Prctica No 17

Integrantes: 8 A
Gwendolyne Mndez Frausto
Edwin Antonio Reyes Oliva
Laura Monserrat Saucedo Herrera
Flor de Mara Torres Jurez
Fecha: 23/04/2013
Determinacin de Bilirrubina total y directa
(Mtodo Mallory-Evelyn modificado. Punto final)
Objetivo: Realizar la cuantificacin de Bilirrubinas Totales y Directa en suero, por medio de una
tcnica colorimtrica. Anlisis que permite junto con otros parmetros bioqumicos, evaluar la
funcin heptica.
Introduccin
La determinacin de la bilirrubina srica total es la prueba de funcin heptica (PFH) ms clsica.
Su principal ventaja es que es fcil de determinar y ya esta automatizada, sin embargo por su
escasa sensibilidad, la bilirrubinemia no debe ser utilizada en la deteccin de hepatopatas. Una
tasa srica normal de bilirrubina es compatible con la existencia de una enfermedad heptica
grave, ya que la capacidad del hgado para metabolizar la bilirrunina es tres veces superior a la que
habitualmente le llega. A pesar de la baja sensibilidad de esta prueba presenta una alta
especificidad, ya que cuando su tasa supera los 1.5 mg/dL, las probabilidades que exista una
enfermedad hepatobiliar son elevadas.
La principal utilidad diagnstica presenta la determinacin de la bilirrubina conjugada. Cuando
esta fraccin asciende se debe asumir que existe un problema en la exvrecin biliar, la cual puede
ser causada por una enfermedad heptica o bien por un transtorno en las vas biliares. Su
sensibilidad es muy superior a la de la bilirrubina total; esta puede estar elevada aunque el
paciente presente niveles de bilirrubina total dentro de los valores de referencia. Algunas veces se
determina la relacin de la bilirrubina conjugada (directa)/bilirrubina total. En la cual un cociente
superior a 0.4 se suele producir en la ictericia de origen hepatocelular y de origen obstructivo.
Mientras que un cociente inferior a 0.2 indica que la ictericia es debida a hemlisis, por lo que un
valor de 0.2-0.4 sugiere un mecanismo combinado como el que se presenta en anemia de clulas
falciformes con hemlisis y lesin hepto-celular. La medicin de bilirrubina no conjugada es de
poca utilidad para la deteccin de las enfermedades hepticas a pesar de que la conjugacin es
una funcin que se realiza de manera exclusiva en el hgado. Los aumentos de esta fraccin se
producen solo cuando falla la conjugacin heptica, asi como tambin cuando hay un transtorno
en el transporte de la bilirrubina hasta el lugar de la conjugacin o simplemente cuando esta
sobre-producida. Tiene escaso valor diagnstico de hepatopata por su escasa sensibilidad.
Los mtodos empleados usualmente en la determinacin de las diferentes gracciones son poco
fiables, en especial cuando la bilirrubinemia no supera los 5 mg/dl.

Material utilizad
4 tubos de ensaye
1 gradilla
Muestra proporcionada por la auxiliar.
2 celdas de cuarzo
Micro-pipetas (600 L, 40 L y 120 L)
Contenedor
Puntillas para las micro-pipetas.

Equipo
Incubadora a 37C
Cronmetro
Espectrofotmetro a 500 nm

Procedimiento realizado

Determinacin de bilirrubina total
Con los reactivos atemperados previamente, se tom un tubo de ensaye y se le coloc el reactivo
y la muestra, para despus ser llevados a incubacin por 75 s., y se ley la absorbancia
correspondiente. Posteriormente se le agrego el reactivo de trabajo, llevndose a incubacin por
375 s. Para volver a tomar la absorbancia correspondiente, teniendo en cuenta que todos los
volmenes utilizados fueron con el doble del volumen indicado en el inserto.
Determinacin de bilirrubina directa
De igual manera que la anterior se atemperaron los reactivos para despus colocar el R1 y la
muestra, levndolos a incubacin por 75 s., tomando la absorbancia correspondiente hasta aqu.
Agregando posteriormente el reactivo de trabajo e incubando 375 s., para tomar la segunda
absorbancia.