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Diferentes rutas de sealizacin de los Wnt en desarrollo

Componentes de la va de sealizacin de Wnt
Ligandos
Receptores
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Algunos procesos de desarrollo donde los Wnt participan
Mecanismos de accin de los Wnt
1. Va cannica : Actua a travs de -catenina /Arm y especifica diferentes
tipos celulares, controla proliferacin y apoptosis segn el contexto de
desarrollo
3 contextos de desarrollo donde intervienen las vias de Wnt
Formacin del tubo neural durante el desarrollo embrionario
de Xenopus.
Formacin de extremidades en vertebrados
Desarrollo embrionario de Drosophila
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2. Va Wnt no cannica :
Interviene en procesos de polaridad celular, de tejido y en
movimientos celulares
Extensin convergente Intercalacin celular Polaridad planar
Wnt11 Wnt11 Wnt?
3 contextos de desarrollo donde interviene la va de sealizacin
de los Wnt
1. Formacin del tubo neural durante el desarrollo embrionario de Xenopus
2. Formacin de extremidades en vertebrados
3. Desarrollo embrionario de Drosophila
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Xenopus laevis
- Anfibio procedente de Sudfrica
- Fertilizacin externa de los huevos.
- Se trabaja con los embriones ( 1-1.7 mm) y
renacuajos (transparentes). Aprox. 2 das a 16C.
- Experimentos clsicos de transplantes
-Tcnicas para anlisis de falta de funcin: morfolinos y RNAi.
-Tcnicas de anlisis de expresin ectpica: microinyeccin de
RNA.
Cmo se forman las tres capas germinales?
Polo animal
Polo vegetal
Sist. Nervioso
Epidermis
Endodermo
Mesodermo
Ectodermo
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Las seales desde el polo vegetal activan la expresin de
molculas difusibles como Wnt8 que se requieren para la
formacin de la regin organizadora
Dos seales se superponen para generar un gradiente de
molculas tipo Nodal
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La va de sealizacin de Wnt se activa en la regin
dorsal y reprime la expresin de Bmp4
Movimientos del mesodermo durante la gastrulacin de Xenopus
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La inyeccin de ARNm de -catenina en la regin vegetal
ventral causa un doble eje
El organizador Wnt8 no es homogeneo
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Microinyeccin de RNA
RA
Gli2 shh
Xwnt8
+RA +RA -RA
+Gli
+Wnt -Wnt
Xiro
RNA de interferencia (RNAi)
Consiste en silenciar un gen mediante el uso de dsRNA.
Se descubri en C elegans como un mecanismo endgeno
de eliminar RNA defectuosos.
Opera a nivel post-transcripcional induciendo la degradacin
de mRNA homlogos.
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Morfolinos
Silenciamiento de genes: Fenocopias
Utilizado inicialmente en terapia gnica como mejora
al uso de oligos antisense
Bloquean la traduccin del mRNA cuando son
complementarios a la 5 UTR.
Previenen la unin al ribosoma
Tamao de 18-25 bases.
Severidad de los fenotipos segn la concentracin,
estabilidad de la protena, tiempo de inyeccin, etc.
3 contextos de desarrollo donde intervienen la va de sealizacin
de los Wnt
1. Formacin del tubo neural durante el desarrollo embrionario de Xenopus
2. Formacin de extremidades en vertebrados
3. Desarrollo embrionario de Drosophila
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Modelo experimental: Pollo
Limb bud
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Especificacin del limb bud
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Generacin del eje Dorsal-Ventral
La expresin de Wnt7a en el ectodermo dorsal.
Lmx1 es un factor de transcripcin activado por Wnt7a en las
clulas dorsales.
3 contextos de desarrollo donde intervienen la va de sealizacin
de los Wnt
1. Formacin del tubo neural durante el desarrollo embrionario de Xenopus
2. Formacin de extremidades en vertebrados
3. Desarrollo embrionario de Drosophila
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Drosophila melanogaster
-Mosca de la fruta de 3mm (adulto)
- ciclo vital de 9 das a 25C
-Se almacena en botellas y tubos
- Genoma: 14000 genes (2000). 4 cromosomas
- Gran cantidad de mutaciones recesivas (balanceador)
- Permite combinar tcnicas de embriologa y anlisis gentico
Desarrollo embrionario en Drosophila
Organizacin metamrica:
segmentos
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Dorsal
Ventral
Posterior Anterior
Especificacin del eje Antero-Posterior
Cutcula larvaria
Blastodermo sincitial
Genes de polaridad segmental
Se expresan en un grupo de clulas de cada
segmentos que se denomina parasegmentos