O teste de Coombs direto usado no diagnstico de doenas auto-imunes e
doena hemoltica do recm-nascido. Ele detecta anticorpos ligados superfcie das hemcias. PRINCPIO DO TESTE O soro Anti-IgG (Soro de Coombs) destina-se pesquisa de anticorpos da frao gamaglobulina humana, quer estejam adsorvidos s hemcias humanas in vivo (Teste de Coombs Direto). COLETA DA AMOSTRA O sangue deve ser coletado por procedimento assptico aprovado, com ou sem adio de anticoagulante. As hemcias obtidas de cogulo podem ser utilizadas em at 5 dias aps sangria. As amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser utilizadas em at 48 horas. Se a demora para a execuo do teste for inevitvel, hemcias de sangue coagulado e as colhidas em EDTA ou Heparina devem ser separadas do soro/plasma, lavadas e ressuspendidas em soluo preservativa de glbulos. Estocar a 2 a 8 C, por no mximo, 20 dias. O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser utilizado at a data de expirao, se armazenado entre 2 e 8C. O armazenamento prolongado de hemcias antes da execuo do teste pode causar deteriorao de antgenos e resultar em reaes mais fracas. PROCEDIMENTO DO TESTE
TESTE DE COOMBS DIRETO OU TESTE DA ANTIGLOBULINA DIRETO Este teste empregado na pesquisa de anticorpos (gamaglobulinas) j fixados s hemcias, como ocorre na Doena Hemoltica do RecmNascido, Anemia Hemoltica Adquirida e em pacientes que tenham recebido transfuses incompatveis. 1. Colocar em um tubo de hemlise uma gota de suspenso de hemcias do paciente a 5%, previamente preparadas em soluo salina 0,9%. 2. Lavar as hemcias do tubo por trs vezes com soluo salina 0,9%. Desprezar o sobrenadante, secando as bordas do tubo na ltima lavagem para retirar toda a soluo. 3. Acrescentar quatro gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs). Misturar bem. 4. Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos. 5. Incubar durante 30 minutos a 37C. 6. Voltar a centrifugar durante 1 minuto. 7. Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no de aglutinao.
INTERPRETAO: POSITIVO: (Presena de aglutinao): Presena de anticorpos livres no soro do paciente, os quais correspondem a um ou mais antgenos presentes nas hemcias usadas no teste. NEGATIVO: (Ausncia de aglutinao): Sem presena de anticorpos livres no soro do paciente.
LIMITAES DO PROCEDIMENTO TCNICO Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer:
1. Quando as hemcias no forem apropriadamente lavadas ou globulinas humanas estiverem presentes na vidraria, resultando numa neutralizao das antiglobulinas humanas. 2. Quando os anticorpos se eluem das hemcias durante incubao inadequada, no permitindo uma apropriada sensibilizao dos glbulos. 3. Quando hemcias e/ou reagente no so adequadamente conservados na temperatura indicada, perdendo a reatividade. 4. Quando o Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) foi omitido durante o teste.
Resultados FALSO-POSITIVOS podem ocorrer:
1. Quando so utilizadas amostras de sangue contaminado. 2. Quando for realizada uma centrifugao excessiva. 3. Quando o soro, as hemcias e o Soro Anti-IgG(Soro de Coombs) estiverem excessivamente frios, detectando a presena de aglutininas frias.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1-Walker Rh, ed. Technical Manual. 11 th Edition. Bethesda: AABB, 1993. 2-Race R.R and Sanger R. Blood Groups in Man, 6 th Edition Oxford Blackwell Scientific Publishers,1975. 3-Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine. 7 th Edition. Oxford Blackwell Scientific, 1983. 4-Guidelines for the Blood Transfusion Service H.M.S.O.