FARMACOLOGIA COMPLEMENTARIA

301520

ACTIVIDAD 14 TRABAJO COLABORATIVO 3
APORTE INDIVIDUAL DOS


ELKIN PADILLA GRACIA
CODIGO: 1064983270
GRUPO: 301520_28
CORREO: EKPD07@HOTMAIL.COM



TUTOR
MARCO ANTONIO MARQUEZ GOMEZ





UNIVRSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
CIENAGA DE ORO - CORDOBA



MAYO 20 DE 2014


2. Resumen de artculo de investigacin. Realizar una bsqueda en la biblioteca
virtual de la UNAD de un artculo de investigacin sobre el frmaco asignado,

preferiblemente relacionado con la promocin de su uso adecuado, eficacia y/o
efectividad del medicamento; del artculo se debe consignar la siguiente
informacin:


DESARROLLO DE LA BIOAUTOGRAFA DIRECTA COMO MTODO DE
REFERENCIA PARA EVALUAR LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LA
GENTAMICINA CONTRA Escherichia coli


Jhonny Colorado R.; Elkin Galeano J.; Alejandro Martnez M.


Vitae, 2007, Vol. 14(1), p.67


Mayo 15 de 2007


http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0121-
40042007000100010


La bioautografa es una tcnica sencilla y rpida que combina las ventajas de la
cromatografa en capa fina y la deteccin de actividad antimicrobiana, logrando
visualizar directamente la(s) fraccin(es) con actividad antimicrobiana. Determinar
la eficacia de esta tcnica puede facilitar el panorama en el aislamiento de
sustancias antimicrobianas presentes en mezclas complejas. El trabajo descrito es
un avance para evaluar si la tcnica permite cuantificar la actividad antimicrobiana
empleando como referencia el aminoglicsido Gentamicina y su actividad contra
el microorganismo patgeno Escherichia coli (E.coli). La cuantificacin de la
actividad antimicrobiana se verifica al medir el dimetro del halo de difusin que se
genera al aplicar soluciones de diferentes concentraciones de Gentamicina sobre
placas cromatogrficas; al determinar luego el efecto del volumen aplicado sobre
la variabilidad de los resultados y finalmente al analizar las diferencias entre los
halos de difusin y de inhibicin microbiana. En el presente estudio se encuentra
que la difusin del antibitico sobre las placas es un factor determinante para
cuantificar, y que existe un rango de concentraciones donde la fuerte interaccin
entre las variables aludidas permite predecir que se cuenta con un mtodo
validable para detectar y cuantificar la actividad antimicrobiana, sobre todo en
mezclas complejas.



Determinar los rangos en los cuales la gentamicina inhibe la produccin de
la bacteria E. coli
Establecer y validar la tcnica de la bioautografa como mtodo ms eficaz
para hacer pruebas de laboratorio.



Preparacin del microorganismo

La cepa ATCC 25922 del microorganismo patgeno E. coli se activ en 5 mL de
caldo nutritivo CASOY (Merck) estril durante 18 a 20 horas en un horno de
termocultivo digital (Indulab 2030) a 38C 0.5. A los 5 mL de caldo donde se
activ la bacteria se les agreg 95 mL de caldo nutritivo estril. Posteriormente las
bacterias fueron incubadas a 38C 0.5 con agitacin manual ocasionalmente
hasta que el microorganismo se encontr en la fase logartmica (entre 3 y 4
horas). Luego se midi la densidad ptica al caldo incubado, a 600 mm, en un
Spectronic 20 y se disminuy la absorbancia a valores entre 0.1 y 0.4 unidades,
diluyendo con caldo CASOY estril.

Preparacin del antibitico

Se prepararon dos grupos de soluciones patrones de sulfato de gentamicina
(g/mol, Applichem) en agua destilada, obtenida en un equipo de smosis reversa
Aguatec CDP 6800. En el primer grupo se prepararon 14 soluciones del
antibitico a concentraciones entre el rango de 0.3 a 101.0 g/L. De cada una de
estas soluciones se inyectaron 1.0 L, en 5 rplicas, sobre placas cromatogrficas
de slica gel 60 F254 (Merck) de 2 x 6 cm. Paralelamente, el segundo grupo
estaba formado por 14 soluciones del antibitico a la mitad de las concentraciones
del primer grupo (0.150 - 50.5 g/L), y de stas se inyectaron 2.0 L bajo las
mismas condiciones cromatogrficas. Lo anterior con el fin de comparar si el
volumen de inyeccin ejerce algn efecto significativo sobre la confiabilidad de la
cuantificacin, teniendo en cuenta el halo de difusin.

Difusin de la Gentamicina

Para detectar los halos de difusin generados por las soluciones de gentamicina
se utiliz el revelador Ninhidrina (Merck) al 0.3% en 1-butanol (Mallinckrodt), el
cual mostr los halos de difusin del antibitico como crculos de color violeta. La
medida de los halos se realiz con un calibrador digital (Stainless-Hardened,
rango de medida: 0-150 mm/0-6 x 0.01 mm/0.0005) en mm.

Impregnacin de las placas con E. coli


Las placas cromatogrficas fueron sumergidas con la superficie que contiene el
antibitico hacia abajo durante 10 segundos dentro de cajas de petri de 10 cm de
dimetro, que contenan 20 mL del caldo CASOY inoculado con E. coli.
Posteriormente, las placas impregnadas del microorganismo fueron incubadas en
sendas cajas de petri estriles, a 38C 0.5 durante 4 horas.

Revelado y medicin de los halos de inhibicin

Despus de la incubacin las placas inoculadas fueron sumergidas durante 10
segundos en una solucin de MTT Sigma (3-[4,5-dimetil-tiazol- 2-il]-2,5-bromuro
de difeniltetrazolium) de 0.8 g/L en tritn X-100 (Sigma) al 0.1% en agua y e
incubadas nuevamente dentro de su correspondiente caja de petri a 38C 0.5
hasta la completa asimilacin del sustrato enzimtico por el microorganismo (este
proceso tard aproximadamente 30 minutos). Posteriormente, fueron sumergidas
en una solucin de etanol al 70% para su desinfeccin y se realiz la medicin de
los halos de inhibicin formados con el calibrador digital en mm.


Los resultados que ofrecen en este artculo muestran que se debe realizar
la bioautografa directa inyectando 1.0 L de muestra sobre las placas. Sin
embargo, an seguimos mejorando esta tcnica, para llegar a realizar
anlisis cuantitativo de sustancias antimicrobianas promisorias y la
utilizacin de otras clulas de importancia biolgica.
Esta tcnica, por ser muy prctica, es susceptible de ser validada para
realizar anlisis rutinarios en laboratorios de control microbiolgico de
productos farmacuticos; es decir, para evaluar la sustancia antimicrobiana
de una mezcla, simultneamente con la cuantificacin de la misma respecto
a la actividad de un patrn como la Gentamicina.


Este tipo de estudios ayudan a ampliar ms el conocimiento sobre como un
frmaco en este caso un antibitico acta sobre una bacteria.
Con esto se pudo determinar o establecer los rangos de concentracin del
frmaco en este caso la gentamicina, necesarios para la disminucin de la
actividad microbiana.


3. Propuesta de intervencin. El estudiante debe presentar una propuesta de
promocin del uso adecuado del medicamento asignado.

Como propuesta del uso adecuado de la gentamicina presento el siguiente
informe:

Mejorar la prescripcin de antibiticos en las unidades neonatales: la hora de
actuar.
Los antibiticos se prescriben cada vez ms en el perodo peri - parto, por
indicaciones tanto maternas como fetales. Su uso eficaz puede salvar la vida, sin
embargo, el uso indiscriminado conduce resistencia a los antibiticos y contribuye
al desarrollo anormal de la flora fecal y desregulacin inmune posterior. Las
unidades neonatales son un rea de alto riesgo para la seleccin y transmisin de
organismos resistentes a mltiples antibiticos. Pocos nuevos antibiticos con
actividad frente a bacterias Gram-negativas estn en desarrollo, y no de manera
significativa los nuevos antibiticos para bacterias Gram-negativas estarn
disponibles en la prxima dcada. Esta revisin busca resumir la prctica actual, y
sugiere estrategias restrictivas de antibiticos sobre la base de datos
epidemiolgicos publicados recientemente en el Reino Unido, de estudios de
vigilancia en infecciones neonatales.
Una reciente auditora del uso emprico de antibiticos entre las unidades
neonatales del Reino Unido revel que, aunque casi el 70% opt un estrecho
espectro de combinacin de antibiticos a base de penicilina / gentamicina para la
presunta infeccin EOS, el 19% utiliza una cefalosporina, ya sea solo o en
combinacin con una penicilina. (12) Para las infecciones de inicio tardo, la
eleccin de combinaciones empricas de antibitico fue mucho ms diversa; 56%
utiliza una combinacin de penicilina / gentamicina o Flucloxacilina / gentamicina
mientras que alrededor del 23% utiliza una cefalosporina, ya sea solos o en
combinacin con otro antibitico, ms comnmente vancomicina. La vancomicina
y teicoplanina se prescribe tambin en el 21% y 8% de las unidades neonatales,
respectivamente, en presencia de un catter permanente.
El oleoducto de nuevos antibiticos es ahora preocupantemente limitado. Hay muy
pocos antibiticos nuevos en fase de desarrollo con actividad contra bacterias
Gram-negativas y no de manera significativa los nuevos antibiticos para bacterias
Gram-negativas estarn disponibles en la prxima dcada. La evidencia en todo el
mundo demuestra que las unidades neonatales son una zona de alto riesgo para
la seleccin y transmisin de mltiples organismos resistentes. El riesgo es que el
brote recurrente de varios organismos resistentes puede llegar a ser muy difcil de
tratar. Una posible consecuencia es que la presencia de bacterias resistentes en
las unidades neonatales, que ya provoca alteraciones significativas en el
movimiento de los bebs entre los hospitales en las redes neonatales podra
empeorar (con graves consecuencias clnicas potenciales y financieros). El
balance est cambiando hacia el reconocimiento de la necesidad de conservar los
antibiticos como un recurso finito. La Conservacin de los antibiticos en los
hospitales se puede realizar utilizando algn tipo de Programa de Administracin
de antibiticos (ASP). Esto debe incluir algn tipo de control peridico tanto del
total de antibiticos como de su espectro, utilizados por la realizacin de una
encuesta de prevalencia de punto regular (PPS). En el futuro, los hospitales se les
animarn a desarrollar programas peridicos de PPS en todas las reas clnicas.

El programa ptimo para un recin nacido de ASP todava tiene que ser
desarrollado, pero son los primeros pasos que se pueden tomar ahora:
Establecimiento de sistemas de vigilancia de las infecciones regular de infecciones
del torrente sanguneo, ya sea a nivel local, por ejemplo, mediante la realizacin
de una auditora anual en colaboracin con los departamentos de microbiologa y /
o a travs de una red como neonIN (neonin@sgul.ac.uk).
Reforzar los vnculos con las reas de microbiologa y los equipos locales de
control de infecciones y los farmacuticos locales. Tener una regular (por ejemplo,
semanalmente) revisin de las infecciones y el uso de antibiticos con inters en
la detencin de los antibiticos si es posible como se mencion anteriormente.
Esto podra ser formalizado en una semana "ronda de infeccin" neonatal, aunque
la base de pruebas para este an no se ha establecido.
El uso de una poltica de tratamiento antibitico emprico de espectro estrecho y
el cumplimiento de la auditora con esto.
Reforzar a todo el personal que la poltica de detencin de antibiticos empricos
cuando los hemocultivos son negativos y la auditora de cumplimiento con esta.
Velar por que la continuacin de antibiticos despus de hemocultivos negativos
requiere de una justificacin documentada y una nueva receta para ser escrito.
Asegurar que la duracin de los antibiticos para el tratamiento de un episodio de
infeccin (ya sea un cultivo positivo o negativo) es pre-indicadas, y slo prolonga
con la redaccin de una nueva receta.
Asegurarse de que los antibiticos de espectro ms estrechos posibles se utilizan
para el tratamiento de infecciones comprobadas y de auditora de esto.
La identificacin de un grupo de antibiticos que deber ser prescrito por consultor
solamente. Le sugerimos cefalosporinas de tercera generacin y meropenem, y
posiblemente a la vancomicina y la teicoplanina. Auditora de cumplimiento de la
presente y la revisin de casos individuales en que estos antibiticos se
prescriben.
Poner en marcha estas medidas ahora, mientras se desarrolla la base de pruebas
para la prescripcin antibitica ptima, es la mejor manera de asegurar las
infecciones neonatales que siguen siendo tratable.


















BIBLIOGRAFIA

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