de la muestra y el patrn contra en blanco de reactivo de
10 30 minutos despus de la adicin del cido sulfrico.

CALCULOS:

Colesterol (mg/100 ml) = Absorbancia de la muestra x 300
Absorbancia del patrn

(La concentracin de colesterol depende de la edad, sexo, caracteres tnicos y la
alimentacin).

200-250 mg/ 100 ml.

ACTIVIDADES:

1. Cundo se encuentran disminuidas las concentraciones sricas de
colesterol?
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2. Las concentraciones sricas de colesterol aumentan en :
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CASO CLNICO:
Hipercolesterolemia y aterosclerosis.

Un hombre de 56 aos acudi al mdico por presentar dolor precordial en reposo,
que se incrementaba con el esfuerzo. Se le detect hipercolesterolemia que, al
anlisis de los lpidos, mostr que la mayora del colesterol plasmtico elevado se
encontraba en la fraccin de lipoprotena de baja densidad (LDL). Se le realiz una
arteriografa coronaria la cual mostr un estrechamiento de las arterias. La
evaluacin de la dieta indic que consuma gran cantidad de alimentos ricos en
colesterol, aunque en los ltimos meses haba seguido una dieta baja en grasas.
Fue diagnosticado de aterosclerosis en las arterias coronarias. El tratamiento
consisti en una dieta sin colesterol y en administrar preparados de lovastatina,
un inhibidor de la HMG-CoA reductasa. Fue tratado tambin con colestiramina,
una resina que capta las sales biliares. La resina no se absorbe y permanece en la
luz intestinal donde se une a las sales y aumenta la cantidad de las mismas que
se excreta con las heces.

1. Cules son algunos alimentos ricos en colesterol?
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2. Cul es la funcin de la bilis en la digestin?
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3. Por qu el hecho de disminuir la concentracin plasmtica de colesterol
puede ser til para la salud de este paciente?
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4. Qu papel desempea la HMG-CoA reductasa en la biosntesis de
colesterol?
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__________________________________________________________________
____________________________

BIBLIOGRAFA:

Kathleen Morrison Treseler. Laboratorio clnico y pruebas de diagnstico.
Editorial Manual Moderno.

Manual departamental. Bioqumica y Biologa Molecular. Facultad de medicina
UNAM. Editorial Mc.Graw Hill

Montgomery R. Bioqumica Casos y Texto. Quinta edicin. Editorial Mosby Year
Book Wolfe publishing.

PRACTICA No 7
DETERMINACIN DE TRIGLICRIDOS.

OBJETIVOS:

Conocer el mtodo por medio del cual se puede determinar el valor de los
triglicridos en una muestra sangunea.
Determinar los valores de una muestra tomada en el laboratorio.

FUNDAMENTO:

Los triglicridos son extrados selectivamente mediante una mezcla de
heptanol-isopropeno-cido sulfrico. Se forman dos capas : la superior, no polar
contiene los triglicridos y la inferior contiene los fosfolpidos, bilirrubina,glucosa,
protenas y glicerol.

INTRODUCCION:

Los dos lpidos de la sangre con un mximo inters en el diagnstico clnico
son el colesterol y los triglicridos; ambos se transportan en las lipoprotenas, que
son partculas globulares de alto peso molecular con un ncleo formado por lpidos
hidrofbicos, triglicridos y steres de colesterol, los cuales aportan la mayor parte
de la masa de la partcula, y por una sola capa superficial de molculas de
fosfolpidos, colesterol y protenas o polipptidos que rodean al ncleo y
estabilizan la partcula para que permanezcan en solucin dentro del plasma.

La mayora de los tejidos del cuerpo humano puede convertir los cidos
grasos en triglicridos; hgado y tejido adiposo son los sitios principales de
sntesis. Los triglicridos son almacenados en el tejido adiposo; en el msculo
esqueltico y cardiaco se guardan solo para consumo local. La sntesis heptica
de los triglicridos se utiliza para la produccin de las lipoprotenas.

La sntesis y la hidrlisis de los triglicridos constituyen un proceso contnuo
en el tejido adiposo. Sin embargo en condiciones normales, los sistemas de
sntesis e hidrlisis estn bien equilibrados y los almacenes de triglicridos se
mantienen relativamente constantes.

Cuando el almacenamiento de energa en forma de triglicridos mediante el
tejido adiposo es excesivo, se establece una condicin llamada obesidad . Las
estadsticas indican que la obesidad est bien correlacionada con un promedio de
vida menor y con un aumento en los problemas de salud, principalmente los
cardiovasculares. Muchos factores conducen a ella, pero la causa bsica es por
supuesto una ingestin calrica por encima de los requerimientos energticos
estndar.
MATERIAL:

Tubos de ensaye.
Pipeta graduada.
Bao mara.
Espectrofotmetro.
Suero sanguneo.
Reactivos de la prctica.

MTODO:

1. Agitar fuertemente la solucin extractora antes de usarla. Si se presentase
turbiedad, incubar en bao mara ligeramente a 370 C y agitar bien.
2. En un tubo de ensaye de 12 x 100 depositar 0.5 ml. de suero problema
ms 4 ml. de solucin extractora. Agitar vigorosamente durante 10
segundos. Dejar en reposo en posicin vertical hasta que se formen y
separen 2 capas.
3. Marcar tres tubos de ensaye con las letras B ( blanco ), M (muestra), y P
(patrn).
4. Enseguida depositar en el fondo de cada uno de los tubos las alcuatas del
extracto (capa superior), etilato de sodio y patrn segn lo siguiente:

Extracto ( capa
superior)
0.2 ml.
Solucin patrn

0.2 ml.
Etilato de sodio

4 gotas 4 gotas

5. Mezclar bien y colocar en bao mara a 56 C. Durante 1 minuto.
6. Agregar a cada uno de los tubos anteriores la solucin oxidante.

Solucin oxidante 0.5 ml. 0.5 ml. 0.5 ml.

7. Mezclar bien y mantener en bao mara a 56 grados C por 30 segundos.
Agregar a cada uno de los tubos 5 ml. de reactivo de color.
8. Mezclar los tubos con agitacin suave y colocarlos nuevamente en el bao
de agua a 56 0 C durante 5 minutos.
9. Sacar los tubos y colocarlos en agua fra. Leer las absorbancias en el
espectrofotmetro a 410 nm.

CALCULOS:

Triglicridos (mg / 100 ml) = Absorbancia de la muestra x 200
Mujeres 37 189 mg/ 100 ml.
Hombres 34 252 mg/ 100 ml.

ACTIVIDADES:

1. Mencione los padecimientos en los cuales se encuentran los triglicridos
elevados.
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2. En que consiste la condicin txica llamada hgado graso.
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3. Defina que es la Obesidad.
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CASO CLNICO:

Obesidad.

Chica de 19 aos, busca ayuda mdica por un exceso de peso de 30 kg. La
mayor parte de su exceso de peso era en forma de triacilgliceroles en el tejido
adiposo. Al estudiar su dieta se comprob que era muy pobre, gran parte de su
ingesta calrica era en forma de carbohidratos (dulces, galletas, pasteles, bebidas
azucaradas y cerveza ) ; en realidad, su ingesta de grasas era bastante moderada.

1. Cmo es posible que se formen cantidades excesivas de triacilgliceroles
en el cuerpo si la dieta contiene predominantemente carbohidratos?
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2. Cmo llega al citoplasma el acetil CoA generado dentro de las
mitocondrias para entrar en la va de biosntesis de novo de los cidos
grasos?
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3. Cul es la enzima limitadora de la velocidad en la biosntesis de novo de
los cidos grasos?
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BIBLIOGRAFA:

Kathleen Morrison Treseler. Laboratorio Clnico y pruebas de diagnstico. Editorial
Manual Moderno, S.A. de C.V.

Daz Zagoya- Hicks. Bioqumica. Editorial Interamericana. McGraw-Hill.

Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto. Quinta edicin. Editorial Mosby Year
PRACTICA No 8
DETERMINACION DE LPIDOS TOTALES

OBJETIVOS:

Conocer uno de los mtodos utilizados para la determinacin de los lpidos
totales.
Determinar los valores totales de lpidos de una muestra sangunea obtenida
en el laboratorio.

FUNDAMENTO:

Los lpidos insaturados reaccionan con el cido sulfrico formando un in
carbonio que reacciona con el carbonilo de la fosfovainillina produciendo un
complejo de color rosa, que es estabilizado por resonancia. La intensidad del color
del complejo es proporcional a la concentracin de los lpidos en el suero.

INTRODUCCIN:

La concentracin total de lpidos aumenta cuando hay un incremento en
cualquier fraccin de lpidos plasmticos (excepto triglicridos), como en el
sndrome nefrtico, cetosis y enfermedades cardiovasculares (aterosclerosis).
Puede encontrarse disminucin en las concentraciones totales de lpidos en
sndromes de malabsorcin. Se produce un incremento fisiolgico despus de una
comida grasosa, y varios frmacos aumentan los lpidos totales (por ejemplo,
anticonceptivos orales, estrgeno).

MATERIAL:

Espectrofotmetro.
Tubos de ensayo.
Suero.
Reactivos para lpidos totales (Bioxon).
Parilla elctrica.
2 vasos de precipitado.
Pipetas graduadas de 1 y 5 ml.

PROCEDIMIENTO:

1.- Marcar 3 tubos de ensayo con las letras MMA (Mezcla Muestra Acida), MPA
(Mezcla Patrn Acida) y B (Blanco) y proceder como sigue:

B MMA MPA
Muestra
Patrn
Acido sulfrico
conc.
-
-
-
0.1 ml.
-
2.0 ml.
-
0.1 ml.
2.0 ml.

2.- Mezclar bien y poner en bao de agua hirviendo durante 10 minutos.
3.- Colocar 5 minutos en bao de agua fra. Proceder como sigue:

B MUESTRA PATRON
MMA
MPA
cido sulfrico
conc.
Reactivo de color
-
-
0.1 ml.
2.5 ml.
0.1 ml.
-
-
2.5 ml.
-
0.1 ml.
-
2.5 ml.

4.- Mezclar bien e incubar a 37 o C durante 15 minutos. Determinar las
absorbancias de las muestras y del patrn a 540 nm igualando a cero con el
blanco. El color es estable por 15 minutos.

CALCULOS:

Lpidos totales (mg/100 ml) = Absorbancia de la muestra X 1000

Como el sistema colorimtrico sigue la ley de Beer, puede ser usado el factor para
el clculo de los resultados.

Factor de calibracin = 1000 ________

Valores de Referencia:
400 1000 mg/ 100 ml.

ACTIVIDADES:

1. En qu consiste el sndrome nefrtico?
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2. Explique en qu consiste la cetosis.
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3. Cmo se relaciona la concentracin elevada de lpidos totales con las
enfermedades cardiovasculares (aterosclerosis)?
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CASO CLNICO:

Cetosis por inanicin. Obesidad

Mujer de 27 aos llega al servicio de urgencias mdicas despus de haber sufrido
un desmayo. Al interrogarla, relata que lleva 15 das a dieta de agua, t, y
verduras cocidas para bajar de peso, sin ningn control mdico. Se detect
aliento con olor a manzanas, cetonuria, cetonemia, cidos grasos libres elevados,
triacilgliceroles elevados, hipoglucemia y presin arterial baja; su peso era de 74
kg y su estatura de 1.59 m. Se diagnostica cetoacidosis por inanicin y obesidad
exgena. Su dieta mostr que gran parte de su ingesta calrica era en forma de
carbohidratos (galletas, chocolates, pasteles, refrescos, dulces, etc.). El
tratamiento consisti en administrar parenteralmente solucin glucosada y
continuar con una dieta normocalrica.

1. Cmo es posible que se formen grandes almacenes de energa en formas
de grasas, si la dieta contiene predominantemente carbohidratos?
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2. Cul es el papel de los cuerpos cetnicos en el metabolismo?
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3. Qu rgimen diettico recomendara a esta persona para bajar de peso?
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__________________________________________________________________
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BIBLIOGRAFA:

Katkleen Morrison Treseler. Laboratorio clnico y pruebas de diagnstico. Editorial
Manual Moderno.

PRACTICA No 9
DETERMINACIN DE PROTEINAS TOTALES

OBJETIVOS:

Determinar los valores normales y anormales de protenas totales en una
muestra sangunea extrada en el laboratorio.

FUNDAMENTO:

Las protenas del suero reaccionan con el reactivo de Biuret formando una
coloracin violeta, cuya intensidad es proporcional a la concentracin de las
mismas en la muestra.

INTRODUCCIN:
Al conjunto de protenas del plasma se les denomina Protenas Totales (PT)
y tiene una concentracin aproximada de 7 g/ 100 ml.

La disminucin de las PT, que es casi siempre un reflejo de reduccin de la
fraccin albmina, se observa en varios trastornos. Por lo general, las globulinas y,
con mayor frecuencia la fraccin de globulina alfa, aumentan al mismo tiempo, lo
que resulta en una concentracin de PT dentro de lmites normales. Cuando la
concentracin de PT baja de 5.3 g/ 100 ml., se considera un nivel crtico, y casi de
modo invariable se produce edema. En muchos estados patolgicos no
relacionados la hipoproteinemia aparece con lentitud e insidia. Puede ser
secundaria a ingestin inadecuada de protena-incluyendo la falta de uno o de
todos los aminocidos esenciales- o a una absorcin deficiente, secundaria a una
sntesis inadecuada de protena dentro del cuerpo (como en la disfuncin
heptica o en trastornos genticos), o secundaria a una prdida elevada de
protena por disfuncin renal o por estados patolgicos que aumentan la cantidad
de protenas de peso molecular bajo en la circulacin, que pueden filtrarse y
perderse (hemlisis intravascular). La prdida tambin tiene lugar debido a un
catabolismo exagerado de protena (desgaste caquctico en neoplasias malignas),
aumento de la concentracin de enzimas catablicas o en enteropatas
gastrointestinales.

Por lo general, la hiperproteinemia se presenta secundaria a la prdida
patolgica de lquido o una reduccin importante en la ingestin de agua. La
cantidad absoluta de protenas sricas no cambia, pero hay un aumento en la
concentracin, resultante de la prdida del solvente agua. Una elevacin absoluta
de la concentracin srica de protenas se observa en el mieloma mltiple.

MATERIAL EMPLEADO:

Tubos de ensaye.
Pipetas.
Espectrofotmetro.
Suero sanguneo.

METODO:

1.- Marcar 3 tubos de ensayo con las letras B (Blanco), P (Patrn) y M (Muestra) y
agregar:

Agua destilada
Muestra ( suero )
Patrn de
protenas
Reactivo de Biuret
0.1 ml.
-
-
5 ml.
-
0.1 ml
-
5.0 ml.
-
-
0.1 ml-
5.0 ml.

2.- Mezclar bien y dejar en reposo por 15 minutos.
3.- Determinar las absorbancias del patrn y de la muestra a 545 nm ajustando a
cero con el blanco. El color es estable por tres horas.

CALCULOS:

Protenas Totales (g / 100 ml.) = Absorbancia de la muestra X 7

Valores de Referencia:
Protenas Totales: 6.0 a 8.0 g/ 100 ml.

ACTIVIDADES:

1.- Mencione cuando aumentan las concentraciones sricas de Protenas
Totales.
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2.- Mencione cuando disminuyen las concentraciones sricas de Protenas
Totales.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

3.- Explique cmo intervienen las protenas en el metabolismo del agua en el
espacio extracelular y por consiguiente, como contribuye su carencia a la
formacin de edema.
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__________________________________________________________________
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BIBLIOGRAFA:

El Manual Moderno, S.A. de C.V.
PRACTICA No 10
DETERMINACION DE ENZIMAS: TRANSAMINASAS

OBJETIVOS:

Conocer la utilidad que tiene la determinacin de la actividad de la TGP y la
TGO en el suero.
Interpretar bioqumicamente la elevacin de las enzimas en el suero.
Conocer su importancia como enzimas de diagnstico clnico.

FUNDAMENTO:

La GOT cataliza la siguiente reaccin:
L aspartato + a- cetoglutarato GOT > glutamato + oxalacetato
La GPT cataliza la siguiente reaccin:
L alanina + a- cetoglutarato GOT > glutamato + piruvato
El piruvato formado ( el oxalacetato es inestable y se transforma en piruvato),
reacciona con la 2,4 dinitrofenilhidrazina producindose, en medio alcalino, un
compuesto coloreado que se mide a 505 nm.

INTRODUCCIN:

Las transaminasas son enzimas ampliamente difundidas en el organismo,
que catalizan la transferencia de un grupo amino de un aminocido a un
cetocido, en una de las ms importantes reacciones del metabolismo proteico. El
inters clnico est centrado especialmente en dos de ellas: GOT (transaminasa
glutmico oxalactica) y GPT (transaminasa glutmica pirvica).

Estas enzimas tienen accin eminentemente intracelular por lo que la
actividad srica en condiciones normales es baja o nula. Un aumento de la
actividad ser evidencia de un deterioro de los tejidos en que se encuentran, de
los cuales resultan particularmente importantes corazn e hgado.

Se ha observado que luego de un infarto de miocardio se produce en suero
un marcado aumento de la actividad de GOT, debido a la liberacin al torrente
sanguneo de esta enzima, tan abundante en el msculo cardaco. En este caso
no existir aumento en la actividad srica de GPT o ser mnimo.

En hepatitis virale y otras formas de enfermedad heptica que involucren
necrosis de tejido, habr tambin un incremento considerable de la actividad
srica en transaminasas, incluso antes de la aparicin de sntomas clnicos como
la ictericia. En este caso, GPT ser la enzima predominante debido a su gran
concentracin en el tejido heptico. Una elevada actividad de transaminasas
puede detectarse tambin en traumas accidentales y quirrgicos y en distrofias
musculares y miositis.

Aplicaciones clnicas de las enzimas:
La medicin de la actividad enzimtica es til para el seguimiento de
enfermedades declaradas, de tendencias genticas hacia ciertos estados
patolgicos y de la respuesta de un paciente a ciertos tratamientos.

MATERIAL EMPLEADO:

Espectrofotmetro.
Micropipetas.
Pipetas.
Tubos de ensayo.
Bao de agua a 37C.
Suero.
Reactivos de transaminasas.

METODO:

En dos tubos de fotocolormetro marcados B (blanco) y D (desconocido), colocar:
B D
Sustrato ( GOT o GPT ) 0.5 ml. 0.5
ml.
Colocar en bao de agua a37 oC unos minutos. Luego agregar:
Suero -
0.1 ml.
Agua 0.1 ml -
Mezclar por agitacin suave e incubar exactamente 30 minutos y agregar:
Diluyente para enzimas 5 ml. 5
ml.
Mezclar por inversin y retirar del bao. Despus de dos minutos leer la
absorbancia en el espectrofotmetro a 505 nm llevando el aparato a cero D.O. con
agua destilada.

CALCULOS:

Empleando tablas de conversin.

(Varan con el mtodo empleado)
TGO: 0-41 UI/L
TGP: 0- 45 UI/L

ACTIVIDADES:

1. Cul es la funcin de las transaminasas?
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2. En qu casos aumenta las concentraciones de TGO (transaminasa
glutmico oxalactica).
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3. Cul es el diagnstico principal de la TGP? (transaminasa glutmico
pirvica).
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_______________________________________________________________
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CASO CLNICO:

Hepatitis

Un hombre de 37 aos ingres en un hospital por glomerulonefritis, que se trat
conservadoramente. A pesar de ello, la enfermedad progres y en los 6 meses
siguientes su hgado fue agrandndose y se hizo doloroso a la palpacin. Las
pruebas de funcin heptica eran anmalas. La concentracin de transaminasa
normal de 2-1
.

1. Por qu aument la actividad de la TGO del suero?
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_______________________________________________________________
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2. Qu vitamina es una de las coenzimas de la TGO?
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BIBLIOGRAFA:

Manual Moderno.

Rex Montgomery. Bioqumica Casos y texto. Quinta edicin. Mosby Year Book.
Wolfe Publishing.

Bioqumica de Harper. Editorial Manual Moderno.

PRACTICA No 11
DETERMINACIN DE ENZIMAS: AMILASA

OBJETIVOS:

Identificar a esta enzima como una de las principales utilizadas para el
diagnstico clnico.
Conocer su importancia en la evaluacin de la pancreatitis aguda.

FUNDAMENTO:

La alfa amilasa incubada en presencia de solucin amortiguadora de
almidn, cataliza la hidrlisis del mismo y su actividad es medida fotomtricamente
despus de la adicin de yodo.

INTRODUCCIN:

Las amilasas son enzimas que catalizan la hidrlisis de los polisacridos.
Las pruebas de amilasa en suero y en la orina son mediciones cuantitativas de la
cantidad de la enzima que se encuentra en la sangre o en la orina .Esta prueba
es de suma importancia en la evaluacin de la pancreatitis aguda. La amilasa que
se encuentra en la sangre es producida principalmente por las glndulas salivales
y el pncreas. Las lesiones en las clulas glandulares ( como en la pancreatitis
aguda) liberan grandes cantidades de amilasa . La enzima penetra rpidamente
en la sangre y aumenta sus valores sricos. Los valores de amilasa en orina
tambin aumentan rpidamente, a menudo dentro de varias horas posteriores al
aumento en el suero. El incremento en la orina se presenta frecuentemente
cuando los valores sricos comienzan a disminuir.

MATERIAL EMPLEADO:

Tubos de ensayo.
Espectrofotmetro.
Muestra (suero).
Reactivos (tcnica de Bioxon).
Pipetas.

METODO:

1.- Marcar Dos tubos de ensayo con las letras C (control) y M (muestra)
respectivamente y enseguida pipetear:

CONTROL MUESTRA
Substrato ( React. No. 1 ) 0.5 ml. 0.5
ml.
Amortiguador ( React. No. 2 ) 0.5 ml. 0.5 ml.

2.- Incubar los tubos a 37 C aproximadamente durante 2 minutos y despus
agregar:

CONTROL MUESTRA
Suero - 0.02 ml.

3.- Mezclar rpidamente e incubar a 37 C durante 7 minutos y 30 segundos
(cronometrados). Enseguida agregar:

CONTROL MUESTRA
Reactivo de color 1 ml. 1 ml.
Agua destilada 8 ml. 8 ml.

4.- Agitar y determinar las absorbancias del control ( C ) y de la muestra ( M ) a
660 nm, ajustando el cero con agua destilada. El color es estable durante 2 horas.

CALCULOS:

Ac = Absorbancia del control
Am = Absorbancia de la muestra

Ac Am
__________ X 800 = U.A/ 100 ml.
Ac

Definicin de unidad: Una unidad Amiloltica o Caraway (UA) es la cantidad de
enzima contenida en 100 ml. de muestra que puede hidrolizar 10 mg. de almidn
en 30 minutos, en las condiciones de la reaccin.

Suero de 60 a 160 U.A./100 ml.

ACTIVIDADES:

1. Las concentraciones de amilasa se encuentran aumentadas en:
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_______________________________________________________________
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2. Las concentraciones de amilasa disminuyen en :
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_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
____________________________

BIBLIOGRAFA:

Manual Moderno.

PRACTICA No 12
DETERMINACION DE ENZIMAS: FOSFATASA ALCALINA

GENERALIDADES:

La fosfatasa alcalina es una enzima, originada principalmente en el hueso,
hgado y placenta, con alguna actividad en el rin e intestino. Se denomina
alcalina porque funciona mejor a valores de pH de 9.

Esta prueba enzimtica se utiliza como un marcador de tumores y como un
ndice de enfermedad del hgado y hueso cuando se correlaciona con otros datos
clnicos. En enfermedad sea, la enzima aumenta en proporcin a la produccin
de nuevas clulas, como resultado de la actividad osteoblstica y del depsito de
calcio en los huesos. En enfermedad heptica, la concentracin sangunea se
incrementa cuando se impide la excrecin de esta enzima por alguna obstruccin
de las vas biliares.

TECNICA:

1. Precalentar el reactivo de trabajo a 37C durante unos minutos.
2. Pipetear en una cubeta:

Reactivo de trabajo 1.0 mL
Muestra 20 uL

3. Mezclar e insertarla en un portacubetas a 37C.
4. Anotar la absorbancia inicial y poner simultneamente el cronmetro en marcha.
Efectuar nuevas lecturas cada minuto durante 3 minutos.
5. Comprobar que las diferencias entre absorbancias sean sensiblemente iguales.
Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio.

CALCULOS:
Considerando que el coeficiente de absorcin molar del 4-nitrofenol a 405 nm es
18.450, se deducen los siguientes factores para calcular la concentracin cataltica

Diferencia o incremento por minuto X 2764 = U/L

VALORES NORMALES:
Adultos 26-117 U/L

ACTIVIDADES A REALIZAR:

1. En qu patologa se eleva en relacin con la elevacin de bilirrubinas y AST?
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2. En qu patologas hay aumentos notorios?
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3. En qu enfermedades seas hay aumentos importantes?
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4. En qu otras enfermedades se puede encontrar alteracin de sta enzima?
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CASO CLNICO:

Colangitis

Femenina de 58 aos de edad, la cual presenta desde hace 1 mes discreta
ictericia, sin sintomatologa agregada, anoche inicia con dolor agudo e
hipersensibilidad en hipocondrio derecho, fiebre y escalosfros, menciona tambin
presencia de coluria. Los anlisis clnicos reportan: BH leucocitosis con
predominio de polimorfonucleares, aumento de la fosfatasa alcalina y de las
bilirrubinas.

1.- A qu se debe el aumento de la fosfatasa alcalina?
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2.- A qu se debe el aumento de la. bilirrubinas?
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PRACTICA No 13
DETERMINACION DE ENZIMAS: FOSFATASA ACIDA

GENERALIDADES:
Las fosfatasas cidas son enzimas distribuidas ampliamente en los tejidos,
incluyendo hueso, hgado, bazo, rin, eritrocitos y plaquetas. No obstante, su
mayor importancia se encuentra en la prstata donde la actividad de la fosfatasa
cida es 100 veces superior que en otros tejidos.

Por esta razn, la prueba de las concentraciones de fosfatasa cida se usa
para diagnosticar cncer metastsico de la prstata y seguir la eficacia del
tratamiento. Se sabe que hay cifras elevadas de fosfatasa cida en pacientes con
cncer de prstata que ha sufrido metstasis ms all de la cpsula a otras partes
del organismo, principalmente hueso. Se considera que una vez que el carcinoma
se ha extendido, la prstata empieza a liberar fosfatasa cida originando un
aumento en la sangre. El procedimiento de la fraccin prosttica mide,
especficamente, la concentracin de fosfatasa cida prosttica secretada por las
clulas de la prstata, en contraste con la medicin de actividad enzimtica total,
la cual es una medicin indirecta.

La fosfatasa cida tambin se halla en concentraciones elevadas en el
lquido seminal. Se pueden emplear pruebas para esta enzima en la investigacin
de estupro.

FUNDAMENTO:
La fosfatasa cida cataliza en medio cido la hidrlisis del naftil fosfato.
El -naftol producido reacciona con una sal de diazono formando un cromgeno.
La actividad cataltica se determina a partir de la velocidad de formacin de dicho
cromgeno medido a 405 nm. El tartrato se utiliza como inhibidor especfico de la
denominada fraccin prosttica.

La fosfatasa cida en suero es muy inestable. Si la determinacin no se
efecta de inmediato, se debe acidificar la muestra aadiendo l gota del reactivo C
por cada ml., de suero. En estas condiciones la fosfatasa es estable 6 das a 2-
8C.

PROCEDIMIENTO:
1. Precalentar el reactivo de trabajo a 37C durante unos minutos.
2. Pipetear en una cubeta:

Reactivo de trabajo
Muestra
1.0 ml
0.1 ml

3. Mezclar e insertarla en el portacubetas termostatizado a 37C. Poner el
cronmetro en marcha.
4. A los 5 minutos, anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas lecturas cada
minuto durante 3 minutos.
5. Comprobar que las diferencias entre las absorbancias sean sensiblemente
iguales. Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio.

CALCULOS:

Utilizar los siguientes factores para calcular la concentracin cataltica:
Absorb/min. x 844 = U/L
Absorb/min. X 14061 = nkat/L

FAC prosttica = FAC total FAC no prosttica

VALORES NORMALES:

FAC total: hasta 10 U/L = 167 nkat/L
FAC prosttica: hasta 3.5 U/L = 58 nkat/L

Nota: Estos titulos se dan nicamente a titulo orientativo, es recomendable que
cada laboratorio establezca sus propios intervalos de normalidad.

RESULTADOS:__________________________________

ACTIVIDADES A REALIZAR:

1. Qu indica una cifra significativamente alta de esta enzima?
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_______________________________________________________________

2. En la patologa mencionada, despus de que tratamientos, disminuyen las
concentraciones de la fosfatasa cida?
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_______________________________________________________________

3. En qu otras enfermedades se presenta moderadamente elevada sta
enzima?
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_______________________________________________________________

BIBLIOGRAFA:
Manual Moderno
PRACTICA No 14
EXAMEN GENERAL DE ORINA

INTRODUCCION:
El examen general de orina es un examen fsico, qumico y microscpico de
la misma, es una herramienta de diagnstico muy importante que permite detectar
muchos trastornos o padecimientos en el paciente.

Cabe mencionar que no se deben de tomar decisiones diagnosticas o
teraputicas basndose en un solo resultado, sino tener en cuenta todos los
hallazgos mdicos.

Adems factores como el uso de algunos frmacos, ingesta de algunos
alimentos, etc., pueden afectar los resultados de algunas pruebas.

MATERIAL Y EQUIPO:

Probeta.
Refractmetro.
Tubo de ensaye de 13x100 mm.
Tiras reactivas.
Portaobjetos.
Cubreobjetos de 22x22.
Microscopio.

TECNICA:

Volumen: En una probeta medir el volumen de la muestra reportndolo en
mililitros.

Densidad: Procedimiento con tira reactiva (Tiempo de lectura 45 segundos).

Sumergir la tira reactiva en una muestra de orina y comparar con la escala
cromtica la variacin en el cambio de color. Esta prueba se basa en el cambio
aparente de pKa de ciertos polielectrolitos pretratados en relacin con la
concentracin inica. En presencia de un indicador los colores varan desde un
verde-azul oscuro en orinas de baja concentracin, hasta un verde amarillo en
muestras de alta concentracin inica. Este mtodo permite la determinacin de la
gravedad especifica (densidad) de la orina entre 1.000 a 1.030.

En general existe una correlacin que no rebasa las 0.005 unidades de los
valores obtenidos con el mtodo del ndice de refraccin. En orinas con un pH
6.5, se puede mejorar la exactitud aadiendo 0.005 al valor obtenido. Si la lectura
es instrumental el ajuste es automtico.
Procedimiento tcnico con el refractmetro:

Limpiar y secar la superficie de la tapa y el prisma del refractmetro,
depositar una gota de orina y cerrar la tapa, dirigir el instrumento hacia la fuente
de luz y leer la escala de densidad en el lmite luz - oscuridad. La escala permite
lecturas de hasta 1.035, de modo que las muestras con valores superiores deben
ser diluidas.

COLOR, OLOR Y ASPECTO: Se hace una inspeccin ocular de la muestra
de orina anotando las observaciones correspondientes.

Examen microscpico de la Orina

En un tubo de ensaye de 13 x 100 mm medir una muestra de orina
previamente mezclada y centrifugar a 3000 r.p.m. durante 10 minutos.
Decantar el sobrenadante en otro tubo.
Poner aproximadamente una gota de sedimento resuspendido sobre un
porta-objetos y colocar un cubre-objetos, evitando la formacin de
burbujas. La cantidad de sedimento no debe ser excesiva que flote en
cubreobjetos.
La observacin debe hacerse lo ms pronto posible para evitar que se
seque y se altere su contenido.
Hacer la observacin microscpica a bajo y alto aumento, cuidando de
variar continuamente el foco y de seguir en forma sistemtica los cuatro
lados del cubre. Los elementos ms comunes a investigar son:
Leucocitos por la tira reactiva. (tiempo de lectura 2 minutos)

Los leucocitos granulocticos contienen esterasas que catalizan la hidrlisis del
derivado ster cido aminopirrol, liberando 3-hidroxi-5-fenil pirrol; este ltimo
compuesto de pirrol, reacciona con una sal de diazonio. El color de reaccin
negativa es crema y violeta para las positivas.

Leucocitos por observacin microscpica:
Por las interferencias que pueden darse con la tira reactiva, se recomienda
hacer la identificacin microscpica de leucocitos en seco fuerte contando el
nmero de ellos en 10 campos representativos.

Bacterias, levaduras, cristales y cilindros; se cuentan en forma apreciativa y se
reportan desde escasos hasta abundantes.

Clulas epiteliales escamosas; slo se informan si son numerosas.

Eritrocitos; de estar presentes, se informan desde escasos hasta abundantes.

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