Determinar si la bacteria fermenta Lactosa (solo crecen Gram negativas) y su pH.
Inocular en forma rayada.
Incubar por 24 horas a 37C.
Ninguno
Presencia de colonias = gram negativo
Colonias color rojo fermentacin de lactosa.
No hubo crecimiento (no es gram negativa)
Colonias incoloras o no crece.
Eosyn - Methilene Blue Agar
Determinar si la bacteria fermenta Lactosa. Inocular en forma rayada.
Incubar por 24 horas a 37C.
Ninguno
Colonias color rosa o verde metlico.
Colonias incoloras o no crece.
Agar de Almidn
Determinar la presencia de la enzima amilasa en la bacteria.
Inocular en lnea recta. Incubar por 48 horas a 37C.
Luego de incubar se aadi solucin de Lugol a la placa. (Yodo)
Se observa halo (zona de hidrlisis alrededor de las colonias).
No se observa halo; todo el medio cambia a color azul negruzco.
2
Medio de Cultivo
Prueba y/o Propsito
Mtodo de Inocular e Incubar
Tratamiento
Resultado Positivo
Resultado Negativo
Tributirin
Determinar la capacidad de la bacteria para hidrolizar lpidos por medio de la enzima lipasa o esterasa.
Inocular en lnea recta con la anilla. Incubar por 48 horas a 37C.
Ninguno
Zona clara (liplisis) alrededor de las colonias, se ve transparente.
No se observa halo alrededor de las colonias.
Agar Nutritivo Placa TSA
Catalasa Distinguir si la bacteria tiene las enzimas catalasa.
Inocular en lnea recta (hacer dos lneas). Incubar por 24 horas a 37C.
Luego de incubar se le aadi perxido de hidrogeno.
Produccin de burbujas de O 2 .
No hay produccin de burbujas.
Agar Nutritivo Placa TSA
Oxidasa Distinguir si la bacteria tiene las enzimas oxidasa. Inocular en lnea recta (hacer dos lneas). Incubar por 24 horas a 37C. Luego de incubar se aadi el reactivo visualizador P- aminodi- metilalanina.
Se torna negro.
No cambia de color.
3
Medio de Cultivo
Prueba y/o Propsito
Mtodo de Inocular e Incubar
Tratamiento
Resultado Positivo
Resultado Negativo
Caldo Nutritivo
Observar patrn de crecimiento.
Inocular usando aguja de inocular en anillo. Incubar por 24 horas a 37C.
N/A
N/A
N/A
Gelatina Nutriente
Determinar la produccin de la exoenzima gelatinasa en la Bacteria.
Inocular en estocada. Incubar por 48 horas a 37C.
Luego de la incubacin, colocar el tubo en la nevera por 30 minutos.
Se observa licuefaccin.
Se solidifica.
Simmons Citrate Agar
Determinar el uso de citrato como nica fuente de carbono y el valor de pH.
Inocular en estocada y rayar la pendiente al mismo tiempo. Incubar por 48 horas a 37C.
Ninguno
Se observa crecimiento y coloracin azul.
No se observa cambio. 4
Medio de Cultivo
Prueba y/o Propsito
Mtodo de Inocular e Incubar
Tratamiento
Resultado Positivo
Resultado Negativo
Caldo de Urea
Determinar si la bacteria contiene la enzima Ureasa
Inocular usando aguja de inocular en anillo. Incubar por 48 horas a 37C.
Ninguno
Color rojo intenso.
No ocurre cambio; color rojo o amarillo.
Rojo Fenol Carbohidrato Dextrosa
Observar si la bacteria lleva cabo fermentacin cida del carbohidrato dextrosa y/ la produccin de gas en el proceso.
Inocular usando aguja de inocular en anillo. Incubar por 24 horas a 37C.
Ninguno
Color amarillo con o sin produccin de gas.
Color rojo 5
Medio de Cultivo
Prueba y/o Propsito
Mtodo de Inocular e Incubar
Tratamiento
Resultado Positivo
Resultado Negativo
Rojo Fenol Carbohidrato Sacarosa
Observar si la bacteria lleva cabo fermentacin cida del carbohidrato sacarosa y/ la produccin de gas en el proceso.
Inocular usando aguja de inocular en anillo. Incubar por 24 horas a 37C.
Ninguno
Color amarillo con o sin produccin de gas.
Color rojo
Rojo Fenol Carbohidrato Lactosa
Observar si la bacteria lleva cabo fermentacin cida del carbohidrato lactosa y/ la produccin de gas en el proceso.
Inocular usando aguja de inocular en anillo.
Incubar por 24 horas a 37C.
Ninguno
Color amarillo con o sin produccin de gas.
Color rojo
6
Medio de Cultivo
Prueba y/o Propsito
Mtodo de Inocular e Incubar
Tratamiento
Resultado Positivo
Resultado Negativo
Agar de Tres Azcares y Hierro (TSIA)
Observar el patrn de fermentacin de la bacteria.
Inocular en estocada y rayar la pendiente. Incubar por 24 horas a 37C.
Ninguno
Slant rojo y el fondo amarillo = solo ocurri fermentacin de glucosa.
Slant y fondo amarillo = ocurri fermentacin de lactosa y/o sacarosa.
Slant y fondo rojo (o no ocurre algn cambio) = no hubo fermentacin de carbohidratos.
N/A 7
Medio de Cultivo
Prueba y/o Propsito
Mtodo de Inocular e Incubar
Tratamiento
Resultado Positivo
Resultado Negativo
Sulfide Indol Motility Media (SIM)
Determinar si la bacteria es mvil, si hay produccin de H 2 S a partir de aminocidos azufrados y si puede degradar el Triptfano a indol a travs de triptofanasa.
Inocular en estocada. Incubar por 48 horas a 37C.
Para determinar si se degrada triptfano aadir 10 gotas del reactivo de Kovac.
Movilidad Crecimiento se esparce fuera de la lnea de inoculacin. Produccin de H 2 S Precipitado negro. Produccin de indol Formacin de una capa rojo cereza.
Movilidad Crecimiento se limita a la lnea de inoculacin.
Produccin de H 2 S No se forma el precipitado Produccin de indol No se forma capa.
Caldo MR-VP
Prueba de Rojo de Metilo. Determinar si la bacteria produce cidos estables por fermentacin de la glucosa.
Inocular usando aguja de inocular en anillo.
Incubar por 48 horas a 37C.
Luego de incubar aadir 5 gotas de rojo metilo.
Se torna rojo.
Amarillo.
8
Medio de Cultivo
Prueba y/o Propsito
Mtodo de Inocular e Incubar
Tratamiento
Resultado Positivo
Resultado Negativo
Caldo MR-VP
Prueba de Voges- Proskauer Determinar si la bacteria puede producir acetilmetil- carbinol por fermentacin de la glucosa
Inocular usando aguja de inocular en anillo.
Incubar por 48 horas a 37C.
Luego de incubar se aadieron 10 gotas del reactivo de Barrit A y se agite. Despus se aadieron 10 gotas del reactivo de Barrit B y agitando cada 3 o 4 minutos por 15 minutos.
Se torna rosa intenso.
No desarrolla el color rosa intenso
9
Medio de Cultivo
Prueba y/o Propsito
Mtodo de Inocular e Incubar
Tratamiento
Resultado Positivo
Resultado Negativo
Agar de Nitrato
Prueba de Reduccin de Nitrato Determinar si la bacteria puede reducir nitratos a nitritos
Inocular en estocada.
Incubar por 48 horas a 37C.
Luego de incubar se le aadieron 5 gotas del reactivo A (cido sulfanlico) y 5 gotas del reactivo B ( -naftilamina). En caso de que la prueba diera negativa se le aada polvo de zinc.
Color rojo con los reactivos A y B. Incolora al aadir polvo de zinc.
Se queda igual al aadir los reactivos A y B. Al aadir polvo de zinc se torna rojo.